IL-1β通过JAK2-STAT3促进大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成

目的探讨IL-1β促进脊髓损伤后胶质瘢痕形成的机制。方法将大鼠随机分为模型组(采用钳夹脊髓的方法建立SCI模型)、假手术组(sham group)、IL-1β特异性抑制剂组(IL-1RA)、IL-1β组(IL-1β)及IL-1β+JAK2-STAT3特异性抑制剂组(IL-1β+AG490)。假手术组只打开椎板,不作其他处理。在术后相应时间点(术后8及12 h和1、3、7及14 d)进行大鼠后肢BBB评分,用Western blot、免疫荧光和免疫组化技术检测GFAP、vimentin、p-STAT3的表达变化。结果 p-STAT3(术后第8 h和第12 h)及GFAP、vimentin(术后第7和第14天)表达趋势:模型组显著高于假手术组(P<0.01),IL-1RA组明显低于模型组(P<0.05),但仍高于假手术组(P<0.05);IL-1β+AG490组明显低于模型组(P<0.05),但仍高于假手术组(P<0.05);IL-1β组均显著高于模型组(P<0.05)。术后第14天,BBB评分模型组显著低于假手术组(P<0.01),IL-1RA组显著高于模型组(P<0.05),但仍低于假手术组(P<0.01);IL-1β组显著低于模型组(P<0.05)。结论 IL-1β可通过JAK2-STAT3促进脊髓损伤后胶质瘢痕形成,抑制IL-1β或JAK2-STAT3可减弱胶质瘢痕形成,促进脊髓神经功能恢复。

JAK_2-STAT_3信号通路在白介素-1β经动脉外膜给药致平滑肌细胞增殖迁移中的作用

目的研究白细胞介素-1β经血管外膜给药导致动脉平滑肌细胞发生的改变及其与JAK2-STAT3信号通路的关系,明确JAK2-STAT3信号通路在血管增殖性病变中的作用。方法 6～8周龄SD雄性大鼠24只,分离左侧颈总动脉,实验组(n=18)血管外膜包裹含白介素-1β2.5μg的琼脂缓释悬液,对照组(n=6)包裹不含白介素的琼脂悬液,术后2、8、24、48 h,1、2周分别处死实验组大鼠3只,对照组1只,血管标本经切片HE染色观察形态,Western blot法检测JAK2、STAT3、磷酸化JAK2以及磷酸化STAT3的表达,免疫组化标记定位磷酸化JAK2及磷酸化STAT3;另取SD雄性大鼠9只,分离两侧颈总动脉,左侧滴加JAK2抑制剂AG490缓释凝胶,右侧滴加等量空白凝胶后两侧均包裹等量白介素-1β,术后8、48 h,1周处死动物分别行HE染色及Western blot检测。结果白介素-1β包裹血管外膜后出现血管平滑肌细胞的增殖、迁移,通道蛋白JAK2、STAT3在不同时间点出现不同程度的磷酸化,经Western blot检测并行灰度分析,p-JAK2相对灰度值对照组(0.337±0.216),8 h组(1.764±0.513),1周组(0.451±0.229);p-STAT3相对灰度值对照组(0.125±0.870),24 h组(1.909±0.309),2周组(0.448±0.516),各组间有明显差异(P<0.05)。加用抑制剂后,8 h组p-JAK2相对灰度值实验侧(0.085±0.031),对照侧(1.416±0.468),48 h组p-STAT3相对灰度值实验侧(0.460±0.065),对照侧(2.425±0.638),提示JAK2、STAT3的磷酸化水平被明显抑制(P<0.05),平滑肌细胞变化程度下降。结论炎性因子白细胞介素-1β经动脉外膜给药可致动脉平滑肌细胞增殖、迁移,这种改变与JAK2-STAT3信号通路有直接关系。

阿帕替尼通过ERK/JAK2-STAT3途径对MDA-MB-468荷瘤动物模型肿瘤细胞生长抑制和凋亡的影响及其作用机制探讨

目的:探究阿帕替尼(APA)通过ERK/JAK2-STAT3途径对三阴性乳腺癌(TNBC)模型的影响和作用机制。方法:通过皮下注射MDA-MB-468细胞构建荷瘤裸鼠模型,随机分为对照组、低剂量阿帕替尼组(4.15 mg·kg^(-1),灌胃)和高剂量APA组(8.30 mg·kg^(-1),灌胃),每组各6只。比较各组细胞凋亡、增殖、ERK/JAK2-STAT3水平。结果:高剂量APA组抑瘤率为(31.37±1.95)%,高于低剂量APA组。高剂量APA组细胞凋亡率为(24.52±3.27)%,显著高于低剂量APA组和对照组,P<0.05。高剂量APA组Ki-67染色评分为(4.63±1.26)分,显著低于低剂量APA组和对照组,P<0.05。低剂量APA组和高剂量APA组的血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)、ERK/JAK2-STAT3途径显著低于对照组(P<0.05)。高剂量APA组的VEGFR-2蛋白水平显著低于低剂量APA组(P<0.05)。结论:阿帕替尼可能通过抑制ERK/JAK-STAT通路抑制TNBC进展。

金盏花苷E通过ROS介导的JAK1-stat3信号途径抑制LPS诱发的炎症反应

目的探讨金盏花苷E对脂多糖(LPS)诱导炎症反应的抑制作用及可能的分子机制。方法 CCK-8实验检测不同浓度(0、2、4、6、8、10、20、25、30μg/mL)的金盏花苷E对RAW264.7细胞活力的影响;不同浓度的金盏花苷E(0、6、8、10μg/mL)预处理RAW264.7细胞2 h,然后用LPS(100 ng/mL)刺激细胞特定的时间,ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-1β释放;Western blotting检测iNOS、COX-2的表达水平及JAK-stats、MAPKs及NF-кB信号途径的磷酸化;ROS检测试剂盒检测RAW264.7细胞内ROS含量;激光共聚焦实验检测转录因子stat3的核转位。结果 CCK-8结果显示,金盏花苷E浓度在低于20μg/mL时对RAW264.7细胞无明显毒性作用;金盏花苷E浓度依赖性地下调LPS诱导的iNOS和COX-2的表达(P<0.01 vs LPS组);抑制LPS诱导的促炎细胞因子TNF-α及IL-1β的释放,且1 0μg/mL组抑制作用尤为显著(P<0.01 vs LPS组);抑制LPS诱导的JAK1-stat3信号途径激活及stat3的核转位;降低LPS诱发的ROS产生(P<0.01 vs LPS组)。结论金盏花苷E通过抑制ROS介导的JAK1-stat3信号途径,抑制LPS诱导的炎症反应。

PHA-665752通过下调JAK2/STAT3通路调控PD-L1表达

目的探究索拉非尼(Sorafenib tosylate,SFB)耐药的肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中,程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-L1)的表达调控机制,关注细胞间质上皮转换因子(cellular-mesenchymal epithelial transition factor,c-Met)对PD-L1表达的影响,并寻找克服耐药性的潜在治疗策略。方法利用HepG2 ^(SR)细胞系作为研究对象,该细胞系对索拉非尼具有获得性耐药性,并表现出c-Met和PD-L1的高表达。并通过平板细胞克隆形成实验、Edu-594染色、Transwell小室、Matrigel基质胶、划痕愈合实验和CCK-8评估细胞增殖、迁移和侵袭能力。利用线粒体膜电位检测(JC-1试剂盒)膜电位变化,反映细胞凋亡情况。采用PHA-665752(c-Met的特异性抑制剂),观察其对c-Met磷酸化和PD-L1表达的影响。并通过蛋白免疫印迹研究PHA-665752对JAK2/STAT3信号通路激活的抑制效果,慢病毒介导的基因敲低技术来评估STAT3对PD-L1表达的影响。结果c-Met和PD-L1在HepG2 ^(SR)中高表达,PHA-665752作为c-Met抑制剂不仅能有效降低HepG2 ^(SR)细胞的增殖能力,迁移能力,提高细胞凋亡率,而且PHA-665752还抑制了JAK2/STAT3信号通路的激活。在敲低STAT3的细胞中,PD-L1的表达也相应下降。结论c-Met通过JAK2/STAT3信号通路在调控PD-L1的表达中起着重要作用。

TM4SF1与肺癌细胞JAK2-STAT3信号通路相互作用机制及其在NSCLC中的表达

目的:探讨四次跨膜蛋白1(four transmembrane protein 1,TM4SF1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况及其与NSCLC患者临床病理特征之间的关系。构建高表达TM4SF1的慢病毒表达载体稳定转染肺癌A549细胞,研究TM4SF1与肺癌细胞JAK2-STAT3信号通路的相互作用机制。方法:收集61例NSCLC患者手术切除的癌组织、相应配对的癌旁组织及因良性肺部疾病切除的正常肺组织10例。采用qRT-PCR及Western blot检测NSCLC组织、癌旁组织及正常肺组织中TM4SF1的表达水平。利用慢病毒转染技术在肺癌A549细胞中高表达TM4SF1基因,应用q RT-PCR及Western blot分析TM4SF1基因及JAK2-STAT3信号通路下游Sox2基因的表达水平,采用Transwell检测TM4SF1高表达对A549迁移的影响。结果:癌组织中TM4SF1 mRNA及蛋白表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)及正常肺组织(P<0.05);TM4SF1的表达与患者年龄及性别无明显关联,与肿块的大小、分化程度、淋巴结转移、临床分期相关(P<0.05)。成功在肺癌细胞株中高表达TM4SF1,高表达TM4SF1后对A549细胞的迁移能力明显增强,并且上调JAK2-STAT3信号通路下游Sox2表达水平。结论:TM4SF1在NSCLC中呈现高表达,过表达该基因可以促进A549细胞的迁移并且上调JAK2-STAT3信号通路下游Sox2表达水平。TM4SF1可能通过该通路促进NSCLC的发生发展及远处转移,TM4SF1可能成为NSCLC的潜在治疗靶点。

Th1/Th2免疫平衡偏移介导JAK2-STAT3信号通路参与感染性早产发生机制研究

目的:探讨Th1/Th2免疫平衡偏移情况及JAK2-STAT3信号通路参与感染性早产发生机制。方法:选取就诊于大理大学第一附属医院的60例早产患者为研究对象(早产组),根据产后胎膜组织病理检查结果分为感染性早产组和非感染性早产组,选取同期正常足月分娩的产妇20例为正常对照(正常对照组)。采用酶联免疫吸附测定试剂盒检测各产妇外周血清中干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平,并计算Th1/Th2免疫调节平衡指数;采用免疫组织化学染色法检测胎膜组织中信号转导及转录激活因子3(STAT3)、核因子κB(NF-κB)蛋白的表达情况。结果:IFN-γ、TNF-α表达水平在早产组中显著升高(P<0.05),尤其是在感染性早产组中升高更明显,Th1/Th2免疫平衡具有明显向Th1方向偏移趋势;IL-6表达水平、STAT3及NF-κB蛋白表达水平在感染性早产组中显著升高(P<0.05),非感染性早产组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Th1/Th2免疫平衡可通过TNF-α、NF-κB、IL-6、JAK2-STAT3信号通路参与感染性早产的发生。

生物钟基因Per1对鼻咽癌细胞CNE2侵袭迁移及与JAK2-STAT3通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨生物钟基因Per1对鼻咽癌细胞CNE2侵袭转移及上皮-间质转化(EMT)的影响,并阐述其与JAK2-STAT3信号通路相关蛋白的关系。方法:实时荧光定量PCR法(qPCR)以及蛋白质印迹法(WB)检测CNE2细胞中Per1基因及蛋白水平;构建Per1基因过表达及干扰慢病毒载体并转染CNE2细胞;实验分为过表达组(Per1-OE)、过表达对照组(Per1-OENC)、干扰组(Per1-sh)、干扰对照组(Per1-shNC);利用划痕愈合、Transwell实验检测Per1基因对各组细胞侵袭、迁移能力;WB检测Per1基因对EMT相关蛋白:E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达的影响;WB检测Per1基因对JAK2-STAT3信号通路相关蛋白表达的影响。结果:WB和PCR结果显示:与人永生化鼻咽上皮细胞NP69相比,Per1在鼻咽癌细胞CNE2中表达降低。通过构建Per1基因过表达及干扰慢病毒载体,有效地上调和下调了CNE2中Per1在转录及蛋白水平的表达,并分别成功筛选出稳转细胞株。划痕实验结果显示:Per1-OE组较Per1-OENC组24 h、48 h细胞迁移率均明显下降(P=0.04,P=0.01),Per1-sh组较Per1-shNC组24 h、48 h细胞迁移率均明显升高(P=0.01,P=0.005)。Transwell实验结果显示:Per1-sh组较Per1-shNC组穿过Transwell小室细胞数明显增加(P=0.02),Per1-OE组较Per1-OENC组穿过Transwell小室细胞数明显减少(P=0.001)。WB结果显示:JAK2、p-JAK2、STAT3蛋白在各组细胞中表达无统计学差异(P>0.05)。Per1-sh组较Per1-shNC组p-STAT3、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达下降,E-cadherin表达升高(P<0.05),Per1-OE组较Per1-OENC组p-STAT3、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达均升高,E-cadherin表达下降(P<0.05)。结论:过表达Per1基因后可抑制鼻咽癌细胞CNE2侵袭、迁移,使N-cadherin、Vimentin、p-STAT3蛋白表达下降,E-cadherin表达增加;干扰Per1基因后则相反,进而表明Per1基因在鼻咽癌细胞CNE2中可能扮演着抑癌基因的角色;同时我们推测Per1基因与p-STAT3的表达有一定的相关性,但其具体作用机制有待进一步研究。

毛壳菌素通过作用于JAK2-STAT3信号通路抑制神经母细胞瘤的增殖及迁移

目的探讨毛壳菌素影响神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖和迁移的机制。方法应用DMSO作为对照,与毛壳菌素分别与SH-SY5Y细胞进行孵育,应用荧光定量PCR(RT-qPCR)和WB检测毛壳菌素的靶分子HIF-1α的mRNA相对表达水平以及蛋白表达水平。采用流式细胞术和CCK8实验检测细胞的增殖,利用Transwell试验检测细胞的迁移能力。采用流式细胞术和WB检测JAK2-STAT3信号通路的活化情况。结果人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中HIF-1α的mRNA相对表达量为1.68±0.06,显著高于人正常胶质细胞(0.98±0.05,均P<0.001),SH-SY5Y细胞系HIF-1α的WB检测的蛋白水平相对灰度值为1.81±0.04,显著高于人正常胶质细胞(0.97±0.06,均P<0.001)。毛壳菌素孵育后的SH-SY5Y细胞的Ki-67-high的占比为(35.89±7.23)%,显著低于DMSO对照组[(76.81±5.12)%,P<0.01];Ki-67的平均荧光强度为573.7±80.25,显著低于DMSO对照组(1522±53.41,P<0.001)。CCK8检测细胞的增殖能力,毛壳菌素组在16h,24h和48h的OD450nm值分别为0.25±0.06,0.30±0.02,0.38±0.03,显著低于对照组(0.40±0.05,0.56±0.02,0.77±0.05,P<0.01)。迁移实验结果表明,DMSO对照组的迁移能力显著高于毛壳菌素组,细胞数分别为22816±4267.2和68172±9733.5,P<0.001。WB分析JAK2和STAT3的磷酸化水平,毛壳菌素孵育细胞的p-JAK2和p-STAT3的蛋白相对表达水平显著低于DMSO对照组,差异具有统计学意义(P<0.001)。流式细胞术分析SH-SY5Y细胞的p-JAK2和p-STAT3所占的比例及平均荧光强度,毛壳菌素组显著低于DMSO对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。WB和流式细胞术分别检测IL-6与毛壳菌素共同孵育后的JAK和STAT3的磷酸化水平,IL-6能够逆转毛壳菌素对JAK2和STAT3磷酸化的抑制作用。结论毛壳菌素可能通过抑制HIF-1α,抑制JAK2-STAT3信号通路的活化,从而抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖和迁移。

复方西羚解毒胶囊调控JAK2-STAT3信号通路抗H1N1病毒感染作用

目的:研究复方西羚解毒胶囊抗H1N1病毒感染作用,并探讨其初步作用机制。方法:建模给药后,解剖,测定小鼠肺指数,肺病毒载量,肺组织病理变化,血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)细胞因子分泌水平,肺泡巨噬细胞分型及眼球血CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比例,检测JAK2-STAT3信号通路相关基因mRNA和蛋白表达。结果:与模型组比较,复方西羚解毒胶囊高、中剂量组可显著降低小鼠肺指数(P<0.01),抑制H1N1病毒的复制载量(P<0.01,P<0.05),减轻肺组织病理状况,显著降低TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌(P<0.05,P<0.01),显著升高肺泡巨噬细胞M2抗炎表型的比例(P<0.01),降低外周血CD4^(+)/CD8^(+)T细胞比例(P<0.01),降低IFN-β、JAK2、STAT3、OAS1 mRNA表达(P<0.01,P<0.05),降低p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达(P<0.01)。结论:复方西羚解毒胶囊对H1N1病毒感染具有显著的治疗效果,这可能是通过调节JAK2-STAT3信号通路发挥炎性控制和免疫调节作用实现的。

慢性应激介导Plexin A1-JAK2-STAT3通路刺激VEGF分泌促进胃癌血管生成

目的 探究异丙肾上腺素(ISO)模拟的慢性应激通过神经丛素A1-蛋白酪氨酸激酶2-信号转导与转录激活因子3(Plexin A1-JAK2-STAT3)通路对胃癌血管生成的影响。方法 利用慢病毒或通路抑制剂分别干扰MGC-803胃癌细胞中Plexin A1的表达或JAK2-STAT3信号通路,再联合利用20μmol/L浓度的ISO作用MGC-803细胞12 h后,收集细胞培养液,采用放射免疫法检测MGC-803细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)水平;用MGC-803细胞培养液进一步培养血管内皮细胞EA.hy926,分别利用CCK-8法、Transwell法、血管形成实验检测EA.hy926细胞的增殖、迁移和成管能力;Western印迹检测EA.hy926细胞中Plexin A1、VEGF受体2(VEGFR2)蛋白表达。结果 慢病毒干扰MGC-803细胞Plexin A1后,细胞VEGF分泌水平明显降低;干扰了Plexin A1表达的MGC-803细胞培养液培养EA.hy926细胞后,EA.hy926细胞中VEGFR2和Plexin A1表达明显减少,同时EA.hy926细胞增殖、迁移和成管能力显著降低;抑制MGC-803细胞中JAK2-STAT3信号通路,细胞VEGF分泌水平明显降低;利用MGC-803细胞培养液培养的血管内皮细胞EA.hy926的增殖、迁移和成管能力显著降低。结论 慢性应激通过胃癌细胞Plexin A1-JAK2-STAT3信号通路刺激VEGF分泌,促进胃癌血管生成。

麻杏石甘汤通过JAK1/2-STAT1信号通路改善流感病毒感染所致肺组织与结肠组织损伤

该研究基于Janus激酶1/2-信号转导与转录激活子1(Janus kinase 1/2-signal transducer and activator of transcription 1,JAK1/2-STAT1)信号通路探讨麻杏石甘汤改善流感病毒感染小鼠肺组织与结肠组织损伤的免疫机制。采用流感病毒滴鼻法制备流感病毒感染模型,实验设正常组、模型组、奥司他韦组、抗病毒颗粒组、麻杏石甘汤组。经灌胃给药或生理盐水3、7 d后,常规法检测体质量,计算肺指数、脾指数、胸腺指数;苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)法观察肺组织、结肠组织的病理变化;酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清炎症因子白细胞介素8(interleukin-8,IL-8)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的水平;蛋白免疫印迹(Western blot)法和实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polyme-rase chain reaction,RT-qPCR)法分别检测肺组织、结肠组织中JAK1、JAK2、STAT1、干扰素调节因子9(interferon regulatory factor 9,IRF9)、IFN-γ蛋白和mRNA的表达水平。结果显示,给药3、7 d后,与正常组比较,模型组小鼠体质量、脾指数和胸腺指数显著降低(P<0.05或P<0.01),肺指数显著升高(P<0.01);肺组织充血水肿,大量淋巴细胞及巨噬细胞浸润;结肠黏膜结构不齐,上皮细胞溃疡、脱落,大量炎性细胞浸润;血清炎症因子IFN-γ水平显著升高(P<0.01);肺组织JAK1、JAK2、STAT1、IRF9、IFN-γ蛋白和mRNA的表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01);结肠组织JAK2蛋白表达水平显著升高(P<0.01),STAT1、IRF9蛋白和mRNA的表达水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,麻杏石甘汤组小鼠体质量、脾指数和胸腺指数显著升高(P<0.05或P<0.01),肺指数显著降低(P<0.05或P<0.01);肺、结肠组织病理损伤得到显著改善;血清炎症因子IFN-γ水平显著降低(P<0.05或P<0.01);肺组织JAK1、JAK2、STAT1、IRF9、IFN-γ蛋白和mRNA的表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01);结肠组织JAK2蛋白表达水平显著降低(P<0.01),STAT1、IRF9蛋白和mRNA表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。给药3 d后,模型组小鼠血清炎症因子IL-8水平较正常组显著升高(P<0.01),麻杏石甘汤组小鼠血清炎症因子IL-8水平显著降低(P<0.01)。结果表明,麻杏石甘汤能显著上调体质量、脾指数和胸腺指数,下调肺指数,降低炎症因子IL-8、IFN-γ的水平,下调肺组织JAK1、JAK2、STAT1、IRF9、IFN-γ与结肠组织JAK2、STAT1、IRF9蛋白和mRNA的表达水平,改善肺组织、结肠组织的免疫病理损伤。其可能机制是通过抑制JAK1/2-STAT1信号通路的活化,从而达到减少肺与结肠组织损伤的治疗目的。

猪苓多糖通过JAK2-STAT3通路抑制N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基诱导的GES-1细胞上皮间充质转化

目的研究猪苓多糖抑制胃黏膜上皮细胞(GES-1)间充质转化的作用和机制。方法应用N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基(MNNG,40μmol·L^(−1))诱导GES-1细胞间充质转化模型,造模同时给予猪苓多糖(1.25、2.50、5.00、10.00 mg·mL^(−1))处理24、48 h后,CCK-8法检测细胞增殖能力;造模同时给予猪苓多糖(5.00 mg·mL^(−1))处理48 h后,实时定量PCR(qRT-PCR)法检测猪苓多糖对N-cadherin、Snail、Twist、Fibronection及Vmention mRNA表达的影响;Western blotting法检测E-cadherin、N-cadherin、Snail、Twist、Fibronetin、Vimentin、STAT3、p-STAT3、JAK2、p-JAK2蛋白表达。裸鼠分别sc经MNNG 40μmol·L^(−1)处理48 h后的GES-1细胞(5×10^(7)·mL^(−1),0.2 mL)、胃癌细胞SGC7901(5×10^(7)·mL^(−1),0.2 mL,阳性对照),1个月后观察各组成瘤及体质量情况,注射局部进行HE染色后行组织病理学观察,验证GES-1细胞经MNNG处理后是否达到肿瘤阶段。结果与模型组比较,随猪苓多糖浓度的增加,GES-1细胞增殖能力逐渐上升,到达5 mg·mL^(−1)时增殖能力最高,差异显著(P<0.01、0.001);猪苓多糖组N-cadherin、Snail、Twist、Fironetion及Vimentin的mRNA表达均显著下降(P<0.05、0.01、0.001);猪苓多糖组E-cadherin蛋白表达显著上升(P<0.05),N-cadherin、Snail、Twist、Fibronetion、Vimentin及通路蛋白STAT3、p-STAT3、JAK2、p-JAK2表达显著下降(P<0.05、0.01、0.001)。对照组和MNNG处理的GES-1组未见瘤体形成,阳性对照SGC7901组注射后1周左右局部出现瘤体,1个月瘤体长至6 cm左右;MNNG处理的GES-1组裸鼠精神较差,体质量明显减轻,SGC7901组裸鼠状态差,体质量大幅减轻;对照组和MNNG组病理染色显示为正常的皮肤组织,阳性对照组显示为肿瘤组织。结论猪苓多糖可能通过抑制JAK2-STAT3通路干预MNNG诱导的GES-1细胞上皮间充质化。

白头翁汤治疗溃疡性结肠炎的信号通路机制分析

溃疡性结肠炎(UC)是一种反复发作的炎症性肠病。目前研究认为,其发病与肠道上皮屏障缺陷、肠道菌群失调、免疫应答失调及遗传等因素密切相关。白头翁汤治疗UC具有一定的疗效。白头翁汤及其加减方可通过多种信号通路减少促炎细胞因子的表达,增加机体抗炎因子,促进肠上皮细胞增殖以加速肠上皮修复,保护肠道黏液屏障,减轻肠道炎症反应,从而减少肠上皮细胞异常增殖,避免“炎-癌”的发生。

IL-5诱导CD34^+造血干细胞嗜酸性粒细胞分化的信号传导机制研究

目的应用体外实验探讨骨髓中CD34^+细胞定向分化为EOS的信号传导机制。方法应用MiniMACS磁性分离仪从体外脐血干细胞中分离CD34^+细胞并应用流式细胞仪进行鉴定,将分离出的细胞进行培养并分成4组,即阴性对照组,定向分化组,和两种信号抑制组。各组细胞培养28d后应用westernblot检测JAK1,STAT2的表达强度,同时观察各组CD34^+分化为EOS的能力及EOS体外的活性。结果在IL-5诱导下CD34^+细胞培养至第28d时,EOS细胞已经占总细胞的87.2%左右,与B组比较,C组细胞在JAK1、STAT2表达强度、ES比例、EPO活性、Eos脱颗粒能力差异均有统计学意义(P<0.05),与C组比较,D组细胞在STAT2表达强度、ES比例、EPO活性、Eos脱颗粒能力差异均有统计学意义(P<0.05)。结论体外实验CD34^+细胞定向分化为EOS是通过JAK1-STAT2途径介导的。JAK1-STAT2途径不但介导了EOS细胞数量上的增加,而且介导了EOS细胞活性的增强。

生长抑素阻断瘦素诱导肝星状细胞增殖及基质分泌的分子机制

目的:研究生长抑素(SS)与酪氨酸蛋白酶1B(PTP1B)对瘦素诱导肝星状细胞(HSC)的增殖和基质蛋白分泌以及对JAK2/STAT3通路的影响。方法:运用MTT法检测各浓度SS对瘦素致激活的HSC细胞增殖的影响;实验分为对照组、瘦素组、瘦素+低浓度SS组、瘦素+高浓度SS组,运用RT-PCR、Western blot、ELISA法分别检测各组PTP1B、TIMP-1、I型胶原蛋白和mRNA以及JAK2/STAT3磷酸化程度。结果 :生长抑素可抑制瘦素致HSC增殖;生长抑素可提高HSC内PTP1B的表达,高剂量生长抑素较低剂量提高明显;并减少TIMP-1mRNA、I型胶原mRNA和蛋白的表达,下调JAK2/STAT3蛋白的磷酸化,同时高剂量生长抑素较之低剂量降低明显。结论:生长抑素能上调瘦素作用下HSC内PTP1B的表达,降低JAK2/STAT3磷酸化,抑制其增殖,减少肝纤维化因子的分泌。

灵芝多糖对地塞米松诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡的影响及可能机制

目的探讨灵芝多糖(GLP)对地塞米松(DEX)诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度GLP对DEX诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡的保护作用,选出GLP最佳浓度;实验分为空白对照组(Control)、地塞米松组(DEX)与灵芝多糖+地塞米松组(GLP+DEX)。试剂盒检测各组细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的活性;Hoechst染色及流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况;Western blot检测Bcl-2、BAX、caspase-3、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3的表达。结果DEX可上调MC3T3-E1成骨细胞caspase-3和caspase-9活性,诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡,上调凋亡相关蛋白Bax、caspase-3的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,上调JAK2-STAT3信号通路相关蛋白p-JAK2、p-STAT3的表达,灵芝多糖干预可逆转以上变化的发生。结论灵芝多糖可能通过抑制JAK2/STAT3通路抑制地塞米松诱导的MC3T3-E1成骨细胞凋亡。

基于网络药理学探讨桃莲绞复方增强全成分肿瘤细胞疫苗抗结直肠癌作用分子机制

目的采用网络药理学方法,探讨桃莲绞复方(Tao-lian-jiao Formula,TLF)增强全成分肿瘤细胞疫苗(Vaccine)抗结直肠癌作用的分子机制。方法观察TLF和全成分肿瘤细胞疫苗单用及联合使用对结肠癌CT26荷瘤小鼠体质量和肿瘤质量的影响,HE染色观察肿瘤组织病理变化。通过中药成分数据库(TCMSP、TCMID),PharmMapper数据库和OMIM数据库分别收集TLF化学成分,成分相关靶点和免疫相关靶点,对TLF调控免疫相关的靶点和通路进行预测分析。通过实时荧光定量PCR、Western blotting对预测结果进行实验验证。结果与模型组比较,TLF组对肿瘤生长无显著抑制作用,反而表现出促进肿瘤生长的趋势,抑制率−20.1%;Vaccine组对肿瘤生长亦无显著抑制作用(P>0.05),但有抑制趋势,抑制率19.1%;当TLF联合Vaccine(TLF+Vaccine)则能显著抑制肿瘤生长(P<0.05),抑制率达51.4%。通过中药成分数据库共收集到TLF所含的57个化学成分,对应570个靶点,同时收集到免疫相关的168个靶点,比对找到TLF免疫调节的潜在作用靶点4个,分子互作后得到24个关键靶点,信号通路(pathway)和基因本体论(Gene Ontology,GO)生物学过程富集分析结果提示干扰素γ受体1(interferon gamma receptor 1,IFNGR1)及下游的JAK1/JAK2-STAT1可能是TLF发挥免疫调控的关键通路。验证实验结果显示,与Vaccine组比较,TLF+Vaccine组肿瘤组织中IFNGR1、磷酸化酪氨酸蛋白激酶-1(phosphorylation of Janus kinase 1,p-JAK1)、磷酸化酪氨酸蛋白激酶-2(phosphorylation of Janus kinase 2,p-JAK2)、磷酸化信号转导和转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,p-STAT1)表达显著降低(P<0.05),与预测结果一致。结论TLF可增强Vaccine的抗结直肠癌作用,具有作为一种有效的肿瘤免疫治疗佐剂的潜力,其作用机制可能与下调IFNGR1表达,抑制JAK1/JAK2-STAT1信号通路活性有关。