Iodogen法用于蛋白质的^（125）I标记──介绍一种高标记方法

本文报道了一种应用Ｉｅｄｏｇｅｎ法进行蛋白质的１２５Ｉ标记方法，该方法具有操作方便、１２５Ｉ利用率高、分离蛋白快速等优点。利用固相免疫放射分析法，对该法标记的１２５Ｉ－驴抗兔ＩｇＧ抗体活性进行分析，其抗体结合力和效价均明显高于氯胺Ｔ法标记的抗体，上述结果提示，Ｉｏｄｏｇｅｎ法更适合于蛋白质的１２５Ｉ标记。

肿瘤坏死因子突变体的碘标记及其质量的检测

用Ｉｏｄｏｇｅｎ法对肿瘤坏死因子突变体进行碘标记，用放射纸层析法及自身取代分析法对产物的放化纯度及比放射性活度进行了计算。结果表明：碘的利用率为７２．７６％，纯化后标记物的游离碘为２．１２％，放化纯度为９３．１４％，比放射性活度为１．２ＴＢｑ／ｇ。标记后的肿瘤坏死因子突变体的细胞毒效应只下降４．３８％，提示Ｉｏｄｏｇｅｎ法标记肿瘤坏死因子突变体可获良好效果。

高效简便的人低密度脂蛋白^(125)Ⅰ标记法

采用固相氧化剂Iodogen法对人血清低密度脂蛋白（LDL）进行125Ⅰ碘化标记，并用荧光扫描法观测氧化剂的脂质过氧化作用．结果：125Ⅰ-LDL的比放射性为5.8×10-4μCi／ngLDL，脂质标记率＜1％，游离125Ⅰ含量＜1，125Ⅰ－LDL浓度为0．3～0．6mg／ml；荧光扫描法证实无脂质过氧化发生，符合用于脂蛋白代谢研究的要求。本法与一氯化碘法比较，比放射性高，操作简单，无特殊技术要求，适于进行脂蛋白受体的研究。

^(125)Ⅰ标记抗MIF单克隆抗体制备及其生物学活性的研究

目的:建立125Ⅰ标记抗巨噬细胞移动抑制因子(MIF)单克隆抗体(mAb)方法,探讨其在体内外生物学活性。方法:①利用Iodogen法,Na125Ⅰ标记Anti-mMIF mAb,用Sephadex G-25柱凝胶过滤层析法分离纯化,测定其标记率。纸层析法测定放射化学纯度和稳定性。②采用ELISA和改良MMI鉴定其免疫活性及生物学活性。③观察小鼠体内的生物学分布情况。结果:①标记的最佳条件为Iodogen 40~100μg、抗体20~50μg[Iodogen(m)∶抗体(m)=2∶1],加入Na125I15~30 MBq、室温反应10~15 min,标记率为(90.40±3.34)%,放射化学纯度为(97.60±1.14)%,比活度为12.2~26.0 MBq/μg;标记物4℃条件下放置3周后放射化学纯度仍为90.36%。②125Ⅰ-mMIF mAb能与抗原MIF特异性结合,较好地保持其免疫活性及生物学活性。③体内生物学分布,在肺、肝、脾、肾内具有较高的放射性计数。结论:Iodogen法获得高标记率和放射化学纯度的125Ⅰ-mMIF mAb,具有很好的体外稳定性,其在体内外保持较好的生物学活性。为进一步应用125I-mMIF mAb进行放射免疫显像和靶向治疗奠定了实验基础。

血管抑素的制备及其核素标记

目的:研究血管抑素的制备及其核素标记的有效方法。方法:采用一步法从人血浆中提取出血管抑素并选择Iodogen碘化法用131I进行放射性核素的标记。结果:获得纯度相对较高的血管抑素,核素标记率达到89%,比活度为3.9MBq/ml。结论:采用一步法所制备出的血管抑素纯度高,实验操作简便,回收率好,稳定性高。Iodoge碘化法可作为放射性核素131I标记血管抑素的有效方法之一。

抗CEA单克隆抗体碘标记方法研究

本文报道用几种碘标记方法(Iodosen、ChT、NBS、Bolton-Hunter试剂等)制备了^(125)I(^(131)I)-抗CEA单克隆抗体。产品通过Sephacex G-50(或-75)柱凝胶过滤纯化后,经纸层析和高压液相层析法鉴定,其放化纯度达到使用要求;用免疫放射双抗体夹心法测定,标记抗体能保持良好的免疫活性。同时我们对上述几种碘标方法进行比较研究,结果NBS法标记率最高,达98％,Iodogen法免疫活性保持最好,与CEA的净结合数达9960cpm(3ng CEA/250μl)。

氨甲喋呤(MTX)的直接碘标记方法研究

本文报道了~125I(~131I)抗肿瘤药物氨甲喋呤的制备方法,用直接碘化法——NBS、ChT、Iodogen进行标记,并对这几种方法进行了比较。结果表明,NBS法最好,标记率达90—99％。经Sephadex G-75柱凝胶过滤后得到纯产品,放化纯度为95.4％。所制得的标记产品适用于示踪研究。

^(125)I-人胸腺素的标记及其在小鼠体内的分布与代谢研究——Ⅰ.应用预载的IODO-BEAD进行人胸腺素^(125)I标记

介绍了一种应用预载的IODO-BEAD进行人胸腺素(HTN)蛋白质酪氨酸位^(125)I标记的Iodogen改良方法,并就用本法标记的HTN的生物活性与用经典的氯胺T法作了对比,对这两种方法的优缺点作了初步讨论,结果表明,前者是一种较理想的标记方法,可以代替后者对被标记物进行示踪分布与代谢观察研究。

^(125)I标记外泌体在Pan02胰腺癌荷瘤小鼠体内的生物分布研究

目的旨在开发用^(125)I-NaI标记外泌体的方法,并通过γ计数仪考察其在Pan02胰腺癌荷瘤小鼠体内的生物分布特征。方法通过非放射性NaI对用于治疗胰腺癌的工程化外泌体进行冷标记,采用透射电子显微镜、纳米粒子跟踪分析和Western blotting实验对标记前后外泌体进行表征。在此基础上采用Iodogen法进行外泌体的放射性^(125)I-NaI标记,分离纯化后测定^(125)I-NaI的标记率,Radio-HPLC法测定给药前后^(125)I-外泌体的放化纯度以考察其稳定性;将^(125)I-外泌体单次尾iv于Pan02胰腺癌荷瘤小鼠体内,分别于给药后2、6、24、72 h(每个时间点雌雄各3只)经CO_(2)麻醉后心脏放血处死小鼠,取血清、主要组织器官及肿瘤,γ计数仪测量其放射性计数,计算各组织/血清在不同时间点的蛋白沉淀率;并计算在不同时间点的每克组织(或每毫升血清)放射性计数占总注入放射性计数的百分比(%ID·g^(−1)或%ID·mL^(−1))。结果外泌体表征的结果显示,标记前后的外泌体形态一致,均成圆形或茶托样结构;标记前外泌体粒径峰值为113 nm,标记后外泌体粒径峰值为122 nm,粒径大小主要分布在50~200 nm;均表达其标志性蛋白CD63及TSG101,符合外泌体特征。^(125)I-NaI标记外泌体的标记率为27.82%,纯化后HPLC法测得即时放化纯度为100%,给药后放化纯度为(93.34±5.48)%。在小鼠尾iv给药后2 h,标记的外泌体主要分布在肝脏[(10.8992±1.5181)%ID·g^(−1)]和脾脏[(2.5664±0.7998)%ID·g^(−1)],肿瘤中为[(0.2910±0.0560)%ID·g^(−1)],脑、心脏、脂肪和肌肉组织摄取较少;给药后72 h,肝脏中仍有较高摄取,肿瘤中仍有放射性分布。给药后2~6 h各组织脏器的蛋白沉淀率较低,表明^(125)I-NaI标记外泌体稳定性有所降低。结论外泌体可以进行^(125)I标记,而且标记同位素前后对外泌体物理形态、生物学活性无明显影响;^(125)I标记外泌体的方法简便,标记率和放化纯度均较高;该外泌体产品在荷瘤小鼠体内大部分血流丰富的组织器官均有分布,且具有一定的肿瘤靶向定位能力。