Isogarcinol对人红白血病细胞HEL的抗肿瘤作用及机制

目的:研究Isogarcinol对人红白血病细胞HEL的凋亡、增殖的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度的Isogarcinol化合物处理HEL细胞,分别采用MTT测定细胞活力,Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,细胞计数绘制细胞生长曲,Western blot和qRT-PCR法检测胞内信号通路相关基因在蛋白和基因水平的表达,利用SCID白血病小鼠模型体内评价该化合物的作用。结果:Isogarcinol抑制人红白血病细胞HEL的活性,IC505.4μmol/L可显著抑制人红白血病细胞HEL的增殖及诱导细胞凋亡; qRT-PCR结果显示促凋亡基因Bax的表达增加,而Caspase-3、Caspase-8的表达发生下调,抗凋亡基因Bcl-2、c-Myc的表达下调; Western blot结果显示Bad,Bax,Cleaved caspase-3,Cleaved caspase-8和Cleaved PARP的相对表达量呈浓度依赖性上调,而JAK2,PStat3、Bcl-2、Caspase3、Caspase-8、PARP、P-ERK 1/2和c-Myc的相对表达量呈浓度依赖性下调;小鼠体内实验表明Isogarcinol显著延长了小鼠的存活时间,并且增加了血红细胞比。结论:Isogarcinol诱导人红白血病细胞HEL细胞凋亡和抑制HEL细胞增殖,可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路而实现的。

异藤黄酚对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的探讨异藤黄酚(ISO)对急性淋巴细胞白血病(ALL)Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法人ALL Jurkat细胞和人正常肝细胞HL-7702分别培养至对数生长期,0[二甲基亚砜(DMSO)]、10、15、20及25μmol/L ISO处理2种细胞,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞处理后24、48及72 h的光密度(OD)并计算细胞存活率;取对数生长期Jurkat细胞,分别用0(DMSO)、10、15及20μmol/L ISO处理,采用流式细胞术检测各浓度ISO组Jurkat细胞24、48 h的凋亡率,采用Hoechst 33258染色法验证各浓度ISO组Jurkat细胞24 h的凋亡率,采用线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒(JC-1)检测各浓度ISO组Jurkat细胞24 h的MMP,采用RNA高通量测序(RNA-seq)分析ISO组Jurkat细胞24 h的细胞内基因转录水平,采用Western blot检测各浓度ISO组Jurkat细胞24 h时凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase9)、剪切的Caspase3(Cleaved-caspase3)、剪切的Caspase9(Cleaved-caspase9)、凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、细胞色素C(Cytc)、蛋白激酶B(Akt)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、重组人BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)、截断的Bid(t-Bid)、磷酸化的信号转导和转录激活因子-3(p-STAT3)、Janus激酶2(JAK2)、磷酸化JAK2(p-JAK2)、多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、剪切的PARP(Cleaved-PARP)、丝裂原活化蛋白激酶p38(p38)蛋白的表达。结果MTT检测结果显示,与DMSO组相比,10、15、20及25μmol/L ISO组Jurkat细胞活力下降(P<0.05),且具有时间依赖性;流式细胞术结果显示,与DMSO组相比,10、15及20μmol/L ISO组Jurkat细胞凋亡率升高(P<0.05),且具有时间依赖性;Western blot结果显示,与DMSO组相比,10、15及20μmol/L ISO处理Jurkat细胞24 h后,Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase9、Cleaved-PARP、t-Bid、Apaf-1及Cytc的表达上调(P<0.05),p-JAK2、p-STAT3及c-Myc的表达下调(P<0.05);RNAseq分析结果,与DMSO组相比,15μmol/L ISO处理Jurkat细胞24 h后,299个基因上调、57个基因下调,且主要影响了Jurkat细胞中MAPK及PI3K/Akt等信号途径,进一步细胞实验结果表明,与DMSO组相比,10、15及20μmol/L ISO组Jurkat细胞中p-p38的表达上调(P<0.05),p-PI3K、p-Akt的表达下调(P<0.05)。结论ISO可抑制Jurkat细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制JAK2/STAT3/c-Myc、PI3K/Akt信号通路及激活p38 MAPK信号通路有关。

HPLC测定7种藤黄科植物中异藤黄酚的含量

目的:建立测定藤黄科植物中异藤黄酚含量的高效液相色谱分析方法(HPLC)。方法:使用岛津Inertsil WP300 C18填料色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇?水=75?25,流速为1.0 m L·min-1,柱温为40℃,检测波长γ为277 nm。结果:异藤黄酚的线性范围为0.005 7-0.039 9μg,平均加样回收率为99.58%,相对标准偏差(RSD)为1.25%。山竹子、岭南山竹子、单花山竹子、黄牛木和薄叶红厚壳中异藤黄酚(Isogarcinol)的含量分别为0.285%,0.199%,0.857%,0.161%和0.006%;而越南黄牛木和红厚壳中没检测出异藤黄酚。结论:该方法简便、准确、灵敏度高,稳定性和重复性好,可用于中药材中异藤黄酚含量的测定。

异藤黄酚对小鼠红白血病CB3细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨异藤黄酚对小鼠红白血病CB3细胞增殖以及凋亡的影响。方法用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况。根据MTT结果,将给药后细胞分为低、中、高3个浓度实验组(2.5,5.0,和10.0μmol·L^(-1)异藤黄酚,处理48 h);未给药细胞作为空白组。用流式细胞术检测CB3细胞凋亡的情况,蛋白质印迹法检测异藤黄酚作用于细胞后聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和胞活化的磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白表达水平。结果异藤黄酚可显著抑制小鼠红白血病CB3细胞的增殖,半数抑制浓度(IC_(50))为(8.19±0.63)μmol·L^(-1)。空白组和低、中、高3个浓度实验组的细胞凋亡率分别为(1.30±0.22)%,(1.80±0.23)%,(2.50±0.52)%和(64.50±3.35)%。给药12 h后,这4组的PARP蛋白相对表达量分别为1.00±0.08,0.86±0.02,0.68±0.12和0.57±0.11;这4组的p-ERK蛋白相对表达量分别为1.00±0.02,0.57±0.13,0.54±0.02和0.05±0.01。上述指标:高浓度实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论异藤黄酚可通过诱导CB3细胞发生凋亡,从而抑制细胞的增殖。其诱导CB3细胞凋亡可能与其调控PARP和p-ERK的表达有关。