miR-203a-5p靶向调控JAG1对多发性骨髓瘤细胞增殖、周期调控的作用及机制研究

目的:探讨miR-203a-5p在多发性骨髓瘤(MM)中的生物学功能及其调控机制。方法:采用稳健排序整合方法对GEO数据库中的3个miRNA表达谱(GSE16558、GSE24371和GSE17498,包含131个MM样本和17个正常浆细胞样本)进行差异性表达整合分析。用慢病毒构建了能稳定过表达miR-203a-5p的MM细胞株。采用qRT-PCR方法检测MM细胞株RPMI8226及U266中miR-203a-5p的表达情况,并检测miR-203a-5p表达上调后对MM细胞增殖及细胞周期表型的影响。应用稳定表达miR-203a-5p的U226细胞进行裸鼠成瘤实验,评价miR-203a-5p在体内肿瘤发生中的作用。利用Target Scan和miRanda等生物预测软件预测miR-203a-5p的候选靶基因,利用荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR和Western blot研究MM细胞中miR-203a-5p的潜在靶点。结果:miR-203a-5p在MM细胞系中的表达显著低于正常浆细胞。miR-203a-5p过表达可以抑制RPMI8226和U266细胞的增殖和细胞周期进展。动物体内实验表明,上调miR-203a-5p可以明显抑制体内肿瘤的生长。通过双荧光素酶报告基因实验证实了JAG1的3’UTR区域可以与miR-203a-5p结合,JAG1是miR-203a-5p的作用靶基因。此外,回复实验结果显示,过表达JAG1可以逆转由miR-203a-5p引起的细胞增殖抑制及周期阻滞。结论:miR-203a-5p通过靶向调控JAG1抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖和细胞周期进展,从而发挥抑癌作用,该分子有望作为一种基于miRNA的MM治疗靶点。

红景天苷调节miR-26a-5p/JAG1/Notch-1信号轴对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学功能的影响

目的探讨红景天苷(SAL)调节微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)/JAG1/神经源性基因Notch同源蛋白1(Notch-1)信号轴对瘢痕疙瘩(KD)成纤维细胞(HKF)生物学功能的影响。方法将HKF细胞随机分为对照组(Control组)、SAL低浓度组(SAL-L组,50μmol/L SAL)、SAL高浓度组(SAL-H组,100μmol/L SAL)、SAL高浓度+miR-NC组(SAL-H+miR-NC组)、SAL高浓度+miR-26a-5p mimics组(SAL-H+miR-26a-5p mimics组)、SAL高浓度+NC-inhibitor组(SAL-H+NC-inhibitor组)、SAL高浓度+miR-26a-5p inhibitor组(SAL-H+miR-26a-5p inhibitor组)。CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期;RT-qPCR检测各组细胞中的miR-26a-5p、JAG1和Notch-1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中JAG1和Notch-1蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-26a-5p与JAG1的关系。结果与Control组相比,SAL-H组HKF细胞增殖能力(24 h)、迁移距离、侵袭细胞个数、S期细胞比例、JAG1和Notch-1 mRNA和蛋白表达显著减少(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、miR-26a-5p表达显著增加(P<0.05);与SAL-H组和SAL-H+miR-NC组相比,SAL-H+miR-26a-5p mimics组相应指标变化与上述变化相同;miR-26a-5p inhibitor减弱了SAL-H对HKF细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用,减弱了HKF细胞凋亡。miR-26a-5p靶向负调控JAG1表达。结论SAL可能通过上调miR-26a-5p,靶向抑制JAG1/Notch-1信号轴抑制HKF细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,改善KD。

尖锐湿疣患者组织中miR-34a-5p、JAG1的表达与HPV分型及复发相关

目的探讨miR-34a-5p、JAG1与人乳头瘤病毒(HPV)分型及预后的关系。方法尖锐湿疣皮损来自于2019年3月—2022年3月本院治疗的101例尖锐湿疣患者(均为HPV阳性),根据治疗后6个月是否复发分为复发组和未复发组;对照组皮损来自于同期行包皮环切术或外阴整形术的患者(98例)。采用qRT-PCR法检测两组皮损组织中miR-34a-5p、JAG1 mRNA水平;采用HPV基因分型检测试剂盒对尖锐湿疣患者进行HPV分型检测;采用Pearson法分析尖锐湿疣患者皮损组织miR-34a-5p与JAG1 mRNA水平的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-34a-5p、JAG1 mRNA水平对尖锐湿疣患者复发的预测价值。结果尖锐湿疣组miR-34a-5p水平显著低于对照组,JAG1 mRNA水平显著高于对照组(P<0.05)。尖锐湿疣患者组织miR-34a-5p与JAG1 mRNA水平呈负相关(r=-0.67,P<0.05)。与疣体直径<10 mm患者相比,疣体直径≥10 mm的患者皮损组织中miR-34a-5p水平显著降低,JAG1 mRNA水平显著升高(P<0.05)。与高危型和低危型患者相比,混合型尖锐湿疣患者组织中miR-34a-5p水平显著降低,JAG1 mRNA水平显著升高(P<0.05)。复发组miR-34a-5p水平显著低于未复发组,而JAG1 mRNA水平显著高于未复发组(P<0.05)。miR-34a-5p、JAG1 mRNA水平及二者联合预测尖锐湿疣患者复发的AUC分别为0.767、0.821、0.891。结论尖锐湿疣患者皮损组织中miR-34a-5p低表达,JAG1 mRNA高表达。二者与HPV分型及复发均相关。

黄芩苷调节Notch/JAG1信号通路对舌癌细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨黄芩苷(Bai)调节Notch/JAG1信号通路对舌癌细胞恶性生物学行为的影响。方法:用0、10、20、30、40、50和100μM Bai处理人口腔上皮细胞HOEC。将人舌磷癌细胞CAL27分为CAL27组(未处理的CAL27细胞)、L-Bai组(10μM Bai处理CAL27细胞)、M-Bai组(20μM Bai处理CAL27细胞)、H-Bai组(40μM Bai处理CAL27细胞)、VPA组(8mM Notch/JAG1通路激活剂VPA处理CAL27细胞)、H-Bai+VPA组(40μM Bai和8mM VPA共同处理CAL27细胞);MTT法检测Bai对人口腔上皮细胞HOEC细胞毒性和CAL27细胞活力的影响;流式细胞术检测CAL27细胞凋亡;Transwell检测CAL27细胞侵袭、迁移能力;Western blot检测上皮-间充质转化(EMT)蛋白以及Notch/JAG1信号通路蛋白表达。结果:0~100μM Bai对HOEC细胞无明显毒性影响。与CAL27组相比,L-Bai组、M-Bai组、H-Bai组OD值、细胞迁移、侵袭数量、vimentin、Snail蛋白水平、Notch1、JAG1蛋白水平依次显著下降(P<0.05),凋亡率、E-cadherin蛋白水平依次显著升高(P<0.05),而VPA组以上指标趋势相反;与H-Bai组相比,H-Bai+VPA组OD值、细胞迁移、侵袭数量、vimentin、Snail蛋白水平、Notch1、JAG1蛋白水平显著增加(P<0.05),凋亡率、E-cadherin蛋白水平显著减少(P<0.05)。结论:Bai可能通过抑制Notch/JAG1信号通路对舌癌细胞增殖、凋亡和EMT产生影响。

JAG1影响单核-巨噬细胞重塑三阴性乳腺癌转移前微环境:基于外泌体中的LncRNA MALAT1

目的探讨JAG1对单核-巨噬细胞在三阴性乳腺癌(TNBC)中肿瘤转移前微环境(PMN)中作用的影响及其可能的调控机制,以期为TNBC诊疗提供新的思路和靶点。方法人TNBC细胞MDA-MB-231,MDA-MB-231B体外培养,qRT-PCR检测JAG1的表达。动物实验将雌性裸鼠分为MDA-MB-231组和MDA-MB-231B组,5只/组,分别往乳腺脂肪垫注射细胞5×10^(6),6周取肿瘤组织进行免疫组化分析。人源单核细胞THP-1为研究对象,分别经人源JAG1重组蛋白(rhJAG1)直接处理或经TNBC条件培养基(CM)处理,通过单核-内皮粘附、Transwell、qRT-PCR和Western blot实验检测JAG1对单核细胞的直接作用和在PMN中的影响。实验分为5组:Control组:THP-1正常培养;231-CM组:THP-1+231-CM;231-JAG1-CM组:THP-1+rhJAG1处理后231-CM;231B-CM组:THP-1+231B-CM;231-DAPT-CM组:THP-1+DAPT处理后231-CM。透射电镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析(NTA)检测JAG1对TNBC外泌体分泌影响。生物信息学筛选与LncRNA MALAT1相互作用的miRNA并行qRT-PCR验证。结果与MDA-MB-231相比,侵袭株MDA-MB-231B的JAG1表达更高(P<0.01),肝转移面积更大;rhJAG1直接处理和TNBC条件培养基处理均能促进单核细胞的黏附、迁移,并影响其分化(均P<0.05);透射电镜和NTA检测显示JAG1能促进MDA-MB-231外泌体分泌数量增多(P<0.01),外泌体中LncRNAMALAT1含量升高(P<0.0001)。生物信息学分析得到与LncRNA MALAT1和JAG1相关的5个候选miRNA,实验证实miR-26a-5p在TMN中的单核-巨噬细胞中受到MALAT1的靶向调控(P<0.0001)。结论JAG1能促进TNBC的外泌体分泌并影响其中Lnc MALAT1的表达,从而靶向PMN中单核-巨噬细胞miR-26a-5p的表达,从而使单核-巨噬细胞中JAG1表达升高,进而影响单核-巨噬细胞在PMN中的黏附、迁移和破骨分化作用。

Circ_0007841通过miR-338-3p靶向JAG1促进肝癌细胞恶性生物学活性的机制研究

目的:探究肝癌恶性生物学活性的调控机制。方法:购买人源正常肝上皮细胞THLE-3与肝癌细胞系BEL-7405、SNU-387、MHCC-97H、HCCLM3、Huh7,转染si-0007841/NC或miR-338-3p inhibitor/NC至Huh7细胞,qRT-PCR检测circ_0007841、miR-338-3p、JAG1的表达。在各组Huh7中利用CCK-8、Transwell检测各组的增殖活力、迁移、侵袭能力变化。Circular RNA Interactome、miRWalk预测circ_0007841与miR-338-3p、miR-338-3p与JAG1的靶向关系,双荧光素酶报告实验验证靶向结合。结果:circ_0007841在HCC中呈高表达,抑制circ_0007841的表达可以抑制HCC的增殖活力与迁移、侵袭能力;进一步抑制miR-338-3p的表达后,可以部分逆转低表达circ_0007841对HCC恶性行为的遏制。在HCC中,circ_0007841可以靶向抑制miR-338-3p的表达,而miR-338-3p则可以靶向抑制JAG1的表达。结论:肝癌中高表达的circ_0007841通过竞争性结合miR-338-3p增加JAG1转录,最终促进肝癌细胞恶性生物学活性。

ENU诱变构建Jag1基因mRNA剪接异常眼畸形小鼠模型

为建立人类和动物眼病的小鼠模型,采用乙烷基亚硝基脲(ENU)诱导C57BL/6J(B6)小鼠突变手段获得眼病小鼠,利用苏木精-伊红(HE)染色法及免疫组织化学染色技术分析小鼠角膜病变特点,通过连锁分析及位置候选克隆确定致病基因。结果显示,ENU诱变获得1例眼畸形小鼠,小鼠角膜上皮细胞层出现明显空泡,且分化异常,角膜基质层胶原纤维排列杂乱松散,角膜内皮细胞部分脱落。染色体定位将致病基因定位于小鼠第2号染色体微卫星D2Mit107(距着丝粒65.13 cM)与D2Mit423(距着丝粒73.57 cM)之间。对候选基因齿状基因1(Jag1)测序发现,突变杂合子小鼠1条染色体上Jag1基因第24号内含子3′端AG碱基被GG碱基替代,导致第25号外显子存在7个碱基的缺失;蛋白质预测发现,该突变引起Jag1编码区移码及蛋白质编码提前终止。综合分析可知,Jag1基因突变是引起小鼠眼畸形表型的分子基础。

沉默JAG1基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究沉默Jagged 1(JAG1)基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及其分子生物学机制。方法:用已构建的pRS-JAG1重组质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用Western blotting方法检测重组质粒对JAG1蛋白表达的影响;MTT比色法测定沉默JAG1对细胞生长的抑制情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;蛋白印记分析细胞周期蛋白1(cyclin D1)、p21CIP1/WAF1、p27KIP1、p-Rb、Bcl-2、Bax、Bcl-xL和cleaved caspase-3蛋白水平的变化。结果:Western blotting结果证实重组质粒可在72h内有效抑制JAG1蛋白表达;人乳腺癌MDA-MB-231细胞JAG1被沉默后,细胞的生长速度明显减慢,细胞明显阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),cyclin D1、p-Rb、Bcl-2和Bcl-xL蛋白水平被下调(P<0.05),而p21CIP1/WAF1、p27KIP1、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:沉默JAG1可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡。本研究为以JAG1为分子靶点的三阴乳腺癌治疗提供实验依据。

乳腺癌和乳腺导管内增生性病变JAG1基因甲基化的检测及临床意义

目的:探讨JAG1基因甲基化在乳腺浸润性导管癌发病中的作用。方法:采用Mass ARRAY方法对乳腺浸润性导管癌(IDC;n=75)、乳腺导管原位癌(DCIS;n=23)、乳腺非典型性导管增生症(ADH;n=20)以及乳腺普通型导管增生症(UDH;n=27)进行JAG1基因甲基化的定量检测。结果:JAG1基因启动区CpG_13、CpG_20.21.22、CpG_26位点在UDH组中的平均甲基化率高于ADH、DCIS、IDC组(P<0.05)。结论:在乳腺癌患者中JAG1(该基因的表达与乳腺癌细胞的生长、浸润、转移、预后有关)基因的部分位点呈现低甲基化改变。CpG_13、CpG_20.21.22、CpG_26位点的低甲基化改变与乳腺癌的形成具有相关性,可能该基因特异性CpG位点的低甲基化参与了乳腺良性病变向乳腺癌的发展演进过程。

胆管细胞癌组织JAG1基因及其蛋白表达水平与患者预后的关系

目的探讨JAG1蛋白表达水平对胆管细胞癌患者肿瘤切除术后预后的判断价值。方法 2010年1月~2014年12月我院诊治的胆管细胞癌患者60例和良性胆道疾病患者60例。检测胆管细胞癌组织、癌旁组织和肝组织JAG1 m RNA及其蛋白表达,测定胆管癌患者术后血清JAG1水平。应用单因素和多因素非条件Logistic回归分析胆管癌患者手术后预后的危险因素。结果癌旁组织、肝组织、胆管癌组织JAG1蛋白阳性率分别为45.0%(27/60)、56.7%(34/60)和81.7%(49/60),组间差异有统计学意义(P<0.05);三种组织JAG1 m RNA水平和蛋白相对表达量分别为(0.91±0.34)和(0.57±0.15)、(1.15±0.48)和(0.84±0.47)、(1.96±0.58)和(1.64±0.58),组间差异有统计学意义(P<0.05);胆管癌患者血清JAG1水平为(205.35±22.51)pg/ml,显著高于良性胆道疾病患者【(102.56±16.52)pg/ml,P<0.05】;肝内胆管癌患者血清JAG1水平与CA125(r=0.41,P<0.05)、CEA(r=0.0.27,P<0.05)、CRP(r=0.17,P<0.05)、肿瘤浸润深度(r=0.13,P<0.05)、淋巴结转移(r=0.08,P<0.05)、TNM分期(r=0.14,P<0.05)、肿瘤分化程度(r=0.15,P<0.05)呈正相关;多因素Cox比例风险回归模型分析显示,肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、分化程度、血清JAG1高水平是影响胆管癌患者无复发生存时间的危险因素(P<0.05),肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、血清JAG1高水平是影响胆管癌患者总生存时间的危险因素(P<0.05)。结论 JAG1蛋白可以作为胆管细胞癌患者肿瘤切除术后的预后指标,血清JAG1水平高患者术后预后差。

针灸对CTX荷瘤小鼠骨髓细胞中Notch信号通路差异基因jag1、notch2的影响

目的采用荷瘤小鼠为研究对象,以Notch信号通路为切入点,通过观察针刺与艾灸干预后环磷酰胺(CTX)模型荷瘤小鼠骨髓细胞中Notch信号通路差异基因jag1、notch2的表达、蛋白量以及mRNA转录情况,探讨针灸改善荷瘤小鼠骨髓抑制的相关作用机制及途径,为临床中针灸减轻肿瘤化疗患者骨髓抑制、提高生存质量及改善造血机能方面提供实验室依据及治疗思路。方法将40只昆明种雄性、清洁级小鼠自由饲养3 d后,在温度20~25℃,湿度60%左右的无菌条件下进行移植瘤模型制备,植瘤7 d后,对40只带瘤小鼠进行尾静脉采血,查其白细胞(WBC)总数并选取WBC数目接近正常范围,瘤体生长良好的荷瘤小鼠32只。将选取的荷瘤小鼠,随机分4组,每组8只,即空白组(A),模型组(B),针疗组(C),灸疗组(D)。B、C、D组均一次性腹腔注射环磷酰胺(CTX)150 mg/kg,A组给予相同体积的生理盐水。C、D组选取"大椎""膈俞""肾俞""足三里"穴位分别施以针刺、艾灸,A、B组每日陪同固定,不治疗。在课题组前期初步筛选的相关差异基因jag1、notch2的基础上,进一步运用免疫组化法、Real-time PCR法、Western Blot法全面深入地测定荷瘤小鼠骨髓细胞中Notch信号通路jag1、notch2基因的变化。结果(1)与空白组比,模型组中jag1和notch2基因蛋白表达升高,具有统计学意义(P<0.05);与模型组比,针疗组与灸疗组中jag1和notch2基因蛋白表达下降,具有统计学意义(P<0.05);(2)与空白组比,模型组中jag1、notch2基因mRNA表达升高;与模型组比,针疗组与灸疗组中jag1、notch2基因mRNA表达降低,但均无统计学意义;(3)与空白组比,模型组中jag1、notch2基因蛋白含量升高且具有统计学意义(P<0.05);与模型组比,针疗组、灸疗组jag1、notch2基因蛋白含量均降低,且具有统计学意义(P<0.05)。结论对Notch信号通路进行靶向调控,下调荷瘤小鼠骨髓细胞Notch信号通路中关键基因jag1、notch2的蛋白表达、mRNA表达、表达含量,是针灸减轻骨髓抑制、调控造血功能、改善造血微环境的重要途径之一。为了更贴近临床恶性肿瘤患者,本次研究选用带瘤体质的小鼠,以期为临床提供新的实验室依据及新的治疗途径。

Notch信号通路基因JAG1、ADAM17和ADAM10与先天性心脏病(CHD)的相关性

目的探索Notch通路的配体JAG1和限速酶ADAM10和ADAM17与先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)发病的相关性。方法选取来自山东、上海两地的1 053例CHD患者血液样本和1 000例对照样本,对这3个基因的5′启动子区和3′-UTR区进行了全测序,并进行统计分析及简要功能验证。结果检测到7个SNP(含2个新发SNP位点Ch2:9695908T/C和Ch20:10655928T/C)和1个单倍型组合具有显著性频率差异。双荧光素酶报告基因试验表明其中ADAM17启动子区的rs3811592Mrs13415726Mrs3811591M这个连锁单倍型可显著下调基因表达;而JAG1启动子区的rs7264849M则可显著上调基因表达。结论这些SNP突变可能影响Notch信号的强弱,从而与心脏发育异常相关。

JAG1和Notch3在乳腺癌组织中的表达及预后价值

目的探讨JAG1和Notch3在乳腺癌组织中的表达水平及预后意义。方法通过在线Oncomine数据库和Kaplan-Meier Plotter数据库分析JAG1和Notch3在乳腺癌组织中的表达情况及对预后的影响。收集2008年1月至2013年12月乳腺浸润性导管癌组织及配对癌旁组织各80例,采用实时荧光定量PCR(QPCR)和免疫组织化学SP法分别检测JAG1和Notch3的mRNA和蛋白水平,分析JAG1和Notch3蛋白表达与乳腺癌临床病理特征和总生存时间(OS)的关系。多因素分析采用Cox比例风险回归模型。结果 Oncomine数据库分析显示,乳腺癌组织中JAG1和Notch3的mRNA水平均高于癌旁组织(P<0.05)。80例乳腺浸润性导管癌组织中JAG1 mRNA水平为1.58±0.56,高于癌旁组织的1.23±0.48(P=0.0039);乳腺浸润性导管癌组织中Notch3 mRNA水平为2.39±0.83,高于癌旁组织的1.95±0.64(P=0.0036)。JAG1和Notch3蛋白在乳腺癌组织中的高表达率为71.3%(57/80)和80.0%(64/80),分别高于癌旁组织的8.8%(7/80)和11.2%(9/80),差异均有统计学意义(P=0.005,P=0.003). JAG1和Notch3蛋白表达在乳腺癌组织中呈正相关(r=0.267,P=0.017)。JAG1和Notch3表达与乳腺癌淋巴结转移、TNM分期和组织学分级有关(P<0.05)。Kaplan-Meier Plotter在线分析显示, JAG1或Notch3高表达的乳腺癌患者的OS短于低表达者(P>0.05)。80例乳腺浸润性导管癌患者中,JAG1高表达者的中位OS为38.3个月,低于JAG1低表达者的80.4个月(P=0.0394);Notch3高表达者的中位OS为39.3个月,低于Notch3低表达者的80.2个月(P=0.0334),且JAG1和Notch3均高表达者的中位OS最短,为27.3个月。Cox多因素分析显示,淋巴结转移、JAG1表达和Notch3表达是影响乳腺癌患者OS的独立因素(P<0.05)。结论 JAG1和Notch3在乳腺癌组织中高表达,且与预后不良有关,有望成为临床评估乳腺癌预后的潜在生物标志物。

1例Alagille综合征患儿JAG1基因筛查及突变功能分析

目的·对1例Alagille综合征患儿进行JAG1基因筛查及突变功能分析。方法·收集患儿及其父母的临床资料及辅助检查结果,抽提DNA进行JAG1基因突变筛查。构建JAG1野生型及突变型表达质粒,转染NIH-3T3细胞,通过real-time RT-PCR、Western blotting分析突变体mRNA和蛋白的表达量;糖苷内切酶H消化实验分析蛋白糖基化结构;RBP-Jκ荧光素酶报告基因检测突变体蛋白对Notch信号通路转录因子RBP-Jκ的激活作用。结果·在患儿及其父亲中发现1个未报道过的JAG1错义突变c.1655C>T(p.Pro552Leu),该突变在患儿母亲及对照健康儿童中未发现。与野生型相比,突变型JAG1在mRNA、蛋白表达量上无明显改变,翻译后糖苷化修饰正常,但突变蛋白对Notch信号通路转录因子RBP-Jκ的激活作用减弱。结论·该患儿携带的JAG1错义突变使JAG1蛋白功能受损,可能是Alagille综合征的致病原因。

黄芪解毒汤对乳腺癌细胞Jag1基因和CyclinD1蛋白表达影响的研究

目的探讨黄芪解毒汤抑制乳腺癌复发转移的机制是否与其干预Jag1基因和CyclinD1蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞中的表达有关。方法采用SPF级SD大鼠灌胃法制备黄芪解毒汤组、阿霉素组、参一胶囊组、生理盐水组的含药血清。运用细胞培养技术,MTT法检测发现最佳抑制浓度;以最佳抑菌浓度即20%浓度的含药血清干预人乳腺癌细胞,RT-PCR检测Jag1基因,Western-blot检测CyclinD1蛋白的表达。结果各组与生理盐水血清组比较,Jag1基因和CyclinD1蛋白表达均明显降低(P<0.01);与其他各组比较阿霉素血清组抑制作用最强(P<0.01);黄芪解毒汤血清组与参一胶囊血清组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论黄芪解毒汤可显著降低MCF-7细胞Jag1基因和CyclinD1蛋白表达,该结果可为黄芪解毒汤在乳腺癌术后治疗中的作用提供实验依据。

圆锥动脉干畸形患儿NOTCH1和JAG1基因3’非编码区变异分析

目的·探索NOTCH1和JAG1的3’非编码区(3’UTR)核苷酸变异与心脏圆锥动脉干畸形(CTD)的相关性。方法·采用病例-对照的研究方法,收集600名无22q11缺失的CTD患儿以及300名正常对照儿童。应用高通量测序技术直接检测样本人群NOTCH1和JAG1 3’UTR区段的序列,筛选变异位点,通过PCR和Sanger测序法验证变异的准确性。运用在线软件Target Scan、Pic Tar和micro RNA.org对变异位点进行功能预测分析。结果·检测出CTD患儿NOTCH1 3’UTR区存在1个新发突变和3个单核苷酸多态性(SNP),JAG1 3’UTR区存在3个新发突变和6个SNP位点。其中JAG1 3’UTR区有2个SNP位点(rs3840074、rs8708)的基因型在病例组和对照组间的分布差异有统计学意义(均P<0.05)。预测结果显示4个突变位点及2个有差异的SNP位点均可与微小RNA结合。结论·NOTCH1和JAG1 3’UTR区的核苷酸变异可能与心脏圆锥动脉干畸形的发生相关。

JAG1影响血管生成并促进三阴性乳腺癌细胞的迁移、侵袭和粘附

目的探究JAG1对三阴性乳腺癌(TNBC)恶性表型的影响,并研究乳腺癌微环境血管生成的机制。方法体外培养人TNBC细胞231和231B,Q-PCR实验检测Notch相关分子的表达水平。动物实验将雌性裸鼠分为231组和231B组,5只/组,乳腺脂肪垫分别注射231和231B细胞1×106/只。4~6周取肿瘤组织进行免疫组化和免疫荧光实验。使用JAG1重组蛋白处理231细胞和DAPT处理231B细胞,实验分4组:231空白对照组;rJAG1处理231组;231B空白对照组;DAPT处理231B组。用CCK-8法、Hoechst 33258染色实验、划痕愈合实验、Transwell小室实验和内皮细胞粘附实验检测TNBC的生物学特性变化。使用Westernblot检测231和231B生物学特性相关蛋白的水平。接下来体外培养血管内皮细胞HUVEC,TNBC条件培养基处理HUVEC,实验分5组:(1)HUVEC阴性对照组;(2)231空白条件培养基处理组;(3)rJAG1处理231的条件培养基处理组;(4)231B空白条件培养基处理组;(5)DAPT处理231B的条件培养基处理组。CCK-8实验和基质胶成管实验分别检测HUVEC的增殖与成管能力。结果与231细胞相比,231B表达更高的JAG1(P<0.05)。231B肿瘤表达更高的VEGFA和CD31。与231空白组相比,rJAG1处理组中231细胞的迁移、侵袭和粘附能力明显受到促进(P<0.05)。Twist1和Snail的蛋白水平均增加(均P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达量增加(P<0.05),而DAPT明显抑制231B的相关现象和指标。JAG1过表达的条件培养基增加了HUVEC的细胞数以及成管数量(P<0.05)。结论JAG1可能影响TNBC的恶性表型,并促进微环境的血管生成。

肝细胞癌骨转移中APEX1和JAG1的表达及意义

目的分析肝细胞癌骨转移(hepatocellular carcinoma bone metastasis,HCC-BM)的临床及病理学特征,检测脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(apurinic/apyrimidinic endonuclease-1,APEX1)和JAG1基因在HCC-BM和肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达;探讨两者的表达与临床病理特征的关系。方法回顾性分析2012年1月—2019年12月在福建医科大学附属第一医院和福建医科大学附属第二医院HCC-BM患者的资料。采用免疫组化检测79例HCC及HCC-BM中APEX1、JAG1的表达,分析两者与临床病理特征的关系。结果福建医科大学附属第一医院和第二医院2012—2019年间肝细胞癌骨转移的发生率为17.02%(79/464)。患者男女比例8.9︰1;中位年龄53岁。脊柱(72.0%)为最常见的骨转移部位,其次为下肢骨11.0%。免疫组化结果显示79例HCC-BM中APEX1胞质、JAG1的阳性率分别为63.3%、62.0%;HCC中的阳性率分别为46.8%、41.8%。APEX1、JAG1在HCC-BM中的表达高于HCC;APEX1的表达与肿瘤的分化程度、原发灶的数目有关(P<0.05);JAG1的表达与肿瘤分化程度、是否合并骨外转移有关(P<0.05)。在HCC-BM中APEX1和JAG1蛋白之间的表达呈正相关(P=0.035)。结论HCC-BM的发生率为17.02%,好发于中老年男性,脊柱为最常见的骨转移部位。APEX1及JAG1在HCCBM中的表达高于HCC,提示两者可能参与肝细胞癌的骨转移,而其具体作用机制尚有待进一步研究。

维吾尔族乳腺癌患者JAG1基因甲基化的临床意义

目的探讨JAG1甲基化在维吾尔族乳腺癌变和进展过程中的临床意义。方法 MALDI-TOF MS法检测JAG1基因在15例乳腺普通型导管增生(usual ductal hyperplasia,UDH)、15例非典型性导管增生(atypical ductal hyperplasia,ADH)、15例导管原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)和50例浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)组织中的甲基化率,免疫组织化学法检测蛋白表达,分析甲基化与蛋白表达的相关性。结果 JAG1基因在乳腺癌变过程组织中的甲基化率逐渐降低,以Cp G_11.12、Cp G_14.15、Cp G_18.19最显著(P<0.05),Cp G_1在低分化组明显降低(P<0.05),Cp G_8.9.10在淋巴结转移组明显降低(P<0.05),而Cp G_16.17在Ⅲ期中显著升高(P<0.05),Cp G_13、Cp G_26在ER、PR和HER2表达间差异有统计学意义(P<0.05),JAG1基因甲基化与蛋白表达显著负相关(r=-0.6 7 4 P<0.001)。结论JAG1基因CpG位点的不同甲基化水平在乳腺癌变进展中可能发挥不同作用。JAG1甲基化是蛋白表达的调控机制之一。

肾透明细胞癌NOTCH1与JAG1的表达及意义

目的:探讨肾透明细胞癌跨膜受体蛋白(NOTCH1)与人类Jagged1基因(JAG1)的表达及意义。方法:应用免疫组化染色法比较肾透明细胞癌(n=129)及正常肾组织(n=33)中NOTCH1和JAG1蛋白的表达差异,并分析两者的表达与肿瘤临床病理参数的相关性。结果:肾透明细胞癌NOTCH1、JAG1阳性表达率高于正常肾组织(分别为95.3%比36.4%,P<0.05;93.0%比42.4%,P<0.05);随着肾癌的病理分级、临床分期的增高和肿瘤的增大,NOTCH1和JAG1的表达水平均增高。复发组NOTCH1和JAG1蛋白的表达均高于未复发组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肾透明细胞癌NOTCH1和JAG1表达均高于正常肾组织,且与肿瘤分级、分期及肿瘤大小有关。两者对临床预后判断可能具有一定价值。