菘蓝(Isatis tinctoria L.)花药和花粉发育的光镜研究

应用塑料薄切片方法，对菘蓝花药和花粉的发育过程进行了观察，结果表明，１．花药壁发育属双子叶植物型。绒毡层为腺质的，当精子形成后开始解体。２．自减数分裂粗线期至末期Ⅱ，同一药室内相邻的小孢子母细胞之间存在胞质通道。３．小孢子母细胞的胞质分裂为同时型，形成四面体形的四分体，并发现早期四分体的小孢子之间亦存在胞质通道。４．生殖细胞从初期至中期具有呈弱ＰＡＳ正反应的壁，有丝分裂前壁物质消失。成熟花粉粒三细胞型。

板蓝根高级不饱和脂肪酸对耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADM逆转作用实验

目的 :板蓝根高级不饱和脂肪酸对肝癌耐药细胞株BEL 740 4/ADM耐药逆转作用及机制研究。方法 :MTT法观察药物对细胞的生长抑制作用 ;免疫组化法检测细胞P 糖蛋白 (P gp)和多药耐药相关蛋白 (MRP)的表达 ;采用高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内ADM的浓度。结果 :耐药肝癌细胞株BEL 740 4/ADM对多种化疗药物产生多药耐药性 ,耐药细胞P gp和MRP的阳性率显著高于亲本细胞 (P <0 .0 1) ;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时与ADM合用后能逆转BEL 740 4/ADM对ADM的耐药性 ;ADM与板蓝根高级不饱和脂肪酸合用时 ,其细胞内ADM的含量较单独使用明显增高。结论 :肝癌细胞株BEL 740 4/ADM对多种化疗药物具有多药耐药性 ,其多药耐药性与P gp和MRP过量表达有关 ;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时能逆转BEL 740 4/ADM对ADM的耐药性 ,其逆转作用可能与降低P gp药物外排功能。

板蓝根与南板蓝根及其混淆品的ITS2条形码鉴定

目的:利用ITS2条形码鉴定区分中药板蓝根与南板蓝根及其混淆品蓼蓝和大青。方法:提取4种中药基原植物基因组DNA扩增ITS2序列,隐马尔科夫模型HMMer进行序列注释,Clustal W法进行序列比对,K2P模型计算种内和种间遗传距离,邻接法构建进化树。结果:遗传距离分析显示,4个物种的最大种内遗传距离为0.034,最小种间遗传距离为0.347,最大种内遗传距离大于最小种间遗传距离。同时4个物种可以在进化树上明显区分开来。结论:ITS2序列可以用于板蓝根与南板蓝根及其混淆品蓼蓝和大青的分子鉴定,相较于传统鉴定方法,该方法更加高效与准确。

板蓝根高级不饱和脂肪组酸的体外抗人肝癌BEL-7402细胞活性

目的 :研究板蓝根高级不饱和脂肪组酸体外抗人肝癌BEL 74 0 2细胞的活性。方法 :MTT法测定细胞毒作用 ,集落形成实验观察药物对肝癌细胞增殖的抑制作用 ,PCR ELISA试剂盒测定细胞的端粒酶活性。结果 :板蓝根高级不饱和脂肪组酸能抑制BEL 74 0 2细胞的增殖 ,其IC50 为 0 6mg·mL-1,有促使肿瘤细胞向正常细胞逆转的趋势 ,可降低端粒酶活性的表达。结论

药桑、两色金鸡菊、刺山柑提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用研究

以三种新疆特色食药两用资源药桑、两色金鸡菊、刺山柑为研究对象,以临床糖尿病常用的药物阿卡波糖为阳性对照,用经典α-葡萄糖苷酶活性测定方法,对其水提物及醇提物进行酶抑制活性筛选,并对其中抑制作用最强的提取物进行了酶促反应动力学分析。药桑、两色金鸡菊、刺山柑提取物对α-葡萄糖苷酶均有明显的抑制作用,药桑醇提物IC_(50)为2.636μg·mL^(-1)、药桑水提物IC50为7.948μg·mL^(-1)、两色金鸡菊醇提物IC_(50)为0.000645μg·mL^(-1)、两色金鸡菊水提物IC_(50)为6.962μg·mL^(-1)、刺山柑醇提物IC_(50)为78.11μg·mL^(-1)、刺山柑水提物IC50为88.5μg·mL^(-1)、阿卡波糖IC_(50)为24.68μg·mL^(-1);由酶动力学实验结果得到,两色金鸡菊醇提物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用表现为可逆竞争性抑制。两色金鸡菊及药桑的水及醇提物具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,可作为潜在的抑制α葡萄糖苷酶、降低餐后血糖的食药两用资源,具有较高的研究价值。

不同生态类型菘蓝SLAF-seq分子标记

目的探究不同生态类型菘蓝Isatis tinctoria表型差异和特异位点扩增片段测序(specific-locus amplified fragment sequencing,SLAF-seq)分子标记。方法以25个不同生态类型菘蓝为研究对象,利用SLAF-seq技术开发SLAF标签,再结合菘蓝叶片叶表观特征的田间观测,分析不同生态类型菘蓝植株表观差异。结果测序后各样品所获得的读长总量各不相同,测序质量值Q30为95.66%~96.60%,GC比例为38.13%~41.37%。共开发535105个菘蓝SLAF标签,多态性SLAF标签有34412个,共得到63002个群体单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)标记。测序分析结果与叶表观特征调查结果相结合,可以将25个不同生态类型菘蓝分为5类,分别为倒卵圆形无缺刻皱缩叶、倒卵圆形缺刻皱缩叶、倒卵圆形无缺刻平坦叶、倒卵圆形缺刻平坦叶、披针形无缺刻平坦叶。结论为后期进一步研究不同类型菘蓝的基因来源和遗传进化提供参考,为菘蓝种质分类、品种鉴定和分子辅助育种提供借鉴。

板蓝根二酮B体外抗癌活性研究

目的 :板蓝根二酮 B抗人肝癌 BEL- 740 2细胞、卵巢癌 A2 780细胞体外活性研究。方法 :MTT法测定板蓝根二酮 B对肝癌 BEL - 740 2细胞和卵巢癌 A2 780细胞的抑制作用 ,集落形成实验观察药物的诱导分化作用 ,PCR- EL ISA试剂盒测定细胞的端粒酶活性。结果 :板蓝根二酮 B具有抑制肝癌 BEL - 740 2细胞、卵巢癌 A2 780细胞增殖的能力 ,其 IC5 0 分别为 8.2 μg/ m L 和 7.8μg/ m L;且具有诱导分化作用 ,可降低端粒酶活性的表达。结论 :研究结果提示板蓝根二酮 B具有体外抗肿瘤活性。

菘蓝的4种有效成分及配伍组合抗腺病毒作用的研究

目的从菘蓝中提取出4种有效成分(编以代码为6号,7号,8号,9号),观察4种有效成分及其配伍抗腺病毒活性。方法通过观察细胞病变效应(CPE),噻唑兰(MTT)比色法检测细胞活性,以确定4种有效成分及其配伍抗腺病毒的作用。结果菘蓝的4种有效成分及其配伍组合对腺病毒生物合成都有抑制作用。随着药物浓度的增加,CPE逐渐减弱,病毒的抑制率增加。结论菘蓝的4种有效成分及其配伍组合能在体外通过抑制生物合成发挥抗腺病毒作用。

菘蓝的4种单体成分抗柯萨奇病毒作用的研究

目的 :了解菘蓝 4种有效单体 (6 ,7,8,9号 )抗柯萨奇病毒B组 3型 (CVB3 )的活性。方法 :通过观察细胞病变效应 (CPE) ,噻唑蓝 (MTT)比色法检测细胞活性 ,用半定量RT PCR检测不同药物浓度下病毒核酸含量 ,以确定有效单体抗CVB3 的作用。结果 :菘蓝的 4种单体成分对CVB3 生物合成均有抑制作用 ,且强于阳性对照药物病毒唑。表现在随着药物浓度的增加 ,CPE程度逐渐减弱 ,病毒核酸的含量逐渐下降。结论 :菘蓝的 4种单体能在体外通过抑制生物合成发挥抗CVB3 作用。

乙酰胆碱对板蓝根^(14)C-同化物运输的影响

以板蓝根源 通道 库模式系统研究了乙酰胆碱对板蓝根14 C 同化物运输的影响 ,结果表明 :低浓度乙酰胆碱处理板蓝根韧皮部 ,板蓝根叶片向肉质根输出的14 C 同化物增多 ,尤其以0 0 1mmol L的处理效果最为明显 ;说明低浓度乙酰胆碱增强了通道的运输活性。

板蓝根高极性流分及其亚流分抗氧自由基的活性

目的 :检测板蓝根高极性流分及其亚流分的抗氧自由基活性。方法 :用快速低压干柱柱层析法从板蓝根中分离出一个高极性流分及其亚流分 ;用过硫酸铵 /N,N ,N’,N’-四甲基乙二胺 ( AP- TEMED)体系检测氧自由基的清除率。结果 :板蓝根高极性流分及其亚流分具有较高的抗氧自由基活性。结论

板蓝根组酸对耐药人肝癌原位移植瘤的耐药逆转研究

目的 研究板蓝根组酸对耐药人肝癌原位移植瘤的耐药逆转作用及机制。方法 利用已建立的人耐药肝癌BEL - 74 0 4 /ADM动物模型 ,应用 FCM、HPL C和 RT- PCR等方法观察板蓝根组酸在体内对多药耐药逆转。结果 板蓝根组酸联合 ADM作用于耐药肝癌动物后 ,肿瘤体积和肿瘤重量分别为 0 .17± 0 .0 5 (cm3)、0 .73± 0 .19(g)明显小于 ADM组的 0 .5 8± 0 .13(cm3)、1.4 1± 0 .32 (g) ,两组间差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ,肿瘤抑制率达 5 3%。其细胞内 ADM的含量 :板蓝根组酸 +ADM组为 1.0 7± 0 .0 7,ADM组为 0 .2 8± 0 .11,有显著性差异 (P<0 .0 1)。但 MDR1- m RNA,P- gp的表达改变不明显。结论 板蓝根组酸在体内能逆转耐药肝癌细胞对 ADM的耐药性 ,其逆转作用可能与降低 P- g P药物外排功能、增加细胞内药物浓度有关 。

油菜与菘蓝和荠菜属间杂交新品系比较试验

甘蓝型油菜与菘蓝（板蓝根）及荠菜属间杂交新品系ＹＰ０１和ＹＤ１２，分别比推广良种中油８２１增产１４．９４％和２４．９０％，差异分别达显著和极显著水平。菌核病率和病指，ＹＰ０１为８．１３％和２．７１，比抗（耐）菌核病较强的对照品种（中油８２１）的３０．７１％和１１．９１相对降低７３．５３％和７７．２５％；ＹＤ１２为２５．５５％和１０．３４，比对照降低１６．８０％和１３．１８％。ＹＤ１６（油菜×荠菜）品系菌核病率接近于零（本年度菌核病严重），产量比对照高２１．０％。

板蓝根组酸诱导耐药人肝癌原位移植瘤的细胞凋亡研究

目的 研究板蓝根组酸诱导耐药人肝癌原位移植瘤的细胞凋亡作用及机制。方法 利用已建立的人耐药肝癌BEL 74 0 4 /ADM动物模型 ,应用FCM、透射电子显微镜等方法观察板蓝根组酸在体内对耐药肝癌细胞的形态学特征变化。结果 FCM检测到的凋亡细胞为 :BEL 74 0 4细胞组 0 5 % ,ADM组为 8 3% ,组酸 +ADM组为 1 7 6 % ,两组比较有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;电镜下见组酸 +ADM组的肿瘤组织中多个凋亡细胞聚集 ,细胞核内染色质空虚 ,或染色质浓缩成新月体帽状结构 ,核仁浓缩或碎裂 ,凋亡小体形成 ,粗面内质网结构松散、脱粒、滑面内质网增多 ,排列无序 ,线粒体呈泡状或出现絮状物 ,嵴模糊不清 ,桥粒连接疏松 ,细胞膜微绒毛脱落或消失 ,溶酶体减少。结论 经组酸 +ADM作用于肿瘤后 ,耐药肝癌中凋亡细胞明显增多 ,肝癌细胞的超微结构形态学改变符合程序化死亡的过程 ,说明板蓝根组酸联合ADM能诱导耐药肝癌细胞发生凋亡 ,具有逆转耐药作用。

板蓝根对试验性小鼠遗传毒性的影响

目的 :研究板蓝根水煎液在实验性小鼠体内是否具有遗传毒性。方法 :应用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形实验 ,观察板蓝根水煎液在小鼠体内能否诱发体细胞和雄性生殖细胞遗传物质的损伤。结果 :板蓝根水煎液能明显诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核和小鼠精子畸形 ,具有致突变作用。结论 :板蓝根水煎液作为一种临床常用的清热解毒和治疗肿瘤的中草药 ,在剂量较大时 ,具有致突变性 ,临床使用上应注意。

大青叶不同生长时期靛玉红含量动态变化研究

[目的]研究不同生长时期的大青叶(Isatis tinctoria L.)中靛玉红含量差异,以便更有效地利用大青叶。[方法]采用高效液相色谱法测定不同生长时期的大青叶中靛玉红含量。[结果]不同生长时期的大青叶中靛玉红含量差异很大。前期靛玉红快速积累,7月开始,靛玉红含量上升,到8月中旬达到最高值。随着叶部的生长发育,大青叶中靛玉红的含量在6～7月递增率为24.5%,而6～8月的递增率为113.2%。[结论]大青叶不同生长时期的靛玉红含量变化较大,生长后期积累十分迅速。这可为大青叶采收期的制定及品质评价等提供依据。

板蓝根新病害——根肿病

在板蓝根种植园中观察到板蓝根的根肿病,为了确认、识别板蓝根的根肿病,采用人工接种的方法,证明根肿病菌可引起板蓝根的根肿病,并描述了根肿病在板蓝根上的症状。

板蓝根组酸活性单体-5b逆转肝癌细胞耐药的实验研究

目的 :研究板蓝根组酸活性单体 5b对肝癌耐药细胞BEL 74 0 4 /ADM逆转作用及机制。方法 :利用BEL 74 0 4细胞的多药耐药模型BEL 74 0 4 /ADM ,应用MTT法、免疫组化法和高效液相色谱法(HPLC)观察板蓝根组酸活性单体 5b对BEL 74 0 4 /ADM多药耐药逆转。结果 :板蓝根组酸活性单体 5b能降低肝癌耐药细胞BEL 74 0 4 /ADM对ADM的耐药性 ,细胞MDR ,p gp的表达改变不明显 ,其细胞内ADM的含量明显增高。结论 :板蓝根组酸活性单体 5b能逆转肝癌耐药细胞BEL 74 0 4 /ADM对ADM的耐药性 ,其逆转作用可能与降低P gP药物外排功能、增加细胞内药物浓度有关。