利用双启动子载体构建产异丁醇大肠杆菌

为了实现异丁醇代谢途径中关键酶的高效共表达,选择具有双T7启动子的质粒载体pCDFDuet、pRSFDuet和pACYCDuet,将基因kivd和alsS分别克隆至pCDFDuet的两个启动子下,yqhD和ilvCD分别克隆至pRSFDuet或pACYCDuet的两个启动子下,构建成两种双质粒共表达系统,获得产异丁醇重组大肠杆菌Eco(CDF+RSF)和Eco(CDF+ACYC)。其中重组菌Eco(CDF+RSF)发酵产异丁醇达2.7g/L;而重组菌Eco(CDF+ACYC)产异丁醇能力较强,达3.5g/L。对两种重组菌目标蛋白的表达量及活力进行比较分析,发现重组菌Eco(CDF+ACYC)中实现了关键酶AHAS(alsS基因编码)和KDCA(kivd基因编码)的高效表达,对提高异丁醇的产量有重要的影响。利用双启动子载体成功构建了具有较高产异丁醇能力的重组菌Eco(CDF+ACYC),为后续改造以适应工业化生产打下了较好的基础。