预防性添加胰蛋白酶抑制剂对成年猪胰岛分离的影响

目的 开发成年猪胰岛分离方法。方法 取成年猪胰体尾部,胰管内注入0.1%冷胶原酶(type Ⅺ)消化液, 在38.5 ℃水箱中消化后,放入4 ℃Hanks液中分离并用600μm的滤过网过滤。残留的组织重新悬浮在冷Hanks液中,并放入Ricordi’s chamber内振荡5 min后再次过滤。胰岛分离分为对照组(n=14)、Pefabloc(胰蛋白酶抑制剂)组(n=8)及FOY(胰蛋白酶抑制剂)组(n=5)。Pefabloc组和FOY组消化液中分别添加1.0 mmol/LPefabloc或FOY。结果 Pefabloc组及FOY组的胰岛收获量分别为(11 848±3 530) 个/g 和(14 496±3 693)个/g,明显高于对照组的(8 505±3 349) 个/g,P<0.05。消化后的消化液胰蛋白酶活性对照组为(114.7±50.0)BAEEU,明显高于胰管内注入前的(4. 0±1. 8) BAEEU 及Pefabloc 组的(5. 5±2. 7) BAEEU(P<0. 01),但Pefabloc组与胰管内注入前却差异无统计学意义。对照组胰岛收获量≥8 000 个/g组的胰蛋白酶活性明显低于收获量<8 000 个/g组的活性〔(78.3±26.7) BAEEU vs (137.5±48.4) BAEEU〕,P<0.05。对照组、Pefabloc组及FOY组纯化后的胰岛对不同浓度葡萄糖显示了良好的胰岛素分泌能力。结论 本实验采用的胰岛分离方法能够获得大量的猪胰岛细胞,而且预防性添加胰蛋白酶抑制剂后进一步稳定地提高了胰岛收获?

成年猪胰岛分离方法的改进

目的 :开发成年猪胰岛分离方法。方法 :取成年猪胰腺体尾部 ,胰管内注入冷 0 .1 %胶原酶消化液 ,在 38.5℃水浴箱中消化后 ,放入 4℃ Hanks液中分离并用 60 0μm的滤过网过滤回收。残留的组织重新悬浮在冷 Hanks液中 ,并放入 Ricordi′s chamber内振荡 5min后再次过滤回收。用Ficoll不连续密度液梯度离心法进行胰岛纯化。结果 :纯化前、后胰岛收获量分别为 ( 850 5± 3349)g-1〔IEQ:( 4 2 53± 2 732 ) g-1)、( 2 334± 1 2 2 3) g-1〕,纯度 >80 %。胰岛收获量与消化后的消化液胰蛋白酶活性显示了弱的负相关 ( r=- 0 .44,P=0 .1 3) ,胰岛收获量≥ 80 0 0 g-1组的消化后消化液胰蛋白酶活性明显低于胰岛收获量 <80 0 0 g-1( 78.3± 2 6.7vs1 37.5± 48.4BAEEU,P<0 .0 5)。结论 :我们采用的胰岛分离方法能够获得大量的猪胰岛细胞 ;胰蛋白酶活性影响胰岛收获量。

大豆胰蛋白酶抑制剂对大鼠胰岛分离纯化的影响

目的探讨大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)在大鼠胰岛分离纯化中对胰岛产量及功能的影响。方法按胶原酶中是否加入STI将大鼠分为实验组和对照组,实验组在胶原酶消化液中按2.0mg/ml加入STI,对照组不添加STI。2组均运用胶原酶原位灌注大鼠胰腺的方法来分离胰岛,使用Ficoll-400用非连续梯度离心法纯化胰岛,将纯化前、后获得的胰岛进行计数,并对纯化后的胰岛进行形态、功能检查。同时进行大鼠同种异体胰岛移植观察其体内功能。结果实验组和对照组在消化后纯化前所得胰岛数量无明显差别〔(624±38.2)IEQvs(586±37.7)IEQ,P>0.05〕;在纯化后实验组与对照组所得胰岛数量〔(408±28.3)IEQvs(189±27.1)IEQ,P<0.05〕和纯度〔(93±2.4)%vs(75±2.1)%,P<0.05〕差异有统计学意义。实验组与对照组最终所得胰岛的体外功能差异无统计学意义(P>0.05),体内功能实验结果差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论使用在胶原酶中加入STI的消化液原位灌注大鼠胰腺,可以明显提高大鼠胰岛的最终产量和纯度,但对胰岛的功能无明显影响。

胰导管保护法提高大鼠胰岛获取量和功能的研究

目的 探讨胰导管保护法（即在胰腺获取时向胰导管内注射少量含胰酶抑制剂的UW液,TIUW液）能否提高冷保存后的大鼠胰腺的胰岛获取量和功能.方法 大鼠胰腺分为5组.组1：新鲜胰腺（n=10）;组2：未应用胰导管保护法仅用TIUW液保存6 h的胰腺（n=10）;组3：应用胰导管保护法且用TIUW液保存6 h的胰腺（n=10）;组4：未应用胰导管保护法仅用TIUW液保存24 h的胰腺（n=10）;组5：应用胰导管保护法且用TIUW液保存24 h的胰腺（n=10）;双硫腙染色鉴定胰岛形态并计数,锥虫蓝染色评估胰岛死亡率,葡萄糖刺激试验评价胰岛离体功能,糖尿病裸鼠胰岛移植评价胰岛在体功能.结果 分离纯化后胰岛获取量分别为590±127、272±50、454±65、253±56、447±66（胰岛当量±标准差）;胰岛死亡率分别为（5.7±4.2）%、（18.3±6.5）%、（11.7±4.2）%、（26.3±5.6）%、（15.0±5.3）%;刺激指数分别为7.32±2.32、4.81±1.17、7.56±2.44、2.88±1.00、5.71±1.90;糖尿病治愈率分别为100%、0%、100%、0%、70%.所有结果均显示差异有统计学意义（P＜0.05,组2与组3和组4与组5）.结论 胰导管保护法提高了冷保存后大鼠胰腺的胰岛获取量和功能.