817肉杂鸡肉瘤组织分离出A、J亚型禽白血病病毒

山东某地饲养的36日龄817肉杂鸡生长迟缓并发生颈部肉瘤。取肉瘤组织上清液接种CEF,培养12d,用IFA试验进行病毒鉴定。检测结果表明,从该肉瘤组织分离到A亚型与J亚型禽白血病病毒(ALV-A、ALV-J),命名为SD1005株。取肉瘤组织上清液人工感染817肉杂鸡与SPF鸡进行动物回归试验,结果复制出同样肉瘤。用复制出的新鲜肉瘤分别制备肉瘤细胞与肉瘤组织触片,IFA试验再次验证出ALV-A与ALV-J均为阳性,而且发现ALV-A与ALV-J分别共感染同一个组织细胞。同时,通过PCR方法用针对ALV-A、ALV-J的2对引物扩增并鉴定出肉瘤组织中含有ALV-A、ALV-J。对扩增的ALV-J囊膜糖蛋白(env)基因1 710bp片段进行的遗传变异分析结果显示,SD1005株与14株国内外参考株之间的同源性为88.5%～94.0%,其中与来自白羽肉鸡的美国参考株0661(AF247566)、ADOL-Hc1(AF097731)的同源性最高,分别为94.0%、93.8%。本研究显示,来自817肉杂鸡的肉瘤组织上清液接种鸡可诱发急性肉瘤,其中既检出ALV-A,又检出ALV-J,但急性肉瘤由单个病毒诱发还是与共感染相关有待于进一步研究。

2015年～2016年江苏盐城地区市场活禽与野生鸟类中J亚型禽白血病分子病原学调查

为调查江苏省盐城地区市场活禽与野生鸟类中J亚型禽白血病病毒（ALV-J）的感染情况，本研究于2015年～2016年采集市场活禽粪便样品636份、野生鸟类粪便样品826份，提取RNA后利用荧光定量PCR方法检测ALV-J；利用普通PCR扩增阳性样品gp85基因，并进行克隆测序。荧光定量PCR结果显示，636份活禽粪便样品中有7份为阳性、826份野生鸟类粪便样品为阴性。PCR扩增、克隆测序得到2个当地土鸡ALV-J分离株的gp85基因，与国内外ALV-J参考病毒株同源性为87.6 %～95.3 %，并且2个样品在进化树的不同分支。本研究结果显示，市场活禽存在ALV-J感染，野生鸟类并未发现ALV-J，表明加强活禽流通过程中禽白血病的防控工作势在必行，同时需继续加强对野生鸟类中ALV-J的监测。

2011年～2012年四川地区J亚型禽白血病分子流行病学调查

为了解2011年～2012年四川地区J亚型禽白血病病毒（ALV-J）流行情况及流行病毒株的分子特征,本研究采集四川地区疑似禽白血病的病料样品784份（血液样品700份,组织样品84份）进行PCR检测,并对部分样品的gp85基因进行序列测定和分析.血液样品和组织样品ALV-J检出率分别为3.1％ （22/700）和14.3％（12/84）.核苷酸序列比对结果表明,18个阳性样品的gp85基因核苷酸同源性为87.7％～99.8％,与ALV-J株HPRS-103的核苷酸同源性为87.3％～98.2％,与以前分离的J亚群四川株SCGS-1的核苷酸序列同源性为87.9％～94.4％.遗传进化分析表明,18个样品分别属于不同的分支,其中来自石棉的样品SM与其他样品的遗传距离最远.该调查结果显示四川地区鸡场的ALV-J感染比较普遍,其gp85基因存在明显的遗传多样性,引种是导致这种遗传多样性的重要原因.

J亚型禽白血病研究进展

J亚型禽白血病(AL-J)是由外源性J亚型禽白血病病毒(ALV-J)引起的致瘤性和免疫抑制性传染病。该病既可水平传播又可垂直传播,在中国鸡群中污染极为普遍且日趋复杂化,严重危害养鸡业的健康发展。由于该病迄今尚无疫苗和有效治疗药物,目前所采取的主要防控措施是对种鸡群净化。作者就其病原学、流行病学、诊断与防控等方面的研究近况进行了综述。

山东省烟台地区J亚型禽白血病与禽网状内皮组织增生症血清流行病学调查

为了解山东省烟台地区J亚型禽白血病与网状内皮组织增生症的流行情况,于2019年9~10月,采用酶联免疫吸附试验对来自烟台地区8个农业县的16个种鸡场、20个商品代场和16个散养鸡群共940份血清样本进行检测分析。结果显示:有5个农业县检测到J亚型禽白血病,抗体阳性率为2.9%;8个农业县全部检测出禽网状内皮组织增生症,抗体阳性率为43.9%,双抗体阳性率为2.7%。此次调查为烟台地区禽白血病的净化及禽网状内皮组织增生症的防控提供了数据支撑。

J亚型禽白血病病毒病原学及诊断方法研究进展

禽白血病是由反转录病毒科禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)引起的一种禽类多种肿瘤性疾病的统称。本群病毒有多个分型,J亚型(ALV～J)是其中一种,主要引起骨髓细胞性白血病(Myeloid Leucosis ML)。主要阐述了J亚型禽白血病病毒的病原学以及诊断方法的研究进展。

J亚型禽白血病病毒水平传播的试验

为探讨J亚型禽白血病病毒(ALV-J)的水平传播情况,选取0日龄60只抗原阴性鸡和20只抗原阳性鸡混合饲养,接触7 d、15 d、25 d、35 d、45 d、55 d、65 d、75 d、90 d后检测阴性鸡的泄殖腔ALV-p27和血清ALV-J抗体,并于65 d采集阴性鸡血浆接种DF-1细胞进行外源性ALV和J亚群分离鉴定。结果显示,阴性鸡与阳性鸡混合饲养15 d,泄殖腔中开始检测到ALV-p27抗原,65 d阳性率最高达50.00%;ELISA和RT-PCR方法检测到细胞培养液中外源性ALV阳性率分别为60.00%和56.67%;RT-PCR和IFA方法检测到细胞培养液中ALV-J抗原阳性率分别为56.67%和63.33%;65 d阴性鸡血清中ALV-J抗体阳性率达63.33%。表明阴性鸡与阳性鸡直接接触混合饲养,通过水平传播被感染外源性ALV-J的几率相当高。

差异极大的不同准种隐藏于同一J亚型禽白血病病毒野毒株中

2012年山东省某地方品系鸡发生疑似血管瘤的肿瘤病例,对发病鸡群随机抽取9只鸡分别接种鸡胚成纤维细胞和DF-1细胞进行病毒分离鉴定,结果显示,在鸡的3种常见肿瘤病毒中仅分离到9株J亚型禽白血病病毒（ALV-J）,定名为LY1201-LY1209.选取LY1201株扩增同时包含有gp85和gp37的env基因,扩增产物连接T载体后转化大肠杆菌,对鉴定后的9个阳性克隆子进行测序和序列分析.结果显示,9个克隆子其相对保守的gp37氨基酸同源性为98.5%~100.0%,而其gp85序列之间氨基酸同源性仅为96.6%~100.0%;其中2个克隆子与其他7个克隆子相比在gp85的210#~219#缺失了10个氨基酸,这表明在LY1201存在着差异极大的不同ALV准种,并且变异较大的gp85基因比gp37基因能更好地显示ALV-J准种的多样性;在9个克隆子中3个克隆子gp85和gp37氨基酸同源性均为100.0%,表明这3个准种为同一准种,代表了在该分离株中占优势的准种.本研究利用单一基因证明了禽反转录病毒的准种多样性,并在单一病毒株中发现了差异极大的不同准种,特别是发现了一个具有明显缺失的ALV-J准种.

蛋鸡J亚群禽白血病病毒gp85基因遗传进化分析

为了解福建省蛋鸡J亚型禽白血病病毒（ALV‐J）的遗传进化关系，对来自福建省蛋鸡场发病蛋鸡中分离鉴定的3株ALV‐J的 gp85基因进行克隆与测序，并与国内外18株ALV‐J参考株的基因序列进行分析。结果表明：3株蛋鸡分离株的 gp85基因与亚群2的国内蛋鸡分离株（CL09DP02、GL09DP01和 HuB09JY03）以及原型株HPRS‐103的亲缘关系较近，达97.8％～99.6％，表明福建省蛋鸡 ALV‐J株很可能与国内部分蛋鸡ALV‐J分离株有着共同的来源。

地方品种HR土鸡不同亚型禽白血病病毒的共感染

为研究HR土鸡中存在的不同亚型禽白血病病毒(ALV)共感染的情况,本实验分别采集46只HR土公鸡的泄殖腔棉拭子和455枚鸡蛋卵白样品,采用ELISA试剂盒检测p27抗原;并采用相应的ELISA试剂盒分别检测卵黄中J亚型ALV(ALV-J)和AB亚型ALV(ALV-AB)抗体。结果表明:HR土公鸡泄殖腔棉拭子样品中p27检出阳性率为87%(40/46),卵白检出率为74.7%(340/455);而卵黄中ALV-J和ALV-AB抗体阳性率分别为0(0/30)和80%(24/30)。无菌采集初步筛选p27抗原检测为阳性的5只HR土公鸡的抗凝血接种CEF,采用抗ALV-J和ALV-A的单克隆抗体进行IFA检测,结果显示5份样品中ALV-A和ALV-J的阳性率均为100%(5/5)。同时选取HR土鸡分离株HR332进行PCR扩增鉴定,结果表明分离株HR332存在ALV-J(HR332J)和ALV-A(HR332A)。其中,HR332J与11株ALV-J国内外参考株的同源性为92.4%～97.9%;HR332A与ALV-A参考株RSA-A、MQNCSU的同源性分别为90.1%和89.7%,与国内分离株SDAU09E2的同源性为99.0%。本研究显示,地方品种HR土鸡存在不同亚型ALV共感染,同时ALV-A和ALV-J共感染同一个鸡的现象已经存在。

某海兰褐鸡场祖代、父母代及商品代鸡血管瘤型ALV-J的分离与鉴定

从山东省某海兰褐鸡场祖代、父母代种鸡和商品代蛋鸡中获得疑似血管瘤型禽白血病(Avian leukosis,AL)病料。采用病理剖检、IFA、分子生物学检测,确定为J亚群禽白血病。从祖代、父母代病料中各分离到1株J亚群禽白血病病毒(J subgroup of avian leukosis virus,ALV-J),从商品代蛋鸡中分离到4株ALV-J。根据原型毒株HPRS103设计1对gp85基因引物,获得gp85基因序列。获得的gp85基因序列与各亚群参考毒株序列核苷酸同源性比对,结果显示:分离自商品代蛋鸡的Commercial03株、Commercial04株、Commercial06株和父母代分离株Parent02株位于同一分支,同源性在97.2%～97.9%,与HPRS103株同源性94.7%～95.2%;Commercial05株与祖代分离株Grandparent01株在同一分支,与HPRS103株同源性为98.3%,4株分离自商品代的ALV-J同源性为95.0%～99.9%。表明商品代蛋鸡中的ALV-J可能来自父母代或祖代种鸡的垂直传播,也可能来自于其他来源的水平传播。从同一鸡场祖代、父母代及商品代鸡中分离得到ALV-J,这在我国还是首次。对后续研究其基因突变、致瘤机制等奠定了良好的基础。

致鸡急性肉瘤组织细胞提取液的泛嗜性研究

为研究致鸡急性肉瘤组织细胞提取液的泛嗜性,本研究采取发生急性肉瘤的山东某地饲养的36日龄817肉杂鸡肉瘤组织细胞提取液接种CEF进行细胞培养,同时人工感染1日龄817肉杂鸡、海兰褐蛋鸡与白羽肉鸡、白来航系SPF鸡等4个品系鸡,结果均复制出同样肉瘤。将复制出的新鲜肉瘤分别制备肉瘤细胞、组织切片与培养12 d的细胞同时采用IFA试验进行病毒鉴定,结果从肉瘤组织中分离到A亚型禽白血病病毒(ALV-A)、J亚型禽白血病病毒(ALV-J)与禽网状内皮增生病病毒(REV)。对1日龄817肉杂鸡进行的致瘤性与接种部位的嗜性研究结果表明肉瘤形成与接种部分密切相关。对不同日龄817肉杂鸡致瘤性结果显示肉瘤发生率对感染日龄有较强的依赖性。本研究表明来自817肉杂鸡的肉瘤组织细胞提取液中存在ALV-A、ALV-J以及REV共感染,具有急性、高致瘤性、泛嗜性等特点,在不同品系、不同日龄鸡均可诱发急性肉瘤。但急性肉瘤由不同病毒诱发还是与多种病毒共感染相关还有待于进一步研究。

GZAS20200701分离毒株gp85基因克隆与序列分析

为了解贵州高脚鸡源的禽白血病病毒的gp85基因变异情况,试验采用ALV p27抗原ELISA试剂盒对贵州省高脚鸡的26份血样进行检测;并采用RT-PCR方法对其中一份血样进行ALV-A/B/J亚型鉴定,然后用gp85基因引物进行RTPCR扩增、克隆及测序分析。结果表明,26份高脚鸡血样ALV p27抗原ELISA检测阳性率为0(0/26);ALV-A/B/J引物RT-PCR扩增的条带为422 bp,与ALV-J目的大小相符;以ALV-J阳性样品为模板,用ALV-J-gp85引物扩增出大小为931 bp左右的产物,命名为GZAS20200701。经克隆测序后与ALV参考株进行比对分析,同源性分析中GZAS20200701与ALV-J亚型中的LYJ195株同源性最高,达99.5%,与ALV-B亚型中的GD08株同源性最低,为48.5%,与A、B、C、D、E、K亚型的同源性为48.5%~50.8%。系统进化树中GZAS20200701与ALV-J中的LYJ15株属于同一个分支,亲缘关系最近,说明GZAS20200701属于ALV-J。试验为贵州高脚鸡ALV-J-gp85基因的遗传变异情况提供数据,丰富了贵州地方品种鸡ALV-J-gp85的资料。