Irgm1基因敲除对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠CD4^+ T细胞亚群的影响

目的:探讨免疫相关GTP酶1(Irgm1)基因敲除对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠CD4+T细胞的影响。方法:C57BL/6纯系小鼠与Irgm1基因敲除杂合小鼠(Irgm1+/-)回交十代繁殖C57BL/6背景下Irgm1+/-小鼠,用C57BL/6 Irgm1+/-小鼠杂交获取Irgm1-/-、Irgm1+/-、Irgm1+/+三种基因型小鼠,PCR扩增DNA检测基因型。用髓鞘少突胶质糖蛋白(Myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG33-55)多肽与弗氏完全佐剂等量混合制成乳剂,免疫C57BL/6野生型(Wt.)和Irgm1基因敲除(Irgm1-/-)小鼠,建立EAE模型,并进行临床评分。MTT法测定MOG33-55免疫后7 d的EAE小鼠淋巴结细胞中MOG33-55特异性T细胞增殖分化水平。取MOG33-55免疫后14 d EAE小鼠脊髓切片,HE染色检测炎细胞浸润情况。取MOG33-55免疫后16 d的EAE-小鼠淋巴结、脊髓和脑组织,提取单个核细胞,用MOG33-55(20μg/ml)体外刺激培养7 d,收集细胞,用流式细胞仪分析EAE小鼠淋巴结、中枢神经系统浸润细胞中Th1、Th17的改变。结果:成功诱导了EAE小鼠模型;HE染色结果显示Wt.小鼠脊髓周围出现明显炎细胞浸润,而Irgm1-/-小鼠则无明显变化;MTT实验表明Irgm1-/-小鼠与Wt.小鼠相比,淋巴结中T细胞对MOG33-55特异性增殖能力降低;流式细胞分析表明相对于Wt.小鼠,Irgm1-/-小鼠EAE模型在淋巴结及中枢神经系统浸润细胞中Th1细胞亚群比例明显增高而Th17细胞亚群比例下降。结论:Irgm1基因敲除可部分保护EAE小鼠的脊髓功能及临床症状。在EAE发病早期,Irgm1可能起到了关键性的作用,因此Irgm1有可能成为EAE治疗的重要分子靶点。

GTP酶-Irgm1对巨噬细胞亚型M1的影响

目的 就GTP酶-Irgm1对巨噬细胞亚型M1分化的影响及可能的机制进行探讨.方法 分别对小鼠腹腔原代巨噬细胞和小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞进行培养,通过流式细胞术并以CD11b及F4/80标记巨噬细胞.每种细胞分成siRNA干扰组与对照组,然后待细胞贴壁后24 h加入干扰素（IFN）-γ和脂多糖（LPS）体外诱导巨噬细胞向M1转化,再进行流式细胞术iNOS染色鉴定M1的百分比.最后利用Western blot和RT-PCR检测体外诱导M1细胞过程时IRF5、IRF8及iNOS的表达情况.结果 ①加入Irgm1 siRNA干扰组的M1百分比（3.4％）明显低于对照组（35.8％）,差异有统计学意义（P＜0.05）;②QPCR检测结果显示：加入Irgm1 siRNA的干扰组与对照组相比,IRF5和IRF8 mRNA表达明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.Western blotting检测结果显示：加入Irgm1 siRNA干扰组与对照组相比,IRF5和IRF8蛋白表达明显减少,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 巨噬细胞内Irgrn1能够通过影响IFR5和IRF8的表达影响巨噬细胞型别的改变.

免疫相关GTP酶Irgm1对小鼠暂时性大脑中动脉缺血再灌注模型脑神经元自噬发生的影响

目的探讨免疫相关GTP酶1（Irgml）在小鼠暂时性大脑中动脉缺血再灌注模型（tMCAO）中的表达及其对tMCAO小鼠大脑神经元内自噬发生的影响。方法采用westernblotting和免疫荧光染色，检测Irgml和自噬相关基因LC3I／II及P62在Irgml^＋/＋小鼠tMCAO脑组织内的表达水平及细胞定位；进一步比较Irgml^＋/＋及Irgml。小鼠tMCAO大脑神经元内自噬发生的差异。结果相比于假手术（sham）组，Irgml在Irgml^＋/＋小鼠tMCAO脑组织中表达明显增高，且主要分布于损伤侧皮层神经元内；同时我们也证实在小鼠tMCAO脑组织中LC3-II表达增加（t=-16．448，P〈0．01），而P62表达明显减低（t=3．975，P〈0．05）。我们进一步实验发现Irgml。小鼠tMCAO脑组织内LC3-II表达量低于Irgml^＋/＋小鼠tMCAO（t=4．073，P〈0．05），而P62表达量高于Irgml^＋/＋小鼠tMCAO（t=-3．383，P〈0．05）。结论在小鼠tMCAO模型中，Irgml参与调节大脑神经元的自噬活动。