三种酸性蛋白酶等电点测试方法的比较

采用Zeta电位法、沉淀法和等电聚焦电泳(IEF)法测定了不同来源的四种酸性蛋白酶的等电点(pI),并比较了这三种方法用于测量酸性蛋白酶pI的优缺点。结果表明:Zeta电位法适用于检测各种酸性蛋白酶,但需要指出的是,对于工业级酶制剂,该方法获得的pI值是其各组分pI值的综合结果;沉淀法难以观察到高溶解度蛋白酶的pI沉淀现象,但使用粒径分析仪检测酶溶液的粒径变化情况可以获得准确的pI;IEF法能准确分析pI大于3的酸性蛋白酶,但有些酸性蛋白酶制剂的酶蛋白组分的pI小于3,因此该方法不适用于检测所有的酸性蛋白酶。

不同等电点沉淀法和超速离心法提取牛奶乳清蛋白的双向电泳分析

为探索牛奶乳清蛋白提取的最适方法,以生鲜荷斯坦牛奶为对象,采用不同等电点(pH 4.6和pH 4.8)沉淀法和超速离心法提取牛奶乳清蛋白样品,并对提取效果进行双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)图谱分析。依据凝胶图谱上蛋白斑点比较图谱质量,采用PDQuest 8.0凝胶图像分析软件进行凝胶图谱分析。结果显示:2种方法均能有效提取牛奶乳清蛋白,且获得的2-DE凝胶图谱背景清晰、蛋白点个体独立、无明显的拖尾现象,且重复性强,但都存在一定的酪蛋白残留。与超速离心法相比,pH 4.6沉淀法和pH 4.8沉淀法提取乳清蛋白的2-DE凝胶图谱可检测到较多的蛋白质斑点。pH 4.6沉淀法提取乳清蛋白制备的2-DE凝胶图谱中蛋白点的表达丰度略高于pH 4.8沉淀法。研究表明:pH 4.6沉淀法提取乳清蛋白制备2-DE凝胶图谱略优于pH 4.8沉淀法和超速离心法。但2种等电点沉淀法和超速离心法都可有效去除牛奶中的高丰度酪蛋白,提高低丰度蛋白的检出敏感性。

饮料中提取酪蛋白的方法选择

目的探索4种沉淀蛋白质的方法在提取饮料酪蛋白过程中对其复溶率的影响,为建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法鉴别饮料中酪蛋白亚型及相应含量的测定寻找最佳前处理方法。方法选取乳粉、以乳粉或牛乳为原料的饮料、添加酪蛋白或酪蛋白酸钠的饮料作为测试样品,用pH 8.5的Tris-HCl溶液溶解,采用等电点沉淀法、乙腈沉淀法、丙酮沉淀法和乙醇沉淀法提取样品中的蛋白质,低温离心后对沉淀的蛋白质进行复溶,用考马斯亮蓝法分别测定沉淀前和复溶后样品溶液中可溶性蛋白质的含量,计算类酪蛋白的复溶率。结果乳粉和3类饮料中的酪蛋白经等电点沉淀法提取后,乳粉的类酪蛋白复溶率在64.95%~66.20%之间,3种饮料中的类酪蛋白复溶率在69.73%~84.95%之间,等电点沉淀法优于其他3种沉淀方法。αs-酪蛋白标准物质和β-酪蛋白标准物质的复溶率分别为70.16%和87.17%,且经高分辨质谱确证其复溶后的主成分为酪蛋白。另外对45种含酪蛋白饮料中的类酪蛋白含量进行了测定,其含量在0.10~42.36 mg/g(mg/mL)之间。结论等电点沉淀法提取类酪蛋白的复溶率较其他3种沉淀方法相对稳定,为饮料中酪蛋白的亚型鉴别及相应含量测定提供了回收率较高的前处理方法,为今后测定酪蛋白含量的液相质谱法的研究奠定了较好基础。

酸/碱溶解-等电点沉淀法回收罗非鱼蛋白的工艺优化及蛋白组成分析

以罗非鱼(Oreochromis niloticus)肉为原料,采用酸/碱溶解-等电点沉淀法回收罗非鱼肌肉蛋白,主要探讨溶解p H值、料液比和溶解时间对可溶性蛋白得率以及沉淀p H值对可溶性蛋白沉淀得率及蛋白亚基组成的影响.结果表明,酸/碱溶解回收罗非鱼肉可溶性蛋白的最佳p H值为p H2.0、3.0、11.0和12.0,料液比1∶9(ω/v),溶解时间10 min,可溶性蛋白种类齐全,包含了典型的鱼蛋白电泳条带;酸/碱可溶性蛋白的最佳沉淀条件为p H 5.5,在此条件下,溶解-沉淀过程的蛋白得率分别为61.59%-64.95%.与鱼肉蛋白相比,四种分离蛋白中盐溶性蛋白的比例均升高,水溶性蛋白的比例均降低(p<0.05).比较而言,碱溶-等电点沉淀过程中鱼蛋白的变性程度较小,其水溶性组分和盐溶性组分所占的比例均较高,组成相对比较齐全,而酸提蛋白中肌球蛋白重链部分降解,少量肌浆蛋白损失.因此,碱溶-等电点沉淀法更有利于回收鱼肉分离蛋白.

酸碱处理对鱼肉蛋白凝胶特性影响的研究进展

我国鱼肉产量巨大,消费量也持续快速增长,但目前国内鱼肉精深加工技术落后,资源浪费严重。与传统加工处理相比,酸碱处理作为一种新型的肌肉蛋白提取和加工技术,不仅能提高蛋白回收率,还能改变蛋白构象,改善蛋白加工特性,提高产品附加值。本文概述酸碱处理对热诱导的鱼肉蛋白凝胶的强度、颜色和保水性等加工特性的影响,探讨了经过酸碱处理后肌球蛋白构象的变化,展望了酸碱处理在鱼肉精深加工领域的应用前景,为鱼肉制品品质改善和新产品研发提供科学依据。

芝麻饼粕蛋白质的理化和功能性质研究

对碱溶酸沉法、超声辅助碱提法和蛋白酶法3种工艺制备的芝麻饼粕蛋白质PA、PU和PE的理化和功能性质进行了研究,结果表明3种工艺制备的芝麻饼粕蛋白质氨基酸组成无显著差异,除赖氨酸含量较低外,其他必需氨基酸组成均接近或高于FAO/WHO模式;芝麻饼粕蛋白的相对分子质量大小顺序为PA>PU>PE。芝麻饼粕蛋白质的溶解性、持水性、持油性、乳化性、起泡性及起泡稳定性大小顺序为:PE>PU>PA,且芝麻饼粕蛋白质的p H-乳化性曲线与p H-溶解性曲线相似,溶解度和乳化性在等电点(p H 4)时最低。

谷氨酰胺转氨酶对碱溶酸沉法提取南极磷虾(Euphausia superba)蛋白质得率的影响

通过碱溶酸沉法提取了南极磷虾蛋白质,研究了谷氨酰胺转氨酶的应用对蛋白质得率的影响。结果表明:碱溶酸沉法能够较好地回收南极磷虾蛋白质;在酸沉过程中,合理添加谷氨酰胺转氨酶能够提高蛋白质得率约5%。

鮰鱼下脚料蛋白质的回收及其凝胶特性研究

通过回收并制备鮰鱼下脚料的蛋白质凝胶,考察溶解pH、离心力、离子强度对鱼下脚料中蛋白质的溶解性及凝胶理化性质的影响。结果表明,溶解pH、离心力、离子强度对鱼下脚料中的蛋白质的溶解性能均有显著影响(P<0.05)。pH=2.5或pH=11.5,离心力为5 500r/min,离子强度为0.6M时,蛋白质溶解性能较好,pH=5.5时蛋白质溶解性最差。溶解pH=11.5时,制备的鱼肉凝胶蛋白质、灰分含量较高,脂类含量较低,并且凝胶的破断强度值、凹陷度以及凝胶强度值较高,但凝胶色泽较差。

采用二步法合成核-壳型二氧化硅/二氧化铈复合微粒(英文)

以正硅酸已酯为硅源,以氨水为催化剂,无水乙醇为溶剂,采用溶胶–凝胶法并经500℃煅烧1h后制备了SiO2微粒,运用激光粒度分析方法研究了各原料配比对SiO2粒子大小和粒径分布的影响;再以硝酸铈为铈源,碳酸铵为沉淀剂,十二烷基苯磺酸钠为分散剂,加入SiO2微粒,用化学沉淀法,通过控制反应和焙烧条件,经300℃煅烧1h后成功合成了核–壳型单分散球状SiO2/CeO2复合微粒。并用差示扫描量热仪/热重分析仪、X射线衍射仪、红外光谱仪、扫描电子显微镜、透射电子显微镜和X射线能谱仪等手段以及zeta电位测定对SiO2/CeO2复合微粒的结构、组成和性能进行了表征。结果表明:SiO2/CeO2复合微粒呈规则球状,粒子分布非常均匀,粒径约300～350 nm;CeO2基本上为膜包覆,伴有少量的CeO2沉积,CeO2包覆层厚度约为30 nm;SiO2包覆CeO2后所得复合微粒的表面电性质发生变化,其等电点对应的pH值从2.2增大至5.5。

低温等电点沉淀法提取头发中的L-精氨酸

用低温等电点沉淀法对头发中L-精氨酸的提取工艺条件进行了研究,考查了头发水解条件、沉淀剂的种类及用量、pH值、氯离子浓度、提取温度等因素对L-精氨酸产量的影响.实验结果表明:在pH值10、温度0℃,氯离子浓度为2.1 mol/L2、mL苯甲醛作沉淀剂时,30 mL头发水解液中L-精氨酸的产量为0.139 g.

酸碱处理技术在肌肉蛋白质分离加工中的应用

酸碱处理技术作为一种蛋白分离、加工技术在肉类加工领域得到了广泛的研究和应用。本文介绍了酸碱处理技术的基本原理及对蛋白质结构和加工特性的影响,其次综述了该技术在鱼类去腥、改善禽类产品凝胶品质以及制备功能食品中的应用及相关研究进展,同时对该技术存在的问题及发展趋势进行探讨,以期对该技术在肌肉蛋白质加工中的应用提供参考。

盐提和碱提酸沉两种方法提取腰果蛋白的结构及其功能性质分析

使用盐提和碱提酸沉两种提取方法从腰果脱脂粉中提取分离蛋白,并对比研究盐提腰果蛋白(CNSPI)和碱提酸沉腰果蛋白(CNPI)的结构和功能性质。结果表明CNPI和CNSPI在结构、微观形态、功能性质和营养价值等方面有明显差异,CNSPI蛋白含量较高,溶解性和乳化性也优于CNPI,CNPI表现出较好的起泡性。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明两种提取方法对分离蛋白的亚基组成没有显著影响;本研究使用氨基酸分析仪来测定分离蛋白的营养价值,结果表明两种方法提取的腰果蛋白氨基酸含量无明显差异,其营养价值都远高于腰果脱脂粉。表面疏水性测定结果表明CNPI的表面疏水性显著高于CNSPI。扫描电子显微镜结果表明CNSPI呈现出大量的片状微观结构,而CNPI呈现出少量球状和薄片结合成的不规则形状。圆二色光谱结果显示CNSPI和CNPI中主要二级结构是β-折叠,CNPI中有较多的无规卷曲,约占29.3%,CNSPI有较多的α-螺旋(27.0%)。在中性条件下,CNPI的起泡性为119.00%,CNSPI的乳化性达到30.14 m2/g。

等电点沉淀提取蛋白和漂洗鱼糜蛋白的高温胶凝特性

研究不同加热温度(100、110、120℃)和时间(15、30、60 min)对等电点沉淀法(isoelectric solubilization precipitation,ISP)提取蛋白与漂洗鱼糜蛋白高温胶凝特性的影响,以白鲢为原料,分别测定凝胶强度、持水性、色泽、化学作用力、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果表明,ISP蛋白凝胶的破断力低于漂洗蛋白凝胶,凹陷深度高于漂洗蛋白凝胶。漂洗蛋白凝胶和ISP蛋白凝胶获得最高凝胶强度的热处理温度分别为110℃和100℃。随着加热时间的延长,凝胶的破断力和凹陷深度降低。ISP蛋白凝胶的持水性不受热处理条件的影响,而漂洗蛋白凝胶的持水性随加热时间的延长而降低,ISP蛋白凝胶的持水性低于漂洗蛋白凝胶。漂洗蛋白凝胶的亮度值(L^*)和白度值(W)高于ISP蛋白凝胶,随着加热时间的延长,漂洗蛋白凝胶的L^*值和W值呈下降趋势,而ISP蛋白凝胶的L^*值和W值呈上升趋势。高温处理过程中,ISP蛋白凝胶和漂洗蛋白凝胶的离子键和氢键含量呈先上升后下降趋势,而疏水相互作用和总巯基含量整体呈下降趋势;漂洗蛋白凝胶和ISP蛋白凝胶的肌球蛋白重链条带消失,肌动蛋白和原肌球蛋白等蛋白条带强度逐渐下降。

超声波辅助酸/碱溶解等电点沉淀法提取鸡架分离蛋白的组成及其凝胶特性

利用高强度超声(high intensity ultrasound,HIU)辅助酸/碱溶解等电点沉淀(isoelectric solubilization/precipitation,ISP)法提取鸡架分离蛋白(protein isolate,PI),采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳研究PI组成,并分析PI凝胶特性。结果表明:PI主要由肌原纤维蛋白组成;酸溶解会导致肌球蛋白重链降解,HIU可减弱降解程度;碱溶PI凝胶的硬度、蒸煮损失率、离心损失率与对照(鸡胸肉糜凝胶,后同)无显著差异,显著高于酸溶PI凝胶(P<0.05);HIU显著提高了酸溶PI凝胶的硬度和弹性(P<0.05),降低了蒸煮损失率及离心损失率(P<0.05);PI凝胶白度均显著低于对照(P<0.05)。碱溶PI凝胶对水分子的结合力和束缚力均优于酸溶PI凝胶;碱溶PI凝胶与对照凝胶均具有均匀致密微观结构,而酸溶PI凝胶微观结构明显粗糙、不均匀。结论:HIU辅助碱溶ISP法可高效提取鸡架中肌原纤维蛋白并保持其凝胶特性,有助于鸡架增值利用。

等电点沉淀结合凯氏定氮法测定市售纯牛奶中酪蛋白的含量

在酪蛋白测定方法的前期研究基础上,对等电点沉淀法进行改进,结合凯氏定氮法对市售纯牛奶中的乳蛋白组分进行了测定。确定了制备纯品酪蛋白的最佳洗涤剂和洗涤次数,NaOH溶液碱复溶酪蛋白等电点沉淀物最佳添加范围。实验结果表明,改进后的等电点沉淀方法,测定酪蛋白质量分数都在74%~76%。pH4.6HAc-NaAc缓冲溶液作为洗涤剂,对于体系pH的维持更加稳定。仅沉淀的处理方式可以将大部分乳清蛋白和酪蛋白进行分离。NaOH溶液最佳添加范围是25mL^35mL。改进后的等电点沉淀结合凯氏定氮法高效准确,简单易行,重现性好,可以用于纯牛奶中酪蛋白的掺假鉴定。

酸溶条件及高强度超声波对鲢鱼肉分离蛋白的提取及凝胶特性的影响

研究了不同酸溶条件(鱼肉匀浆液的pH值)和高强度超声波(High Intensity Ultrasonic treatment,HIU)对酸溶等电点沉淀法鲢鱼肉分离蛋白(protein isolate,PI)的提取、蛋白组成以及凝胶特性的影响。数据显示:降低pH能显著提高蛋白回收率(由pH4.0到3.0,提高了21.11%),但pH<3.0时,进一步降低pH对蛋白回收率不再有提高作用;HIU显著提高了蛋白回收率(pH 3.0时,提高了3.77%);PI中以肌原纤维蛋白为主,pH降低能够显著减少等电点处可溶性中等分子蛋白种类及浓度,而HIU对此影响不大。pH降低和HIU均会增加PI凝胶亮度(89.24→94.25)和白度(83.24→88.45)。HIU显著提高了PI凝胶硬度(1531.74→1756.24 g),降低pH能够提高PI凝胶硬度(1162.55→1683.41 g),但当3.0后,作用不显著。pH低于4.0时,pH变化和HIU对PI凝胶弹性无显著影响(0.792~0.823)。降低pH和HIU引起PI凝胶蒸煮损失率的显著增加(2.05%→4.43%)。结论:极酸pH(pH<3.0)并不会提高蛋白回收率,且对PI凝胶特性无益。采用pH 3.0的酸溶条件并辅以HIU,能够得到最高的蛋白回收率及最优的PI凝胶特性。

类PSE禽肉(肉鸡、火鸡)加工特性及蛋白质功能性质改善研究进展

综述了通过添加非肉成分(多糖类、蛋白类、油脂类、盐类)改善类PSE禽肉加工特性的方法,以及采用高压处理、高强度超声波处理、脉冲电场处理、非酶糖基化、谷氨酰胺转氨酶酶促糖基化、酸碱处理等改善类PSE禽肉蛋白质功能性质的技术手段,并对其未来发展方向进行了展望。

电子电器产品中磷酸酯类化合物4种萃取方式的比较选择

通过对定制3类不同材质电子电器产品(含9种磷酸酯类化合物(TCEP、TCPP、TDCPP、TPP、RDP、o-TCP、m-TCP、p-TCP、BDP))萃取,比较超声、微波、索氏、溶解-沉淀4种萃取方式的效果。数据表明溶解-沉淀萃取方式最优,该萃取方式操作方便、步骤缩短、成本减少,且采用高效液相色谱-质谱质谱法检测时无明显基底效应。

蓝圆鲹酸/碱等电点沉淀法分离蛋白凝胶特性与消化特性

采用酸/碱等电点沉淀(isoelectric solubilization/precipitation,ISP)法制备蓝圆鲹肌肉分离蛋白(acid/alkaline aided protein isolate,API/KPI),并对全蛋白(total protein,TP)、肌原纤维蛋白(myofibrillar protein,MP)与分离蛋白的理化特性、凝胶特性以及消化稳定性进行比较研究。结果表明,蓝圆鲹肌肉蛋白在碱性条件下溶解性显著高于酸性条件,经优化后的API与KPI的回收率分别为65.0%与84.6%,显著高于MP(54.0%)。KPI、API与MP的脂肪与灰分含量明显低于TP,其中KPI的粗蛋白含量最高。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示KPI与API的蛋白组成与TP相近,但KPI与API的氨基酸组成中甘氨酸与脯氨酸含量显著低于TP。质构与流变学分析结果显示,KPI与API的凝胶强度与储能模量(G’)均明显低于TP与MP,其中TP、MP与KPI的储能模量在50~55 ℃会出现明显的下降趋势,表明发生凝胶劣化现象,而API组无明显变化。扫描电子显微镜结果表明,与90 ℃相比,经55 ℃加热处理的KPI、TP与MP组凝胶结构更加疏松、多孔,这与流变学分析的结果一致。体外模拟胃肠液消化实验表明,MP具有最佳的消化性,API与KPI的消化性相当,且显著高于TP。综上所述,利用ISP制备分离蛋白可显著提高蛋白回收率,且分离蛋白的消化性明显优于TP。由于分离蛋白失去凝胶化能力,故可考虑将其应用于食品蛋白配料领域。

优化Ⅰ型胶原蛋白的纯化工艺

使用0.5 mol/L乙酸和胃蛋白酶提取Ⅰ型胶原蛋白后,结合等电点沉淀法和超滤纯化技术对Ⅰ型胶原蛋白进行纯化。通过鞣酸沉淀法和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实等电点沉淀可有效除去胃蛋白酶;经超滤纯化后的胶原蛋白紫外光谱检测在235nm处有最大吸收峰;在SDS-PAGE谱图上出现3条Ⅰ型胶原蛋白特征谱带;采用凯氏定氮法也证实其纯度符合YY/T1511—2017医药行业标准;通过傅里叶变换红外光谱、圆二色谱法(Circular Dichroism, CD)测定证实胶原蛋白三螺旋结构被完整保留下来。采用等电点沉淀法结合超滤纯化技术,可保证Ⅰ型胶原蛋白的高纯度及三螺旋结构的完整性。