灯盏花注射液对小鼠肠缺血再灌注肝损伤的保护作用

制作小鼠肠缺血再灌注肝损伤模型 ,观察灯盏花注射液对小鼠肠缺血再灌注肝损伤的保护作用。结果表明 ,小鼠肠系膜上动脉缺血 2 0 m in和再灌注 1h,血清丙氨酸转氨酶 (AL T)和谷胱甘肽 S-转移酶(GST)活性明显增高。不同剂量灯盏花注射液能降低肠缺血再灌注肝损伤小鼠血清 AL T和 GST的活性 ,明显改善肠缺血再灌注肝损伤小鼠的超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量。病理检查结果也表明 ,灯盏花注射液对缺血再灌注肝损伤小鼠有一定的保护作用。提示灯盏花注射液对小鼠肠缺血再灌注肝损伤的保护作用与其抗氧化作用有关。

缺血后处理对大鼠肝大部切除后残肝缺血再灌注损伤的影响

目的探讨缺血后处理对肝大部切除后残肝缺血再灌注损伤的影响。方法选取健康清洁级雄性SD大鼠115只,体重230～280g,其中25只随机分为5组:70%单纯肝切除1组(PH1)、70%肝切除合并缺血再灌注1组(PHIR1)、10s-10s循环3次后处理组(IPO1)、30s-30s循环3次后处理组(IPO2)和60s-60s循环3次后处理组(IPO3)。再灌注6h后取各组大鼠下腔静脉血及残肝组织,测定血清ALT、AST活性及肝细胞凋亡指数,选取保护效果最佳的后处理方案。剩余90只大鼠随机分为3组:PH2组、PHIR2组和IPO组,并于再灌注1、6、12、24、48h取各组大鼠下腔静脉血及残肝组织,每时点6只,测定血清ALT、AST活性及肝组织丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)水平。结果与PH1组比较,PHIR1组、IPO1组、IPO2组和IPO3组血清ALT和AST活性、肝细胞凋亡指数均升高(P<0.05);与PHIR1组比较,IPO1组、IPO2和IPO3组血清ALT和AST活性、肝细胞凋亡指数均降低,但仅IPO2组差异有统计学意义(P<0.05)。选择IPO2组作为后处理方案,与PHIR2组比较,IPO组各时点ALT、AST活性和MDA、MPO表达水平降低(P<0.05),SOD表达水平升高(P<0.05)。结论缺血后处理可以减轻肝大部切除后残肝的缺血再灌注损伤,其机制与抑制氧化反应,减少自由基生成,减轻炎细胞浸润等有关。

过氧化物酶Ⅰ、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶在大鼠肝缺血再灌注损伤小肠内的表达变化

目的:观察过氧化物酶Ⅰ(PrxI)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)在大鼠肝缺血再灌注损伤模型小肠内的表达变化以及小肠内氧化应激的水平,探讨肝缺血再灌注损伤对小肠的影响及PrxI、CAT、SOD的抗氧化作用。方法:制备大鼠70%肝缺血再灌注损伤模型。肝缺血再灌注6h后取血、肝和小肠。采用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性;钼酸比色法和硫代巴比妥酸比色法测定血清、小肠中H_2O_2和丙二醛(MDA)的含量;H-E染色法观察肝、小肠的形态学改变;RT-PCR测定小肠组织PrxI、CAT、SOD mRNA水平的表达,免疫印迹测定其蛋白水平的表达。结果:与对照组相比,肝缺血再灌注损伤组大鼠血清ALT活性、MDA和H_2O_2的含量明显升高;H-E染色结果显示模型组大鼠肝组织形态结构受损明显;小肠组织内MDA和H_2O_2的含量明显高于对照组,PrxI、CAT、SOD的mRNA和蛋白表达水平与对照组相比也升高明显。结论:PrxI、CAT和SOD在小肠组织处于高度氧化应激状态过程中可能发挥了抗氧化应激作用。

局部热应激预处理对肝脏缺血/再灌注损伤的防护作用的机制

目的:探讨热应激预处理诱导产生的热休克蛋白70对肝脏缺血/再灌注损伤的保护作用的机制。方法:应用pringle,s法制备肝脏缺血/再灌注损伤模型及热应激预处理模型。将实验大鼠随机分为热应激预处理(HP+I/R)组与非预处理(I/R)组,对比观察两组动物肝脏缺血/再灌注后0、4、8、122、4h时肝脏HSP70的表达、SOD活力和MDA的产生量及大鼠血清门冬氨酸转氨酶(aspartatetransaminase,AST),丙氨酸转氨酶(alaninetransaminase,ALT)的活性与肝脏病理组织学改变。结果:热应激预处理组各时间点肝脏HSP70的表达及SOD的活力均比非预处理组同一时间点高,而血清AST、ALT酶活性及MDA的产生量较非预处理组低,病理损伤也比非预处理组减轻。结论:热应激预处理诱导产生的热休克蛋白70可能通过促进SOD的产生,从而降低氧自由基对肝脏的损害,起到保护肝脏缺血/再灌注损伤的作用。

PEP-1-SOD1融合蛋白转导入大鼠肝脏组织的能力及酶活性

目的研究PEP-1-SOD1融合蛋白转导入大鼠肝脏组织的能力及其酶活性。方法实验分为SOD1组和PEP1-SOD1组,分别经尾静脉注射500μgSOD1和500μgPEP-1-SOD1融合蛋白入大鼠体内,于0.5,1,2,4,8和24h时间点取肝脏(n=6,每组,每个时间点)。免疫荧光技术检测PEP-1-SOD1的转导能力。黄嘌呤氧化酶法测定肝脏组织SOD1活性。结果SOD1蛋白不能进入肝脏组织内。PEP-1-SOD1可转导入肝脏组织内,SOD1活性于注射后0.5h开始升高,1h达高峰,持续存在达24h,两组各个时间点比较,差异有统计学意义(P<0.01)。SOD1组内各时间点比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论PEP-1-SOD1以天然酶活性形式转导入肝脏组织,为进一步的动物模型实验及临床疾病进行蛋白质治疗提供理论基础。

缺血后处理对兔肝脏热缺血再灌注损伤的保护

目的探讨缺血后处理对肝脏热缺血再灌注损伤的保护作用。方法阻断肝十二指肠韧带建立兔肝脏热缺血再灌注模型,将30只健康新西兰大耳白兔随机分为假手术(S组)、缺血再灌注(IR组)、缺血后处理(IP组)3组,每组10只。S组只分离肝十二指肠韧带,不阻断;IR组分离并阻断肝十二指肠25min后再恢复灌注;IP组分离并阻断肝十二指肠韧带,于肝脏缺血25min后恢复血灌前阻断、复灌各1min共3个循环进行缺血后处理。观察麻醉诱导后20min(T0)、阻断肝十二指肠韧带25min(T1)、开放30min(T2)、开放1h(T3)、开放2h(T4)、开放4h(T5)血流动力学、谷丙转氨酶(ALT)变化,并检测肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)变化。结果与IR组比较,IP组T2时HR,T2、T5时SBP及T5时DBP较IR组高;复灌后(T2～T5)血浆ALT明显降低,肝组织中MDA明显下降,而SOD明显升高(P<0.05)。结论缺血后处理可减轻肝脏缺血再灌注损伤。

瘦素对肠缺血/再灌注损伤大鼠肝脏功能的影响及其机制

目的:探讨瘦素(leptin)对大鼠肠缺血/再灌注(I/R)损伤时肝脏的保护作用及其机制。方法:99只Wistar大鼠随机分成11组:假手术组,肠缺血45min再灌注15min、30min、1h、3h、6h的肠I/R损伤组和相应时间点的leptin治疗组,每组9只大鼠。肠I/R损伤组和leptin治疗组建立大鼠肠I/R损伤模型;leptin治疗组于再灌注的同时腹腔注射leptin0.2mg/kg。假手术组术后1h处死,其余各组大鼠于相应时间点处死,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT),肝组织中白细胞介素-6(IL-6)、IL-10和超氧化物歧化酶(SOD)水平的动态变化。结果:肠I/R组血清ALT随着时间变化逐渐升高,肝组织中的IL-6水平于再灌注3h显著升高,而IL-10水平基本处于平稳的波动状态,SOD活性于再灌注早期呈略微下降趋势,1h后逐步回升至假手术组水平;leptin治疗后血清ALT水平基本稳定在较低水平,再灌注3h后,肝组织IL-6水平较损伤组明显降低,同时SOD活性显著提高,IL-10水平于再灌注15min时突然增高,随即恢复到假手术组水平。结论:leptin对大鼠肠I/R造成的肝脏功能损伤具有改善作用,可能与其调节肝组织中的细胞因子释放、提高肝脏的抗氧化损伤能力有关。

瘦素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的探讨瘦素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法40只SD大鼠随机分为4组,分别为:假手术组(Sham组)、肝缺血再灌注损伤(HIRI)模型组、HIRI瘦素预处理组和HIRI术后瘦素处理组,每组10只。HIRI模型组建立大鼠肝I/R损伤模型,Sham组开腹后仅钝性分离肝蒂左分叉,但不夹闭阻断肝叶供血,HIRI瘦素预处理组大鼠于HIRI术前30 min给予腹腔注射重组瘦素,剂量为0.2 mg/kg体质量。HIRI术后瘦素处理组大鼠于HIRI术后30 min给予腹腔注射重组瘦素,剂量为0.2 mg/kg体质量。4组大鼠分别于HIRI术后3 h采集血清和6 h时处死,采集肝脏组织。采用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡情况,检测各组大鼠血清中丙二醛(MDA)活性和超氧化物歧化酶(SOD)水平,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,采用全自动生化分析仪分析丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量。结果Sham组见少量TUNEL阳性肝细胞,HIRI模型组TUNEL阳性肝细胞与Sham组比较明显增多(P<0.05),HIRI瘦素预处理组凋亡细胞和阳性率较HIRI模型组和HIRI术后瘦素处理组明显减少(P<0.05)。HIRI模型组大鼠肝脏组织匀浆MDA含量明显高于Sham组大鼠肝脏组织匀浆中的含量,SOD含量明显低于Sham组(P均<0.05),HIRI瘦素预处理组MDA含量高于Sham组,但明显低于HIRI模型组(P均<0.05)。与Sham组比较,各组大鼠IL-6、TNF-α、ALT、AST水平均明显升高(P均<0.05),与HIRI模型组比较,瘦素预处理组大鼠IL-6和TNF-α、ALT、AST水平降低,HIRI术后瘦素处理组IL-6和TNF-α水平较HIRI模型组升高(P均<0.05)。结论瘦素预处理可以对大鼠肝脏缺血再灌注损伤具有改善作用,可能与其调节肝组织中的细胞因子释放,提高肝脏的抗氧化损伤能力有关。

抑肽酶对大鼠肝脏缺血再灌注过程中氧化与抗氧化能力变化的影响

目的 研究大鼠肝脏缺血再灌注过程中氧化与抗氧化能力平衡的变化及抑肽酶预处理对其的影响。方法 健康成年SD大鼠 12 0只 ,随机分为假手术组 (A0 )、生理盐水预处理组 (A1 )和抑肽酶预处理组 (A2 ) ,观察肝脏缺血再灌注过程中肝组织氧化与抗氧化能力相关指标的变化 ,分析抑肽酶预处理的影响。结果 肝脏缺血再灌注后A1 、A2 两组与A0 组相比肝组织丙二醛含量大幅升高 (P <0 .0 1) ,A1 组较A2 组升高更多 (P <0 .0 1) ;A1 、A2 两组肝组织超氧化物歧化酶活性、总抗氧化能力与A0 组相比大幅降低 (P <0 .0 1)。结论 大鼠肝脏缺血再灌注过程中氧化与抗氧化能力平衡遭到严重破坏 ,抑肽酶可减轻自由基反应 ,降低其破坏程度。

黄芪注射液对大鼠肠缺血再灌注肝损伤的保护作用

目的探讨黄芪注射液对大鼠肠缺血再灌注所致肝损伤的保护作用及机制。方法Wistar大鼠随机分为假手术组、肠缺血再灌注组、黄芪组。夹闭肠系膜上动脉 1h ,再灌注 3h后分别测定各组血清丙氨酸转移酶 (ALT)、谷胱甘肽S -转移酶 (GST)活性、肝组织MDA含量和SOD活性 ,并观察各组肝组织病理学改变。结果大鼠肠缺血 1h再灌注 3h后 ,血清ALT、GST活性、肝组织MDA含量明显升高、肝组织SOD活性明显降低。黄芪注射液能明显改善肠缺血再灌注肝损伤大鼠血清ALT和GST的活性、肝组织的SOD活性和MDA含量。肝组织病理检查结果也表明 ,黄芪注射液对肠缺血再灌注肝损伤大鼠有一定的保护作用。结论黄芪注射液对大鼠肠缺血再灌注肝损伤的保护作用与其抗氧化作用有关。

SOD在缺血预处理保护大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用

目的 :探讨超氧化物歧化酶 (superoxidedismutase ,SOD)在缺血预处理保护肝脏缺血再灌注损伤过程中的作用。方法 :应用大鼠部分肝脏缺血再灌注损伤模型 ,检测缺血预处理组 (IP组 )、缺血再灌注组 (I/R组 )及对照组 (C组 )大鼠血清丙氨酸转氨酶 (alaninetransaminase,ALT) ,门冬氨酸转氨酶 (aspartatetransaminase ,AST)及乳酸脱氢酶 (lactatedehydrogenase ,LDH)水平与肝脏病理组织学改变 ,测定其肝脏组织SOD水平的变化并与单纯缺血预处理组 (OIP组 )大鼠进行比较。结果 :IP组的肝脏损害虽较C组重 ,但明显较I/R组轻 ,其 3种血清生化酶均显著低于I/R组 ;OIP组肝组织的SOD水平 (2 14 .95± 2 4 .38)NU/mgprotein均显著高于IP组 (172 .4 3± 15 .2 3)、I/R组 (16 4 .0 3± 30 .0 8)与C组 (16 7.0 3± 2 7.6 0 )NU/mgprotein (P <0 .0 1)。结论 :缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤具有保护作用 。

烟酰胺单核苷酸通过Sirt3减轻心脏死亡供肝诱导的缺血-再灌注损伤

目的 探讨烟酰胺单核苷酸(NMN)对大鼠心脏死亡供肝诱导的缺血-再灌注损伤(IRI)的作用及机制。方法 通过“磁环+双袖套”法建立大鼠原位肝移植模型。将SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、原位肝移植组(OLT组)、NMN处理+原位肝移植组(NMN组)、NMN+去乙酰化酶-3(Sirt3)抑制剂(3-TYP)+原位肝移植组(NMN+3-TYP组)。观察各组大鼠肝组织病理学改变及肝细胞凋亡情况,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平,测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量,检测肝组织Sirt3、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、PTEN诱导假定激酶1(PINK1)、Parkin、线粒体外膜转位酶20(TOMM20)表达水平。分析各组大鼠术后生存情况。结果 与Sham组比较,OLT组ALT、AST水平升高;与OLT组比较,NMN组ALT、AST水平均下降;与NMN组比较,NMN+3-TYP组ALT、AST水平升高(均为P<0.05)。Sham组大鼠肝组织结构基本正常;OLT组大鼠肝组织可见明显的淤血、空泡变性和肝细胞坏死等病理改变。OLT组Suzuki评分、细胞凋亡率较Sham组升高;NMN组Suzuki评分、细胞凋亡率较OLT组降低;NMN+3-TYP组Suzuki评分、细胞凋亡率较NMN组升高(均为P<0.05)。与Sham组比较,OLT组SOD含量下降,MDA含量升高;与OLT组比较,NMN组SOD含量升高,MDA含量下降;与NMN组比较,NMN+3-TYP组SOD含量下降,MDA含量升高(均为P<0.05)。与Sham组比较,OLT组Sirt3、TOMM20蛋白相对表达量下降,PINK1、Parkin、LC3Ⅱ蛋白相对表达量升高;与OLT组比较,NMN组Sirt3、PINK1、Parkin、LC3Ⅱ蛋白相对表达量升高,TOMM20蛋白相对表达量下降;与NMN组比较,NMN+3-TYP组PINK1、Parkin、LC3Ⅱ蛋白相对表达量下降,TOMM20蛋白相对表达量升高(均为P<0.05)。Sham组、OLT组、NMN组、NMN+3-TYP组大鼠术后7 d生存率分别为100%、50%、75%、58%。结论 NMN可通过上调Sirt3,增强肝脏抗氧化能力及诱导PINK1/Parkin介导的线粒体自噬,减轻肝IRI,从而对心脏死亡供肝发挥保护作用。

淫羊藿苷后适应对肠缺血再灌注肝损伤的保护作用

目的探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对肠缺血再灌注导致肝损伤的保护作用。方法 Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、ICA低剂量组、ICA高剂量组。分别检测各组血清丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果与假手术组比较,模型组大鼠可使大血清ALT、AST活性分别升高4.4倍、3.74倍,差异显著(P<0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠再灌注后血清SOD活性降低53%、MDA含量增高2.11倍,差异显著(P<0.01)。结论 ICA可减轻大鼠肠缺血再灌注所致肝损伤的作用,其作用机理可能与减轻机体的脂质过氧化损伤有关。