补阳还五汤通过调控PI3K/Akt、JAK2/STAT3信号促进BMSC趋化迁移对外伤性脊髓损伤大鼠神经元活性及认知功能的影响

目的研究补阳还五汤通过调控磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)、内源性酪氨酸激酶(JAK)2/信号传导和转录启动因子(STAT)3信号促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)趋化迁移对外伤性脊髓损伤大鼠的神经元活性及认知功能的影响。方法选取健康大鼠53只,随机分为健康组(健康大鼠常规饲养)、损伤组(建立脊髓损伤模型)、干预组(补阳还五汤治疗)、对照组(甲泼尼龙治疗),每组12只,剩余5只大鼠用于补阳还五汤含药血清制备。流式细胞术鉴定BMSCs细胞。Transwell小室法测大鼠BMSCs迁移。高架十字迷宫和Morris水迷宫实验检测大鼠认知功能。苏木素-伊红(HE)染色检测脊髓组织病理形态。TUNEL测脊髓组织神经细胞凋亡。免疫组化检测p-JAK2、p-STAT3。Western印迹测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt。结果传代后的培养细胞呈旋窝状或放射状贴壁生长,细胞多呈星形、梭形或三角状,培养3代后,细胞贴壁加快、形态均一,呈旋窝状或单层放射状生长。培养细胞表面抗原CD29、CD90为阳性,CD31、CD45为阴性,提示其为BMSCs细胞。与健康组相比,损伤组总路程、进入开臂次数、穿越平台次数显著降低,不同时间的潜伏期显著升高(P<0.05)。与损伤组相比,干预组与对照组总路程、进入开臂次数、穿越平台次数显著升高,不同时间的潜伏期显著降低(P<0.05)。干预组与对照组各指标对比无统计学差异(P>0.05)。健康组脊髓组织结构完整。损伤组脊髓组织疏松水肿,有细胞空泡变性产生。相较于损伤组,干预组与对照组大鼠脊髓组织病理形态有所改善。与健康组相比,损伤组BMSCs、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt显著降低,神经细胞凋亡率、p-JAK2、p-STAT3显著升高(P<0.05)。与损伤组相比,干预组BMSCs、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt显著升高,神经细胞凋亡率、p-JAK2、p-STAT3显著降低(P<0.05)。干预组与对照组各指标水平无统计学差异(P>0.05)。结论补阳还五汤通过激活PI3K/Akt通路抑制JAK2/STAT3信号通路的激活,促进BMSCs的迁移,减轻神经细胞的凋亡,起到神经保护的作用,从而改善脊髓损伤大鼠的认知功能。

PCV2感染后JAK-STAT信号通路的基因差异表达分析

JAK-STAT信号通路是阐明细胞因子生物学功能及病毒如何发挥作用的分子基础,但对于猪圆环病毒2型(PCV2)感染及病毒复制的作用机制,目前尚无报道。本研究采用PCR列阵方法,建立PK-15细胞JAKSTAT信号通路的功能分类芯片,分析JAK-STAT信号通路中所有已知的Jak和Stat家族成员、激活JAK-STAT信号通路的受体,以及与Stat蛋白相关的核辅助因子及共同活化因子、Stat诱导蛋白及该通路的负反馈调节蛋白等基因在PCV2感染后的差异表达情况,为进一步明确PK-15细胞JAK-STAT信号通路对病毒复制力和复制机制奠定基础。

黄芩多糖通过调节JAK 2/STAT 3通路和IL-23/IL-17炎性轴改善DSS诱导的UC模型小鼠的炎症

【目的】研究黄芩多糖对溃疡性结肠炎小鼠(UC)肠道炎症的影响及其机制。【方法】选用C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组以及黄芩多糖低、中、高剂量组(10只/组)。观察小鼠日常状态并记录疾病活动指数(DAI)评分。酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中细胞因子白细胞介素-6、17、23(IL-6、IL-17、IL-23)的表达。处死小鼠,HE观察小鼠肠黏膜损伤情况记录结肠组织损伤指数(TDI)评分,Western blot法和免疫组化法检测Janus激酶2(JAK2)、信号转导因子和转录激活因子(STAT3)、p-JAK2、p-STAT3蛋白的表达水平。【结果】与空白组相比,模型组小鼠DAI评分升高,血清中IL-6、IL-17、IL-23含量升高,结肠组织p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值升高,p-JAK2、p-STAT3表达量升高。与模型组相比,各给药组小鼠DAI评分降低;血清中IL-6、IL-17、IL-23含量降低,TDI评分降低,结肠组织p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值降低,p-JAK2、p-STAT3表达量降低。【结论】黄芩多糖可能通过JAK2/STAT3通路和IL-23/IL-17炎性轴改善UC小鼠的炎症。

酪氨酸激酶2抑制剂治疗斑块型银屑病机制与临床研究进展

斑块型银屑病是一种免疫相关的慢性炎症性皮肤病,较为常见,疾病负担重,严重影响患者身心健康。近十余年,生物制剂治疗银屑病取得了突破性进展,但安全高效的靶向口服药物仍有待开发。JAK-STAT信号转导途径通过转导细胞因子信号,在多种免疫相关疾病发生发展中具有重要作用。在JAK家族成员中,酪氨酸激酶2已被证实可以通过转导白介素-12/23、干扰素及其下游信号通路,参与斑块型银屑病的发生发展,是较为理想的药物靶点。高度选择性酪氨酸激酶2抑制剂氘可来昔替尼Ⅲ期临床试验显示出良好的疗效和安全性,已获美国食品药品管理局批准用于口服治疗斑块型银屑病,另有多种酪氨酸激酶2抑制剂目前正在研发中。本文介绍了JAK-STAT通路及酪氨酸激酶2参与斑块型银屑病发病的机制,及酪氨酸激酶2抑制剂在斑块型银屑病治疗领域的临床试验现状。

常见JAK2基因突变的筛检及在BCR-ABL阴性骨髓增殖病中的临床意义

目的建立多重等位基因特异性聚合酶链反应检测JAK2基因5种常见突变的方法,并评价在3种常见的骨髓增殖性疾病中的临床意义。方法对149例BCR-ABL融合基因为阴性的骨髓增殖性疾病(MPD)患者,包括73例真性红细胞增多症(PV)、51例原发性血小板增多症(ET)和25例原发性骨髓纤维化(IMF)患者;并结合临床及实验室其他检查资料,对其在该类疾病诊断和鉴别诊断中的价值进行评估。20名急性白血病患者和15名健康志愿者作为对照组进行研究。所有病例的骨髓或外周血标本抽提DNA后用建立的多重PCR方法进行平行检测。结果①149例MPD患者中共检出118例患者存在JAK2基因突变,总突变率为79.2%。其中PV患者阳性68例,JAK2V617F突变65例、JAK2exon12突变3例,阳性率93.2%(68/73);ET患者检测出阳性35例,其中34例为V617F突变,JAK2exon12突变1例,阳性率为68.6(35/51);IMF患者阳性15例,均为JAK2V617F突变,阳性率为60%(15/25)。②JAK2突变阳性的MPD患者和突变阴性MPD的临床资料相比较,两组在患者性别,发病年份方面的差异无统计学意义。研究发现两组PV患者的白细胞[(19.5士7.6)×109/L vs(7.1土1.1)×109/L,P=0.0005]、血小板计数[(498士172)×109/L vs(206士114)×109/L,P=0.0004]、ET患者的血红蛋白[(152士18)g/L vs(112士11)g/L,P<O.OO01]、白细胞计数[(16.2士5.2)×109/L vs(9.3士3.4)×109/L,P<0.0001]以及IMF患者的白细胞[(15.1士3.8)×109/L vs(9.3土1.6)×109/L,P=0.0001]差异均有统计学意义。结论建立的多重PCR方法可以同时检测5种JAK2基因突变,可在临床上推广使用。与JAK2突变阴性的MPD患者相比较,突变阳性的患者有更明显的骨髓增殖紊乱特征。

miR-153靶向PRDM2基因并通过JAK/STAT信号通路影响膀胱癌的侵袭和迁移

目的:研究微小RNA(miR)-153是否靶向正性调控域锌指蛋白2(PRDM2)基因并通过调控JAK/STAT信号通路影响膀胱癌细胞的侵袭和迁移。方法:运用q PCR检测miR-153在膀胱癌组织中的表达;运用免疫组化检测PRDM2在正常组织和膀胱癌组织中的表达;Western blot检测不同膀胱癌细胞株中PRDM2的表达情况;双萤光素酶报告基因系统检测miR-153对PRDM2转录活性的影响;Transwell侵袭实验检测miR-153过表达对膀胱癌细胞RT4侵袭能力的影响;划痕实验检测miR-153过表达对膀胱癌细胞RT4迁移能力的影响;Western blot实验检测过表达miR-153后JAK/STAT信号通路蛋白的水平。结果:和正常组织比较,PRDM2蛋白在膀胱癌中表达较高(P<0.05);miR-153的表达水平在膀胱癌组织中较低(P<0.05);双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-153可以调控PRDM2的表达水平;过表达miR-153后,膀胱癌细胞株RT4的侵袭和迁移能力明显降低,p-JAK2和p-STAT3的蛋白水平下调。结论:miR-153靶向PRDM2,并通过JAK/STAT信号通路调控膀胱癌细胞的侵袭和迁移能力。

低氧预处理激活神经元细胞JAK/STAT并促进血管内皮生长因子受体-2的表达

目的研究低氧预处理对神经元细胞Janus激酶(JAK)/信号转导和转录激活因子(STAT)信号通路以及血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)表达的影响。方法将培养的小鼠神经元细胞分为细胞对照组、细胞类缺血组和细胞低氧预处理组,细胞类缺血组细胞经95%NO2+5%CO2混合气体处理30min,细胞低氧预处理组细胞于89%N2、l%O2和10%CO2环境中处理8次,每次20min,2d后进行类缺血处理。定量分析各组细胞中VEGFR-2、JAK及STAT蛋白磷酸化(p-STAT)的表达变化。细胞转染JAK特异性小干扰RNA(siRNA),之后进行低氧预处理和类缺血处理,检测p-STAT和VEGFR-2的表达。另取45只BALB/c小鼠分为动物对照组(n=8)、动物对照+血管内皮生长因子(VEGF)组(n=7)、动物脑缺血组(n=8)、动物脑缺血+VEGF组(n=7)、动物低氧预处理组(n=8)和动物低氧预处理+VEGF组(n=7),分析各组海马神经元细胞pSTAT和VEGFR-2的表达,并检测细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase 3)的活化情况。结果与细胞对照组相比较,细胞类缺血组细胞中VEGFR-2mRNA表达显著下调(P<0.05);与细胞类缺血组相比,细胞低氧预处理组细胞VEGFR-2mRNA表达上调(P<0.05),并促进JAK mRNA和蛋白的表达(P<0.05)以及STAT蛋白的活化(P<0.05)。与非特异性转染组相比,JAK沉默组细胞p-STAT和VEGFR-2的表达显著降低(均P<0.05)。在小鼠体内,脑缺血降低p-STAT和VEGFR-2的表达(P<0.05),而低氧预处理则可有效逆转缺氧对p-STAT和VEGFR-2的抑制(P<0.05)。与动物脑缺血+VEGF组相比,动物低氧预处理+VEGF干预可显著抑制caspase3的活化(P<0.05)。结论低氧预处理可以激活神经元细胞JAK/STAT信号通路并诱导VEGFR-2的表达,并增强VEGF的神经保护作用。

基于JAK/STAT信号通路的中药治疗慢性萎缩性胃炎药理机制研究进展

现关于中医药干预慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)的临床研究和基础实验研究已成为消化系统疾病中的研究热点。Janus蛋白酪氨酸激酶(Janus protein tyrosine kinase,JAK)/信号转导子与激活子(signal transducer and activator of transcription,STAT)信号通路的状态与消化道疾病的发生与进展十分密切。诸多研究表明中药可通过多种机制调控该信号通路干预CAG的进展,大致可分为以下几个方面:通过抑制JAK2/STAT3、核转录因子-κB/STAT1通路激活或促使白介素-4(interleukin-4,IL-4)/STAT6激活达到干预CAG的目的;同时降低IL-6、IL-1β等相关炎症因子表达,不仅可抑制相关通路激活,亦可起到减轻胃黏膜炎症的作用;再者上调抑癌基因p21、下调原癌基因表达防止受损的胃黏膜进一步恶化;最后还可调节生存素、B淋巴细胞瘤2家族调控细胞凋亡/增殖平衡机制逆转胃黏膜萎缩及肠化生。

SOCS-2和SOCS-3通过IGF-1和GH信号转导系统作用于成肌细胞的分化(英文)

新近发现的细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)家族,因其能够通过Janus激酶—信号传导和转录激活子(JAK-STAT)信号传导通路来反馈调节生长因子的信号或者抑制细胞因子的信号转导而倍受研究人员重视。一些研究表明,SOCS-3在促进成肌细胞分化和抑制白介素6(IL-6)导致的细胞炎症过程中具有重要的作用。综合大量关于细胞因子信号转导抑制因子家族的文献报道,文章分析了近几年SOCS-2和SOCS-3与IGF-1和GH信号转导关系的研究,特别是关于SOCS-3在成肌细胞分化过程中的研究,认为可以将SOCS-2和SOCS-3作为细胞内生长信号调节和促进动物肌肉发育的潜在因子进行研究。

IL-2对视网膜色素上皮细胞外基质合成的影响

目的探讨炎症因子白介素-2(IL-2)对视网膜色素上皮(RPE)细胞发生上皮间质转分化(EMT)和细胞外基质(ECM)合成的影响。方法采用10 μg/L IL-2诱导RPE细胞,在相应时间点用Real-time PCR和Western blot方法检测EMT特异性指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、ECM主要成分Ⅰ型胶原纤维(COL-1)和纤维连接蛋白(Fn)、转化生长因子β2 (TGF-β2)mRNA及蛋白的表达和JAK/STAT3信号通路的激活。进而用WP1066特异性阻断JAK/STAT3信号通路,观察α-SMA、COL-1、Fn和TGF-β2 mRNA及蛋白的表达变化。结果 RPE细胞经10 μg/L IL-2诱导后,Fn、COL-1、TGF-β2 mRNA与蛋白的表达及p-STAT3/STAT3明显增高( P < 0.05 ),且这种作用随IL-2处理时间增加而增强,而α-SMA mRNA和蛋白表达则无明显变化。JAK/STAT3抑制剂WP1066能有效抑制IL-2诱导的RPE细胞中Fn、COL-1和TGF-β2 mRNA和蛋白的表达。结论 IL-2能通过 JAK/STAT3 信号通路促进RPE细胞ECM合成以及TGF-β2的表达,可能在增殖性玻璃体视网膜病变中起重要作用。

护肝布祖热对CCl4诱导人肝星状细胞LX-2活化的作用及机制研究

目的探讨护肝布祖热(HGBZR)抗肝损伤的作用及机制。方法体外培养人肝星状细胞LX-2,采用MTT法检测LX-2细胞存活率以确定四氯化碳(CCl)造模浓度和药物干预浓度。细胞实验分为6组:空白组、模型组、阳性组(水飞蓟素,10μg·mL)及HGBZR低、中、高剂量组(5、10、20μg·mL),除空白组以外,其余各组分别加入终浓度5 mmol·L^(-1)CCl损伤干预24 h,然后再进行药物干预24 h。采用MTT法检测各组细胞存活率;Annexin V/PE双染法检测细胞凋亡率;qRT-PCR法检测各组细胞α-平滑肌动蛋白(SMA)、TIMP-1、PTP1B、转化生长因子(TGF)-β、Smad3、Smad4、Smad7、CHOP、PERK、IRE1、ATF6 mRNA表达情况;Western Blot法检测各组细胞Jak1、Stat3、TGF-β、Smad3、Smad4、Smad7、CHOP、Caspase12、核因子(NF)-κB p65蛋白表达情况。结果随着CCl浓度(5~30 mmol·L^(-1))升高,LX-2细胞存活率逐渐下降,当CCl浓度为5 mmol·L^(-1)时细胞呈现增殖状态,故选择5 mmol·L^(-1)CCl处理24 h作为肝损伤模型复制条件。与模型组比较,HGBZR中、高剂量组的细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均明显升高(P<0.05);LX-2细胞的α-SMA、TIMP-1、TGF-β、Smad3、Smad4、CHOP、PERK、IRE1、ATF6 mRNA表达水平明显降低(P<0.05),PTP1B、Smad7 mRNA表达水平明显升高(P<0.05);LX-2细胞的Jak1、Stat3、TGF-β、Smad4、CHOP、Caspase12及NF-κB p65(核蛋白)蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Smad7、NF-κB p65(质蛋白)蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Smad3蛋白表达水平无明显变化(P>0.05)。结论HGBZR可能通过调控TGF-β/Smad、Jak/Stat和内质网应激信号通路相关目标基因转录水平及蛋白表达,促进活化LX-2细胞的凋亡,对CCl诱导的化学性肝损伤具有一定保护作用。

微小RNA-375对腰椎间盘突出大鼠JAK2/STAT3信号通路的影响

目的分析微小RNA-375(miR-375)对腰椎间盘突出大鼠JAK激酶2(JAK2)/信号传导及转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法选取20只8周龄雄性SD大鼠开展研究,通过硬膜外自体髓核移植法成功建立腰椎间盘突出大鼠模型18例,采用随机数字表法分为A组、B组、C组,每组各6例。取各组大鼠髓核组织,A组和B组采用Lipofectamine 2000脂质体分别转染miR-375模拟物和miR-375阴性对照,C组不转染。3组标本均培养48 h,分别于3、6、12、24、48 h时检测并比较各组细胞凋亡率、迁移率、侵袭个数,并比较培养48 h后各组白细胞介素(IL)-1β、IL-1、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)水平。结果随着培养时间的延长,各组细胞凋亡率、细胞迁移率均呈现增长趋势,培养3~48 h内A组的细胞凋亡率、细胞迁移率均低于B组和C组;随着培养时间的延长,各组细胞侵袭个数均呈现增多趋势,培养3~48 h内A组的细胞侵袭个数少于B组和C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。培养48 h后A组和B组的IL-1β、IL-1、IL-6、TNF-α水平均高于C组,但A组低于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。培养48 h后A组的JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3水平均低于B组和C组,且A组低于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-375高表达可通过抑制JAK2/STAT3信号通路,抑制间盘细胞侵袭、迁移和凋亡,缓解炎症反应。

三穗麻鸭JAK2基因克隆与序列分析研究

为了解三穗鸭JAK2基因特征,采用分段PCR方法获取三穗麻鸭JAK2基因并进行克隆与测序,应用生物信息学相关软件进行基因分子特征分析。结果:三穗麻鸭JAK2基因全长3 393 bp,可编码1 131个氨基酸;与原鸡的核苷酸序列同源性达94.5%,氨基酸同源性达97.6%;进化树分析显示,该基因与鸡属动物亲缘关系最近。

COX-2/PGE2激活JAK/STAT3信号通路调控人口腔癌KB细胞增殖侵袭和转移

目的:探讨COX-2在人口腔癌KB细胞中的表达量及其调控癌细胞增殖、侵袭和转移的作用机制。方法:利用qRT-PCR和Western blot检测COX-2在人口腔癌和癌旁正常组织、人口腔癌KB细胞和人口腔上皮HIOEC细胞中的差异表达。通过慢病毒转染,建立COX-2高表达的KB细胞系或加入COX2抑制剂(塞来昔布)后,RT-qPCR和Western blot检测细胞系中COX-2的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞的侵袭能力,Western blot分析细胞内EMT相关蛋白的表达,ELISA方法检测细胞培养液中PGE2的含量,Western blot检测KB细胞系JAK、p-JAK、STAT3和pSTAT3蛋白的表达。PGE2受体PTGER2抑制剂(AH6809)或JAK/STAT3通路抑制剂(AG490)作用KB细胞系后,检测KB细胞增殖、侵袭和EMT能力。结果:与癌旁正常组织相比,人口腔癌组织中COX-2表达明显升高(P<0.05),与HIOEC细胞相比,KB细胞中COX-2表达明显升高(P<0.01)。成功构建了COX-2高表达的KB细胞系,过表达COX-2促进了KB细胞增殖、侵袭与EMT,使p-JAK和p-STAT3蛋白表达明显上升,且上调了细胞培养液中PGE2表达。AH6809或AG490作用KB细胞能明显抑制COX-2对KB细胞增殖、侵袭和EMT的促进作用。结论:COX-2/PGE2激活JAK/STAT3信号通路促进人口腔癌KB细胞增殖、侵袭和EMT。

通心络上调CXCR4信号通路增强冠心病患者血管内皮祖细胞功能

目的血管内皮祖细胞功能受损与冠心病的发病、预后密切相关,CXCR4信号通路是调控内皮祖细胞功能的重要分子机制。研究中成药通心络治疗对冠心病患者血管内皮祖细胞功能的影响及与CXCR4信号通路的关系,探索通心络防治动脉粥样硬化的细胞分子机制。方法 60个冠心病患者随机分为两组,A组为标准化治疗对照组,给予冠心病标准化治疗3个月;B组为标准化治疗+通心络治疗组,给予冠心病标准化治疗+通心络口服3片/次,3次/d治疗3个月。两组患者在治疗前后抽取外周血分离出单个核细胞体外诱导培养内皮祖细胞。分别检测两组患者内皮祖细胞迁移、黏附功能,以及CXCR4表达和JAK-2磷酸化水平。并检测CXCR4中和抗体、JAK-2抑制剂AG490体外干预后B组内皮祖细胞JAK-2磷酸化水平和迁移、黏附功能。结果 A、B两组患者在治疗后内皮祖细胞迁移、黏附功能以及JAK-2磷酸化水平都较治疗前提高,但B组提高更明显。A、B两组治疗前后内皮祖细胞CXCR4表达均差异无统计学意义。CXCR4中和抗体或AG490体外干预后,B组内皮祖细胞的JAK-2磷酸化被抑制,同时其迁移、黏附功能明显减弱。结论通心络治疗可改善冠心病患者内皮祖细胞功能,与上调CXCR4/JAK-2信号通路有关。

腺病毒介导TFPI基因转染诱导血管平滑肌细胞凋亡机制的探讨

目的研究组织因子途径抑制物(TFPI)基因转染对大鼠血管平滑肌细胞凋亡通路的影响,探讨TFPI诱导细胞凋亡的机制。方法将含有人TFPI基因的重组腺病毒或含β-半乳糖苷酶(LacZ)基因的重组腺病毒或DMEM在体外分别转染大鼠血管平滑肌细胞,用ELISA方法检测转染后平滑肌细胞中TFPI蛋白的表达,Western blot方法测定基因转染后不同时间点细胞中JAK-2、p-JAK-2、STAT-3、p-STAT-3以及cyclinD1的表达。结果基因转染后1天在血管平滑肌细胞中检测到TFPI蛋白的表达,而峰值出现在第3天;基因转染后3、5、7天,各组JAK-2和STAT-3的表达无明显差异(P>0.05),而TFPI组p-JAK-2、p-STAT-3以及cyclinD1的表达与对照组相比明显减少(P<0.05),且具有明显的时间依赖性。结论 TFPI可能通过抑制JAK-2/STAT-3通路来发挥诱导平滑肌细胞凋亡的作用,从而抑制再狭窄发生。

川芎嗪对脂多糖诱导内皮细胞花生四烯酸通路炎症反应的影响

目的研究川芎嗪对脂多糖(LPS)诱导内皮细胞花生四烯酸(AA)通路炎症反应的影响,为拓展川芎嗪临床适应症提供实验依据。方法在LPS(1 mg.L-1,2 h)诱导的原代培养人冠脉内皮细胞上,观察川芎嗪(1和10μmol.L-1,6 h)对COX-2、5-LOX和FLAP蛋白表达的影响;并观察加入LPS同时给予p-p38MAPK抑制剂SB203580(20μmol.L-1,6 h)或JAK2抑制剂AG490(20μmol.L-1,6 h)对上述蛋白表达及p-p38MAPK或p-STAT3蛋白表达的影响。结果川芎嗪可抑制COX-2、5-LOX和FLAP蛋白表达,抑制MAPK和STAT3通路磷酸化激活。结论川芎嗪靶向内皮细胞,抑制AA通路炎症反应,抑制MAPK和JAK2/STAT3通路激活。

JAK/STAT3通路在瘦素促进肺癌细胞增殖机制中的作用

目的:探讨瘦素在促进肺癌细胞增殖过程中的可能机制,并探讨其在肺癌发生发展中的作用。方法:MTT法检测瘦素对肺癌A549细胞的促增殖作用。流式细胞术检测不同浓度瘦素处理组肺癌A549细胞的增殖率。免疫细胞化学法检测经不同浓度瘦素处理的A549细胞中STAT3、p-STAT3及Bcl-2蛋白的表达。结果:STAT3、p-STAT3及Bcl-2蛋白在A549细胞中均有表达。瘦素处理后的A549细胞中STAT3、p-STAT3及Bcl-2的表达随着处理浓度增加而增强,且100ng/mL瘦素处理组表达增加最明显,与对照组比较差异有显著性(P<0.05);瘦素刺激A549细胞24h后增殖效应最明显,且100ng/mL组G2/M期细胞所占的比例较对照组和10ng/mL组显著增加(P<0.05)。结论:瘦素可能通过JAK/STAT3通路,活化STAT3介导抗凋亡基因Bcl-2的过度表达而使肺癌细胞呈持续增殖。

艾灸调节肿瘤免疫抑制效应的实验研究

目的观察艾灸调节肿瘤免疫抑制效应与IL-2受体-Jak-Stat信号转导通路的关系,探讨艾灸调节免疫抑制效应的作用机制。方法将50只Balb/c小鼠随机分为正常对照组、正常艾灸组、荷瘤对照组、艾灸治疗组和艾灸非经穴组等5组,每组各10只。观察艾灸大椎(2mg/壮,2壮/次,共6次)对H22移植性实体瘤诱导免疫抑制效应的影响。采用125I-IL-2放射配基方法观察脾淋巴细胞高亲和IL-2受体数量及亲和力,RT-PCR方法观察脾细胞IL-2受体各亚基及信号分子Jak1、Jak3、Stat5a、Stat5b mRNA表达水平。结果荷瘤对照组脾淋巴细胞中亲和力IL-2R数量明显低于正常对照组;艾灸治疗组中亲和力IL-2R数量较荷瘤对照组明显增加,荷瘤对照组脾淋巴细胞IL-2Rα、IL-2Rβ、Jak1、Stat5a、Stat5b mRNA表达水平与正常对照组比较明显降低;艾灸治疗组IL-2Rα、IL-2Rβ、Jak1、Stat5a、Stat5b mRNA表达水平明显高于荷瘤对照组。各组IL-2Rγ mRNA、Jak3 mRNA表达水平未见显著差异。结论针灸正向调节肿瘤机体非特异性免疫功能低下或受抑状态,与上调淋巴细胞IL-2受体数目及其IL-2Rα、IL-2Rβ和相关信号分子Jak1、Stat5a、Stat5b表达水平有关;但研究结果并未显示出针灸调节肿瘤诱导的免疫抑制效应与Jak3和IL-2Rγ链相关。

JAK激酶抑制剂AG490阻滞乳腺癌MCF-7的侵袭和迁移

目的探讨JAK/STAT3和MAPK/ERK1/2两条信号通路的交联作用及其对乳腺癌MCF-7细胞侵袭迁移的影响机制。方法在乳腺癌MCF-7中,分JAK酶抑制剂AG490未处理组和处理组,Western blot检测磷酸化和非磷酸化STAT3和ERK1/2蛋白的变化,RT-PCR检测STAT3、ERK1/2mRNA的变化,明胶酶谱法检测MCF-7分泌MMP-2、MMP-9的变化,同时应用Transwell小室对细胞侵袭迁移能力进行研究。结果 AG490处理MCF-7细胞后,磷酸化和非磷酸化STAT3和ERK1/2蛋白均减少,STAT3、ERK1/2mRNA转录水平也下降,同时也观察到了AG490能使MCF-7分泌MMP-2和MMP-9减少,从而显著降低了MCF-7细胞的侵袭迁移能力。结论 AG490可阻断JAK/STAT3和MAPK/ERK1/2两条信号通路,抑制MCF-7细胞分泌MMP-2和MMP-9,从而抑制了其侵袭迁移。