Ipr1/PPE68重组BCG诱导BALB/C小鼠免疫应答的探讨

目的构建Ipr1/PPE68重组卡介苗(Recombinant BCG,rBCG),探讨其诱导BALB/C小鼠免疫应答的效果。方法将Ipr1和PPE68基因及结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)复制子OriM分别插入pBudCE4.1的多克隆位点,构建共表达穿梭质粒pBIPO,将其电转入BCG,构建Ipr1/PPE68-rBCG并将rBCG免疫BALB/C小鼠,检测小鼠血清中IgG2a、IL-12、IFN-γ及IL-4的水平、特异性脾淋巴细胞增殖和CD4+和CD8+T细胞数量,同时观察脾、肺荷菌量及脾、肺组织病理学变化。结果酶切测序及菌落PCR鉴定Ipr1和PPE68以及OriM基因序列与理论值相符,Western-blotting结果显示Ipr1和PPE68蛋白成功表达。Ipr1/PPE68-rBCG免疫小鼠后,血清中的IgG2a和IL-12水平及脾淋巴细胞增殖情况明显高于对照组,但与BCG组相比没有显著意义;IFN-γ水平显著低于BCG组,与对照组相比无显著性差异;各组别IL-4的水平差异均不明显。脾、肺荷菌实验未见菌落生长,肺、脾组织未见病理学改变。结论成功构建Ipr1/PPE68-rBCG,该重组BCG能诱导BALB/C小鼠的细胞免疫应答。

Ipr1/PPE68穿梭质粒构建及诱导BALB/c小鼠免疫应答的探讨

目的构建Ipr1/PPE68共表达穿梭质粒pBIPO(pBud-Ipr1-PPE68-OriM),探讨其诱导BALB/C小鼠的免疫应答特征。方法将Ipr1基因和PPE68编码序列以及结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的复制子OriM分别插入质粒pBudCE4.1的多克隆位点,构建共表达穿梭质粒pBIPO,经酶切测序及Western blotting鉴定后,用其免疫BALB/c小鼠,于末次免疫后2w处死小鼠,ELISA法分别检测小鼠血清中lgG2a、IL-12及IFN-γ的水平,流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞数量,MTT法检测特异性脾淋巴细胞增殖,同时观察肺脾组织病理学变化。结果酶切测序鉴定PPE68和Ipr1基因序列与理论值相符,Western-blotting鉴定PPE68和Ipr1蛋白表达成功。质粒pBIPO免疫后小鼠血清中的lgG2a、IFN-γ及IL-12水平与CD4+和CD8+T细胞表达均呈现出有意义的提高,脾淋巴细胞增殖与BCG组相比差异无统计学意义,肺脾组织未见病理学改变。结论成功构建DNA疫苗(pBIPO),该疫苗能够有效诱导BALB/c小鼠的细胞免疫应答,为进一步研究其抗MTB的免疫保护作用奠定基础。