纤维粘连蛋白靶向JAK/STAT3信号通路调控粘连性肠梗阻的机制

目的:探究纤维粘连蛋白(FN)靶向JAK/STAT3信号通路调控粘连性肠梗阻的作用机制。方法:选取2019年1月—2020年12月就诊行肠切除手术的粘连性肠梗阻患者65例(观察组),同期行腹股沟疝手术患者65例(对照组),取患者肠组织及术前血液样本,采用qRT-PCR、Western blot及免疫组织化学实验检测肠组织样本中FN、STAT3、p-STAT3基因及蛋白表达,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清样本中FN表达。体外培养人肠上皮细胞系HIEC-6,采用慢病毒转染抑制细胞FN表达,采用CCK8、Transwell迁移实验观察FN对细胞增殖及分化的影响,同时采用qRT-PCR、Western Blot实验检测FN对细胞STAT3、p-STAT3表达的影响。结果:与对照组比较,观察组肠组织中FN mRNA及蛋白表达明显较高(P<0.05),STAT3、p-STAT3 mRNA及蛋白表达则明显较低(P<0.05),且观察组血清中分泌型FN含量也明显较高(P<0.05)。体外实验显示,与NC siRNA组HIEC-6细胞比较,LV-FN siRNA组HIEC-6细胞在48、72、96、120 h的增殖率均明显较低(P<0.05),细胞迁移能力也明显较低(P<0.05),其FN mRNA及蛋白表达明显较低(P<0.05),STAT3、p-STAT3 mRNA及蛋白则明显较高(P<0.05)。结论:纤维粘连蛋白在粘连性肠梗阻患者肠组织及血清中呈明显高表达,可通过JAK/STAT3信号通路的异常激活影响细胞的增殖和迁移,引起病变肠段发病。

基于JAK/STAT3信号通路探讨SLIT3对高糖诱导的人肾小球足细胞炎症反应的影响

目的探讨SLIT3能否调控JAK/STAT3信号通路调控高糖诱导的肾小区足细胞炎症反应。方法将肾小球足细胞MPC-5随机分为L-Glucose+NC siRNA组、L-Glucose+SLIT3组、L-Glucose+SLIT3 siRNA组、H-Glucose+NC siRNA组、H-Glucose+SLIT3组、H-Glucose+SLIT3 siRNA组。流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA检测细胞中炎症因子水平;蛋白质印迹检测细胞中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达;RT-PCR检测细胞中SLIT3、IL-1β、IL-6、TNF-α相对表达量。结果与Ctrl组相比,SLIT3-siRNA1组(0.67±0.04)、SLIT3-siRNA2组(0.26±0.03)和SLIT3-siRNA3组(0.71±0.08)MPC-5细胞中SLIT3对表达量均明显降低,且SLIT3-siRNA3组变化最显著(P<0.01);与L-Glucose+NC siRNA组相比,L-Glucose+SLIT3组和H-Glucose+NC siRNA组MPC-5细胞凋亡率(分别为11.84%±1.06%、11.88%±1.07%)、细胞中IL-1β(分别为164.69±6.92、155.31±8.62)、IL-6(分别为162.16±5.56、105.35±3.44)、TNF-α(分别为103.31±6.84、128.43±4.82)水平及mRNA相对表达量、细胞中p-JAK2/JAK2(分别为1.74±0.14、3.93±0.17)和p-STAT3/STAT3比值(分别为1.99±0.24、4.43±0.16)明显增加,L-Glucose+SLIT3siRNA组细胞凋亡率(2.73%±0.25%)、细胞中IL-1β(78.09±7.47)、IL-6(46.48±2.63)、TNF-α水平(42.61±3.10)及mRNA相对表达量、细胞中p-JAK2/JAK2(0.16±0.04)和p-STAT3/STAT3(0.20±0.03)比值明显降低(P<0.01);与H-Glucose+NC siRNA组相比,H-Glucose+SLIT3组MPC-5细胞凋亡率(16.24%±1.28%)、细胞中IL-1β(214.09±9.28)、IL-6(205.44±6.80)、TNF-α水平(192.11±4.93)及mRNA相对表达量、细胞中p-JAK2/JAK2(5.00±0.39)和p-STAT3/STAT3比值(5.71±0.33)明显增加,H-Glucose+SLIT3 siRNA组细胞凋亡率(6.25%±0.43%)、细胞中IL-1β(118.60±8.05)、IL-6(74.37±4.91)、TNF-α水平(98.76±4.81)及mRNA相对表达量、细胞中p-JAK2/JAK2(2.99±0.13)和p-STAT3/STAT3(2.05±0.14)比值明显降低(P<0.01)。结论敲减SLIT3可抑制高糖诱导的肾小球足细胞中炎症反应和细胞凋亡,改善足细胞损伤,其作用机制可能比抑制JAK2/STAT3信号通路激活有关。

安子合剂对ACA阳性流产小鼠母胎界面JAK/STAT3信号通路的影响

目的观察安子合剂对抗心磷脂抗体(ACA)阳性小鼠母胎界面JAK/STAT3信号通路的影响。方法以人β2-GPⅠ为诱导剂建立ACA阳性小鼠模型,空白组给予生理盐水,模型组给予人β2-GPⅠ;各治疗组分别给予阿司匹林和高、低两种不同剂量安子合剂,于妊娠第15天处死,计算胚胎吸收率,采用ELISA方法检测外周血ACA;采用免疫组化方法检测胎盘、蜕膜组织JAK、GP130、p-STAT3,以Western blot方法检测STAT3、p-STAT3。结果安子合剂低、高剂量组、阿司匹林组小鼠的胚胎吸收率明显降低,小鼠血清ACA的滴度也显著降低(P<0.05),母胎界面的JAK、GP130、p-STAT3的表达均增高,其中胎盘的JAK、p-STAT3的表达与模型组比较具有显著差异(P<0.05),蜕膜GP130、p-STAT3的表达与模型组比较具有显著差异(P<0.05)。结论 ACA导致妊娠丢失的病理机制与母胎界面JAK/STAT3信号通路有关,安子合剂发挥治疗作用的机制可能是通过提高胎盘JAK的表达、增强蜕膜GP130的表达,促进胎盘及蜕膜STAT3的活化。

星状神经节阻滞对帕金森疼痛患者VAS评分炎症指标及JAK/STAT3信号通路的影响

目的 探讨星状神经节阻滞对帕金森疼痛患者VAS评分、炎症指标及Janus激酶(JAK)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路影响。方法 参考电脑随机数字表法,按1∶1试验原则将2020-04—2022-05厦门大学附属中山医院的80例帕金森疼痛患者随机分为药物组和阻滞组各40例。药物组给予常规药物治疗,阻滞组在此基础上给予星状神经节阻滞。比较2组视觉模拟评分法(VAS)评分、30项帕金森病非运动症状筛查问卷(NMSS)、39项帕金森病生活质量量表(PDQ-39)、血疼痛物质[5-羟色胺(5-HT)、血清P物质(SP)、神经肽Y(NPY)、前列腺素E_2(PGE_2)、去甲肾上腺素(NE)、β-内啡肽(β-EP)]、炎症指标[白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性IL-2受体(s IL-2R)、可溶性IL-6受体(sIL-6R)]、磷酸化JAK(p-JAK mRNA)、磷酸化STAT3(p-STAT3 mRNA)、不良反应。结果 阻滞组治疗后疼痛VAS评分、NMSS评分、PDQ-39评分低于药物组(P<0.05);阻滞组治疗后5-HT、SP、NPY、PGE2、NE低于药物组,β-EP高于药物组(P<0.05);阻滞组治疗后IL-2、IL-6、IL-8、TNF-α、sIL-2R、sIL-6R低于药物组(P<0.05);阻滞组治疗后p-JAK mRNA、p-STAT3 mRNA低于药物组(P<0.05);阻滞组不良反应发生率5.00%(2/40)与药物组10.00%(4/40)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 星状神经节阻滞可有效抑制疼痛因子合成,增加镇痛因子合成,缓解帕金森疼痛,改善非运动症状,提高生活质量,其机制可能与抑制炎症反应和JAK/STAT3信号通路活化有关。

水蛭素通过JAK/STAT3信号通路缓解人肾小管上皮细胞纤维化的相关机制研究

目的:探讨水蛭素抑制人肾小管上皮细胞纤维化的作用机制。方法:将HK-2细胞分为正常对照组、模型组、AG490(3 mg/L)阳性对照组及水蛭素低(1 mg/mL)、中(3 mg/mL)、高(10 mg/mL)浓度组,除正常对照组外其他各组培养基均含5 ng/mL TGF-β_1。各组细胞培养24、48、72 h时采用MTT测定细胞增殖情况;各组细胞培养72 h时采用双抗体夹心ELISA法检测细胞分泌Ⅰ型胶原(ColⅠ)和纤连蛋白(Fib)含量;各组细胞培养72 h时采用实时荧光定量PCR法以及Western blot法检测细胞α-SMA、ColⅠ、Fib、JAK、STAT3 mRNA和蛋白的表达。结果:水蛭素高、中浓度组细胞在培养24、48、72 h时光密度较模型组显著降低,在培养72 h时细胞培养液中ColⅠ、Fib含量较模型组显著降低,细胞中α-SMA、ColⅠ、Fib、JAK、STAT3 mRNA和蛋白表达较模型组显著降低(P<0.05或P<0.01)。水蛭素上述作用均具有浓度依赖性。结论:水蛭素可逆转TGF-β_1刺激HK-2细胞的增殖和纤维化,其作用机制可能与抑制JAK/STAT3信号通路有关。

JAK/STAT3信号通路调控肿瘤及其相关生物功能的研究进展

JAK/STAT3信号通路是细胞信号通路中重要的信号传导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化状态,对细胞凋亡和增殖起着关键的作用,并且还诱导胚胎发育、肝脏再生、糖酵解和炎性反应、上皮间质转化和血管再生等一系列生物发生过程,与人类肿瘤的发生发展密切相关。

巨噬细胞清道夫受体1通过JAK/STAT3信号通路调节骨髓间充质干细胞成骨分化

目的:探索巨噬细胞清道夫受体1(macrophage scavenger receptor 1,MSR1)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)成骨分化的调控作用及机制。方法:在体内水平,对MSR1野生型(wild type,WT)及敲除(knock out,KO)小鼠进行胫骨骨皮质缺损模型,并于术后第10天对缺损部位进行小动物CT扫描三维重建及参数分析。在体外实验中,用MSR1 WT及KO小鼠来源的原代巨噬细胞的条件培养基刺激BMSC,并通过CCK-8、Transwell、茜素红染色、碱性磷酸酶染色和实时定量逆转录聚合酶链反应等实验检测MSR1对BMSC的增殖、迁移和成骨分化能力的调控作用。最后,通过Western blot和ELISA实验探讨MSR1对BMSC成骨分化发挥调控作用的具体机制。结果:在体内水平,MSR1的缺失可导致小鼠骨愈合能力显著减弱。在体外水平,MSR1的敲除可显著影响BMSC的成骨分化能力,但不影响增殖及迁移能力。在机制探索方面,MSR1可通过JAK/STAT3信号通路上调骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)的分泌,进而发挥其对BMSC成骨分化的调控作用。结论:MSR1是巨噬细胞发挥调节BMSC成骨分化作用的关键分子之一,这为今后靶向MSR1促进骨愈合提供了坚实的理论基础。

研究miR-375/JAK/STAT3信号通路在胃癌中的作用

本研究拟分析胃癌中miR-375应用价值。方法 旨在通过荧光定量PCR验证胃癌中miR-375表达和不同TNM分期参数关系。培养SGC-7901细胞,分对照组,miR-375组和?si- miR-375组。MTT法分析对细胞增殖。Western blot分析JAK/STAT3信号通路改变。结果 在原发性胃肿瘤中观察到miR-375的显著过表达。miR-375在具有更晚分期和淋巴结转移的进展性肿瘤中表达增加(P<0.05)。上调miR-375胃癌细胞中表达促进细胞增殖, 且激活JAK/STAT3通路,差异具有统计学意义(P<0.05)。而在SGC-7901细胞转染miR-375 siRNA用于下调其表达,可逆转上述改变(P<0.05)。结论 miR-375过表达于胃癌,促进胃癌进展。敲降miR-375的表达,可通过调控JAK/STAT3信号通路,抑制细胞增殖,进而延缓胃癌进展。

基于JAK/STAT3信号通路探讨“金汁”粪菌移植对小鼠溃疡性结肠炎的改善作用

目的探讨“金汁”粪菌移植对小鼠溃疡性结肠炎的改善作用。方法将小鼠随机分为正常组、模型组、“金汁”组、“金汁”+Tofacitinib(JAK抑制剂)组,每组12只。正常组小鼠给予蒸馏水,其余各组小鼠给予含2%DSS的蒸馏水溶液,连续饮用8 d建立溃疡性结肠炎模型。造模结束后,“金汁”组给予粪便滤液灌肠(每次0.2 mL,每天2次);“金汁”+Tofacitinib组给予粪便滤液灌肠(每次0.2 mL,每天2次)+Tofacitinib腹腔注射(5 mg/kg,每天1次),连续干预5 d。给药结束后,记录疾病活动指数(DAI)、结肠长度和脾脏指数,HE染色观察结肠组织病理变化,ELISA法检测血清炎性因子水平,比色法检测结肠组织MPO活性,免疫组化法检测结肠组织增殖及炎症相关蛋白表达,RT-qPCR和Western blot法检测结肠组织JAK、STAT3 mRNA和蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠DAI评分、脾脏系数、病理评分升高(P<0.05),结肠组织细胞结构破坏,大量炎性细胞渗出,血清IL-6、TNF-α水平、结肠组织MPO活性和Ki-67、IL-6、TNF-α、p-STAT3蛋白表达升高(P<0.05),结肠组织JAK、STAT3 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),结肠长度缩短(P<0.05),血清IL-4水平和结肠组织PCNA、IL-4蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,“金汁”组和“金汁”+Tofacitinib组上述指标均有改善(P<0.05),且“金汁”+Tofacitinib组效果更佳。结论“金汁”粪菌移植对溃疡性结肠炎小鼠症状有改善作用,该作用可能是通过调控JAK/STAT3信号通路实现的。

华蟾素对胃癌肿瘤细胞SGC-7901增殖、凋亡以及JAK/STAT3信号通路的影响

目的探讨华蟾素(Cino)对转录激活因子3(STAT3)的调控作用,以及对人胃癌肿瘤细胞SGC-7901的增殖、凋亡的影响。方法采用MTT法检测不同浓度华蟾素(0.1、1.0、10 mg/L)及5-FU(20 mg/L)分别作用于人胃癌肿瘤SGC-7901细胞12、24、48 h后对肿瘤细胞增殖活力的影响;半定量RT-PCR检测Cyclin D1、PCNA、Bcl-2的mRNA表达水平;蛋白悬液芯片(Bio-plex)法检测STAT3磷酸化(p-STAT3)蛋白表达水平。结果华蟾素可显著抑制SGC-7901的增殖,且呈时间和剂量依赖性。华蟾素能抑制SGC-7901细胞Cyclin D1、PCNA、Bcl-2的mRNA表达水平(均P<0.05)。华蟾素抑制p-STAT3蛋白表达水平,且呈现剂量依赖性(P<0.05)。结论华蟾素具有抑制胃癌肿瘤细胞增殖和诱导凋亡的作用,其可能机制与其抑制STAT3活化,从而抑制其下游靶基因表达有关。

基于IL-6/JAK/STAT3信号通路探讨大黄灵仙方缓解胆管细胞炎性反应的作用机制

目的:基于IL-6/JAK/STAT3信号通路探讨大黄灵仙方缓解脂多糖(LPS)诱导肝内胆管炎症模型大鼠的胆管细胞炎性反应的作用机制。方法:将50只SD大鼠随机分为5组,空白组、模型组、胆宁片(0.5 g/kg)、大黄灵仙方低、高浓度组(2.4 g/kg、4.8 g/kg),每组10只。除空白组以外,其余各组大鼠于胆总管处一次性注射1.25 mg/kg LPS以构建肝内胆管感染动物模型。第8天灌胃结束后取材,取大鼠肝门处肝脏组织,采用HE染色观察肝门和胆管树组织病理变化。生化法测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的表达水平。酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清中白介素6(IL-6)、Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导和转录活化因子3(STAT3)的表达水平。蛋白免疫印迹法(WB)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测胆管树组织中的IL-6、JAK2、STAT3蛋白及mRNA的表达水平。结果:(1)与空白组对比,模型组大鼠的肝窦和门管区小叶间胆管等结构均被破坏,周围存在炎性细胞浸润,血清中ALT、AST、MDA、IL-6、JAK2、STAT3表达量明显上升,SOD的表达水平下降,IL-6、JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达水平升高。(2)与模型组比较,胆宁片组、大黄灵仙方低、高浓度组的大鼠肝脏病理损伤程度均有改善,能显著降低血清中ALT、AST、MDA、IL-6、JAK2、STAT3和上调SOD的表达水平,下调IL-6、JAK2、STAT3蛋白及mRNA的表达,以大黄灵仙方高浓度组效果最佳。(3)与胆宁片组相比,大黄灵仙方低、高浓度组的大鼠肝脏病理损伤程度趋于正常,无明显炎性细胞浸润,血清中ALT、AST、MDA、IL-6、JAK2、STAT3表达量以及IL-6、JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达水平均降低,SOD的表达水平上升,以大黄灵仙方高浓度组治疗效果最佳。结论:大黄灵仙方可有效减缓LPS诱导的大鼠胆管炎症反应,促使胆道恢复至非炎症状态,其机制可能与下调IL-6/JAK/STAT3信号通路的活化有关,以大黄灵仙方高浓度组治疗效果最佳。

JAK/STAT3信号通路参与白细胞介素-17诱导的支气管平滑肌细胞增殖与迁移

【目的】探讨白介素-17(IL-17)促进支气管平滑肌细胞(BSMC)的增殖与迁移作用及JAK/STAT3相关信号通路在其中的作用机制。【方法】使用不同浓度IL-17处理BSMC不同时间,以确定最佳实验条件。随后使用MTT检测细胞活力,BrdU染色观察细胞增殖状态,并使用PI染色流式细胞仪检测细胞周期。进一步利用细胞迁移实验检测细胞迁移能力。使用Western blot实验检测IL-17处理后BSMC的JAK、p-JAK、STAT3、p-STAT3蛋白表达量。利用JAK/STAT3信号通路特异性阻断剂AG490来特异性阻断JAK/STAT3信号通路,检测阻断JAK/STAT3信号后IL-17对细胞增殖、迁移以及JAK/STAT3信号通路蛋白表达量的影响。【结果】IL-17可促进BSMC增殖(P <0.05),促进细胞周期进程(P <0.05)并使细胞迁移能力增强(P <0.05)。这一过程伴随着BSMC的JAK/STAT3信号通路的增强(P <0.05)。抑制JAK/STAT3信号通路缓解了IL-17对BSMC的促进增殖和迁移的作用(P <0.05)。【结论】JAK/STAT3信号通路参与了IL-17诱导的BSMC增殖与迁移作用,AG490对IL-17引起的BSMC JAK/STAT3信号通路的增强起到了抑制作用。

JAK/STAT3信号通路及其在胃肠道疾病中作用的研究进展

JAK/STAT3信号通路广泛存在于机体各个组织中,介导细胞增殖、分化、迁移、凋亡、免疫调节等多种生物学过程。近年研究发现该通路激活在胃肠道疾病中起重要作用,可促进胃癌、结直肠癌生长和肿瘤血管生成,并抑制肿瘤细胞凋亡,同时参与炎症性肠病的发生。针对JAK/STAT3信号通路的抑制剂在一些疾病模型中显示出良好的疗效。本文就相关研究进展作一综述。

JAK/STAT3信号通路与骨关节炎研究进展

体内研究发现,Janus激酶/信号转导与转录激活子3(JAK/STAT3)信号通路激活,可参与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂P21(P21)缺乏和细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)等因子对软骨的损害过程;增加I型胶原蛋白α1和间充质干细胞(MSC)数量从而造成软骨下骨硬化;参与P21缺陷引起的滑膜组织炎症。体外研究发现,JAK/STAT3信号通路激活,可通过增加基质金属蛋白酶、I型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶降解细胞外基质促进软骨细胞损伤;分别参与延伸蛋白2(ELP2)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、表皮生长因子样结构域7(EGFL7)调控成骨细胞、破骨细胞分化以及血管形成过程;促进成纤维细胞样滑膜细胞产生S100A8/A9,调节骨关节炎(OA)滑膜细胞周期来促进滑膜炎和OA滑膜细胞的增殖。而在体内体外实验中应用JAK/STAT3信号通路抑制剂可缓解上述过程,发挥抗OA的作用。JAK/STAT3信号通路在软骨破坏、软骨下骨变化和滑膜炎等OA病理变化过程中发挥重要作用,对JAK/STAT3信号通路进行靶向调控可作为治疗OA的潜在研究方向及新靶点。

IL-6/JAK/STAT3信号通路在纤维化疾病中作用的研究进展

组织或器官纤维化是多种疾病的基本病理改变,临床中较为常见的包括肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化和心肌纤维化等。白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)/Janus激酶(Janus kinase,JAK)/信号传导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路是参与调控细胞分化和增殖等生物学功能的重要分子机制。

铁皮石斛多糖对缺血性脑卒中大鼠脑组织JAK/STAT3信号通路的影响

[目的]探讨铁皮石斛多糖(DOP)对缺血性脑卒中大鼠脑组织Janus激酶(JAK)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)信号通路的影响。[方法]以线栓法建立大脑中动脉闭塞大鼠模型。SD大鼠随机分为模型组、DOP低剂量(25μg/g)组、DOP中剂量(50μg/g)组、DOP高剂量(100μg/g)组、依达拉奉组,每组12只;另取12只SD大鼠设为假手术组。经药物干预后,以Longa分级法对各组大鼠进行神经功能缺损评分;通过三苯基氯化四氮唑染色检测大鼠脑梗死情况;苏木精-伊红染色观察大鼠海马神经组织病理形态变化;酶联免疫吸附法检测大鼠脑组织炎性细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、环氧合酶2(COX-2)、白细胞介素6(IL-6)水平;Western blot检测大鼠脑组织JAK/STAT3信号通路相关蛋白表达水平。[结果]与假手术组相比,模型组大鼠海马神经元皱缩、变小,变性坏死,结构破损,排列紊乱,且数目明显减少,海马神经组织整体呈现明显病理损伤,神经功能缺损评分、脑梗死面积、脑组织IFN-γ、COX-2及IL-6水平、p-JAK/JAK、p-STAT3/STAT3明显升高(P<0.05)。与模型组相比,药物处理组大鼠海马神经组织病理损伤减轻,神经功能缺损评分、脑梗死面积、脑组织IFN-γ、COX-2及IL-6水平、p-JAK/JAK、p-STAT3/STAT3均降低,且DOP各组之间呈剂量依赖性(P<0.05)。DOP高剂量组与依达拉奉组比较,大鼠各指标均无明显变化(P>0.05)。[结论]DOP可抑制缺血性脑卒中大鼠JAK/STAT3信号通路激活,减少炎性细胞因子合成分泌,减轻脑部炎症,修复神经功能。

氯化锂对OVX小鼠骨丢失和JAK/STAT3信号通路的影响

目的研究氯化锂(lithium chloride,LiCl)干预对双侧卵巢切除(ovariectomized,OVX)小鼠骨丢失、Janus激酶/信号转导与转录激活子(The janus kinase/signal transducer and activator of tran-ions,JAK/STAT)信号通路及成骨细胞(osteoblast,OB)的影响。方法体内实验:选取8周龄雌性C57BL6/J小鼠24只,分为假手术组(Sham组),OVX组和卵巢切除+氯化锂干预(OVX+LiCl)组。收集动物左右侧股骨及右侧胫骨标本,进行Micro-CT、免疫组织化学和骨生物力学测试。体外实验:处死3日龄C57BL/6小鼠,分离颅骨培养原代OB,分为空白对照组(Control组)和LiCl组进行细胞活性检测、碱性磷酸酶染色、茜素红染色、实时荧光定量PCR检测。结果Micro-CT分析示OVX组骨量减少,骨小梁厚度变薄,骨小梁数量减少,骨小梁分离度增加,LiCl干预显著改善骨丢失。生物力学示OVX组的最大载荷、最大应力均显著低于Sham组(P<0.05),OVX+LiCl组的最大载荷、最大应力较OVX组显著升高(P<0.05)。免疫组化结果示,OVX+LiCl组JAK2和STAT3表达显著高于Sham组(P<0.05);OVX组P-STAT3表达明显低于Sham组(P<0.05),而OVX+LiCl组表达显著升高(P<0.05)。LiCl组的OB增殖活性显著高于对照组(P<0.05)。LiCl组的碱性磷酸酶活性和钙结节数量显著高于OVX组(P<0.05)。LiCl组STAT3 mRNA和OCN mRNA表达显著高于对照组(P<0.05)。结论LiCl通过调控OB改善OVX小鼠骨量和骨微结构,其机制可能与调节JAK/STAT3信号通路有关。

NLRP3炎症小体对脓毒症大鼠肠道炎症与损伤及JAK/STAT3信号通路的影响

目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体通过JAK/STAT3信号通路对脓毒症大鼠的肠道炎症反应和肠粘膜损伤的作用机制。方法:选择健康清洁级雄性Wistar大鼠30只,随机分为三组:假手术组、模型组与NLRP3抑制剂组,各10只,模型组和抑制剂组采用盲肠结扎穿孔术进行造模,抑制剂组于造模前30 min腹腔注射NLRP3抑制剂MCC950(10 mg/kg),模型组注射等量生理盐水。观察各组大鼠24 h的生存情况,HE染色进行回肠病理评分,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β),Western blot法检测小肠组织NF-κB p65、NLRP3、凋亡相关斑点蛋白(ASC)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、p-JAK和p-STAT3蛋白表达量。结果:(1)与假手术组相比,模型组大鼠的死亡率和病理评分显著增加,血清TNF-α和IL-1β水平升高,组织NF-κB p65、NLRP3、ASC、Caspase-1、p-JAK和p-STAT3蛋白的相对表达量均显著增加(P<0.05)。(2)与模型组相比,抑制剂组大鼠的死亡率和病理评分显著降低,血清TNF-α和IL-1β水平,组织NF-κB p65、NLRP3、ASC、Caspase-1、p-JAK和p-STAT3蛋白的表达量显著下降(P<0.05)。抑制剂组与假手术组相比,上述指标间仍存在显著的统计学差异(P<0.05)。结论:NLRP3炎症小体可能通过活化JAK/STAT3信号通路增强脓毒症大鼠的肠道炎症反应,损伤肠道黏膜,靶向干预NLRP3能够逆转肠道损伤。

基于miR-155/JAK2/STAT3信号通路探讨仙茅苷减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤作用机制

目的探讨仙茅苷对心肌缺血再灌注(I/R)大鼠心肌损伤的改善作用及对微小RNA(miR)-155/Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导及转录激活蛋白3(JAK2/STAT3)信号通路的调节作用。方法将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、仙茅苷组、miR-155过表达组和miR-155过表达+仙茅苷组。除假手术组外,其余组大鼠采用冠状动脉左前降支结扎法建立心肌I/R模型,仙茅苷组和miR-155过表达+仙茅苷组大鼠于建模前6 d腹腔注射仙茅苷50 mg/kg,1次/d;miR-155过表达组和miR-155过表达+仙茅苷组大鼠于建模前在左心室上取3个位点注射miR-155 mimic。再灌注24 h后超声心动图检测心功能,TTC染色检测心肌梗死面积,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测心肌组织中miR-155表达水平,苏木精-伊红(HE)染色观察心肌损伤病理表现,ELISA检测血清中肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,蛋白质免疫印迹法检测心肌组织中p-JAK2和p-STAT3蛋白相对表达量。结果与模型组比较,仙茅苷组心肌组织miR-155水平降低,心肌梗死面积减小,左室射血分数(LVEF)和左室缩短分数(LVFS)升高,左室舒张末期内径(LVESD)和左室收缩末期内径(LVEDD)减小,血清中CK-MB、cTnT、LDH水平下降,心肌组织中p-JAK2和p-STAT3蛋白相对表达量升高,而miR-155过表达组以上各指标变化趋势相反(均P<0.05);与miR-155过表达+仙茅苷组比较,miR-155过表达组miR-155水平升高,心肌梗死面积增大,LVEF和LVFS降低,LVESD和LVEDD增大,血清中CK-MB、cTnT、LDH水平上升,p-JAK2和p-STAT3蛋白相对表达量降低,而仙茅苷组以上各指标变化呈相反趋势(均P<0.05)。结论仙茅苷可减轻大鼠心肌I/R损伤,改善心功能,其可能通过抑制miR-155表达从而上调JAK2/STAT3信号通路发挥作用。

基于Hepcidin和JAK2/STAT3信号通路探讨通痹颗粒 对胶原诱导性关节炎大鼠的影响

目的研究通痹颗粒对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠铁调素(hepcidin,Hepc)、Janus激酶(janus kinase,JAK)2/信号转导子和转录激活子(signal transduction and activator of transcription,STAT)3信号通路的影响。方法选取36只雌性SD大鼠随机分成空白组、模型组、阳性对照组和通痹颗粒低、中、高剂量组,每组6只。空白组不予处理,其余组用牛Ⅱ型胶原建立CIA模型。造模完成后,空白组、模型组予生理盐水灌胃,其余各组分别以巴瑞替尼片和低、中、高剂量通痹颗粒灌胃。每天1次,连续4周。HE染色行滑膜组织病理学观察;酶联免疫吸附法测定血清Hepc、白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)水平;逆转录-聚合酶链反应法测定滑膜中JAK2、STAT3、细胞信号因子传导抑制体(suppressor of cytokine signaling,SOCS)1、SOCS3的mRNA相对表达量;Western blot法检测滑膜中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS1、SOCS3的蛋白表达量。结果模型组见滑膜上皮结构缺损,滑膜重度增生,排列紊乱,并有大量炎症细胞浸润和多个血管翳形成;各给药组滑膜炎症均有所减轻,阳性对照组优于通痹颗粒高剂量组,通痹颗粒中、高剂量组优于低剂量组。与模型组相比,各给药组关节炎指数评分、血清Hepc和IL-6水平均显著降低(P<0.01);与阳性对照组相比,通痹颗粒中、低剂量组关节炎指数评分、血清Hepc和IL-6水平均升高(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组和通痹颗粒低、中、高剂量组JAK2、STAT3 mRNA和蛋白以及p-JAK2、p-STAT3的蛋白表达量均降低(P<0.05),而通路抑制因子SOCS1、SOCS3 mRNA和蛋白的表达均升高(P<0.05);与阳性对照组比较,通痹颗粒各剂量组JAK2、STAT3 mRNA和蛋白以及p-JAK2、p-STAT3的蛋白表达量均升高(P<0.05),而SOCS1、SOCS3 mRNA和蛋白的表达均降低(P<0.05)。结论通痹颗粒能够改善CIA大鼠滑膜炎症,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路而减少Hepc的表达有关。