香茶菜总三萜及齐墩果酸、熊果酸的含量测定

目的建立香茶菜总三萜及齐墩果酸和熊果酸的含量测定方法,为其质量评价提供依据。方法采用紫外-可见分光光度法,以熊果酸为对照品,5%香草醛冰醋酸-高氯酸为显色剂,于547 nm测定香茶菜中总三萜的含量;采用高效液相色谱法,色谱柱为Welch XB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液（85：15）,流速为0.6 ml·min-1,柱温为30℃,检测波长为210 nm,测定香茶菜中齐墩果酸和熊果酸的含量。结果不同产地、批次和药用部位的香茶菜总三萜含量为0.13%-1.14%;齐墩果酸和熊果酸在不同的药用部位含量差异显著：根中未检测到,全草中含量分别为0.0128%、0.0388%,地上部位中含量为0.0230%-0.0514%、0.0756%-0.1891%。结论该方法简便、准确,重复性好,可用于香茶菜的质量控制;明确和规范药用部位是其质量控制的前提。

王枣子试管苗继代快繁优化技术研究

[目的]研究不同植物生长调节物质(6-BA、IAA)以及不同浓度的蔗糖对王枣子试管苗继代快繁生长的影响,探究王枣子试管苗生长的最佳继代培养基。[方法]通过正交设计,分析王枣子的株高、活叶数、腋芽分化率的数据,确定王枣子快繁的最佳培养基。[结果]培养基组合为MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 1.0mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7.0 g/L时,腋芽分化率最大,为1.33,诱导率为0.75,长势较强,为王枣子继代快繁的适宜培养基。[结论]研究结果为王枣子试管苗继代快繁提供了借鉴。

王枣子提取物抗氧化活性的研究

通过测定王枣子提取物的还原能力和对化学模拟体系中羟自由基(·OH)、超氧阴离子(O-2·)及二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的清除能力,研究了王枣子水提取物及醇提取物的体外抗氧化活性。结果表明,王枣子水提取物及醇提取物在一定的质量浓度范围内均具有抗氧化活性及清除自由基的作用,抗氧化活性与质量浓度呈显著的量效关系(P<0.01),醇提取物的还原能力显著大于水提取物的还原能力(P<0.01);在王枣子提取物质量浓度为1.0 g·L-1时,王枣子水提取物对·OH、O-2·和DPPH·的清除率分别为65.25%、82.30%和65.18%,而体积分数为65%的乙醇提取物对相应自由基的清除率分别为72.51%、98.54%和91.64%,王枣子醇提取物对自由基的清除效果更好。

培养基类型和植物生长物质浓度对王枣子愈伤组织诱导和继代的影响

目的优化王枣子愈伤组织的诱导和探究疏松愈伤组织的继代条件,为王枣子悬浮细胞培养奠定初步基础。方法以王枣子无菌苗幼叶为外植体,采用单因素试验研究不同培养基类型对愈伤组织诱导的影响;采用L9(32)正交试验设计,研究2,4-D、KT不同浓度配比对王枣子疏松愈伤组织的增殖培养的影响。结果愈伤组织的诱导率在MS、1/2MS和B5培养基上呈上升趋势。MS的出愈时间最晚,1/2MS的出愈时间次之;在B5培养基上出愈时间最早,且愈伤组织的质地和生长状态较好。正交试验的结果显示,愈伤组织的在B5培养基上添加2,4-D 2.5 mg·L-1+KT 1.0 mg·L-1增殖倍数最小为19.78倍,添加2,4-D 1.5 mg·L-1+KT 0.2 mg·L-1达到最大增殖倍数27.34倍;王枣子疏松愈伤组织增殖试验中2,4-D(P<0.01)的影响效应比KT(P=0.091)大。结论B5培养基是最佳的王枣子愈伤组织诱导培养基,B5培养基中添加2,4-D 1.5 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1为疏松愈伤组织增殖的最佳配比。

王枣子叶总黄酮纤维素酶-超声辅助提取工艺的优化及其抗氧化活性

目的优化王枣子叶总黄酮纤维素酶-超声辅助提取工艺,并评价其抗氧化活性。方法在单因素试验基础上,以乙醇体积分数、料液比、超声功率、超声时间为影响因素,总黄酮得率为评价指标,响应面法优化提取工艺。考察总黄酮对DPPH·、·OH的清除作用。结果最佳条件为乙醇体积分数64%,料液比1∶39,超声功率130 W,超声时间16 min,总黄酮得率为13.92%。总黄酮对DPPH·的清除作用与其质量浓度呈正相关,在0.25 mg/mL时清除率达93.55%,而在0.09 mg/mL时对·OH的清除率达88%。结论该方法稳定可靠,可用于纤维素酶-超声辅助提取具有较强抗氧化活性的王枣子叶总黄酮。

王枣子总黄酮对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及机制研究

目的研究王枣子中总黄酮(TFIA)对佐剂性关节炎(AA)的治疗作用及机制。方法采用注射完全弗氏佐剂制备AA模型大鼠后随机分为4组:AA组、AA+TFIA 50mg/kg组、AA+TFIA 100mg/kg组、AA+TFIA 150mg/kg组,每组10只。另设空白对照组大鼠,不造模(n=10)。造模后4d,TFIA各剂量组大鼠采用TFIA灌胃治疗,分别按上述3个剂量灌胃,每天1次,共24d,空白对照组和AA组灌胃生理盐水。治疗第12天、16天、20天、24天采用大鼠关节炎评分法评价TFIA对AA大鼠的治疗作用。治疗第24天处死各组大鼠,分离大鼠滑膜组织,原代培养各组大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS),ELISA检测各组FLS中白细胞介素(IL-1)表达,MTT检测各组FLS增殖活力,real time qPCR检测各组FLS miR-152和经典Wnt信号通路关键基因[β-catenin、细胞周期蛋白基因(ccnd1)]表达。向AA大鼠FLS转染miR-152mimics和对照NC mimics,向TFIA 100mg/kg剂量组大鼠FLS转染miR-152inhibitors和对照NC inhibitors,36h后检测miR-152、β-catenin、ccnd1、IL-1表达和FLS的增殖。结果 TFIA各剂量灌胃治疗均能抑制AA大鼠关节炎评分,抑制β-catenin、ccnd1、IL-1表达和FLS增殖活力(P<0.05),各剂量组间比较差异无统计学意义(P>0.05),与空白对照组相比,各剂量组均未恢复至正常水平(P<0.05)。与空白对照组相比,AA组FLS中miR-152表达降低(P<0.05),向AA组FLS转染miR-152mimics后,与对照组相比,过表达的miR-152抑制β-catenin、ccnd1、IL-1表达,抑制FLS增殖(P<0.05)。向TFIA100mg/kg剂量组FLS转染miR-152inhibitors,与对照组相比,抑制了miR-152的表达,促进了β-catenin、ccnd1、IL-1表达,促进了FLS增殖(P<0.05)。结论 TFIA对AA大鼠有一定治疗作用,此作用可能通过上调miR-152的表达,影响经典Wnt信号通路实现。