β-榄香烯调控PI3K/Akt/mTOR信号通路对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的 探讨β-榄香烯对子宫内膜癌Ishikawa细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法 用不同浓度(0、50、100、150、200、250、300μg/mL)β-榄香烯处理Ishikawa细胞,应用CCK-8法检测细胞存活率,计算β-榄香烯的半数抑制浓度IC50,确定低、中、高药物处理浓度,并设置0μg/mL β-榄香烯作为空白对照组,2μg/mL顺铂阳性对照组。使用AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,通过划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,通过Western blot检测Ishikawa细胞中PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达水平。结果 β-榄香烯呈浓度依赖性抑制Ishikawa细胞的增殖,其对Ishikawa细胞24 h和48 h的IC50分别为168.9μg/mL和157.1μg/mL。β-榄香烯能够诱导Ishikawa细胞的凋亡,在经0、85、170、255μg/mL β-榄香烯处理24 h后,细胞凋亡率分别为(9.41±0.52)%、(16.67±0.25)%、(21.27±0.30)%和(25.55±0.89)%,组间多重比较具有统计学差异(P<0.001)。β-榄香烯还能够抑制Ishikawa细胞的迁移、侵袭能力,并且抑制作用随着浓度的升高而增强(P<0.001)。此外,β-榄香烯可降低Ishikawa细胞PI3K、p-PI3K、mTOR、p-mTOR蛋白表达水平(P<0.05),p-PI3K和p-mTOR蛋白表达水平显示出明显的浓度依赖性,255μg/mL β-榄香烯组与0μg/mL β-榄香烯组相比,PI3K、p-PI3K、Akt、mTOR、p-mTOR蛋白表达水平明显降低(P<0.001)。结论 β-榄香烯能够抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,其机制可能与β-榄香烯能够抑制Ishikawa细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路的激活有关。

雌激素调控子宫内膜癌Ishikawa细胞中LRP16基因表达及其意义

目的:探讨子宫内膜癌Ishikawa细胞中雌激素(E2)对LRP16基因表达的调控作用,LRP16基因过表达对Ishikawa细胞增殖及侵袭生长能力的影响以及可能的分子机制.方法:采用Northernblot方法检测细胞中LRP16基因mRNA表达水平.双荧光报告系统检测相对荧光素酶活性.胎盘蓝死活细胞计数方法观察LRP16过表达对Ishikawa细胞增殖的影响,Matrigel包被的Transwell方法观察LRP16过表达对Ishikawa细胞侵袭生长能力的影响.Westernblot方法检测Ishikawa细胞中的蛋白水平.结果:雌二醇诱导了Ishikawa细胞中LRP16基因mRNA水平表达上调;而ICI182780则Ishikawa细胞中LRP16mRNA水平下调.增加ERα表达量促使Ishikawa细胞中LRP16基因上调.pGL3S5与ERα共转染Ishikawa细胞的相对荧光素酶活性较单纯pGL3S5转染组细胞升高30倍.我们没有观察到LRP16基因过表达对Ishikawa细胞的促增殖效应.Transwell结果显示LRP16基因过表达Ishikawa细胞的侵袭率较对照组细胞增加了30%.LRP16基因过表达的Ishikawa细胞中E钙粘合素的mRNA以及蛋白水平较对照组细胞下调了3倍,而没有检测到MMP2,MMP9以及CD44蛋白水平的变化.结论:我结果表明E2通过激活ERα上调子宫内膜癌Ishikawa细胞中LRP16基因mRNA水平,LRP16表达水平依赖于雌激素.LRP16基因表达上调没有促进子宫内膜癌细胞的增殖,但可能通过抑制E钙粘合素表达水平增加了细胞的侵袭能力.

细胞外信号调节激酶1/2在瘦素促进子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖中的作用

背景与目的:流行病学研究提示瘦素与子宫内膜癌的发生有关,但其作用机制尚不清楚。瘦素作为促有丝分裂原,能够显著促进多种细胞的生长增殖。本研究的目的在于探讨细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)在瘦素促进子宫内膜癌细胞增殖中的作用。方法:免疫荧光染色检测Ishikawa细胞中瘦素受体的表达;于Ishikawa细胞中分别加入不同浓度的瘦素(0、10、50、100、150ng/ml),作用不同时间(6、12、24h),MTT法检测各组细胞的增殖情况;同时应用ERK1/2激酶特异性抑制剂PD98059阻断ERK1/2磷酸化,观察其对瘦素促进Ishikawa细胞增殖的影响;应用免疫印迹技术检测100ng/ml瘦素作用于Ishikawa细胞不同时间后(20、40、60min)ERK1/2的活化水平(以p-ERK1/2与ERK1/2的比值表示)。结果:免疫荧光检测结果证实Ishikawa细胞存在瘦素受体的表达;瘦素能明显促进Ishikawa细胞的增殖,在0～100ng/ml范围内瘦素浓度越高,细胞增殖越显著,100ng/ml瘦素作用24h其增殖效应最大(A值=0.73±0.02),100ng/ml组与150ng/ml组差异无统计学意义(P=0.129);PD98059能明显抑制瘦素对Ishikawa细胞的增殖作用,100ng/ml瘦素和100μmol/LPD98059作用24h后,细胞增殖率为(6.88±0.86)%;Ishikawa细胞经100ng/ml瘦素处理后,ERK1/2活化程度明显增高。结论:瘦素可能通过激活ERK1/2信号转导途径促进子宫内膜癌细胞的增殖。

紫草素通过PI3K/Akt信号通路诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡

目的通过研究紫草素诱导Ishikawa细胞凋亡的过程中对PI3K/AKT信号通路的影响,探讨紫草素通过PI3K/Akt信号通路诱导子宫内膜癌细胞凋亡的机制。方法 Ishikawa细胞体外培养,经0.3μg·m L-1、0.5μg·m L-1、0.7μg·m L-1紫草素处理细胞后,倒置显微镜观察不同时间Ishikawa细胞生长变化;RT-PCR及Western-blot检测相关蛋白的表达。结果随着紫草素作用浓度的增加及干预时间的延长,Ishikawa细胞数量逐渐减少;紫草素作用于子宫内膜癌Ishikawa细胞48 h后,p Akt、Bcl-2的蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),而Akt的蛋白表达含量与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论紫草素能够抑制Ishikawa细胞的生长,且呈浓度依赖性;紫草素诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡是通过抑制PI3K/Akt信号通路中Akt的磷酸化,从而对Akt下游靶蛋白Bax上调和Bcl-2下调,发挥了诱导细胞凋亡的作用。

DKK1对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭和迁移能力的影响研究

目的探讨DKK1对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移能力的影响。方法子宫内膜癌Ishikawa细胞,分别施加外源性重组DKK1,分为对照组(未施加DKK1)、DKK1组(施加终浓度为300 ng/ml DKK1);DKK1小干扰RNA(siRNA)瞬时转染,分为对照组(未转染siRNA)、DKK1 RNA干扰(RNAi)组(转染DKK1 StealthTMSelect siRNA)。应用Transwell实验,计数每个视野中穿过凝胶和微孔滤膜的细胞数,反映细胞的侵袭能力;计数穿过微孔滤膜的细胞数,反映细胞的迁移能力。结果外源性重组DKK1干预后24 h,DKK1组穿过凝胶和微孔滤膜的细胞数为(101.10±6.05),较对照组(135.90±3.98)减少(t=15.20,P<0.05)。外源性DKK1干预后,细胞的侵袭能力减低25.61%。DKK1组穿过微孔滤膜的细胞数为(107.10±5.63),较对照组(142.60±6.95)减少(t=12.56,P<0.05)。外源性DKK1干预后,细胞的迁移能力减低24.89%。DKK1 siRNA转染后24 h,DKK1 RNAi组细胞DKK1mRNA表达水平较对照组降低36.71%。DKK1 RNAi组穿过凝胶和微孔滤膜的细胞数为(150.00±4.83),较对照组(130.40±6.15)增加(t=7.93,P<0.05)。下调DKK1基因表达后,细胞的侵袭能力增强15.03%。DKK1 RNAi组穿过微孔滤膜的细胞数为(154.30±5.64),较对照组(139.70±3.47)升高(t=6.98,P<0.05)。下调DKK1基因表达后,细胞的迁移能力增强10.45%。结论 DKK1能抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的侵袭、迁移能力。DKK1有望成为子宫内膜癌细胞侵袭、迁移的有效靶点。

SB203580与雷帕霉素联合对人子宫内膜癌Ishikawa细胞的体外抗肿瘤作用

目的观察体外P38MAPK信号通路抑制剂SB203580单独及SB203580联合mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶蛋白)信号通路抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)对Ishikawa细胞生长、细胞凋亡以及细胞侵袭能力的作用。方法一定浓度梯度的SB203580单独或联合运用雷帕霉素,MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测细胞抑制率、软琼脂克隆形成实验检测肿瘤细胞体外成瘤性、流式细胞仪检测细胞凋亡、Transwell法检测Ishikawa细胞体外侵袭力的改变。结果SB203580对Ishikawa细胞有抑制生长、降低体外成瘤性、诱导凋亡和降低细胞侵袭能力的作用;在相同条件下,SB203580与雷帕霉素联合的抗肿瘤作用要明显优于SB203580单用。结论SB203580与雷帕霉素可协同抑制人子宫内膜癌细胞Ishikawa的生长、诱导细胞凋亡,并同时抑制Ishikawa细胞的侵袭性,具有良好抗肿瘤前景。

雌、孕激素及肝素结合生长因子对Ishikawa细胞HOXA10基因表达的调节

目的通过体外实验研究雌激素、孕激素、肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)对Ishikawa细胞中HOXA10基因表达的调节,探讨HOXA10基因在胚胎种植中的意义。方法体外培养高分化子宫内膜癌细胞Ishikawa,按实验目的分别加入雌激素、孕激素、雌孕激素联合、雌孕激素RU486联合、HB-EGF刺激48 h后,采用免疫荧光、逆转录聚合酶链反应、免疫印迹三种方法测定各个条件下Ishikawa细胞中HOXA10基因的表达。结果雌、孕激素单独或联合作用48 h后都可以显著提高Ishikawa细胞中HOXA10基因的表达(P<0.05),同时加RU486后HOXA10基因表达的上调趋势减弱。加HB-EGF刺激48 h后HOXA10基因的表达量增高(P<0.05)。结论雌、孕激素、HB-EGF对HOXA10基因的表达具有上调作用,RU486能够抑制孕激素的上调作用。

胰岛素和睾酮对Ishikawa细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响

目的探讨胰岛素（INS）和睾酮（T）对多囊卵巢综合征（PCOS）子宫内膜腺上皮细胞生长的影响和葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）表达的调节机制。方法体外培养Ishikawa细胞，予不同浓度INS（90、60、30、3、0．3U／L）或T（10^-2、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7mmol／ml）刺激Ishikawa细胞48h，MTT法检测INS、T对Ishikawa细胞生长的作用；免疫细胞化学检测GLUT4蛋白在Ishikawa细胞定位表达；分别以30U／LINS和10^-5mmol／mlT刺激Ishikawa细胞24和48h，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定INS和T对Ishikawa细胞GLUT4 mRNA表达的影响。结果（1）不同浓度的INS均可促进Ishikawa细胞的生长，随着INs浓度的增加，INS促进Ishikawa细胞生长作用越强，INs浓度自0．3～30U／L时，Ishikawa细胞生长依次加强，与对照组相比均有显著性差异（P〈0．01）。INS浓度达60、90U／L时，细胞生长状况与INS浓度为30U／L相似。不同浓度的T均可抑制Ishikawa细胞的生长，随着T浓度的增加，T抑制Ishikawa细胞生长作用越明显。T浓度自10^-7、10^-6、10^-5mmol／ml，Ishikawa细胞生长依次减弱，与对照组相比均有显著性差异（P〈O．01，P〈0．05），T浓度达10^-4、10^-2mmol／ml时，细胞生长抑制状况与T浓度10^-5mg／ml相似。（2）GLUT4蛋白，定位表达于Ishikawa细胞的细胞浆内。（3）Ishikawa细胞中GLUT4 mRNA表达，在INS组和T组均较对照组减弱（P〈0．01，P〈0．05），INS组比T组减弱更明显（P〈0．05），且INS和T作用24和48h GLUT4 mRNA表达无显著性差异（P〉0．05）。结论不同浓度INS和T均可影响Ishikawa细胞生长，并降低GLUT4 mRNA的表达，推测PCOS高胰岛素、高雄激素血症的病理生理特性有可能影响子宫内膜的代谢过程，与子宫内膜的病变相关。

紫草素对子宫内膜癌Ishikawa细胞雌激素信号通路表达的影响

目的:观察紫草素对子宫内膜癌Ishikawa细胞雌激素信号通路表达的影响。方法:Ishikawa细胞体外培养,经1、3、5M紫草素及相应浓度紫草素中分别加入雌激素10 n M,处理细胞后,用MTT法分别检测治疗24 h、48 h、72 h后Ishikawa细胞生长抑制率;Western-blot及RT-PCR法检测雌激素信号通路ERα、Cyclin D1、c-myc蛋白表达情况及ERα基因的表达情况。结果:显示随着紫草素作用浓度的增加及干预时间的延长,Ishikawa细胞抑制率明显上升;紫草素作用于子宫内膜癌Ishikawa细胞24 h后,ERα、Cyclin D1、c-myc蛋白表达下降,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),但是ERαmRNA表达无统计学意义,与空白对照组比较(P>0.05)。结论:紫草素随着浓度的增加及作用时间的延长,能够显著抑制Ishikawa细胞的增殖;紫草素通过抑制雌激素信号通路中ERα、Cyclin D1、c-myc蛋白表达,起到抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖的作用。

大蒜素诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨大蒜素诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡的作用机制。方法:分别以二甲基亚砜(空白对照组)、大蒜素(12.5、25、50μg/mL)和LY2940025μg/mL干预对数生长期Ishikawa细胞。48 h后,用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术分析细胞凋亡状况,Western Blotting法检测p-PI3K、p-AKT、Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:与空白对照组比较,经大蒜素12.5、25、50μg/mL或LY2940025μg/mL干预能够提高Ishikawa细胞增殖抑制率和凋亡率;经大蒜素25、50μg/mL或LY2940025μg/mL干预能够下调p-PI3K、p-AKT、Bcl-2表达并上调Cleaved Caspase-3、Bax表达,提高Bax/Bcl-2比值,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与LY294002组比较,经大蒜素50μg/mL干预能够提高Ishikawa细胞增殖抑制率和凋亡率,下调p-PI3K、p-AKT表达并上调Cleaved Caspase-3、Bax表达,提高Bax/Bcl-2比值,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:大蒜素能够诱导人子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡,可能与抑制PI3K/AKT信号通路活化而使其下游促凋亡蛋白表达上调有关。

紫草素诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡及其机制的研究

目的:研究紫草素诱导体外培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡作用及其机制。方法:流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率变化;免疫组化法(SABC法)检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:紫草素可诱导细胞凋亡,改变细胞周期分布,多数细胞周期阻滞于G1期,细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.05);紫草素可上调Bax和下调Bcl-2基因蛋白的表达,与空白组对照差异有统计学意义(P<0.05)。结论:紫草素能够诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡,其凋亡机制可能与促进Ishikawa细胞中Bax上调,Bcl-2下调相关。

顺铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖及自噬的影响

目的:观察顺铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖及自噬的影响。方法:MTS法检测不同剂量顺铂对Ishikawa细胞增殖的作用。透射电镜观察自噬泡形成,应用Western blot检测LC3及Beclin1的积累,免疫荧光检测LC3的荧光聚集情况。结果:(1)10μg/m L顺铂对Ishikawa细胞的增殖有抑制作用,随着时间及浓度的增加,细胞增殖的抑制作用明显增加(P<0.01);(2)透射电镜显示顺铂处理后子宫内膜癌细胞发生自噬,随着时间剂量增加,Western blot检测LC3表达增加,Becline1表达无明显变化;(3)与对照组相比,20μg/m L-12 h组的自噬体及LC3表达增加;20μg/m L-24 h组较12 h组的自噬体及LC3表达增加。结论:顺铂对Ishikawa细胞增殖有明显抑制作用,呈时间剂量依赖性;顺铂诱导Ishikawa细胞发生自噬,呈时间剂量依赖性。自噬相关基因LC3的变化可能为顺铂诱导子宫内膜癌自噬分子机制之一。

雌激素对人子宫内膜样癌Ishikawa细胞中p57^(kip2)、Cyclin D1、CDK4表达及形态变化影响的研究

目的:研究雌激素对人子宫内膜样癌(EC)Ishikawa细胞(高分化)中p57^(kip2)、Cyclin D1、CDK4表达及形态变化的影响。方法:分别采用含3种不同浓度雌二醇(E_2)(10^(-6)、10^(-8)、10^(-10)mol/L)的培养基培养Ishikawa细胞24、48、72h,MTT检测细胞增殖情况,光镜和电镜观察细胞形态变化,Western blot法检测p57^(kip2)、Cyclin D1、CDK4蛋白表达。结果:MTT结果显示,与对照组比较,低、中浓度E_2组Ishikawa细胞增殖明显(P<0.05),高浓度E_2组细胞增殖不明显(P>0.05)。光镜及电镜结果显示,与对照组比较,低、中浓度E2组Ishikawa细胞密度增加,部分细胞内线粒体、内质网轻微肿胀,随着作用时间延长,其肿胀程度增加;高浓度E_2组Ishikawa细胞密度减少,较多细胞内线粒体明显肿胀,可见细胞凋亡现象,随着作用时间延长,线粒体、内质网弥漫肿胀、空泡化,细胞凋亡增多。Western blot法结果显示,随着E_2作用时间延长及浓度增加,p57^(kip2)、Cyclin D1与CDK4蛋白表达均逐渐增加(P<0.05),其中p57^(kip2)、Cyclin D1、CDK4蛋白均在高浓度E_2组表达最高,而p57^(kip2)蛋白在低浓度E_2组表达最低,Cyclin D1与CDK4蛋白在对照组表达最低。Cyclin D1和CDK4蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论:E_2浓度较低时可能以上调Cyclin D1与CDK4蛋白表达为主,发挥正向调控细胞周期进程的作用,促进Ishikawa细胞增殖;E_2浓度较高时可能以上调p57^(kip2)蛋白表达为主,从而抑制Ishikawa细胞增殖,还可导致较强细胞损伤。

华蟾素对子宫内膜癌Ishikawa细胞RRM2表达的影响和意义

目的:探讨华蟾素对体外培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、侵袭力及其对RRM2表达的影响和意义。方法:体外培养Ishikawa细胞,经不同浓度华蟾素干预后,用RT-PCR及Western blot分别检测RRM2在mRNA及蛋白水平上的表达,用MTT法检测处理前后细胞的增殖,transwell小室分析细胞体外的侵袭力。结果:华蟾素能显著减少RRM2在mRNA及蛋白水平的表达,有效地抑制Ishikawa细胞增殖,降低侵袭力,研究证实华蟾素终浓度3.0mg/ml是最佳抑制浓度,对照组Ishikawa细胞组则无上述效应。结论:华蟾素可明显降低Ishikawa细胞中RRM2表达,抑制细胞增殖,降低细胞侵袭力。

胰岛素和睾酮对Ishikawa细胞HOXA10基因表达的影响

目的观察胰岛素(INS)和睾酮(T)对子宫内膜腺癌细胞HOXA10基因表达的影响。方法免疫细胞化学检测HOXA10蛋白在Ishikawa细胞定位表达;体外培养Ishikawa细胞,予不同浓度INS(90、60、30、3、0.3 U/L)或T(10^(-3)、10^(-4)、10^(-5)、10^(-6)、10^(-7)mol/L)刺激Ishikawa细胞48h,MTT法检测INS、T对Ishikawa细胞生长的作用;最后分别以30 U/LINS和10^(-5)mol/L T刺激Ishikawa细胞48 h,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定INS和T对Ishikawa细胞HOXA10mRNA表达的影响。结果 (1)HOXA10蛋白定位表达于Ishikawa细胞的细胞浆内。(2)不同浓度的INS均可促进Ishikawa细胞的生长,随着浓度的增加作用越强,INS浓度达60、90 U/L时,细胞生长状况与浓度为30 U/L相似。不同浓度的T均可抑制Ishikawa细胞的生长,随浓度增加抑制作用越明显,浓度达10^(-4)、10^(-3)mol/L时,细胞生长抑制状况与浓度为10^(-5)mol/L相似。(3)RT-PCR检测结果显示INS组和T组Ishikawa细胞中HOXA10mRNA表达均较对照组减弱(P<0.01或P<0.05)。结论不同浓度INS和T均可影响Ishikawa细胞生长,高浓度的INS和T降低细胞上HOXA10mRNA的表达。

紫杉醇脂质体对子宫内膜癌Ishikawa细胞的体外杀伤作用

目的探讨注射用紫杉醇脂质体对人子宫内膜癌细胞系的体外杀伤作用。方法以不同浓度含紫杉醇脂质体的培养基作用于人子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞，并设对照（普通培养基），通过MTT、倒置显微镜观察细胞增殖状况及形态，流式细胞分析技术检测该药对细胞生长的影响。结果经不同浓度紫杉醇脂质体作用24～96h，细胞存活率显著下降（P〈0．05）；镜下观察显示部分细胞皱缩变形，崩解坏死，细胞脱壁悬浮；流式细胞术结果显示细胞凋亡率逐渐增加，细胞周期各时相中，S期比例减少。结论紫杉醇脂质体可抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的生长。

siRNA抑制RRM2表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖影响的研究

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)抑制RRM2基因表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖及侵袭能力的影响。方法:针对RRM2基因设计siRNA,利用阳离子脂质体Lipofectamine2000TM将siRNA片段导入Ishikawa细胞中。用荧光显微镜观察转染情况,流式细胞术检测细胞转染率、凋亡率及细胞周期,用MTT比色法检测siRNA对Ishikawa细胞增殖的影响,半定量q-PCR和Western blot分别检测RRM2在mRNA和蛋白水平上表达的变化,用transwell小室检测细胞体外侵袭能力。结果:设计的siRNA能有效地抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖,降低侵袭能力,诱导细胞凋亡,并使细胞阻滞于G1期,减少S和G2期的细胞,同时RRM2在mRNA及蛋白水平上的表达明显减少,而对照的错义序列组Ishikawa/Neg-ative-siRNA则没有上述效应。结论:体外合成的siRNA可降低子宫内膜癌Ishikawa细胞中RRM2的表达,且抑制细胞增殖,降低细胞侵袭能力,促进细胞凋亡并诱导生长停滞。

白藜芦醇抑制PI3K/AKT通路诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬的作用研究

目的探究白藜芦醇促进子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬的作用机制。方法Ishikawa细胞分为对照组、白藜芦醇组和白藜芦醇+PI3K激动剂(740Y-P)组。用qRT-PCR和Western blot法检测LC3、Beclin1、PI3K和AKT的表达水平,用细胞免疫荧光法检测LC3的表达强度,用电镜观察细胞的自噬情况。结果白藜芦醇可增加细胞的Beclin1和LC3 mRNA(P<0.05,P<0.01)及蛋白水平(均P<0.01);细胞质LC3红色荧光强度增强;自噬小体数量增加。白藜芦醇组Ishikawa细胞P-PI3K(P=0.017)和P-AKT(P=0.025)蛋白水平低于对照组,而白藜芦醇+740Y-P组自噬水平相对于白藜芦醇组有所下降(P<0.01)。结论白藜芦醇可能是通过抑制PI3K/AKT通路诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬,从而抑制细胞增殖。白藜芦醇可能成为子宫内膜癌辅助治疗的新药物。

LRP16基因通过雌激素受体α介导抑制Ishikawa细胞中E-钙黏着素的转录活性

目的:既往研究表明LRP16基因过表达通过下调E-钙黏着素促进子宫内膜癌Ishikawa细胞的侵袭生长,本研究目的在于探讨LRP16基因下调E-钙黏着素的分子途径。方法:用免疫组化方法检测LRP16基因过表达的Ishikawa细胞中E-钙黏着素的表达;用共转染与荧光素酶实验检测LRP16基因对E-钙黏着素启动子转录活性的影响;用染色质免疫共沉淀实验检测雌激素受体α(ERα)与LRP16蛋白在E-钙黏着素启动子区的招募状况。结果:E-钙黏着素在LRP16过表达的Ishikawa细胞中的表达水平明显下调;LRP16抑制了E-钙黏着素启动子的转录活性,该效应呈现对雌激素(E2)存在的依赖性特征;LRP16本身没有与E-钙黏着素启动子区结合,但明显抑制了ERα与E-钙黏着素启动子区的结合。结论:LRP16通过抑制ERα对E-钙黏着素基因的转录激活活性,下调E-钙黏着素在Ishikawa细胞中的表达水平。

顺铂联合5-氟尿嘧啶对子宫内膜癌Ishikawa细胞的影响及其可能机制

目的探讨顺铂联合5-氟尿嘧啶对子宫内膜癌Ishikawa细胞内分泌治疗的影响。方法将人子宫内膜癌Ishikawa细胞系进行常规传代培养,选择处于对数生长周期的细胞分为3组:5-氟尿嘧啶(5 mg/L)组、顺铂(5 mg/L)组、顺铂(5 mg/L)+5-氟尿嘧啶(5 mg/L)组(联合组),在给予相应的药物处理后进行MTT法检测细胞抑制率和流式细胞仪检测细胞凋亡情况,同时采用免疫印迹法检测Bcl-2和p65蛋白的表达情况。结果联合组、顺铂组与5-氟尿嘧啶组的细胞抑制率分别为(41.45±3.13)%、(25.20±3.09)%和(23.19±4.10)%,联合组的抑制率明显高于其他2组(P<0.05)。联合组、顺铂组与5-氟尿嘧啶组的细胞凋亡率分别为(29.44±4.35)%、(5.74±1.12)%和(5.82±1.78)%,联合组的凋亡率明显高于其他2组(P<0.05)。联合组、顺铂组与5-氟尿嘧啶组的Bcl-2相对表达量分别为(0.31±0.11)、(1.23±0.49)和(1.28±0.59),p65相对表达量为(0.67±0.23)、(1.67±0.56)和(1.71±0.71),联合组的Bcl-2和p65相对表达量都明显少于其他2组(P<0.05)。结论顺铂+5-氟尿嘧啶在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的联合使用能促使细胞凋亡,抑制细胞增殖,其机制可能与抑制Bcl-2和p65蛋白的表达相关。