5种海水鱼同工酶表达的组织特性及其电泳的初步分析

于1994年7—12月，在山东、福建沿海采集真鲷、黑鲷、牙鲆、鲈和小黄鱼等5种鱼63尾692个生化样品，应用水平淀粉胶和垂直聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，对5种鱼的肌肉、眼睛、肝脏、心脏、鳍、鳃、肾脏共7种组织的23种同工酶进行初步分析。结果为：1．选出酶活性强，基因座位表达稳定、清晰的肌肉、眼睛、肝脏、心脏4种组织，用于以上5种鱼的常规性生化遗传分析；2．筛选出适于电泳分析的缓冲液系统有TCl，EBT，TG等3种以及14种图谱清晰、分辨率高的同工酶（LDH，MDH，IDHP，MEP，ADH，SDH，G6PDH，CAT，GDH，PGM，PGDH，GP，EST，Pm，SOD）和肌浆蛋白（Pm）；3．对其中的LDH，IDHP，ADH，GDH和BST5种同工酶进行生化遗传分析，包括每种酶的亚基结构、编码座位以及多态座位等位基因数等。

大弹涂鱼不同组织器官的同工酶研究

采用垂直聚丙烯酰胺平板电泳技术 ,对大弹涂鱼(Boleophthalmuspectinirostris)的眼睛、心脏、肝脏、肌肉、脾脏和鳃等6种组织器官中的13种同工酶进行研究 ,并分析了其酶谱表型。结果表明,四唑氧化酶 (TO)和酸性磷酸酶 (ACP)没有检测到酶带 ;三梨醇脱氢酶 (SDH)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 (G -6 -PDH)仅在肝脏中表达 ;超氧化物歧化酶 (SOD)在所有组织中均存在 ,部分组织中存在差异 ;乳酸脱氢酶 (LDH)、苹果酸脱氢酶 (MDH)、苹果酸酶 (MEP)、酯酶(EST)、醇脱氢酶 (ADH)、D -葡萄糖脱氢酶 (GcDH)、甲酸脱氢酶 (FDH)、谷氨酸脱氢酶 (GDH)则具有明显的组织特异性。

中国鲎同工酶组织器官特异性表达

采用垂直聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,分析了中国鲎6种组织器官(肝胰腺、心脏、肠、鳃、肌肉和黄色结缔组织)的乙醇脱氢酶(ADH)、山梨醇脱氢酶(SDH)、酯酶(EST)、过氧化氢酶(CAT)、天冬氨酸转化酶(AAT)、苹果酸脱氢酶(MDH)和苹果酸酶(ME)等7种同工酶的活性和分布,并对其酶谱的表型进行了分析.结果表明,中国鲎的同工酶系统存在不同程度的组织特异性.乙醇脱氢酶在鳃和黄色结缔组织中不表达;山梨醇脱氢酶在鳃中不表达;酯酶、过氧化氢酶和苹果酸脱氢酶在6种组织器官中均有表达,但表达活性存在差异;而天冬氨酸转化酶Aat-1位点在鳃中不表达.

管角螺不同组织同工酶的研究

采用聚丙烯酰胺垂直板梯度凝胶电泳技术,对管角螺7种组织(外套膜、肌肉、肝脏、心脏、生殖腺和缠卵腺)的5种同工酶(EST、SOD、ME、MDH、LDH)进行了分析,结果表明:5种同工酶存在不同程度的组织特异性,SOD、EST、LDH在肝脏组织中有较高活性,而MDH、ME在心脏组织中活性较高。

马氏珠母贝不同组织同工酶的比较

采用聚丙烯酰胺凝胶水平平板电泳技术 ,研究了马氏珠母贝的 8种组织 7种同工酶的酶谱表型 ,结果表明 :所测组织中未检出α -磷酸甘油脱氢酶 (α -GPDH)和醇脱氢酶 (ADH) ,乳酸脱氢酶 (LDH)只在肝脏有一条微弱谱带 ,苹果酸脱氢酶 (MDH)、苹果酸酶 (ME)和超氧化物岐化酶 (SOD)部分组织间有显著差异 ,而酯酶 (EST)则具有明显的组织特异性。

彩虹明樱蛤同工酶组织特异性研究

采用聚丙烯凝胶垂直电泳技术和同工酶特异性染色方法,对彩虹明樱蛤(Moerella iridescens)的斧足、肝胰腺和外套膜3种组织的酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)和超氧化物歧化酶(SOD)3种同工酶进行了分析。结果表明,这3种酶在上述3种组织中均得到了表达,不同的酶既存在一定的组织特异性又有相似性的特点。EST在3种组织中分别产生7～8条酶带,分为4个带区,其中EST-3和EST-6在3种组织中均为保守存在的强带,而斧足中缺失EST-1、EST-8和EST-9,肝胰腺中缺失EST-1和EST-2,外套膜中缺失EST-2和EST-8;MDH在3种组织中有4～5条酶带,MDH-2在斧足中缺失,MDH-3在外套膜中缺失,而处于s-MDH的MDH-4和MDH-5在3种组织中保守存在。SOD在3种组织中共表现为4条酶带,酶谱无明显变化,组织间无明显差异,这一特殊性可以用其作为生化遗传标记对彩虹明樱蛤进行种质鉴定。

池蝶蚌与三角帆蚌不同组织SOD及EST同工酶的比较研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法研究池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)和三角帆蚌(Hyriopsiscumingii)5种组织(鳃、外套膜、肠、闭壳肌和斧足)中SOD和EST同工酶的表达情况。结果表明,两种蚌的SOD和EST同工酶均具有明显的组织特异性。SOD、EST酶谱间存在不同程度的种间差异,可作为鉴定池蝶蚌与三角帆蚌的遗传标记。

美国金鳟的同工酶分析

本实验运用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对养殖型美国金鳟眼(E)、心(H)、肾(K)、肝(L)、肌肉(M)五种组织的乙醇脱氢酶(ADH)、酯酶(EST)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6- PDH)、谷氨酸脱氢酶(GDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和过氧化物酶(POD)等7种同工酶进行电泳研究。结果显示：美国金鳟中ADH、EST、G-6-PDH、GDH、LDH、MDH、POD、SOD 7种同工酶都有不同程度的组织特异性；美国金鳟群体同工酶分析共记录18个基因座位,其中有8个基因座位为多态,等位基因总数为26个,从而得出多态座位百分数P为44．44％,位点有效等位基因数Ne=1．4444,表明美国金鳟群体遗传多样性偏高。

细角螺几种组织的同工酶分析

采用聚丙烯酰胺垂直板梯度凝胶电泳技术,对细角螺7种组织(外套膜、肌肉、肝脏、心脏、生殖腺和缠卵腺)的7种同工酶(EST,SOD,ME,MDH,LDH,ADH,GDH)进行了分析,结果表明:所测组织中未检出ADH和GDH,LDH除了在肝脏中呈现较浓的条带外,在其他组织均呈现微弱条带,无组织差异性;ME,EST,SOD,MDH在组织间具有显著的差异.

克氏原螯虾LDH同工酶的组织特异性研究

以克氏原螯虾为材料,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,分析了肌肉、眼球、肝胰腺和心脏4种组织和器官中乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的表达情况。结果发现,眼球中出现Ldh-5和Ldh-6 2条酶带,肌肉中出现Ldh-1、Ldh-2、Ldh-3、Ldh-4、Ldh-5共5条酶带,肝胰腺中只出现Ldh-6 1条酶带,心脏中出现Ldh-3和Ldh-5共2条带。在这些检测到的酶带中,肌肉中Ldh-5活性最强,染色最深。实验结果表明,不同组织中LDH的同工酶的表达存在差异,表现出明显的组织特异性。

可口革囊星虫不同组织同工酶的比较

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术,研究了可口革囊星虫5种组织(收吻肌、吻、肠、肾管及体壁)10种同工酶(ADH、GCDH、SDH、EST、LDH、ME、POD、SOD、MDH、CAT)的表达。结果表明:除CAT外,其余9种同工酶均得到了较为清晰的酶谱,除SOD和MDH在5种组织中表型相同外,其它7种同工酶的表达均具有明显的组织特异性。SDH-2、EST-1、LDH-1和POD-1为收吻肌所特有;ADH-3、ADH-4、GCDH-2、GCDH-4、GCDH-5、EST-10和LDH-6均为吻所特有;EST-4为肾管所特有。在肠中,ADH和GCDH均没有检测到活性。初步探讨了5种组织中各种同工酶的分布与活性及其与各组织生理功能的关系。

口虾蛄超氧化物歧化酶同工酶的组织特异性研究

以口虾蛄为材料进行研究,用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,对其肌肉、心脏、腹鳃、肝胰腺及眼球5种组织器官进行超氧化物歧化酶(SOD)同工酶的研究分析。结果表明:不同组织中超氧化物歧化酶(SOD)的同工酶谱带存在差异,具有明显的组织特异性。眼球、腹鳃、肝胰腺和心脏中有2条酶带,肌肉中几乎不表达,心脏中SOD2和肝胰腺中SOD1谱带表达最浓,而腹鳃中的酶带表达最弱。

感染桃拉综合症病毒的凡纳滨对虾体内4种同工酶酶谱的变化

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法,对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)成体的复眼、肝脏、心脏、鳃和肌肉等5种组织中的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、酯酶(EST)和过氧化物酶(POD)4种同工酶进行研究,并将健康虾与感染桃拉综合症病毒(TSV)病虾的同工酶酶谱进行比较。结果表明,这4种同工酶在凡纳滨对虾体内的不同组织均有分布,但在酶活性和条带数量上存在不同程度的组织特异性,其中4种同工酶均在肝脏组织中表达最强,ACP和POD在肌肉中、EST在复眼中表达最弱,AKP在复眼中不表达。感染TSV后,病虾的ACP和AKP均出现酶带数量减少和酶活性降低,如病虾的ACP酶谱在肝脏、心脏和鳃中缺失的酶带数分别为2、1和1条,酶活性也呈现下降;AKP酶谱在肝脏、心脏和肌肉中缺失的酶带数分别为3、4和3条,且酶活性均明显降低;而病虾的EST和POD表达的酶带数和酶活性却均有明显增加,尤其是在肝脏和心脏中,EST分别新增3条和5条酶带,POD各新增1条酶带。总之这4种同工酶的表型在健康虾和病虾之间存在着明显的差异,尤其是在肝脏中的变化最为明显,说明肝脏中这4种同工酶的特异性变化可以作为研究凡纳滨对虾桃拉综合症的生理生化指标。

卡拉白鱼同工酶的研究

采用聚丙烯酰胺垂直板状连续电泳法,对卡拉白鱼(Chalcalburnus chalcoides aralensis)8种组织(眼睛、肌肉、心脏、肝脏、肾、脾、肠和脑)的7种同工酶进行研究.结果表明:卡拉白鱼的EST,LDH,MDH,ME,ADH,POD,SOD 7种同工酶均有不同程度的组织特异性;群体同工酶分析共记录23个基因座位,其中6个基因座位为多态,多态座位百分数P为26.09%,等位基因总数为29个,位点有效等位基因数Ne=1.26,研究表明,卡拉白鱼群体遗传多样性的水平较高.

洞庭湖鲇不同组织SOD同工酶的比较研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,研究了洞庭湖鲇(Silnrus asotus)5种组织或器官(肌肉、肾脏、肝脏、胰脏和心脏)中超氧化物歧化酶(SOD)同工酶的表达情况。结果表明,在鲇组织中共检出SOD同工酶带5条(SOD-1、SOD-2、SOD-3、SOD-4和SOD-5),其中SOD-5仅在肝脏中表达,不同组织中SOD同工酶的表达存在差异,表现出明显的组织特异性。

口虾蛄琥珀酸脱氢酶(SDH)同工酶的组织特异性研究

口虾蛄 (Oratosquillaoratoria) ,俗称虾爬子、螳螂虾等 ,属节肢动物门、甲壳纲、口足目、虾蛄科、口虾蛄属 ,主要生活于近海浅滩 ,泥质海底巢穴中 ,我国山东、浙江以及江苏以南沿海皆有分布 .它具有个体大、肉味鲜嫩、营养丰富等特点 .随着人们食物结构的改变 ,其国内国际市场的需求量越来越大 .目前浙江已有虾蛄的人工养殖 ,苗种培育已取得成功[1] ,正朝着产业化与规模化方向发展 .同工酶作为一种生化指标 ,已广泛应用于虾蟹类的物种及杂种鉴定[2 ,3] 、亲缘关系比较及系统分类[4 ,5] 、胚胎发育过程中的基因表达与调控[6 - 9] 等的研究 .关于口虾蛄的同工酶研究 ,目前尚未见报道 ,本文报道的是口虾蛄的琥珀酸脱氢酶同工酶的组织特异性研究结果 ,旨在为口虾蛄进一步生物学研究和资源的合理开发提供参考 .

细鳞斜颌鲴5种组织2种同工酶的电泳分析

为了解细鳞斜颌鲴(Xenocypris microlepis)的生化遗传特征,并以此为基础为其种质资源鉴定提供理论依据,本研究采用不连续聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳对细鳞斜颌鲴5种组织(心脏、晶状体、肌肉、肾脏和肝脏)的乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)进行分析。结果表明:所测样本鱼的心脏、晶状体、肌肉、肾脏和肝脏中的LDH酶带数分别为:6～8、5、2～4、5和4～6条; MDH酶带数分别为:7～8、5～6、7～8、3～4和4条;细鳞斜颌鲴的LDH同工酶和MDH同工酶具有组织特异性,其心脏、肾脏和肝脏MDH分为上清液型(s-MDH)和线粒体型(m-MDH),肌肉和晶状体组织中未见上清液型MDH(s-MDH)。研究认为晶状体组织LDH可作为鉴定细鳞斜颌鯝种质特征的生化遗传参数。本研究可为鉴定细鳞斜颌鲴种质、制定其种质标准提供参考依据。

斑点叉尾鮰形态观察及其两种同工酶的电泳分析

为从形态特征和生化遗传层面上丰富斑点叉尾鮰(Ietalurus Punetaus)种质资源研究内容,进一步为筛选鉴定斑点叉尾鮰种质的生化遗传标记提供前期基础,采用形态学方法观测斑点叉尾鮰(Ietalurus Punetaus)的形态特征,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了斑点叉尾鮰5种组织(心脏、眼睛晶状体、肌肉、肝脏和肾脏)中乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)的表达情况.结果表明:1)斑点叉尾鮰主要形态特征为体表无鳞,头小,口亚端位,具4对触须.背部呈灰褐色,腹部呈乳白色且浑圆,体侧具不规则灰黑色斑点.背鳍和胸鳍具棘.脂鳍肥厚,末端游离.尾鳍分叉深.各鳍鳍式为:背鳍D.i-6~8,胸鳍P.i-8~9,腹鳍V.8~9,臀鳍A.26~29,尾鳍C.29~30.鳔分两室,腹膜黑色.肋骨10对.脊椎骨总数93.左侧第一鳃弓外侧鳃耙数21~23.2)LDH同工酶在斑点叉尾鮰的心脏、眼睛晶状体、肌肉、肝脏和肾脏中表达的酶带数分别为5条、3~4条、3条、4~7条和5条,MDH酶带数分别为4条、1条、2条、3条和6~8条,且同一组织不同个体间也存在明显差异.研究认为,LDH同工酶和MDH同工酶在斑点叉尾鮰5种组织中的表达具有组织特异性和个体差异性,各组织同工酶的表达与其生理功能相适应.

普通伏翼不同组织3种同工酶的比较

采用聚丙烯酰胺不连续凝胶垂直板活性电泳,分析了普通伏翼的心、肝、肾、胸肌、肺、胃、小肠、舌8种组织的酯酶(EST)、乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)3种同工酶。结果表明:普通伏翼8种组织的3种同工酶存在差异,其分布具有明显的组织特异性,与器官或组织所执行的功能有关。

兴国红鲤同工酶的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳,分析了兴国红鲤的心、肝、肾、晶状体、脑和肌肉六种新鲜组织中的苹果酸酶(ME)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和α-淀粉酶(α-AMY)四种同工酶系统的酶带及其肌肉蛋白带。结果表明,不同组织中四种同工酶谱带是不相同的,存在着明显的组织特异性。肌肉蛋白分析显示雌雄鱼体中蛋白带无显著区别。