静态磁场通过激活FGFR1/JAK2/STAT3信号通路促进皮肤成纤维细胞的增殖活性和迁移表型

目的:通过体外实验探讨静态磁场(SMF)对皮肤成纤维细胞增殖活性和迁移表型的调控作用与潜在机制。方法:将人皮肤成纤维细胞(HSFs)分为5组,包括对照组、SMF组、SMF+阿魏酸组、SMF+芦可替尼组、SMF+Stattic组。对照组为正常培养的HSFs;SMF组的HSFs细胞暴露于1mT的SMF中。其余三组分别将FGFR1、JAK2、STAT3的抑制剂(3μmoL/L阿魏酸、3nmoL/L芦可替尼、20μmoL/L的Stattic)与HSFs一起预培养,并暴露于1mT的SMF中,所有组均处理24h。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析细胞的增殖活性。用ELISA试剂盒法检测人类B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(BAX)的水平。用Western blot检测凋亡标志蛋白cleaved-caspase3及FGFR1、JAK2、STAT3、磷酸化的(p)-FGFR1、p-JAK2、p-STAT3的表达以及细胞迁移相关表型高迁移率组蛋白1(HMGB1)、波形蛋白(vimentin)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2的表达。结果:与对照组比,SMF组的细胞增殖活性增加,BAX的水平减少,cleaved-caspase3的蛋白表达水平下调,p-FGFR1、p-JAK2、p-STAT3、HMGB1、vimentin、VEGFA、MMP-9、MMP-2的表达水平均显著上调(均P<0.05)。与SMF组比,SMF+阿魏酸组的细胞增殖活性降低,BAX的水平增加,cleaved-caspase3的蛋白表达水平上调,而p-FGFR1、p-JAK2、p-STAT3、HMGB1、vimentin、VEGFA、MMP-9、MMP-2的表达均显著下调(均P<0.05)。与SMF组比,SMF+芦可替尼组的细胞增殖活性降低,BAX的水平增加,cleaved-caspase3的蛋白表达水平上调,JAK2、p-JAK2、p-STAT3、HMGB1、vimentin、VEGFA、MMP-9、MMP-2的表达水平均显著下调(均P<0.05)。与SMF组比,SMF+Stattic组的细胞增殖活性降低,BAX的水平增加,cleaved-caspase3的蛋白表达水平上调,STAT3、p-STAT3、HMGB1、vimentin、VEGFA、MMP-9、MMP-2的表达水平均显著下调(均P<0.05)。结论:SMF通过激活FGFR1/JAK2/STAT3信号通路促进皮肤成纤维细胞的增殖活性和迁移表型。

缺氧诱导因子-1α通过miR-126/JAK2-STAT3轴调控慢性肾病小鼠肾纤维化

目的:探究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)通过miR-126/JAK2-STAT3轴促进慢性肾病小鼠肾纤维化的分子机制。方法:选取8周龄雄性C57/BL6小鼠,分为假手术组、模型组、HIF-1αmimic组、miR-126 mimic组、HIF-1α+miR mimic组、WP1066组、miR-126 mimic+WP1066组;用全自动生化仪检测小鼠肾24 h尿蛋白、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)水平,qRT-PCR检测肾组织内miR-126相对表达量,免疫印迹检测肾组织内HIF-α,肾纤维化关键蛋白fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA,JAK2/STAT3信号通路关键蛋白表达;Masson染色分析小鼠肾病理形态及间质纤维化程度。结果:模型组模型建立后miR-126表达受到抑制,差异有统计学意义。与假手术组相比,模型组小鼠24 h尿蛋白、BUN、SCr水平均上调,肾组织肾小管、间质结构紊乱,肾纤维化明显,fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA、p-JAK2、p-STAT3表达上调;HIF-1α过表达进一步上调24 h尿蛋白、BUN、SCr、fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA、p-JAK2、p-STAT3表达;miR-126过表达下调24 h尿蛋白、BUN、SCr、fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA、p-JAK2、p-STAT3表达;HIF-1α过表达可以逆转miR-126过表达抑制肾纤维化的趋势,差异有统计学意义。与模型组相比,JAK2/STAT3信号通路被阻断后,p-JAK2、p-STAT3、fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA表达明显下调,miR-126的过表达可以进一步下调小鼠肾组织内p-JAK2、p-STAT3、fibronectin、collagen-Ⅰ、α-SMA表达,差异有统计学意义。结论:小鼠肾纤维化促进肾组织内HIF-1α高表达,HIF-1α通过抑制miR-126提升JAK2-STAT3信号通路活性,最终促进肾纤维化进展。

基于JAK2-STAT3信号通路探讨热毒宁注射液治疗大鼠急性肺损伤的作用机制

目的:探讨热毒宁注射液通过调节JAK2-STAT3信号通路干预急性肺损伤(ALI)大鼠作用机制。方法:30只Wistar大鼠随机分为五组,分别为模型对照组、空白对照组、地塞米松组、热毒宁高剂量组和热毒宁低剂量组。每组大鼠均进行腹腔注射给药,每日1次,连续5 d,末次给药后,采用脂多糖滴注咽后壁气管建立ALI大鼠模型。造模24 h后,比较各组大鼠动脉氧分压,HE染色法观察肺组织的病理学改变,ELISA法检测大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的表达水平,Western blot测定各组大鼠肺组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠PaO 2水平明显下降,病理评分升高,PaCO 2、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达升高(均P<0.05)。与模型对照组比较,地塞米松组和热毒宁高剂量组大鼠PaO 2水平升高,病理评分下降,PaCO 2、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达降低(均P<0.05)。结论:热毒宁注射液对ALI大鼠有保护作用,其机制可能与调节JAK2-STAT3信号通路的活化、降低炎症反应有关。

急性期电针对面神经损伤模型兔JAK1-STAT3信号通路的影响

目的:探讨急性期电针对面神经损伤兔JAK1-STAT3信号通路的影响,方法:将80～85日龄日本大耳白兔面神经用特制止血钳压榨5min,损伤长度约2cm,造成面神经损伤模型,电针组在术后1天后立即进行治疗,连续治疗5天,模型组术后不进行任何治疗。治疗结束后截取各组受损面神经,采用Western blot方法检测JAK1、STAT3蛋白的表达水平。结果:空白组JAK1、STAT3蛋白水平有少量表达,模型组与空白组比较,表达显著增加(P<0.01)。治疗5天后电针组JAK1、STAT3蛋白水平表达趋于正常,显著低于模型组(P<0.01)。结论:急性期电针可以通过激活JAK1-STAT3信号通路促进面神经损伤的修复。

JAK_2-STAT_3信号通路在白介素-1β经动脉外膜给药致平滑肌细胞增殖迁移中的作用

目的研究白细胞介素-1β经血管外膜给药导致动脉平滑肌细胞发生的改变及其与JAK2-STAT3信号通路的关系,明确JAK2-STAT3信号通路在血管增殖性病变中的作用。方法 6～8周龄SD雄性大鼠24只,分离左侧颈总动脉,实验组(n=18)血管外膜包裹含白介素-1β2.5μg的琼脂缓释悬液,对照组(n=6)包裹不含白介素的琼脂悬液,术后2、8、24、48 h,1、2周分别处死实验组大鼠3只,对照组1只,血管标本经切片HE染色观察形态,Western blot法检测JAK2、STAT3、磷酸化JAK2以及磷酸化STAT3的表达,免疫组化标记定位磷酸化JAK2及磷酸化STAT3;另取SD雄性大鼠9只,分离两侧颈总动脉,左侧滴加JAK2抑制剂AG490缓释凝胶,右侧滴加等量空白凝胶后两侧均包裹等量白介素-1β,术后8、48 h,1周处死动物分别行HE染色及Western blot检测。结果白介素-1β包裹血管外膜后出现血管平滑肌细胞的增殖、迁移,通道蛋白JAK2、STAT3在不同时间点出现不同程度的磷酸化,经Western blot检测并行灰度分析,p-JAK2相对灰度值对照组(0.337±0.216),8 h组(1.764±0.513),1周组(0.451±0.229);p-STAT3相对灰度值对照组(0.125±0.870),24 h组(1.909±0.309),2周组(0.448±0.516),各组间有明显差异(P<0.05)。加用抑制剂后,8 h组p-JAK2相对灰度值实验侧(0.085±0.031),对照侧(1.416±0.468),48 h组p-STAT3相对灰度值实验侧(0.460±0.065),对照侧(2.425±0.638),提示JAK2、STAT3的磷酸化水平被明显抑制(P<0.05),平滑肌细胞变化程度下降。结论炎性因子白细胞介素-1β经动脉外膜给药可致动脉平滑肌细胞增殖、迁移,这种改变与JAK2-STAT3信号通路有直接关系。

基于IL-6介导的JAK1/STAT3信号通路探讨竹叶石膏汤合清气化痰丸对COPD大鼠的改善作用

目的探讨竹叶石膏汤合清气化痰丸对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠IL-6介导JAK1/STAT3信号通路的调控作用。方法将48只大鼠随机分为正常组,模型组,中药低、中、高剂量组(5、10、15 g/kg竹叶石膏汤合清气化痰丸)及中药低、中、高剂量(5、10、15 g/kg竹叶石膏汤合清气化痰丸)+伊他替尼(30 mg/kg)组,每组8只。采用气道滴注脂多糖(LPS)联合烟熏方法建立COPD模型,造模28 d后给药干预。给药2周后,采用肺功能检测仪测定肺功能指标[吸气峰流速(PIF)、呼气峰流速(PEF)、分钟通气量(MV)],HE染色观察肺组织病理变化,RT-qPCR、免疫印迹分析和免疫组化法检测肺组织IL-6、JAK1、STAT3、SOCS3 mRNA和蛋白表达。结果与模型组比较,中药各剂量组PIF、PEF、MV增加(P<0.05),肺组织炎症细胞浸润和充血水肿减轻,肺大泡减少,肺泡腔的破坏、扩张和融合得到缓解,IL-6、JAK1、STAT3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),SOCS3 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05);给予伊他替尼干预后,中药各剂量组的作用均被逆转(P<0.05)。结论竹叶石膏汤合清气化痰丸可下调IL-6介导的JAK/STAT信号通路过度表达和持续活化,并抑制IL-6表达,减轻气道炎症,抑制COPD症状。

ATOX1通过JAK2/STAT3通路促进肝癌细胞生物学行为的机制探讨

目的探究肝细胞癌(HCC)中抗氧化剂1铜伴侣蛋白(ATOX1)表达的临床意义及其与肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭的关系。方法分析人类基因组图谱数据库HCC癌组织和正常肝组织ATOX1 mRNA的表达。采用免疫组织化学染色检测15例HCC癌和癌旁组织中ATOX1的表达。人肝癌细胞株Hep3B和HepG2分为对照组(NC组)、ATOX1敲低1组(si-ATOX1#1组)和ATOX1敲低2组(si-ATOX1#2组)。通过CCK-8细胞增殖实验、划痕实验、Transwell侵袭实验观察敲低ATOX1对癌细胞恶性生物学行为的影响。构建裸鼠异种皮下移植瘤模型,分析敲低ATOX1表达对移植瘤质量和体积的影响。Western blot检测移植瘤中Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路蛋白表达水平。结果生物信息学分析显示HCC癌组织中ATOX1 mRNA表达高于癌旁组织(P<0.05)。免疫组化染色发现HCC癌组织中ATOX1蛋白阳性率高于癌旁组织(93.33%vs.13.33%,P<0.01)。体外实验结果显示,siRNA敲低Hep3B、HepG2细胞中ATOX1蛋白表达后,癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力均显著降低(均P<0.05)。小鼠体内实验中,sh-ATOX1敲低组裸鼠皮下移植瘤的体积和质量均显著小于sh-con组,JAK2/STAT3通路相关蛋白p-JAK2、p-STAT3、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)及基质金属蛋白酶2表达均下降。结论ATOX1能够通过JAK2/STAT3通路促进HCC的增殖、迁移和侵袭,可能成为潜在的肿瘤标志物和治疗靶点。

SOCS3调控JAK/STAT3通路对PD-1/PD-L1抑制剂所致小鼠心脏毒性的影响

目的 探讨细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)通过调控酪氨酸激酶/转录激活因子3(JAK/STAT3)通路影响巨噬细胞M1型极化的作用机制,及其对程序性死亡受体1/程序性死亡配体1(PD-1/PD-L1)抑制剂所致小鼠心脏毒性的影响。方法 将RAW 264.7细胞分为对照组、LPS组、pc-NC组、pc-SOCS3组、si-NC组、si-SOCS3组及抑制剂组,细胞转染相应质粒并使用100 ng/mL LPS干预;50只SPF级6周龄BALB/c小鼠分为正常组、模型组、NC组、SOCS3组及抑制剂组,每组10只,除正常组外,其余各组小鼠通过腹腔注射PD-1/PD-L1抑制剂BMS-1 10 mg/kg建立PD-1/PD-L1抑制剂诱导的小鼠心脏毒性模型,并通过尾静脉注射相应质粒或腹腔注射相应药物。HE染色观察小鼠心脏组织病理;ELISA法检测细胞上清和小鼠血清IL-10、TNF-α和IL-1β水平;Western blot检测细胞SOCS3、CD86、CD80以及JAK/STAT3信号通路相关蛋白表达。结果 细胞过表达SOCS3会促进巨噬细胞细胞炎症因子水平和M1型极化,并抑制JAK/STAT3通路相关蛋白表达;细胞SOCS3低表达后,细胞炎症因子水平降低,并抑制巨噬细胞M1型极化,激活JAK/STAT3通路(P<0.05);BMS-1干预后小鼠心脏组织损伤严重,心脏指数、血清炎症水平及CD86、CD80蛋白表达明显升高,JAK/STAT3通路相关蛋白表达明显降低(P<0.05);过表达SOCS3组小鼠心脏损伤减轻,心脏指数、血清炎症因子及心脏CD86、CD80蛋白表达明显降低,JAK/STAT3通路相关蛋白表达明显升高(P<0.05);JAK/STAT3通路抑制剂AG490逆转了低表达SOCS3对PD-1/PD-L1抑制剂诱导小鼠心脏损伤减轻作用和M1型巨噬细胞极化作用。结论 低表达SOCS3可通过激活JAK/STAT3通路抑制巨噬细胞M1型极化并减轻PD-1/PD-L1抑制剂所致小鼠心脏毒性。

AZD1480靶向阻断JAK2-STAT3信号通路抑制胶质瘤细胞增殖研究

目的探讨AZD1480对胶质瘤细胞增殖的靶向抑制作用及其机制。方法用不同浓度的AZD1480在不同时间段内处理胶质瘤细胞U87MG,然后分别采用Western Blot检测JAK2-STAT3通路活化、CCK-8检测细胞增殖、AnnexinⅤ/PI染色检测细胞凋亡,统计学分析AZD1480的影响。结果用不同浓度的AZD1480处理24 h后,U87MG细胞中的磷酸化活化蛋白p-JAK2的表达随浓度增加而逐渐降低,p-STAT3的表达则被完全抑制。与用0μM AZD1480分别处理24、48、72 h结果(0.657±0.037、1.359±0.051、1.919±0.092)相比,用0.5μM的AZD1480处理后,U87MG的细胞活性分别为0.554±0.028、1.127±0.053和1.359±0.125,差异有统计学意义(P<0.05);随着AZD1480浓度增加及干预时间延长,U87MG细胞活性的降低更为明显(P<0.05)。与对照组(0μM)比较,用0.5μM AZD1480处理过的U87MG细胞凋亡比例从(4.54±0.50)%增长至(6.81±0.70)%,差异有统计学意义(P<0.05);随着AZD1480浓度增加,U87MG细胞凋亡比例呈逐渐上升趋势(P<0.05)。结论应用AZD1480能够靶向阻断JAK2-STAT3信号通路活化,有效抑制人脑胶质细胞增殖、诱导其凋亡,从而有望成为人脑胶质瘤基因靶向治疗的一种新靶点和新策略。

基于JAK2/STAT3/SOCS1信号通路探讨电针不同腧穴对急性结肠炎大鼠的作用机制

目的:探讨JAK2/STAT3/SOCS1信号通路在电针不同腧穴对大鼠急性结肠炎的作用机制。方法:将36只SPF级SD大鼠随机分为6组,每组6只。除正常组外,其余各组用冰乙酸溶液灌肠制备急性结肠炎大鼠模型,在造模结束后给予各腧穴组电针治疗,疏密波,频率2~50 Hz,强度2 mA,以肌肉震颤为度,20 min/次,1次/d,连续3 d。观察大鼠一般情况;HE法观察大鼠结肠组织黏膜病理学变化;ELISA法检测血清白介素-4(IL-4)、白介素-8(IL-8)的含量;Western blot和RT-PCR法检测大鼠结肠组织JAK2、STAT3、SOCS1蛋白及mRNA的表达。结果:与正常组相比,模型组大鼠整体状况差,结肠黏膜严重受损、甚则坏死,溃疡面明显,血清IL-4的含量明显降低、IL-8的含量明显升高(P<0.01),结肠组织中JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达均明显升高、SOCS1蛋白及mRNA表达均明显降低(P<0.01);与模型组比较,各腧穴组大鼠一般情况明显好转,结肠黏膜损伤坏死、溃疡面明显减轻,血清IL-4的含量明显升高、IL-8的含量明显降低(P<0.01);结肠组织中JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达明显下降、SOCS1蛋白及mRNA表达则明显升高(P<0.05);足三里组与天枢、大肠俞、上巨虚穴比较,结肠黏膜损伤显著减轻,血清IL-4的含量显著升高、IL-8的含量显著降低(P<0.05);结肠组织中JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达显著下降、SOCS1蛋白及mRNA表达则显著升高(P<0.05)。结论:电针各腧穴均能改善结肠组织黏膜的损伤,减轻炎症反应。其中足三里穴治疗效应总体优于天枢、大肠俞、上巨虚穴,其作用机制可能通过调JAK2/STAT3/SOCS1信号通路相关蛋白及炎性细胞因子IL-4、IL-8有关。

PHA-665752通过下调JAK2/STAT3通路调控PD-L1表达

目的探究索拉非尼(Sorafenib tosylate,SFB)耐药的肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中,程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-L1)的表达调控机制,关注细胞间质上皮转换因子(cellular-mesenchymal epithelial transition factor,c-Met)对PD-L1表达的影响,并寻找克服耐药性的潜在治疗策略。方法利用HepG2 ^(SR)细胞系作为研究对象,该细胞系对索拉非尼具有获得性耐药性,并表现出c-Met和PD-L1的高表达。并通过平板细胞克隆形成实验、Edu-594染色、Transwell小室、Matrigel基质胶、划痕愈合实验和CCK-8评估细胞增殖、迁移和侵袭能力。利用线粒体膜电位检测(JC-1试剂盒)膜电位变化,反映细胞凋亡情况。采用PHA-665752(c-Met的特异性抑制剂),观察其对c-Met磷酸化和PD-L1表达的影响。并通过蛋白免疫印迹研究PHA-665752对JAK2/STAT3信号通路激活的抑制效果,慢病毒介导的基因敲低技术来评估STAT3对PD-L1表达的影响。结果c-Met和PD-L1在HepG2 ^(SR)中高表达,PHA-665752作为c-Met抑制剂不仅能有效降低HepG2 ^(SR)细胞的增殖能力,迁移能力,提高细胞凋亡率,而且PHA-665752还抑制了JAK2/STAT3信号通路的激活。在敲低STAT3的细胞中,PD-L1的表达也相应下降。结论c-Met通过JAK2/STAT3信号通路在调控PD-L1的表达中起着重要作用。

TM4SF1与肺癌细胞JAK2-STAT3信号通路相互作用机制及其在NSCLC中的表达

目的:探讨四次跨膜蛋白1(four transmembrane protein 1,TM4SF1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况及其与NSCLC患者临床病理特征之间的关系。构建高表达TM4SF1的慢病毒表达载体稳定转染肺癌A549细胞,研究TM4SF1与肺癌细胞JAK2-STAT3信号通路的相互作用机制。方法:收集61例NSCLC患者手术切除的癌组织、相应配对的癌旁组织及因良性肺部疾病切除的正常肺组织10例。采用qRT-PCR及Western blot检测NSCLC组织、癌旁组织及正常肺组织中TM4SF1的表达水平。利用慢病毒转染技术在肺癌A549细胞中高表达TM4SF1基因,应用q RT-PCR及Western blot分析TM4SF1基因及JAK2-STAT3信号通路下游Sox2基因的表达水平,采用Transwell检测TM4SF1高表达对A549迁移的影响。结果:癌组织中TM4SF1 mRNA及蛋白表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)及正常肺组织(P<0.05);TM4SF1的表达与患者年龄及性别无明显关联,与肿块的大小、分化程度、淋巴结转移、临床分期相关(P<0.05)。成功在肺癌细胞株中高表达TM4SF1,高表达TM4SF1后对A549细胞的迁移能力明显增强,并且上调JAK2-STAT3信号通路下游Sox2表达水平。结论:TM4SF1在NSCLC中呈现高表达,过表达该基因可以促进A549细胞的迁移并且上调JAK2-STAT3信号通路下游Sox2表达水平。TM4SF1可能通过该通路促进NSCLC的发生发展及远处转移,TM4SF1可能成为NSCLC的潜在治疗靶点。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨黄芪-山茱萸对高糖诱导足细胞损伤的保护作用

目的:探究黄芪-山茱萸对高糖诱导肾足细胞损伤的保护作用及机制。方法:CCK8法检测黄芪-山茱萸(0、175、350、700、1400、2800 mg/L)对足细胞(MPC-5)活性的影响。30 mmol/L葡萄糖诱导MPC-5细胞损伤,350、700、1400 mg/L黄芪-山茱萸进行干预;ELISA测定MPC-5细胞IL-6、IL-1β水平,流式细胞术测定细胞凋亡,免疫荧光染色测定MPC-5肾病蛋白(nephrin)、足细胞素(podocin)表达,qRT-PCR测定MPC-5细胞nephrin、podocin、结蛋白(desmin)、Wilm瘤基因1(WT-1)基因表达,Western blot测定细胞Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路磷酸化表达。结果:2800 mg/L黄芪-山茱萸可显著抑制MPC-5细胞活性(P<0.01)。MPC-5细胞经高糖诱导后,IL-6、IL-1β水平升高,凋亡增加,nephrin、podocin、WT-1表达降低,desmin表达升高,JAK2/STAT3信号通路磷酸化表达增加(P<0.01)。350、700、1400 mg/L黄芪-山茱萸可抑制高糖诱导MPC-5细胞IL-6、IL-1β水平升高和凋亡,增强nephrin、podocin、WT-1表达,降低desmin表达,抑制JAK2/STAT3信号通路磷酸化表达(P<0.05)。结论:黄芪-山茱萸可减轻高糖诱导足细胞炎症和凋亡损伤,其机制与抑制JAK2/STAT3通路磷酸化有关。

基于JAK2-STAT3信号通路探讨祛脂愈肝对NASH模型大鼠IL-17、IL-2的影响

目的基于JAK2-STAT3信号通路研究祛脂愈肝汤对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠白细胞介素(IL-17、IL-2)的影响。方法通过高脂饮食诱导复制NASH模型大鼠,随机均分为模型组、多烯组、祛脂愈肝汤低、中、高剂量组;另设空白组。经药物干预后、处死并观察肝组织病理变化;检测各组大鼠血清肝功能、血脂;ELISA法检测各组大鼠血清IL-17、IL-2水平;qRT-PCR法检测各组大鼠肝组织中JAK2、STAT3 mRNA表达。结果与空白组相比,模型组大鼠肝组织脂肪变性、炎性细胞浸润征象显著;各药物干预组均有不同程度的改善,其中祛脂愈肝汤高剂量组、多烯组改善最为显著;肝功能、血脂结果显示模型组大鼠血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平与空白组相比显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),各药物干预组均有不同程度降低,差异有统计学意义(P<0.01);ELISA法检测模型组大鼠血清IL-17与空白组相比显著升高、IL-2显著降低,差异有统计学意义(P<0.01),各药物干预组血清IL-17显著降低、IL-2显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);qRT-PCR法检测模型组大鼠肝组织JAK2、STAT3 mRNA表达与空白组相比显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),各药物干预组肝组织JAK2、STAT3 mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);综合上述结果,以多烯组、祛脂愈肝汤高剂量组疗效最佳,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论祛脂愈肝汤干预NASH模型大鼠,可通过抑制JAK2及下游STAT3 mRNA的表达,阻断JAK2-STAT3通路的激活,从而调控炎症介质的基因转录达到治疗NASH的作用。

Th1/Th2免疫平衡偏移介导JAK2-STAT3信号通路参与感染性早产发生机制研究

目的:探讨Th1/Th2免疫平衡偏移情况及JAK2-STAT3信号通路参与感染性早产发生机制。方法:选取就诊于大理大学第一附属医院的60例早产患者为研究对象(早产组),根据产后胎膜组织病理检查结果分为感染性早产组和非感染性早产组,选取同期正常足月分娩的产妇20例为正常对照(正常对照组)。采用酶联免疫吸附测定试剂盒检测各产妇外周血清中干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平,并计算Th1/Th2免疫调节平衡指数;采用免疫组织化学染色法检测胎膜组织中信号转导及转录激活因子3(STAT3)、核因子κB(NF-κB)蛋白的表达情况。结果:IFN-γ、TNF-α表达水平在早产组中显著升高(P<0.05),尤其是在感染性早产组中升高更明显,Th1/Th2免疫平衡具有明显向Th1方向偏移趋势;IL-6表达水平、STAT3及NF-κB蛋白表达水平在感染性早产组中显著升高(P<0.05),非感染性早产组与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Th1/Th2免疫平衡可通过TNF-α、NF-κB、IL-6、JAK2-STAT3信号通路参与感染性早产的发生。

高盐饮食激活肠JAK1/STAT3通路诱导肠上皮屏障功能障碍

目的探讨高盐饮食在肠道屏障功能中的作用机制与Janus激酶1和转录激活因子3(Janus kinase1⁃signal transducer and activator of transcription 3,JAK1⁃STAT3)信号通路激活的关系。方法将8周的SPF级C57BL/6小鼠随机分成正常饮食对照组(control)和高盐饮食组(high salt diet,HSD)。正常饮食对照组喂养普通饲料,高盐饮食组采用NaCl含量为8%的饲料喂养12周,收集两组小鼠肠道组织,检测屏障蛋白及JAK1/STAT3通路;将人正常结肠上皮细胞NCM⁃460细胞分组如下:(1)正常对照组(control);(2)高浓度NaCl处理组(high NaCl,50 mmol/L),处理时间均为48 h;(3)JAK1抑制剂Ruxolitinib治疗组(high NaCl+Ruxoli⁃tinib),用Ruxolitinib(50μmol/L)预处理2 h,再用NaCl(50 mmol/L)共孵育46 h,通过Western blot法检测细胞屏障蛋白及JAK1/STAT3通路蛋白变化。结果高盐饮食不仅降低小鼠体重、结直肠重和肠长度,还抑制肠屏障蛋白ZO⁃1的相对表达,并上调肠道JAK1磷酸化蛋白;细胞实验中,JAK1抑制剂Ruxolitinib可抵抗由高浓度NaCl诱导的肠屏障功能障碍。结论高盐饮食可能通过激活JAK1/STAT3信号而诱导肠屏障功能障碍。

β-榄香烯阻断JAK2-STAT3信号通路促进紫杉醇对肺癌细胞增殖和凋亡作用研究

目的:研究分析讨论β-榄香烯对紫杉醇抑制肺癌细胞增殖、诱导凋亡的作用,并探讨其可能的机制。方法:建立耐药细胞株A549/Taxol,MTT法测定β-榄香烯对A549/Taxol细胞株的抑制率及IC50;使用Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率;并通过Western Blot法检测JAK2、STAT3、p-STAT3、Bcl-2、Bax、Caspase3蛋白的表达水平,借以分析β-榄香烯对紫杉醇抑制肺癌细胞增殖、诱导凋亡的作用和机制。结果:药物干预48 h后,可见β-榄香烯对A549/Taxol肺癌细胞活性均显示出抑制作用,并且抑制作用表现出明显的剂量依赖性,对肺癌细胞抑制的IC50水平为108.5μg/mL。研究中采用IC50浓度108.5μg/mL榄香烯干预A549/Taxol肺癌细胞, 24 h后可见A549/Taxol肺癌细胞的凋亡水平显著增加(P<0.05);与此同时,肺癌细胞JAK2、STAT3、p-STAT3和Bcl-2可见降低(P<0.05),而Bax和Caspase3则见升高(P<0.05)。结论:β-榄香烯可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路,发挥拮抗肺癌细胞对紫杉醇的耐药性作用,抑制肿瘤细胞增殖,诱导凋亡。

IL-1β通过JAK2-STAT3促进大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成

目的探讨IL-1β促进脊髓损伤后胶质瘢痕形成的机制。方法将大鼠随机分为模型组(采用钳夹脊髓的方法建立SCI模型)、假手术组(sham group)、IL-1β特异性抑制剂组(IL-1RA)、IL-1β组(IL-1β)及IL-1β+JAK2-STAT3特异性抑制剂组(IL-1β+AG490)。假手术组只打开椎板,不作其他处理。在术后相应时间点(术后8及12 h和1、3、7及14 d)进行大鼠后肢BBB评分,用Western blot、免疫荧光和免疫组化技术检测GFAP、vimentin、p-STAT3的表达变化。结果 p-STAT3(术后第8 h和第12 h)及GFAP、vimentin(术后第7和第14天)表达趋势:模型组显著高于假手术组(P<0.01),IL-1RA组明显低于模型组(P<0.05),但仍高于假手术组(P<0.05);IL-1β+AG490组明显低于模型组(P<0.05),但仍高于假手术组(P<0.05);IL-1β组均显著高于模型组(P<0.05)。术后第14天,BBB评分模型组显著低于假手术组(P<0.01),IL-1RA组显著高于模型组(P<0.05),但仍低于假手术组(P<0.01);IL-1β组显著低于模型组(P<0.05)。结论 IL-1β可通过JAK2-STAT3促进脊髓损伤后胶质瘢痕形成,抑制IL-1β或JAK2-STAT3可减弱胶质瘢痕形成,促进脊髓神经功能恢复。

寻常型银屑病中医三证型形成与皮肤组织中JAK1/STAT3信号通路关系的研究

目的:探讨寻常型银屑病血热、血瘀、血燥证形成与皮肤组织中JAK1/STAT3信号通路的关系。方法:选取2013年10月至2014年10月东直门医院皮肤科门诊和病房收治的寻常型银屑病患者18例(严格中医辨证分为血热证、血瘀证、血燥证三型),正常人受试者6例,记录患者一般情况,用RT-PCR法检测各组受试者皮肤组织中IL-22R1、JAK1、STAT3、Cmyc、VEGF的mRNA表达差异。结果:检测24例受试者皮肤组织,IL-22R1、JAK1、STAT3、C-myc的mRNA表达相互间均呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);血热证患者皮损中,IL-22R1、JAK1、STAT3、C-myc的mRNA表达均明显高于正常人,差异有统计学意义(P<0.01),血燥证IL-22R1、JAK1、STAT3的mRNA表达高于正常人,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:JAK1/STAT3信号通路的异常活跃,可能是银屑病血热证临床表现形成的重要因素;且JAK/STAT信号通路活化差异可能与血热证向血瘀、血燥证转变的过程相关。

保肝宁对瘦素刺激HSC增殖及其JAK_2-STAT_3信号通路影响的实验研究

目的观察中药复方保肝宁对瘦素刺激肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖功能的作用及其对JAK2-STAT3信号通路的影响。方法给正常Wistar大鼠灌胃保肝宁煎剂7d,制备含药血清,用噻唑兰(MTT)比色法检测保肝宁对100ng/ml的瘦素刺激HSC-LX2增殖的影响;应用蛋白印迹试验检测保肝宁对100ng/ml的瘦素刺激HSC-LX2中的JAK2、STAT3蛋白的表达水平。结果保肝宁组对瘦素刺激的HSC-LX2增殖有显著的抑制作用;保肝宁作用6h后,JAK2、STAT3蛋白表达水平开始降低,此时JAK2降低较为明显;24h时STAT3蛋白降低较为明显。结论中药复方保肝宁有抑制瘦素促HSC-LX2增殖的作用,而JAK2-STAT3通路被阻断,JAK2、STAT3蛋白表达的降低可能是其发生的主要机制之一,而这一作用主要是通过阻断瘦素发生生物学效应的JAK2-STAT3经典通路,降低JAK2、STAT3蛋白表达来实现的。