丹参酮ⅡA对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的探讨丹参酮ⅡA在体外对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法以不同浓度的丹参酮ⅡA处理J82细胞,分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双标记流式检测法、Transwell侵袭实验及划痕实验检测J82细胞的增殖、凋亡、侵袭及迁移情况。结果丹参酮ⅡA可抑制J82细胞增殖,且呈浓度与时间依赖性(均P<0.05)。1、3、5μmol/L丹参酮ⅡA处理组总凋亡率分别为12.23%、14.74%、18.40%,均高于对照组的3.36%(P<0.05),且呈浓度依赖性(P<0.05)。对照组、1μmol/L组、3μmol/L组、5μmol/L组细胞侵袭数比较,差异有统计学意义(P<0.05),且呈浓度与时间依赖性(均P<0.05)。对照组、1μmol/L组、3μmol/L组、5μmol/L组划痕后12、24、36h划痕愈合率比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),呈浓度依赖性(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA在体外可抑制膀胱癌J82细胞增殖,促进其凋亡,降低其侵袭和迁移能力。

CYP2U1基因沉默对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响

目的观察细胞色素P4502U1(CYP2U1)基因沉默对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响。方法脂质体转染法转染至J82细胞,qRT-PCR、Western-blot检测CYP2U1、p53、caspase-3、Bcl-2的表达。MTT、划痕试验、流氏细胞技术分别检测各组细胞增殖、迁移、凋亡情况。结果 CYP2U1基因沉默后CYP2U1在人膀胱癌J82细胞中表达减少(P <0.05)。沉默CYP2U1基因可提高人膀胱癌J82细胞的增殖和迁移,抑制凋亡,促进Bcl-2的表达,抑制p53、caspase-3的表达(P <0.05)。结论 CYP2U1基因沉默能促进人膀胱癌J82细胞的增殖和迁移,抑制其凋亡,可能与下调p53、caspase-3、上调Bcl-2 mRNA及蛋白的表达有关。

丹参酮ⅡA对人膀胱癌J82细胞增殖与凋亡效应及作用机制

目的探讨丹参酮ⅡA对人膀胱癌J82细胞增殖与凋亡效应及作用机制。方法以不同浓度(1、2、3、5、8μmol/L)的丹参酮ⅡA处理J82细胞48 h,先后采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测法检测梯度剂量的丹参酮ⅡA对J82细胞半数抑制率(IC50)的测定及细胞增殖的影响,流式细胞术及Annex V/PI染色检测法用于检测丹参酮ⅡA对J82细胞凋亡及细胞周期的影响,免疫印迹法(Western-blotting)检测与细胞;周亡相关的蛋白cyclin Dl、Bel-xL、caspase3、caspase8、caspase9、P65表达的差异。结果丹参酮ⅡA能够抑制人膀耽癌J82细胞的活性,且具有浓度依赖性(P<0.05),半数抑制浓度(IC50)为4.16μmol/L。1、3μmol/L丹参酮ⅡA处理组的G1期细胞百分比分别为(47.98%±1.49%)、(54.94%±3.39%),均高于对照组(42.22%±0.48%)(均P<0.05),且3μmol/L组高于1 pmol/L组(P<0.05);3μmol/L组的S期细胞百分比(33.19%±4.17%)低于对照组(46.32%±2.14%)(P<0.05)。1、3、5μmol/L组的总凋亡率分别为11.23%、14.84%、18.42%,均高于对照组的3.26%(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05)。1、3 pmol/L组的caspase3蛋白相对表达量分别为(0.39±0.02)、(0.52±0.03),均高于对照组的0.26±0.02(P<0.05);caspase9蛋白相对表达量分别为(0.18±0.03)、(0.33±0.12),均高于对照组的0.02±0.02(P<0.05);3μmol/L组两种蛋白的表达量均高于1μmol/L组(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA在体外可抑制J82细胞增殖,G1/S期阻滞可能是其中的机制之一,同时可能通过线粒体途径诱导J82细胞凋亡。

隐丹参酮对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的探讨隐丹参酮在体外对人膀胱癌J82细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法以浓度为0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、8.0μmol/L的隐丹参酮处理J82细胞48 h后,采用CCK-8法检测其对J82细胞增殖的影响。Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测J82细胞凋亡情况。免疫印迹法(Western blotting)检测细胞增殖及凋亡相关蛋白p65、caspase 3、caspase 8、caspase 9表达的差异。结果CCK-8法结果显示各组的450 nm吸光度(A)值:对照组(1.77±0.06),0.5μmol/L组(1.78±0.08),1.0μmol/L组(1.64±0.05),2.0μmol/L组(1.48±0.12),3.0μmol/L组(1.20±0.07),4.0μmol/L组(0.93±0.10),5.0μmol/L组(0.76±0.02),8.0μmol/L组(0.05±0.01),各组的450 nm A值差异有统计学意义(F=329.83,P=0.00),除0.5μmol/L组外其余各两组间的差异均有统计学意义(均P<0.05)。流式细胞术检测结果显示三组的早期凋亡率和总凋亡率在总体上差异均有统计学意义(F=32.49,P=0.00;F=6.39,P=0.03);两个实验组的早期凋亡率均高于对照组(均P<0.05),且3.0μmol/L组比1.0μmol/L组更高[(11.83±1.12)%比(7.01±1.84)%,t=3.73,P<0.05]。Western blotting结果显示隐丹参酮处理后p65蛋白表达减少,caspase 3、caspase 9蛋白表达增加。结论隐丹参酮在体外可能通过抑制NF-κB信号转导通路来抑制人膀胱癌J82细胞增殖,并通过线粒体途径诱导其凋亡。

敲减免疫调节蛋白B7-H3基因对膀胱癌细胞恶性增殖、侵袭和干细胞样特性的影响

目的·探讨干扰免疫调节蛋白B7-H3基因对膀胱癌J82细胞的恶性增殖和干细胞样特性的影响。方法·shRNA干扰效率的检测采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)。J82细胞增殖采用克隆形成实验检测。细胞凋亡采用流式细胞术检测。细胞侵袭采用Transwell检测。肿瘤克隆能力采用肿瘤成球实验观察。细胞凋亡、侵袭和干细胞样相关蛋白表达采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测。结果·B7-H3在膀胱癌组织及膀胱癌细胞系中高表达(P=0.000)。确定shRNA2为设计的3组shRNAs中干扰B7-H3基因效率最高(P=0.000)。B7-H3干扰抑制了J82细胞的增殖、侵袭、肿瘤克隆能力及干细胞样特性(P=0.000)。并且,B7-H3干扰促进了J82细胞的凋亡(P=0.000)。结论·免疫调节蛋白B7-H3基因干扰可对膀胱癌J82细胞的恶性增殖、侵袭及干细胞样特性产生抑制作用。

澳洲茄碱通过mTOR信号通路抑制膀胱癌细胞增殖

目的研究澳洲茄碱对膀胱癌细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期的影响及其作用机制。方法0、5、10、20、40μmol/L澳洲茄碱处理膀胱癌J82和T24细胞24 h、48 h、72 h后,应用CCK-8检测细胞生存率。0、10、30μmol/L澳洲茄碱处理J82细胞24 h后,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。0、10、30μmol/L澳洲茄碱处理J82细胞24 h后,应用Western blot法检测mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白的表达。0、10、20、30μmol/L澳洲茄碱处理J82细胞24 h后,RT-qPCR法检测mTOR、p70S6K mRNA表达情况。结果澳洲茄碱显著抑制膀胱癌J82细胞、T24细胞增殖,相同作用时间、不同浓度组细胞生存率总体差异均有统计学意义(P<0.01)。澳洲茄碱诱导J82细胞凋亡,0、10、30μmol/L澳洲茄碱组凋亡率分别为(0.93±0.26)%、(8.33±2.16)%、(29.53±7.63)%。澳洲茄碱引起J82细胞发生S期阻滞,0、10、30μmol/L澳洲茄碱组S期细胞占比分别是(34.51±3.61)%、(39.34±3.21)%、(44.50±4.29)%。澳洲茄碱下调J82细胞p-mTOR蛋白表达(F=85.18,P<0.01)和p-p70S6K蛋白表达(F=74.96,P<0.01)。澳洲茄碱下调J82细胞mTOR mRNA表达(F=31.49,P<0.01)和p70S6K mRNA表达(F=47.08,P<0.01)。结论澳洲茄碱通过mTOR信号通路抑制膀胱癌细胞增殖、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期。

抑制miR-221表达对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 :探讨抑制微RNA(microRNA,miRNA,miR)-221表达对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 :将化学合成的miR-221抑制片段has-miR-221 inhibitor和miR-221抑制阴性无意义片段(阴性对照组)(has-miR-221inhibitor negative control)转染至膀胱癌T24和J82细胞中,转染5 h后,在荧光显微镜下观察转染效率;实时荧光定量PCR法检测转染48 h后,T24和J82细胞中miR-221的表达情况;MTT法检测转染24、48和72 h后,T24和J82细胞的增殖情况;RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染48 h后,T24和J82细胞中p53上调凋亡调控因子(p53 upregulated modulator of apoptosis,PUMA)、Bax和Bcl-2 mRNA及蛋白的表达;FCM法和吖啶橙(acridine orange,AO)-溴化乙锭(ethidium bromide,EB)染色检测转染48 h后,T24和J82细胞的凋亡情况。结果 :Has-miR-221 inhibitor转染至T24和J82细胞的效率分别为80%和90%。Has-miR-221 inhibitor转染后,T24和J82细胞中miR-221的表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(只加入转染试剂)(P<0.05);转染后T24和J82细胞的增殖抑制率高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),且呈时间依赖性;转染组PUMA和Bax mRNA及蛋白的表达水平明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),Bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);has-miR-221 inhibitor转染组T24和J82细胞的凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论 :抑制miR-221的表达可抑制膀胱癌细胞的增殖,并促进其凋亡。