问号钩端螺旋体诱导的Vero和J774A.1细胞的凋亡和超微结构病变

目的 :探讨不同毒力的钩体黏附和侵入宿主细胞能力及其病理变化。方法 :建立 Fontana镀银染色法用于观察问号钩体黄疸出血群赖型 5 6 6 0 1株、波摩那群波摩那型 5 6 6 0 8株和双曲钩体三堡隆群 patoc型 Patoc 株黏附 Vero和 J774 A.1细胞的能力 ;采用电镜技术观察感染细胞的超微结构病变 ;采用 FITC- Annexin V/PI荧光标记流式细胞术 ,检测紫外线灭活前后的上述钩体菌株诱导 Vero和 J774 A.1细胞凋亡或坏死的情况。结果 :问号钩体 5 6 6 0 1和 5 6 6 0 8株对 Vero细胞的黏附率分别为 2 4 .2 %和 2 2 .9% (P>0 .0 5 ) ;对 J774 A.1细胞的黏附率分别为4 9.0 %和 4 6 .9% (P>0 .0 5 ) ;双曲钩体 Patoc 株不能黏附细胞。两株问号钩体侵入细胞后形成含有钩体的特殊吞噬泡 ,并引起相似的细胞超微结构病变 ,如细胞核染色质浓缩或溶解、细胞空泡变性、线粒体肿胀及线粒体嵴消失、内质网肿胀和膜旁核糖体消失等。灭活前的 5 6 6 0 1和 5 6 6 0 8株引起的 Vero细胞凋亡率分别为 84 .4 %和 82 .8% ,灭活后则分别为 77.9%和 86 .1%。灭活前后的 5 6 6 0 1株均以诱导 Vero细胞晚期凋亡为主 ,其凋亡率分别 6 8.0 %和5 2 .9%。灭活前后的 5 6 6 0 8株均以诱导 Vero细胞早期凋亡为主 ,其凋亡率分别为 6 4.1%和 5 0 .1%

问号钩端螺旋体诱导J774A．1细胞FasL／Fas表达上调及FasL／Fas相关细胞凋亡的研究

目的:了解FasL/Fas途径参与问号钩端螺旋体(简称钩体)诱导细胞凋亡及其FasL/Fas表达水平变化。方法:建立问号钩体黄疸出血群赖型56601株感染小鼠单核-巨噬细胞J774A.1模型。采用DAPI染色法观察问号钩体56601株感染细胞凋亡的形态学特征,流式细胞术定量检测感染细胞的凋亡率及FasL中和抗体对细胞凋亡的阻断作用。PE标记抗小鼠FasL或Fas单克隆抗体染色法,观察问号钩体56601株感染细胞FasL/Fas表达情况。采用流式细胞术定量检测感染细胞的FasL/Fas表达水平。结果:问号钩体56601株感染J774A.1细胞4h时,部分细胞出现染色质浓缩及边缘化现象;感染24h时上述病变现象更加明显且有部分细胞核裂解。问号钩体56601株感染J774A.1细胞4h和24h的凋亡率分别为53.6%和64.31%。FasL中和抗体预处理细胞后,问号钩体56601株感染细胞4h或24h的凋亡率分别为10.27%和15.90%。J774A.1细胞被问号钩体56601株感染后4和24h,FasL表达率分别从感染前的4.19%上升至21.69%和65.70%,Fas表达率分别从感染前的12.88%上升至91.96%和88.01%。结论:诱导细胞凋亡是问号钩体56601株损伤J774A.1细胞的重要机制。问号钩体可上调靶细胞FasL/Fas表达水平,并通过FasL/Fas途径诱导J774A.1细胞凋亡。

低剂量X射线照射对J774A.1细胞IL-12和p38MAPK表达的影响

通过检测低剂量辐射 (LDR)对J774A .1细胞株中白细胞介素 12 (IL - 12 )及 p38丝裂原活化蛋白激酶 (p38MAPK)的影响 ,以研究LDR辐射免疫效应的机制。分别采用流式细胞术和ELISA检测了p38MAPK、IL - 12蛋白水平的变化。结果表明 ,75mGyX射线照射后 ,J774A .1细胞分泌IL - 12量在照射后 2、4、8h升高 (p <0 .0 5 ) ,随后即开始下降至恢复假照射水平 ;而 p38MAPK也于照射后 2h出现升高 ,两者在发生时间上呈现一致性。结果显示LDR引起IL - 12表达增加 ,而p38MAPK传导通路可能在其中发挥作用 ,为低剂量辐射增强细胞免疫功能提供了实验依据。

左归降糖舒心方含药血浆调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路抑制ox-LDL诱导J774A.1巨噬细胞焦亡的机制

目的基于NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/Gasdermin D(GSDMD)通路探讨左归降糖舒心方含药血浆对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导J774A.1巨噬细胞焦亡的调控机制。方法将分化完全的J774A.1巨噬细胞分为空白血浆组、模型组、左归降糖舒心方含药血浆组、MCC950(NLRP3特异性抑制剂)组,每组6个复孔。除空白血浆组外,其余各组以100 mg·L^(-1)ox-LDL诱导细胞,构建细胞焦亡模型。空白血浆组、模型组、MCC950(50μmol·L^(-1))组以含10%空白血浆进行培养,左归降糖舒心方含药血浆组用10%含药血浆培养细胞24 h。采用CCK-8法测定各组细胞增殖情况,计算细胞增殖抑制率;采用LDH释放实验检测细胞膜完整性及细胞焦亡水平;采用ELISA法及免疫荧光法检测细胞白细胞介素(IL)1β、IL-18含量及蛋白表达情况;采用Western Blot法检测NLRP3、Caspase-1及GSDMD蛋白表达。结果与空白血浆组比较,模型组细胞的IL-18、IL-1β含量及LDH释放率明显增高(P<0.01),IL-1β、IL-18及NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达明显上调(P<0.01)。与模型组比较,左归降糖舒心方含药血浆组细胞的IL-18、IL-1β含量及LDH释放率明显下降(P<0.01),IL-1β、IL-18及NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达明显下调(P<0.01)。结论左归降糖舒心方含药血浆能够抑制ox-LDL诱导的J774A.1巨噬细胞焦亡状态及炎性反应,其作用机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路,下调细胞炎性因子IL-18、IL-1β表达有关。

脂肪间充质干细胞对J774.1细胞的免疫调控

背景:近期研究发现脂肪间充质干细胞针对T细胞、B细胞和树突状细胞均有抑制免疫反应的能力,但对于其是否可以对巨噬细胞起到相应的免疫调控能力还不清楚。目的:观察脂肪间充质干细胞与J774.1细胞共培养后白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的表达。方法:将脂肪间充质干细胞按照2×107/孔分别接种于transwell的上层小室和24孔板中,再利用含1 mg/L脂多糖的培养液重悬J774.1细胞,将J774.1细胞接种到含脂肪间充质干细胞的transwell下层小室和24孔板中,同时设立未激活J774.1细胞阴性对照组和脂多糖激活J774.1阳性对照组。培养48 h收集细胞样,提取RNA样本,荧光定量PCR法检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA水平。结果与结论:相对于单纯脂多糖激活的阳性对照组J774.1细胞,脂肪间充质干细胞与J774.1细胞的接触型混合培养可以明显降低J774.1细胞的白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的表达量,而非接触共培养组中,只有白细胞介素6 mRNA水平发生了明显的降低。以上结果表明脂肪间充质干细胞具有抑制脂多糖激活J774.1细胞的免疫反应的能力。

巨噬细胞J774A.1外泌体促进结直肠癌细胞系MC38和CT26的增殖和迁移

目的探讨巨噬细胞J774A.1分泌的外泌体对小鼠结直肠癌细胞系MC38和CT26增殖和迁移的影响及作用机制。方法应用流式细胞术对J774A.1细胞进行表型鉴定;应用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析(NTA)和Western blot分别检测J774A.1细胞外泌体的形态特征、大小和表面标志物;荧光显微镜下观察MC38和CT26细胞对外泌体的摄取情况;应用CCK8法检测外泌体对MC38和CT26细胞增殖作用的影响;细胞划痕实验检测MC38和CT26细胞的迁移能力;Western blot检测增殖相关通路的磷酸化蛋白p-MEK1/2和p-ERK1/2的表达变化。结果J774A.1细胞为表达细胞表面标志分子CD68和CD206的M2型巨噬细胞。J774A.1细胞的外泌体均能被结直肠癌细胞MC38和CT26摄取,而且能够促进它们增殖(P<0.05)、迁移及MEK-ERK信号通路激活。结论巨噬细胞J774A.1的外泌体能够促进结直肠癌细胞系MC38和CT26的增殖及迁移,这可能与MEK-ERK信号通路的磷酸化增加有关。

人MUC-1全长cDNA基因真核表达载体构建及在COS-7细胞中的表达

目的 构建含人 MUC- 1全长 c DNA序列的真核表达载体 ,并观察其在 COS- 7细胞中的表达 .方法 将目的基因 MUC- 1克隆入 p GEM- 3zf(- )载体中并进行酶切鉴定和DNA序列测定 .亚克隆入真核质粒 pc DNA3.1(+) ,构建真核表达载体 pc DNA3.1(+) - MU C- 1.用电穿孔法将重组质粒转入 COS- 7细胞 ,以免疫荧光和流式细胞仪检测 MUC- 1的表达 .结果 酶切鉴定和序列分析证实 ,重组质粒含有人MU C- 1全长 c DNA编码序列 ,转染实验表明 MU C- 1基因能在 COS- 7细胞中表达 .结论 人 MU C- 1全长 c DNA基因真核表达载体构建及其在 COS- 7中的表达均获成功 。

弓形虫和乙型肝炎病毒混合核酸疫苗的研究Ⅱ.pcDNA3-HBsAg-GRA1在COS-7细胞中的表达及鉴定

目的 鉴定pcDNA3 HBsAg GRA1在哺乳动物细胞内是否表达目的蛋白。 方法 提取pcDNA3 HBsAg GRA1质粒 ;体外培养COS 7细胞 ;pcDNA3 HBsAg GRA1经脂质体转染体外培养的COS 7细胞 ;取转染后的细胞培养上清进行SDS PAGE ,Western blot鉴定。结果 成功将pcDNA3 HBsAg GRA1转染入COS 7细胞。转染的细胞能高效表达分子为 4 7kD分泌性融合蛋白 (HBsAg GRA1)。HBsAg GRA1能同时被HBsAb阳性人血清及弓形虫免疫兔血清所识别。 结论 pcDNA3 HB sAg GRA1在体外培养的COS 7细胞中高效表达与预期分子量大小相同 ,且具有免疫学活性的融合蛋白。

pNEgr-mIL-12真核表达重组质粒的构建及在COS-7细胞和黑色素瘤B16细胞中的表达

目的 :构建含辐射敏感启动子的 p NEgr- m IL- 1 2真核表达载体 ,转染哺乳动物细胞后经不同剂量 X射线照射 ,检测 m IL- 1 2的表达。方法 :限制性内切酶酶切构建 p NEgr- m IL- 1 2表达载体 ;脂质体转染法转染 COS- 7细胞和 B1 6细胞 ;ELISA法检测 m IL- 1 2 p70表达。结果 :1 p NEgr-m IL- 1 2重组质粒转染瞬时表达细胞 COS- 7细胞 ,经不同剂量 X射线照射后 ,照射组 m IL- 1 2表达量比未照射组明显增高 ( P<0 .0 5 ,P<0 .0 0 1 ) ,约为未照组的 1 .5～ 2 .5倍 ;在 2 .0 Gy照后表达增高最为明显 ,表达于照后 4h达峰值 ,在观察的 72 h内保持于较高水平 ;2转染 p NEgr- m IL- 1 2的B1 6细胞于 2 .0 Gy照后增高明显 ,为未照射组的 1 .5倍 ;并且经 2 .0 Gy X射线照射后随时间延长表达水平逐渐增高 ;低至 0 .0 5 Gy的剂量对两种细胞亦均有激活作用。结论 :p NEgr- m IL- 1 2重组质粒具有辐射激活下游基因表达的功能 ,且经不同剂量 X射线照射后表达均有增强 ,尤以 2 .0 Gy照射组作用明显 ,但在低剂量 5 0、75、1 0 0 m

Ang 1-7对雨蛙素刺激的胰腺腺泡AR42J细胞p38 MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的探讨血管紧张素1-7(Ang 1-7)干预雨蛙素(caerulein,CAE)刺激的胰腺腺泡细胞AR42J后,p38MAPK/NF-κB信号蛋白的表达变化。方法将AR42J细胞随机分为3组:对照组、雨蛙素组(10 nmol/L,CAE组)、Ang1-7组(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L Ang 1-7+10 nmol/L雨蛙素)。对照组为正常生长的AR42J细胞,CAE组用10 nmol/L的雨蛙素刺激AR42J于2 h、6 h、12 h、24 h及48 h收集细胞,Ang 1-7组为不同浓度Ang 1-7作用30 min后再用雨蛙素刺激24 h收集细胞,Western blot技术检测各组细胞中ACE2、Mas受体、p38 MAPK、p-p38 MAPK及NF-κB的蛋白表达。结果 AR42J细胞中可见ACE2-Ang 1-7-Mas受体轴表达;与对照组相比,CAE组ACE2和Mas受体的表达呈先增多后减少的趋势,均于24 h达高峰(P<0.05);p38 MAPK、p-p38 MAPK及NF-κB的表达亦是24 h达峰值(P<0.05);Ang 1-7(10-7mol/L、10-6mol/L及10-5mol/L)上调Mas受体的表达,下调p38 MAPK、p-p38MAPK、NF-κB蛋白的表达,Ang 1-7的浓度为10-5mol/L时,后三者的表达水平与CAE组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论雨蛙素刺激的AR42J细胞中,Ang 1-7可通过Mas受体抑制p38MAPK/NF-κB信号通路的活性。

人α_1抗胰蛋白酶基因的克隆及在COS-7细胞中的表达

目的 克隆人α1 抗胰蛋白酶 (α1 -AT)基因并在真核细胞中表达。方法 以人α1 抗胰蛋白酶(α1 -AT)基因的总RNA为模板,采用反转录PCR法得到α1 -AT的编码区cDNA,构建真核表达载体pcD NA3. 1( +) -α1 -AT,在脂质体介导下转染非洲绿猴肾细胞系COS-7,经G418压力筛选建立稳定转染人α1 -AT的细胞系,用Western印迹检测其在COS-7细胞中的表达。结果 获得的人α1 -ATcDNA序列与文献报道的核苷酸序列一致,Western印迹证实稳定转染人α1 -AT的COS-7细胞系中有α1 -AT的表达。结论 构建了人α1 抗胰蛋白酶的真核表达载体,并在COS-7细胞中获得稳定表达。

hIFN-λ1(hIL-29)基因及在COS-7细胞中瞬时表达和抗病毒效应

目的:克隆hIFN-λ1基因,构建pcDNA3.1A-IFN-λ1表达质粒,并在真核细胞中获得表达,以进一步研究rhIFN-λ1的生物学特性。方法:采用RT-PCR法从病毒诱导的A549细胞mRNA中克隆hIFN-λ1基因,并重组于pcDNA3.1A真核表达载体上。结果:经双酶切和PCR鉴定及DNA序列分析,发现所克隆的基因与GenBank公布的序列一致,并在COS-7细胞中获得了有效瞬时表达。结论:成功克隆了hIFN-λ1基因,并成功地获得了瞬时表达,其rhIFN-λ1表达产物具有抗病毒活性。

内皮素1串联体的构建及其在COS-7细胞中的表达鉴定

目的:克隆、表达内皮素1(endothlin1,ET1)串联体,提高ET1的免疫原性及其免疫机体后产生抗体的效价.方法:通过pGEX-4T-1载体对ET1的基因进行了串联,并在ET1串联基因下游引入GM-CSF基因,酶切鉴定及序列分析构建重组质粒;再将含有ET1串体与GM-CSF的融合基因连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,同样经过酶切鉴定及序列测定证实;并对构建表达载体转染COS-7细胞,应用间接免疫荧光法及ELISA检测表明目的基因在COS-7细胞中的表达情况.结果:正确构建了ET1重复序列4串体基因与GM-CSF基因重组的克隆载体pGEX-ET1④-GM-CSF以及真核共表达质粒pcDNA3.1-ET1④-GM-CSF;间接免疫荧光法及ELISA检测表明目的基因ET1和GM-CSF在COS-7细胞中都得到了表达.结论:内皮素1串联体的构建及其在COS-7细胞中的成功表达将对ET1的免疫学特性、核酸疫苗的研制以及相关自身疾病免疫治疗的进一步研究奠定基础.

大鼠促甲状腺激素释放激素受体1基因的克隆及其在COS-7细胞系中的表达

目的:克隆大鼠促甲状腺激素释放激素受体1(TRH-R1)基因,构建其真核表达载体,并检测该基因在非洲绿猴肾细胞系COS-7中的表达。方法:应用RT-PCR方法,以大鼠脑源RNA为模板,扩增获得TRH-R1基因,定向克隆到pDsRed2-N1中,以LipofectAMINE 2000试剂转染pDsRed2-N1-TRH-R1表达载体至COS-7细胞系中进行瞬时表达。结果:测序结果表明,从大鼠脑源总RNA中克隆到正确的TRH-R1基因全长编码序列;显微照相观察到所构建的TRH-R1表达载体质粒在COS-7细胞系中获得有效表达。结论:大鼠TRH-R1基因的克隆、真核表达载体的构建及在COS-7细胞系中表达获得成功,为进一步研究其功能奠定了基础。

二仙丸加减方含药血清抑制巨噬细胞焦亡的物质基础和作用机制

背景:课题组前期研究发现二仙丸加减方可以缓解胶原诱导性关节炎大鼠炎症反应,但其作用机制尚需进一步验证。目的:分析二仙丸加减方入血成分,观察二仙丸加减方含药血清对J774A.1巨噬细胞焦亡的影响。方法:①二仙丸加减方入血成分分析:采用超高效液相色谱-高分辨质谱(UHPLC-HRMS)对二仙丸加减方及入血成分进行检测和鉴定。②二仙丸加减方含药血清对J774A.1巨噬细胞焦亡的影响:采用分子对接技术对二仙丸加减方入血成分倍半萜类化合物与NLRP3进行初步验证。将J774A.1巨噬细胞随机分为空白对照组、脂多糖+三磷酸腺苷组及脂多糖+三磷酸腺苷+二仙丸加减方含药血清低(2.5%)、中(5%)、高(10%)剂量组。根据试剂盒说明书检测各组细胞上清液中乳酸脱氢酶释放情况;ELISA检测各组细胞上清液中白细胞介素1β、白细胞介素18水平;Hoechst/PI染色法检测各组细胞膜受损情况;Western blot检测各组细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD及GSDMD-N蛋白表达水平。结果与结论:①共鉴定出二仙丸加减方药效成分32个,入血成分21个,其中入血成分主要包括多种倍半萜类化合物;②分子对接结果显示3-O-Acetyl-13-deoxyphomenone、Incensol oxide、Atractylenolide Ⅲ、Rupestonic acid、3,7-Dihydroxy-9,11-eremophiladien-8-one与NLRP3之间结合活性较好;③与空白对照组相比,脂多糖+三磷酸腺苷组细胞上清中乳酸脱氢酶活性及白细胞介素1β、白细胞介素18水平均显著升高(P<0.001),Hoechst/PI染色可见PI阳性细胞数量显著增加。脂多糖+三磷酸腺苷+二仙丸加减方含药血清各组上述指标均显示不同程度降低;④与空白对照组相比,脂多糖+三磷酸腺苷组NLRP3、Caspase-1、GSDMD及GSDMD-N蛋白表达显著升高(P<0.05);与脂多糖+三磷酸腺苷组相比,脂多糖+三磷酸腺苷+二仙丸加减方含药血清各组细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD及GSDMD-N蛋白表达均有不同程度降低(P<0.05),且具有一定的剂量依赖性。结果表明:二仙丸加减方含药血清可能通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路抑制J774A.1巨噬细胞焦亡。

人补体C_1－抑制物基因在COS－7细胞中的表达

利用全长人Ｃ１－ＩＮＨｃＤＮＡ片段构建成功可在ＣＯＳ－７细胞中瞬间表达重组人Ｃ１－ＩＮＨ的表达质粒ｐＳＶＬＣ１。通过ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ－７细胞，经体外标记、免疫沉淀和Ｗｅｂｔｅｒｎ印迹后发现，转染细胞可分泌─条分子量约１１０ｋＤ的免疫活性蛋白带。ＥＬＩＳＡ测定其表达水平，在转染后７２ｈ可达２μ／（ｍｌ·１０７细胞）。功能活性测定表明重组Ｃ１－ＩＮＨ具有抑制Ｃ１ｓ酯裂解的作用。

A549细胞对单硬脂酸甘油酯固体脂质纳米粒的摄取作用

目的 考察单硬脂酸甘油酯固体脂质纳米粒 (monostearinsolidlipidnanoparticles ,MSLN)经PEG2 0 0 0修饰后 ,对A5 4 9细胞摄取MSLN及J774A1细胞吞噬MSLN的影响。方法 采用溶剂扩散法制备MSLN ,测定其粒径和zeta电位 ;以罗丹明B(RhodamineB)为荧光标记物 ,研究A5 4 9细胞对MSLN的摄取作用和J774A1细胞对MSLN的吞噬作用。结果 MSLN的细胞毒性较低 ,A5 4 9细胞对MSLN的摄取可快速接近饱和 ,其摄取百分率与MSLN在细胞外的浓度呈负相关。结论 MSLN经PEG2 0 0 0修饰 ,可显著抑制J774A1细胞对MSLN的吞噬 ,但可增加A5 4 9细胞对MSLN的摄取。

不同剂量X射线照射对小鼠巨噬细胞表达CD80和CD86的影响

采用免疫组织化学法观察了X射线全身照射对小鼠腹腔巨噬细胞及体外照射对培养的小鼠巨噬细胞株J774A .1细胞表达CD80和CD86的影响。结果表明 ;全身照射和体外照射时 2GyX射线诱导CD80表达增高均较 0 .0 75Gy为早 ,而CD86对两种剂量的反应无明显区别。剂量效应关系的研究表明 ,CD80和CD86的表达无论全身照射或体外照射时均在 0 .0 75Gy剂量点出现峰值 ,而在较大剂量照射时出现第二个峰值的剂量则全身照射高于体外照射。实验结果显示 。

问号钩端螺旋体磷脂酶C的活性及其内化时细胞内游离Ca^(2+)水平的变化

目的 :了解不同毒力的钩端螺旋体 (简称钩体 )对细胞内游离 Ca2 + 水平的影响及其磷脂酶 C(PL C)活性与细胞内游离 Ca2 + 水平的关系。方法 :建立问号钩体 Vero和 J774 A.1细胞感染模型。采用 fluo- 3/ AM胞内 Ca2 +特异荧光标记激光共聚焦技术 ,检测强毒力的问号钩体黄疸出血群赖型 5 6 6 0 1株和弱毒力的波摩那群波摩那型5 6 6 0 8株及无毒力的双曲钩体 Patoc 株作用的 Vero和 J774 A.1细胞胞内游离 Ca2 +水平。以 [3 H]PIP2 为底物 ,采用同位素法检测上述 3株钩体培养物上清、胞浆和胞膜中 PLC的活性。结果 :正常 Vero和 J774 A.1细胞胞内游离Ca2 + 基础值分别为 (10 2 .3± 8.2 ) %和 (10 5 .9± 7.3) % ,在观察时间内 Patoc 株钩体作用细胞的荧光强度变化百分数一直波动于 (10 2 .3± 8.2 ) %～ (10 2 .2± 8.3) %。问号钩体 5 6 6 0 1株感染的 Vero和 J774 A.1细胞胞内游离Ca2 +浓度呈双峰型增高 ,第一峰荧光强度变化百分数分别为 (430 .5± 35 .7) %和 (74 7.5± 18.5 ) % ,第二峰荧光强度变化百分数分别为 (380 .6± 17.4 ) %和 (80 4 .6± 2 2 .4 ) %。问号钩体 5 6 6 0 8株感染 Vero和 J774 A.1细胞 ,其胞内游离 Ca2 +浓度均呈缓慢的单一坡型升高 ,其最大荧光强度变化百分数分别为 (2 35 .

辐射对EL-4、J774A.1细胞CD2、CD48表达的影响

目的 通过时程及量效研究观察不同剂量X射线照射对EL 4和J774A 1细胞株中表面分子CD2、CD4 8的影响。方法 采用荧光免疫流式细胞术检测蛋白表达的变化。结果 (1)EL 4细胞CD2分子表达结果显示 ,0 0 75GyX射线照射后CD2合成在照射后 4h即开始升高 ,至 8～ 16h达峰值 (P <0 0 5～ 0 0 1) ,2Gy照射后则从照射后 4h开始下降 ,至 8h达最低点 (P <0 0 1) ,一直持续较低至 4 8h恢复 ;8h量效结果显示 ,在低剂量区 0 0 5 0 ,0 0 75Gy使CD2表达上调 ,而高剂量范围中 1,2Gy使CD2表达下调。 (2 )J774A 1细胞CD4 8分子表达结果显示 ,0 0 75GyX射线照射后CD4 8合成在照射后 2h即开始升高 ,至 4h达峰值 (P <0 0 5 ) ,随后急剧下降 ,8h恢复至假照射水平 ,16～4 8h下降明显低于假照射水平 (P <0 0 5 ) ,2Gy照射后则从照射后 2h开始下降 ,至 8h达最低点(P <0 0 1) ,随后有所恢复 ,但直至 4 8h仍未能恢复至假照射水平。 4h量效结果显示 ,在低剂量区0 0 5 0 ,0 0 75 ,0 10 0Gy使CD4 8表达上调 ,而高剂量范围中 1～ 6Gy均使CD4 8表达下调 (P <0 0 5～0 0 1)。结论 X射线照射可引起CD2、CD4 8不同的辐射效应 ,两者的相互作用体现出低剂量辐射具有不同于高剂量辐射的兴奋效应。