脓毒症患者中性粒细胞内钙水平下降影响细胞迁移研究

目的探究细胞内钙水平与脓毒症患者中性粒细胞迁移功能障碍的关系。方法纳入吉林大学第一医院2017年12月—2018年9月临床诊断为脓毒症的21例患者血样,另外选取20名健康人作为对照组。采用磁珠分选试剂盒分离健康对照及脓毒症患者外周血中性粒细胞,多通道微流控芯片技术检测中性粒细胞的趋化迁移能力。利用钙指示剂Fluo-4,采用流式细胞术检测健康对照和脓毒症患者中性粒细胞内钙水平,以及钙螯合剂BAPTA-AM与EDTA共同孵育的健康对照中性粒细胞内的钙水平。结果与健康对照组相比,脓毒症患者中性粒细胞内钙水平显著下降(P<0.01)。钙螯合剂BAPTA-AM与EDTA联合处理后,健康对照中性粒细胞内钙水平显著下降(P<0.01)。微流控技术发现细胞内钙下降后,中性粒细胞在微流控中的迁移速度、迁移距离以及间隙通过率均显著降低(P<0.01)。结论脓毒症患者中性粒细胞内钙水平降低可能是导致中性粒细胞迁移能力下降的重要原因。本研究为通过调节细胞内钙水平改善中性粒细胞迁移障碍提供了新的研究思路。

电针对神经病理性痛大鼠脊髓背角细胞内钙离子浓度以及钙-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ的影响

目的:通过观察坐骨神经分支选择性损伤(SNI)大鼠脊髓背角神经细胞内钙离子([Ca2+]i)浓度以及钙-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的变化和电针干预对其的影响,探讨电针干预神经病理性痛的脊髓机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂(AP-5)组和一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME)组,每组22只。采用SNI法制备神经病理性痛模型,假手术组仅分离不结扎。电针组电针大鼠损伤侧"委中""环跳"穴30min,1次/d,AP-5组予AP-5 0.7mg·kg-1·d-1腹腔注射,L-NAME组予L-NAME 60mg·kg-1·d-1腹腔注射,连续7d。造模前及SNI后10d、16d分别测定机械痛阈。激光共聚焦显微镜技术观察脊髓背角[Ca2+]i的荧光强度;Western blot和免疫组化法测定脊髓CaMKⅡ的表达。结果:与假手术组比较,SNI后10d各组机械痛阈值均降低(P<0.01);与模型组比较,电针组、AP-5组和L-NAME组SNI后16d时机械痛阈值均升高(P<0.01,P<0.05)。与假手术组比较,模型组脊髓背角[Ca2+]i浓度与CaMKⅡ表达均升高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,电针组、AP-5组和L-NAME组脊髓背角[Ca2+]i浓度均被逆转(P<0.05,P<0.01),而CaMKⅡ的表达仅电针组被逆转(P<0.05)。结论:电针减轻大鼠神经病理性痛的机制之一,可能与其有效下调脊髓背角[Ca2+]i浓度及CaMKⅡ的表达,继而抑制其一系列后效应有关。