大鼠胰岛细胞的分离纯化及培养

目的 探讨大鼠胰岛细胞分离纯化和培养的方法。方法 采用胰导管逆行灌注Hanks液分离成年大鼠胰岛,Ⅴ型胶原酶消化,不连续密度梯度Ficoll 4 0 0纯化胰岛。用台盼蓝和双硫腙染色检测胰岛活性和纯度,葡萄糖刺激胰岛素释放试验检测胰岛功能。结果 胰岛细胞的收获量为5 4 0±15 0个胰岛 胰腺,活性>90 % ,纯度>90 % ,高糖刺激后胰岛素释放量为低糖刺激的2倍多。结论 胰导管灌注Hanks液,Ⅴ型胶原酶消化和不连续密度梯度葡聚糖纯化胰岛,可以获取数量多。

两种不同纯化大鼠胰岛细胞方法的比较

目的比较分析OptiPrep和Ficoll两种介质纯化大鼠胰岛细胞的效果。方法将24只SD大鼠随机分成2组,采用明尼苏达大学改良方法提取大鼠胰岛细胞,消化分离胰岛细胞后,分别采用不连续密度梯度Ficoll离心法和OptiPrep离心法纯化胰岛细胞,比较纯化后胰岛细胞数量、纯度、存活率及功能,观察OptiPrep和Ficoll两种介质对大鼠胰岛细胞纯化效果的影响。结果与Ficoll组相比,OptiPrep组胰岛细胞的产量(分别为304±13.57和346±9.09)和纯度(分别为88.25%±2.22%和94.00%±0.82%)均显著增加(P<0.05);OptiPrep组与Ficoll组胰岛细胞的存活率(分别为93.50%±1.29%和91.50%±1.29%)和功能(胰岛素释放指数分别为3.04±0.05和3.02±0.06)的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 OptiPrep法纯化大鼠胰岛细胞比传统的Ficoll法更有优势,而且OptiPrep价格相对便宜,可以作为纯化大鼠胰岛的常规方法。

成人胰岛细胞的分离纯化与应用

目的探讨成人胰岛细胞分离纯化技术,为胰岛细胞移植治疗1型糖尿病提供大量高质量的胰岛细胞。方法使用LiberaseHI复合胶原酶和改良的Recordi自动胰岛细胞分离技术分离胰岛,采用COBE2991细胞淘洗仪连续密度梯度离心纯化胰岛细胞,用DTZ和AO-PI染色显微镜下评价胰岛细胞的数量、纯度和活性。结果该组研究共分离30例胰腺的胰岛,获得胰岛细胞数量平均为(316626±191972)IEQ,平均每克胰腺收获胰岛细胞3389IEQ,收获的胰岛纯度平均为(74.70±7.84)%,活度平均为(94.10±2.19)%,胰岛细胞刺激指数平均为(3.68±0.58)。在此基础上,成功实施7人12次的成人胰岛细胞移植。结论成功建立了改良的Recordi自动胰岛分离技术,获得大量高纯度有活性的胰岛细胞,为开展胰岛细胞临床移植提供了保障。

不同消化条件对小鼠胰岛分离纯化效果的影响

目的探讨提高小鼠胰岛分离纯化后数量和质量的适宜消化条件。方法通过胆总管逆行灌注胶原酶P溶液进行小鼠胰腺消化,分离胰岛,采用不连续密度梯度Ficoll离心法纯化胰岛,观察胶原酶浓度和消化时间对胰岛分离结果的影响。结果胶原酶浓度和消化时间对小鼠胰岛分离效果有重要影响。在胶原酶P浓度为1.0 mg/ml、37℃消化25 min条件下,胰岛分离效果最佳。结论胶原酶浓度和消化时间影响小鼠胰岛分离结果,优化消化条件可提高胰岛分离数量和质量。

大鼠胰岛细胞原代培养方法比较研究

目的:比较减碎消化法和原位灌注消化法在大鼠胰岛细胞原代培养中的优缺点,探讨一种简单易行的大鼠胰岛细胞培养方法。方法:雄性SD大鼠30只随机分成减碎组(CC组,n=15),胰腺剪为小组织块后,Ⅴ型胶原酶逐级消化分离;原位灌注组(YY组,n=15),采用胆总管逆行灌注Ⅴ型胶原酶分离胰岛。双硫腙(DTZ)染色检测胰岛纯度,葡萄糖刺激胰岛素释放试验检测胰岛功能。结果:2组获得的胰岛对于葡萄糖刺激均具有良好的分泌活性(P<0.01);YY组比CC组获得的胰岛数量多(P<0.01),形态较好,等量胰岛的胰岛素释放量亦多(P<0.05)。结论:胆总管原位灌注Ⅴ型胶原酶消化可以获取数量多,活性和纯度较好的胰岛。

对大鼠胰岛两种不同分离纯化方法的实验研究

目的 选择最佳鼠胰岛的制备方法。方法 采用不同的胶原酶消化法及不连续密度梯度纯化法。结果 Dextran法和Ficoll法分离纯化出胰岛细胞成活率无明显差异 ,且价格相差数十倍。

大鼠胰岛分离纯化实验研究

目的介绍一种大鼠胰岛分离纯化方法。方法SD大鼠和Wistar大鼠共10只,以0.05%Ⅴ型胶原酶胆管灌注,经消化后用葡聚糖(dextran)不连续密度梯度法纯化胰岛。DTZ和AO/PI染色检测纯度及活性。结果胰岛收获量为(930±168)个,Ⅴ型胶原酶灌注及不连续密度梯度法可获得纯度高、活性好胰岛。结论以0.05%的胶原酶胆管灌注消化的方法可得纯度高、活性良好的胰岛。

成人胰岛细胞分离纯化技术

目的探讨成人胰岛细胞分离纯化技术,为胰岛细胞移植治疗1型糖尿病提供大量高质量的胰岛细胞。方法使用LiberaseHI复合胶原酶和改良的Recordi自动胰岛细胞分离技术分离胰岛,采用COBE2991细胞淘洗仪连续密度梯度离心纯化胰岛细胞,用DTZ和AO-PI染色显微镜下评价胰岛细胞的数量、纯度和活性。结果本组研究共分离30例胰腺的胰岛,获得胰岛细胞数量平均为（316626±191972）IEQ,平均每克胰腺收获胰岛细胞3389IEQ,收获的胰岛纯度平均为（74.7±7.84）﹪,活度平均为（94.1±2.19）﹪,胰岛细胞刺激指数平均为3.68±0.58。在此基础上,成功实施7人12次的成人胰岛细胞移植。结论成功建立了改良的Recordi自动胰岛分离技术,获得大量高纯度有活性的胰岛细胞,为开展胰岛细胞临床移植提供了保障。

大鼠胰岛细胞分离纯化的实验研究

目的优化胰岛细胞分离纯化的方法,提高胰岛产量、纯度和功能。方法本实验经胰管注射胶原酶、胰腺静止消化分离成年大鼠胰岛,葡聚糖离心纯化,获得胰岛细胞,进行记数和功能鉴定。结果纯化后胰岛收获量为7021±861IEQ/胰腺(IEQ=胰岛当量,一个胰岛当量为一个150μm直径的胰岛),纯度达86%;胰岛形态结构完整,胰岛素释放试验显示胰岛细胞功能良好。结论细节优化可以显著提高胶原酶消化、葡聚糖不连续梯度离心分离胰岛的效率。