睡莲花isostrictiniin对CCl_4致小鼠急性肝损伤防护作用及其体外抗氧化活性研究

目的研究睡莲花isostrictiniin的体外抗氧化能力和对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的防治作用。方法采用总抗氧化能力测定(FRAP法)、DPPH·清除实验和还原能力测定探讨睡莲花isostrictiniin的抗氧化活性。通过CCl4所致小鼠急性肝损伤模型评价isostrictiniin的肝保护作用,将60只健康昆明种小鼠随机分为6个组:空白组、模型组、联苯双酯组(150mg/kg体质量)、isostrictiniin低、中、高剂量组(25、50、100mg/kg体质量),连续灌胃7d。最后次给药l h后,除空白组腹腔注射花生油溶液(0.1mL/10g体质量),其它各组小鼠腹腔注射0.10%的CCl_4花生油溶液按(0.1mL/10g体质量)。结果睡莲花isostrictiniin具有较好的总抗氧化能力,浓度范围在10~50μg/mL其FRAP值大于同浓度下Vc的FRAP值;且该化合物具有较强还原能力,随着浓度的增大,吸光值也增大。Isostrictiniin对DPPH·清除能力的IC_(50)值为8.95μg/mL,接近于Vc(IC506.33μg/mL)的清除能力。与模型组比较,isostrictiniin中、高剂量组(50、100 mg/kg)血清ALT、AST水平及肝脾脏指数降低,差异有统计学意义(P<0.01);肝组织匀浆中MDA和NO的含量降低,SOD和GSH的活性升高,差异有统计学意义(P<0.01)。病理组织学检查结果可知isostrictiniin中、高(50、100mg/kg)剂量可以降低CCl4对小鼠肝脏组织的病理损伤。结论睡莲花isostrictiniin有较好的抗氧化活性,对CCl4所致小鼠急性化学性肝损伤具有良好的防治作用。

睡莲酚对小鼠酒精性肝损伤的保护作用

目的研究睡莲花中标识性成分睡莲酚对急性酒精性肝损伤(ALI)的保护作用。方法72只雄性昆明种小鼠随机分为:正常组、模型组、阳性药联苯双酯组(DDB)、睡莲酚低、中、高剂量组(25、50、100 mg·kg^(-1)),每组12只。根据分组给药,每天灌胃给药1次,每次给药2 h后,除正常组外,其余各组小鼠灌胃给予52°白酒(13 mL·kg^(-1)),连续7 d。16 h后取血并收集肝组织,HE染色观察小鼠肝脏病理情况,检测小鼠血清ALT、AST、TG和TC含量,测定小鼠肝组织MDA、GSH、SOD、TNF-α、IL-6、IL-1β及TG水平,RT-PCR检测Keap1、Nrf2、NQO1的mRNA表达水平。结果与正常组相比,模型组血清AST、ALT活性、肝组织MDA、TG、TC水平增高(P<0.01),GSH和SOD活性显著降低(P<0.01)、TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著增加(P<0.01),Nrf2 mRNA、NQO1 mRNA表达降低(P<0.01),肝组织出现明显的空泡和细胞坏死。与模型组相比,睡莲酚给药组小鼠能有效改善血清中的ALT、AST活性(P<0.05,P<0.01),TG、TC含量显著下降(P<0.05,P<0.01),MDA水平明显降低(P<0.01),GSH和SOD水平明显升高(P<0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6的水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。PCR结果显示,睡莲酚给药组中Nrf2 mRNA的表达水平上调,Keap1 mRNA的表达下调,Nrf2-Keap1信号通路显著激活。结论睡莲酚对ALI有较好的防治作用,其机制与调控Keap1/Nrf2抗氧化通路相关,这可能为ALI治疗方法的发展提供新思路。

睡莲酚对H2O2致LO2细胞损伤的保护作用

目的研究睡莲酚对H2O2致正常肝(LO2)细胞损伤的保护作用。方法将LO2细胞分为药物组(给予6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μg/mL的睡莲酚)、空白组(给予完全培养液),置于37℃、5%CO2环境下分别培养24、48和72 h后,采用MTT法检测样品对LO2细胞的毒性。0.6 mmol/L H2O2处理LO2细胞4 h构建H2O2损伤LO2细胞模型。用含6.25、12.50、25.00μg/mL的睡莲酚的培养液干预损伤肝细胞,MTT法测定细胞活力,并检测天冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酸氨基转移酶(ALT)、丙二醛(MDA)、氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮(NO)的水平。结果睡莲酚在6.50~25.00μg/mL的浓度范围内给药24、48和72 h,对正常人体肝(LO2)细胞无毒性作用。与空白组比较,给药组细胞的存活率达到90%以上,差异无统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,给药组该范围内可抑制H2O2对LO2细胞的损伤,升高细胞活力,差异有统计学意义(P<0.05);H2O2致急性损伤肝细胞的ALT、AST、MDA和NO水平均降低,SOD活力升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论睡莲酚对氧化应激致肝细胞损伤有保护作用。