知母中3种黄酮类成分的含量与颜色相关性研究

目的建立一测多评法同时测定知母中新芒果苷、异芒果苷、芒果苷的含量,并探讨其含量与颜色值之间的相关性,为知母药材的质量评价研究奠定理论基础。方法以芒果苷为指标,计算新芒果苷、异芒果苷与芒果苷的相对校正因子,并利用相对校正因子计算新芒果苷和异芒果苷的含量,另采用外标法测定知母中3种成分的含量,比较外标法与一测多评的结果,以验证一测多评法的准确度及可行性,进一步利用色差仪对知母粉末颜色进行测量,以3种成分含量为指标,研究其与颜色值的相关性。结果应用一测多评法与外标法测定20批知母饮片,其结果无显著性差异;色度研究结果表明,芒果苷与新芒果苷的含量与L^*、a^*、b^*值存在极显著相关关系(P<0.01),说明在一定程度上,L^*值越小、a^*值越大、b^*值越大,知母中芒果苷、新芒果苷含量越高。结论应用一测多评法测定知母中的新芒果苷、异芒果苷与芒果苷的含量,方法准确可行,在对照品缺乏的情况下,该方法可以作为一个新模式用于药材的多成分定量。芒果苷和新芒果苷与颜色指标值密切相关,表明知母颜色越偏黄,芒果苷与新芒果苷含量越高,故通过色差仪对知母色差值进行测定,快速预测知母中有效成分的含量,可为该药材质量评价体系的建立提供参考依据。

石韦有效成分的高效液相色谱测定

石韦为较常用中药,中医认为有清肺泄热、利水通淋等功效。主要来源于水龙骨科(Polypodiaceae)石韦属(Pyrrosia)植物:有柄石韦(P.petiolosa)、庐山石韦(P.sheareri)和石韦(P.lingua)的地上部分;同属多种植物也在全国不同地区应用。

中药石韦的原植物调查和品质评价

对中药石韦中国药典所载3种正品,6种地区用药及2个混淆种作了原植物调查和鉴定;并分析了7种石韦中的有效成分芒果甙、异芒果甙和绿原酸的含量。

HPLC法同时测定参芪博力康片中7种成分的含量

目的建立HPLC法同时测定参芪博力康片中7种成分的的含量。方法采用Syncronis C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温:30℃;流动相:乙腈-2 mL·L^(-1)冰醋酸,梯度洗脱;流速:1.0 mL·min^(-1);检测波长分别为258(检测新芒果苷、芒果苷、异芒果苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷和芒柄花素)和320 nm(检测2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷)。结果 7种成分分别在11.38~284.50,6.57~164.25,0.79~19.75,3.91~97.75,3.07~76.75,7.69~192.25和9.86~246.50μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r≥0.999 1);平均回收率分别为100.04%,99.25%,96.86%,98.73%,98.12%,97.73%和99.59%;RSD值分别为0.62%,0.75%,1.42%,0.96%,1.22%,0.92%和0.89%。结论该方法操作简便、重复性好,可用于参芪博力康片中多指标性成分的质量评价。

基于超高效液相色谱-紫外检测定量指纹图谱结合化学模式识别的复方金钱草颗粒质量评价

复方金钱草颗粒具有利尿、抑制泌尿系结石形成、抗炎、抗氧化作用,且具有较大的市场需求。因此,采用超高效液相色谱-紫外检测(UPLC-UV)法建立定量指纹图谱,并结合化学模式识别技术对不同年份的复方金钱草颗粒进行质量评价,可为其质量控制提供依据。采用聚类分析(HCA)和主成分分析(PCA)等化学模式识别技术对35批复方金钱草颗粒样品的指纹图谱数据进行分析,筛选出质量差异标志物芒果苷和异芒果苷,并对二者进行含量测定。在复方金钱草颗粒指纹图谱中共指认出12个共有峰,且35批样品的相似度均在0.952以上。在HCA中,将35批样品分为了两类,其中2018年和2019年的样品为一类,2020年和2021年的样品为一类。此外,PCA结果显示了与聚类分析相同的聚类趋势。在此基础上,进一步通过正交偏最小二乘法分析(OPLS-DA)筛选出了导致2018年、2019年与2020年、2021年的样品产生差异的差异标志物芒果苷和异芒果苷。以两个差异标志物芒果苷和异芒果苷为指标进行含量测定,结果显示色谱峰的分离度良好,线性关系良好,平均加标回收率分别为101.7%~105.6%和103.4%~105.5%,且相对标准偏差(RSD)均低于1.43%。在35批样品中,2020年、2021年的样品与2018年、2019年的样品相比,芒果苷与异芒果苷含量更高且波动范围更小。该研究建立了准确、可靠的复方金钱草颗粒质控方法,实现了对不同年份的复方金钱草颗粒样品合理、有效的质量评价,可为建立更系统、更全面的质量控制标准提供借鉴与参考。

异芒果苷对高脂饮食诱导大鼠肝脏损伤的改善作用

目的探讨异芒果苷对高脂饮食诱导大鼠非酒精性脂肪肝的影响.方法将动物随机分为4组:空白组、高脂组、异芒果苷(20、40 mg/kg)组.除空白组外,其它组动物以高脂肪饮食喂养6周,空白组给予正常饲料,从第5周起,异芒果苷组给予相应的药物治疗2周.ELISA法检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、细胞因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),采用HE染色观察肝脏病理改变,Western blot法检测肝脏Sirt1/NF-κB信号通路蛋白的表达.体外实验采用棕榈酸诱导肝脏L02细胞损伤模型,检测细胞活性以及细胞上清IL-1β、IL-6、TNF-α水平,检测细胞Sirt1/NF-κB信号通路蛋白表达.结果体内实验结果显示,异芒果苷显著降低ALT、AST活性及TG、TC、IL-1β、IL-6、TNF-α水平(P<0.01),改善肝组织病理学改变,增加肝脏Sirt1蛋白表达(P<0.01),降低NF-κB信号通路蛋白表达(P<0.01).体外实验结果表明,异芒果苷能显著增加L02细胞活性(P<0.01),降低细胞上清炎症因子水平(P<0.01),增加细胞Sirt蛋白表达(P<0.01),降低NF-κB信号通路蛋白表达(P<0.01).结论异芒果苷能显著改善高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝,其机制可能与调节Sirt1/NF-κB信号通路有关.

复幼方药味配伍对盐知母中新芒果苷、芒果苷、异芒果苷提取率及稳定性的影响

目的探究复幼方药味配伍对盐知母中新芒果苷、芒果苷、异芒果苷提取率及稳定性的影响。方法建立复幼方中新芒果苷、芒果苷、异芒果苷的HPLC测定方法,通过复幼方整体提取和方中各药味与盐知母分别配伍提取,考察不同药味配伍对盐知母中3种成分提取率和稳定性的影响。结果较盐知母单独提取,复幼方全方提取后,新芒果苷、异芒果苷提取率增加,芒果苷提取率降低;各药味与盐知母分别配伍提取后,生地黄-盐知母组、泽泻-盐知母组新芒果苷的提取率降低,地骨皮-盐知母组、生地黄-盐知母组芒果苷的提取率降低,各组异芒果苷的提取率均高于盐知母单独提取。与0 h测得的含量相比,复幼方水提液放置48 h后,新芒果苷含量较稳定,芒果苷含量降低为84.04%,异芒果苷含量升高。关黄柏-盐知母配伍水提液放置48 h后新芒果苷稳定性降低;芒果苷、异芒果苷在地骨皮-盐知母配伍水提液中不稳定,放置48 h后含量分别降低8.37%、9.99%;夏枯草-盐知母配伍水提液放置48 h后,3种成分的含量呈不同程度下降。结论复幼方煎煮提取过程中主要是生地黄、地骨皮影响了新芒果苷、芒果苷、异芒果苷的提取率,提取液放置过程中主要是关黄柏、地骨皮、夏枯草影响了该3种成分的稳定性,不同的药味配伍及配伍比例是影响复方中有效成分含量的关键因素。

异芒果苷通过调节PTEN-PI3K-AKt-mTOR通路抑制恶性胶质瘤的恶性行为

目的 探索异芒果苷对恶性胶质瘤细胞U251的抑制作用及可能机制。方法 常规培养U251细胞,以一定浓度梯度的异芒果苷与U251细胞共孵育,MTT法检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测集落形成能力,Transwell小室迁移和侵袭实验检测纵向迁移能力,划痕实验检测横向迁移能力,western blot实验检测PTENPI3K-AKt-mTOR通路的变化,PTEN-siRNA予以验证。结果 与一定浓度梯度的异芒果苷共孵育后,MTT法检测发现U251细胞的增殖能力以时间依赖性和浓度依赖性下降,平板克隆形成实验检测发现U251细胞的集落形成能力浓度依赖性下降,Transwell小室迁移和侵袭实验检测发现U251细胞的纵向迁移和侵袭能力浓度依赖性下降,划痕实验发现U251细胞的横向迁移能力浓度依赖性下降,免疫印迹检测发现,PTEN表达呈浓度依赖性上调,而磷酸化的PI3K、磷酸化的AKt及磷酸化的mTOR呈浓度依赖性下降。PTEN-siRNA沉默PTEN可抵消异芒果苷的抑制作用。结论 异芒果苷可以抑制恶性胶质瘤U251细胞的恶性生物学行为,作用机制与调控PTEN-PI3K-AKtmTOR通路有关。

光石韦中芒果苷和异芒果苷的一测多评含量测定方法的建立

目的建立光石韦中芒果苷和异芒果苷的一测多评含量测定方法。方法采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC),十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%甲酸(12:88,V:V)为流动相;检测波长为256 nm。流速1.0 mL/min;柱温30℃,相对校正因子0.894,相对保留时间1.18 s。结果对9批光石韦药材含量测定,分别用外标法和一测多评法计算芒果苷和异芒果苷含量,结果两种方法计算结果差异极小。结论该一测多评法准确、简便可用于光石韦中芒果苷和异芒果苷的含量测定。

知母饮片炮制前后黄酮类和皂苷类成分变化研究

目的:测定知母饮片炮制前后3个黄酮类和2个皂苷类成分变化。方法:采用高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)测定3个黄酮类成分,色谱柱为岛津Intetsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%冰醋酸,梯度洗脱,进样量20μL,流速1.0 mL/min,柱温30℃;采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定2个皂苷类成分,色谱柱为岛津Intetsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%冰醋酸,梯度洗脱,进样量10μL,流速1.0 mL/min,氮气流量2.5 mL/min,蒸发温度80℃。结果:知母饮片炮制后知母皂苷BⅡ、新芒果苷、芒果苷含量下降,知母皂苷AⅢ含量上升,异芒果苷含量相对稳定。结论:知母饮片炮制后部分知母皂苷BⅡ会转化成知母皂苷AⅢ,新芒果苷、芒果苷会转化成其他成分,异芒果苷结构相对稳定,不易转化成其他成分。

基于靶向代谢组学研究知母总黄酮对前列腺增生大鼠体内花生四烯酸代谢的影响

目的:研究经知母总黄酮干预后前列腺增生(benign prostatic hyperplasia, BPH)大鼠前列腺中花生四烯酸(arachidonic acid, AA)的代谢组学特征。方法:采用Shim-PACK XR-ODS C18(75 mm×3.0 mm, 2.2μm)色谱柱,以0.05%的甲酸-水溶液(浓氨试液调节pH至3.3)为流动相A,甲醇-乙腈(20∶80,v/v)为流动相B,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),柱温40℃,进样量10μL;质谱采用负离子扫描,多反应监测(MRM)模式。分别收集假手术组、模型组、知母总黄酮组和阳性对照组大鼠的前列腺组织,利用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)法对其中的11个物质[包括花生四烯酸(AA)、5-羟二十碳四烯酸(5-HETE)、8-羟二十碳四烯酸(8-HETE)、11-羟二十碳四烯酸(11-HETE)、12-羟二十碳四烯酸(12-HETE)、15-羟二十碳四烯酸(15-HETE)、白三烯(LTB4)、前列腺素D2(PGD2)、前列腺素E2(PGE2)、前列腺素H2(PGH2)、血栓素B2(TXB2)]进行定量分析。结果:待测物均能被很好地检出,在其线性范围内呈现良好的线性关系。组织样品中11个待测成分在高、中、低浓度下的提取回收率均>75.7%,基质效应为85.5%~106.3%,准确度RSD<11.2%,日内和日间精密度RSD分别<11.0%和9.5%。方法的专属性、准确度、精密度、提取回收率、基质效应和稳定性方面均符合要求。研究表明,模型组大鼠前列腺内的AA及其代谢物浓度均显著高于假手术组;知母总黄酮可改变BPH发展过程,有效下调BPH大鼠前列腺中AA及其代谢物的浓度。结论:知母总黄酮可以通过脂氧合酶(LOX)和环氧合酶(COX)的2条途径来调节AA代谢,抑制BPH中发生的炎症反应。

异芒果苷抑制人骨肉瘤U2OS细胞的恶性生物学行为

本研究以异芒果苷对人骨肉瘤(U2OS)细胞的恶性生物学行为影响及作用机制进行探索。在U2OS细胞中加入不同浓度梯度的异芒果苷,然后通过MTT法分析细胞迁移和侵袭试验分别研究异芒果苷对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭能力的作用。分别通过平板克隆形成和微球体法检测异芒果苷对U2OS细胞克隆形成能力和自我更新能力的影响。利用Western blotting检测异芒果苷对U2OS细胞c-Src蛋白表达的影响,并通过RNA激活技术(RNAa)评估异芒果苷是否通过c-Src蛋白抑制骨肉瘤。结果表明,异芒果苷能够抑制U2OS细胞的增殖并呈剂量依赖性,同时不同浓度异芒果苷对U2OS细胞的克隆形成、迁移和侵袭有抑制作用,并呈现一定的剂量依赖关系,而且异芒果苷能够抑制U2OS癌干细胞自我更新的能力。另外,异芒果苷可下调U2OS细胞的c-Src蛋白的表达。异芒果苷可能是通过降低c-Src的表达实现U2OS细胞的恶性生物学行为,而且在一定程度上呈现剂量依赖性。

HPLC法测定盐炙前后知母中新芒果苷、芒果苷和异芒果苷

目的建立HPLC法同时测定盐炙前后知母中新芒果苷、芒果苷、异芒果苷,并比较盐炙前后3种成分的差异。方法采用HPLC法,Ecosil色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相乙腈–0.2%冰醋酸,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长258 nm,柱温室温,进样量10μL。结果新芒果苷、芒果苷、异芒果苷分别在0.860 0～17.200 0μg、0.806 5～16.130 0μg、0.039 0～0.780 0μg与峰面积的线性关系良好;平均回收率分别为98.32%、98.30%、97.27%,RSD值分别为0.87%、0.74%、0.71%（n=6）。知母盐炙后新芒果苷、异芒果苷的量减少,而芒果苷的量增加。结论该方法准确、专属性强、灵敏度高,可用于知母中新芒果苷、芒果苷、异芒果苷的质量控制方法。新芒果苷、芒果苷之间可能在炮制过程中发生了转化,可为进一步研究盐知母炮制机制提供参考。

整合指纹图谱与多成分含量测定的酸枣仁汤质量评价研究

目的 利用HPLC-DAD-ELSD分析技术,建立酸枣仁汤指纹图谱结合多成分含量测定方法,为其质量控制提供参考。方法 采用Phenomenex C色谱柱(250 mm×4.6 mm,5.0μm),以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,柱温30℃,在282 nm和335 nm检测波长下,分别以芒果苷和斯皮诺素为参照峰;ELSD漂移管温度105℃,载气体积流量2.5 L/min条件下,以酸枣仁皂苷A为参照峰,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对10批自制酸枣仁汤进行相似度评价;同时建立13个指标成分含量测定方法,应用于市售产品及自制样品的质量评价。结果 10批自制酸枣仁汤的平均出膏率为21.57%,在282 nm和335 nm分别标定了5个和4个共有峰,相似度分别为0.907~0.999、0.926~0.999;HPLC-ELSD指纹图谱中标定了4个共有峰,相似度为0.946~0.999。13种指标成分在各自的线性范围内线性关系良好(r>0.995 9),平均加样回收率为93.69%,RSD值平均为2.04%。10批不同剂型市售产品中新芒果苷、乌药碱、芒果苷、异芒果苷、甘草苷、斯皮诺素、阿魏酸、6′′′-阿魏酰斯皮诺素、异甘草苷、知母皂苷BII、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和甘草酸的质量分数分别为0.30~3.38、0.02~0.20、0.27~6.04、0.33~1.38、1.54~12.02、0.16~0.87、0.16~1.27、0.04~0.35、0.25~3.12、3.66~20.92、0.36~0.98、0.32~0.89、4.90~36.37 mg/g,波动范围大。自制酸枣仁汤13种成分含量波动范围小。结论 建立了酸枣仁汤HPLC-DAD-ELSD指纹图谱与多成分含量测定相结合的质量评价方法,方法准确、可靠,为市售酸枣仁汤产品的质量控制和体内药动学研究提供参考。

不同部位和不同产地加工方法的知母质量评价研究

目的采用UPLC-QQQ-MS/MS法同时测定不同部位和不同产地加工方法知母Anemarrhenae Rhizoma中9个成分的含量,并比较其差异。方法采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为0.01%甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱,体积流量0.4 mL/min,进样量2μL,柱温30℃;质谱采用电喷雾离子源、负离子模式(ESI-),多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)。结果知母中新芒果苷、芒果苷、异芒果苷、知母皂苷AⅡ、知母皂苷AⅢ、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ、知母皂苷E1、知母皂苷Ⅰ 9个成分在各自范围内呈良好的线性关系,加样回收率97.23%~100.76%。知母的5个不同部位中知母须根中芒果苷、异芒果苷的含量最高;知母肉中知母皂苷E1、知母皂苷BⅡ、知母皂苷Ⅰ含量最高;知母头与知母片、知母肉成分差异较小。比较知母的不同产地加工方法,趁鲜切片新芒果苷和知母皂苷BⅡ的含量较高,润切片芒果苷和知母皂苷AⅢ的含量较高。结论知母须根具有一定的开发利用价值,知母肉具有其存在的合理性;知母产地加工,可不切去知母头,以减少工序,提高知母根茎的综合利用率;趁鲜切片可加速干燥,降低饮片霉变风险。