沉默JAG1基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究沉默Jagged 1(JAG1)基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及其分子生物学机制。方法:用已构建的pRS-JAG1重组质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用Western blotting方法检测重组质粒对JAG1蛋白表达的影响;MTT比色法测定沉默JAG1对细胞生长的抑制情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;蛋白印记分析细胞周期蛋白1(cyclin D1)、p21CIP1/WAF1、p27KIP1、p-Rb、Bcl-2、Bax、Bcl-xL和cleaved caspase-3蛋白水平的变化。结果:Western blotting结果证实重组质粒可在72h内有效抑制JAG1蛋白表达;人乳腺癌MDA-MB-231细胞JAG1被沉默后,细胞的生长速度明显减慢,细胞明显阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),cyclin D1、p-Rb、Bcl-2和Bcl-xL蛋白水平被下调(P<0.05),而p21CIP1/WAF1、p27KIP1、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:沉默JAG1可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡。本研究为以JAG1为分子靶点的三阴乳腺癌治疗提供实验依据。

胆管细胞癌组织JAG1基因及其蛋白表达水平与患者预后的关系

目的探讨JAG1蛋白表达水平对胆管细胞癌患者肿瘤切除术后预后的判断价值。方法 2010年1月~2014年12月我院诊治的胆管细胞癌患者60例和良性胆道疾病患者60例。检测胆管细胞癌组织、癌旁组织和肝组织JAG1 m RNA及其蛋白表达,测定胆管癌患者术后血清JAG1水平。应用单因素和多因素非条件Logistic回归分析胆管癌患者手术后预后的危险因素。结果癌旁组织、肝组织、胆管癌组织JAG1蛋白阳性率分别为45.0%(27/60)、56.7%(34/60)和81.7%(49/60),组间差异有统计学意义(P<0.05);三种组织JAG1 m RNA水平和蛋白相对表达量分别为(0.91±0.34)和(0.57±0.15)、(1.15±0.48)和(0.84±0.47)、(1.96±0.58)和(1.64±0.58),组间差异有统计学意义(P<0.05);胆管癌患者血清JAG1水平为(205.35±22.51)pg/ml,显著高于良性胆道疾病患者【(102.56±16.52)pg/ml,P<0.05】;肝内胆管癌患者血清JAG1水平与CA125(r=0.41,P<0.05)、CEA(r=0.0.27,P<0.05)、CRP(r=0.17,P<0.05)、肿瘤浸润深度(r=0.13,P<0.05)、淋巴结转移(r=0.08,P<0.05)、TNM分期(r=0.14,P<0.05)、肿瘤分化程度(r=0.15,P<0.05)呈正相关;多因素Cox比例风险回归模型分析显示,肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、分化程度、血清JAG1高水平是影响胆管癌患者无复发生存时间的危险因素(P<0.05),肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、血清JAG1高水平是影响胆管癌患者总生存时间的危险因素(P<0.05)。结论 JAG1蛋白可以作为胆管细胞癌患者肿瘤切除术后的预后指标,血清JAG1水平高患者术后预后差。

红景天苷调节miR-26a-5p/JAG1/Notch-1信号轴对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学功能的影响

目的探讨红景天苷(SAL)调节微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)/JAG1/神经源性基因Notch同源蛋白1(Notch-1)信号轴对瘢痕疙瘩(KD)成纤维细胞(HKF)生物学功能的影响。方法将HKF细胞随机分为对照组(Control组)、SAL低浓度组(SAL-L组,50μmol/L SAL)、SAL高浓度组(SAL-H组,100μmol/L SAL)、SAL高浓度+miR-NC组(SAL-H+miR-NC组)、SAL高浓度+miR-26a-5p mimics组(SAL-H+miR-26a-5p mimics组)、SAL高浓度+NC-inhibitor组(SAL-H+NC-inhibitor组)、SAL高浓度+miR-26a-5p inhibitor组(SAL-H+miR-26a-5p inhibitor组)。CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期;RT-qPCR检测各组细胞中的miR-26a-5p、JAG1和Notch-1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中JAG1和Notch-1蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-26a-5p与JAG1的关系。结果与Control组相比,SAL-H组HKF细胞增殖能力(24 h)、迁移距离、侵袭细胞个数、S期细胞比例、JAG1和Notch-1 mRNA和蛋白表达显著减少(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、miR-26a-5p表达显著增加(P<0.05);与SAL-H组和SAL-H+miR-NC组相比,SAL-H+miR-26a-5p mimics组相应指标变化与上述变化相同;miR-26a-5p inhibitor减弱了SAL-H对HKF细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用,减弱了HKF细胞凋亡。miR-26a-5p靶向负调控JAG1表达。结论SAL可能通过上调miR-26a-5p,靶向抑制JAG1/Notch-1信号轴抑制HKF细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,改善KD。

JAG1蛋白表达水平对结直肠癌患者切除术后预后影响的临床研究

目的:探讨JAG1蛋白表达水平对结直肠癌患者切除术后预后的影响。方法:选择2008年1月—2013年12月接受手术切除的结直肠癌患者48例,另选择同期48例结直肠良性疾病患者作为对照。检测结直肠癌组织、癌旁组织、结直肠良性组织中JAG1 mRNA和蛋白,测定结直肠癌患者术后血清JAG1水平、实验室检测指标及临床病理学参数,并比较它们之间的相关性,分析结直肠癌患者术后预后的危险因素。结果:结直肠良性组织JAG1蛋白阳性表达率为10.42%(5/48)、癌旁组织JAG1蛋白阳性表达率为45.83%(22/48),显著低于结直肠癌组织的83.33%(40/48)(P<0.05)。结直肠良性组织JAG1 mRNA和蛋白相对表达量水平为(0.35±0.08)、(0.12±0.04),癌旁组织JAG1 mRNA和蛋白相对表达量水平为(0.92±0.38)、(0.52±0.16),显著低于直肠癌组织的(1.98±0.43)(1.67±0.54)(P<0.05)。结直肠癌患者血清JAG1水平为(198.14±35.67)pg/mL,显著高于对照组中的(94.37±25.43)pg/mL(P<0.05)。JAG1与CA125、CEA、CRP呈正相关(P<0.05),与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度呈正相关(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、分化程度、血清JAG1高表达是影响结直肠癌患者RFS的危险性因素(P<0.05);浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、血清JAG1高表达是影响结直肠癌患者OS的危险性因素(P<0.05)。结论:JAG1蛋白可以作为诊断结直肠癌切除术后影响预后的特异性指标,也可成为结直肠癌癌基因治疗的新靶点。血清JAG1水平偏高不利于结直肠癌患者术后预后。

骨髓间充质干细胞中Jag1对骨骼发育的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞中Jag1对骨骼发育的影响并分析其可能的作用机制。方法杂交得到基因型为Prrx1-Cre;Jag1^(f/f)的基因敲除小鼠,并选择Jag1^(f/f)小鼠作为同窝对照,记录小鼠体重并分析其变化趋势。取10 d小鼠股骨进行Micro CT扫描,分析骨量、骨小梁数量、骨小梁厚度和分离度数据。苏木素—伊红(hematoxylin-eosin,H/E)染色观察股骨生长板部位组织学变化。免疫荧光染色观察Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)、Ⅱ型胶原(CollagenⅡ,ColⅡ)、Ⅹ型胶原(CollagenⅩ,ColⅩ)的表达情况。体外分离并培养骨髓间充质干细胞,提取蛋白,Western blot检测细胞外调节蛋白激酶1/2 (extracellular regulated protein kinases 1/2,Erk1/2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)蛋白磷酸化水平。结果经实时荧光定量PCR检测,构建的Prrx1-Cre;Jag1^(f/f)基因型小鼠在骨髓间充质干细胞中以较高的效率敲除了Jag1。Prrx1-Cre;Jag1^(f/f)小鼠发育迟缓,随着出生时间增长,与对照鼠相比体重明显下降,并于出生后20 d左右死亡。Micro-CT扫描结果显示Prrx1-Cre;Jag1^(f/f)小鼠股骨骨量、骨小梁数量、骨小梁厚度显著下降。Prrx1-Cre;Jag1^(f/f)小鼠生长板软骨层变薄(P<0.05),成骨细胞、早期软骨细胞及肥大软骨细胞的数量均显著下降(P<0.05)。Western Blot结果显示骨髓间充质干细胞中Erk1/2蛋白磷酸化水平显著下降,JNK蛋白磷酸化水平显著上升。结论在Prrx1标记的骨髓间充质干细胞中敲除Jag1可抑制成骨、软骨分化,这一作用可能通过抑制Erk1/2信号通路,激活JNK信号通路而实现。