BCR-ABL阴性MPN患者JAK2 V617F基因突变及其与疾病类型、血管性疾病的关系

目的 研究断裂点簇集区/Abelson白血病病毒(BCR-ABL)阴性骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者Janus激酶2(JAK2)V617F基因突变情况及其与疾病类型、血管性疾病的关系。方法 选取2020年5月至2023年5月濮阳市安阳地区医院收治的79例BCR-ABL阴性MPN患者为研究对象,另选取同期健康体检人群80例为对照组,于入院第1天采集外周血检测血常规和凝血功能,采用荧光定量聚合酶链反应技术(PCR)技术检测JAK2 V617F基因突变率和突变负荷,根据疾病类型和是否合并血管性疾病将患者分组并比较各组检测结果,采用多因素logistic回归分析研究血管性疾病影响因素。结果 MPN组JAK2 V617F基因突变率高于对照组(P<0.05);真性红细胞增多症(PV)组、原发血小板增多症(ET)组和原发性骨髓纤维化(PMF)组JAK2 V617F突变率分别为92.31%、57.78%和62.50%,ET组和PMF组突变率均低于PV组(P<0.05),3组突变负荷差异无统计学意义(P>0.05);血管性疾病组JAK2 V617F基因突变率和突变负荷均高于非血管性疾病组(P<0.05);血管性疾病组年龄、骨髓增殖性肿瘤总症状评估问卷(MPN-10)评分、纤维蛋白原(Fib)和D-二聚体(D-D)水平高于非血管性疾病组(P<0.05),两组性别、疾病分类、血红蛋白(Hb)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)、活化部分凝血激酶时间(APTT)和斑块厚度(PT)差异无统计学意义(P>0.05)。JAK2 V617F基因突变阳性组Fib和D-D水平均高于JAK2 V617F基因突变阴性组(P<0.05);MPN并发血管性疾病危险因素包括年龄、D-D、JAK2 V617F突变阳性和JAK2 V617F突变负荷(P<0.05)。结论 BCR-ABL阴性MPN患者JAK2 V617F基因突变率较高,且JAK2 V617F基因突变可能引起凝血异常,与疾病类型和血管性疾病均存在密切联系。

生物钟基因Per1对鼻咽癌细胞CNE2侵袭迁移及与JAK2-STAT3通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨生物钟基因Per1对鼻咽癌细胞CNE2侵袭转移及上皮-间质转化(EMT)的影响,并阐述其与JAK2-STAT3信号通路相关蛋白的关系。方法:实时荧光定量PCR法(qPCR)以及蛋白质印迹法(WB)检测CNE2细胞中Per1基因及蛋白水平;构建Per1基因过表达及干扰慢病毒载体并转染CNE2细胞;实验分为过表达组(Per1-OE)、过表达对照组(Per1-OENC)、干扰组(Per1-sh)、干扰对照组(Per1-shNC);利用划痕愈合、Transwell实验检测Per1基因对各组细胞侵袭、迁移能力;WB检测Per1基因对EMT相关蛋白:E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达的影响;WB检测Per1基因对JAK2-STAT3信号通路相关蛋白表达的影响。结果:WB和PCR结果显示:与人永生化鼻咽上皮细胞NP69相比,Per1在鼻咽癌细胞CNE2中表达降低。通过构建Per1基因过表达及干扰慢病毒载体,有效地上调和下调了CNE2中Per1在转录及蛋白水平的表达,并分别成功筛选出稳转细胞株。划痕实验结果显示:Per1-OE组较Per1-OENC组24 h、48 h细胞迁移率均明显下降(P=0.04,P=0.01),Per1-sh组较Per1-shNC组24 h、48 h细胞迁移率均明显升高(P=0.01,P=0.005)。Transwell实验结果显示:Per1-sh组较Per1-shNC组穿过Transwell小室细胞数明显增加(P=0.02),Per1-OE组较Per1-OENC组穿过Transwell小室细胞数明显减少(P=0.001)。WB结果显示:JAK2、p-JAK2、STAT3蛋白在各组细胞中表达无统计学差异(P>0.05)。Per1-sh组较Per1-shNC组p-STAT3、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达下降,E-cadherin表达升高(P<0.05),Per1-OE组较Per1-OENC组p-STAT3、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达均升高,E-cadherin表达下降(P<0.05)。结论:过表达Per1基因后可抑制鼻咽癌细胞CNE2侵袭、迁移,使N-cadherin、Vimentin、p-STAT3蛋白表达下降,E-cadherin表达增加;干扰Per1基因后则相反,进而表明Per1基因在鼻咽癌细胞CNE2中可能扮演着抑癌基因的角色;同时我们推测Per1基因与p-STAT3的表达有一定的相关性,但其具体作用机制有待进一步研究。

208例BCR/ABL1阴性慢性骨髓增殖性疾病JAK2、CALR、MPL基因突变检测及其诊断价值

目的:检测经典BCR/ABL1阴性慢性骨髓增殖性疾病患者JAK2、CALR、MPL基因突变,探讨其诊断价值。方法:2012年3月至2015年12月208例BCR/ABL1阴性慢性骨髓增殖性疾病患者(ET146例,PV37例,MF25例)纳入BCR/ABL1阴性CMPN组,124例继发性血小板增多及73例继发性红细胞增多症患者纳入对照组。抽取骨髓或静脉血提取基因组DNA及总RNA,进行JAK2基因外显子12至20,MPL基因外显子10以及CALR基因外显子3至9测序分析。结果:146例ET患者中,JAK2V617F突变86例(58.9%);JAK2 exon 12突变2例(1.4%);CALR突变41例(28.1%),其中Ⅰ型(c.1092_1143del)22例,Ⅱ型(c.1154_1155insTTGTC)11例,Ⅴ型(c.1091_1142del)1例,Ⅷ型(c.1104_1137del)1例,41型(c.1107_1137del)1例,42型(c.1125_1125del)1例,其他(c.1107_1115del,c.1111_1144 del,c.1101 A>C,c.1112_1117del)4例;MPL基因突变9例(6.2%)。JAK2、CALR、MPL基因突变均阴性的患者有8例(5.4%)。37例PV中检出JAK2以及CALR突变共35例(94.6%),其中JAK2V617F突变31例(83.8%),JAK2 exon 12突变2例(5.4%);CALR突变2例(5.4%),其中Ⅰ型1例,另1例为CALR c.1191_1193del。JAK2、CALR、MPL突变均阴性2例。25例MF中检出JAK2V617F突变19例(76%),CALR突变2例(8%);JAK2、CALR、MPL突变均阴性的患者有4例(16%)。124例继发性血小板增多的患者以及73例继发性红细胞增多的患者中,均未检测出JAK2、CALR或者MPL基因突变。结论:联合JAK2、CALR、MPL基因突变能覆盖大多数BCR/ABL1阴性的骨髓增殖性疾病患者,CALR突变在ET患者中检出率较高,因此CALR突变可作为JAK2、MPL突变阴性的ET的新诊断指标。

真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性骨髓纤维化患者骨髓病理特点及JAK2突变

目的:探讨真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、原发性骨髓纤维化(IMF)患者的骨髓病理特点并且检测JAK2V617F突变的发生率,分析骨髓中纤维增生程度以及JAK2V617F突变对PV、ET患者白细胞数的影响。方法:69例初诊患者的骨髓切片经HGF染色以及Gomori染色后进行形态学研究,并利用real-timePCR法测38例患者的骨髓或者外周血的JAK2V617F突变;分析骨髓切片中纤维组织增生程度以及JAK2突变对患者白细胞数的影响。结果:15例PV和15例ET患者的骨髓切片中可以观察到不同程度的纤维组织增生,所有PV、ET、IMF患者骨髓中可见到巨核细胞增多、巨核细胞多形性改变以及巨核细胞定位于骨小梁旁;12例PV、4例ET、4例IMF中检测到JAK2V617F突变;有突变和无突变患者发病时白细胞数均值分别为20.4×109/L和11.4×109/L,不同纤维增生程度的PV、ET患者的白细胞数均值差异无显著性(P=0.367)。结论:69例PV、ET、IMF患者骨髓切片中均有巨核细胞的形态以及定位变化,PV、ET、IMF患者中JAK2V617F突变的发生率分别为80%、27%、50%;有突变患者的白细胞数均值高于无突变患者,初诊的PV、ET患者骨髓中不同纤维增生程度患者的白细胞均值无明显差异。

转JAK2基因脐血CD34^+细胞体外扩增与生物学特性研究

目的:探讨转基因JAK2介导的脐血干祖细胞长期扩增调控的可行性和转基因细胞的生物学特征。方法:构建逆转录病毒载体MGI-F2JAK2,内含有JAK2基因的功能催化区和2个与小分子靶向基因合成药物(AP20187)结合的位点蛋白(F36v,F2)。应用MiniMACS磁珠分选系统纯化分离脐血CD34+细胞,用含JAK2的逆转录病毒上清转染脐血CD34+细胞。转染后的CD34+细胞在IMDM培养体系中,将细胞分为AP20187组;FL组;TPO组;AP20187+FL+TPO(AFT)组。对扩增后的细胞定期检测基因转移后GFP动态变化、细胞免疫标记、造血祖细胞集落培养、染色体核型分析和裸鼠致瘤实验。结果:分选的CD34+细胞纯度>91%,基因转移率为49.32%±6.21%;只有AP20187+FL+TPO组可以使转基因的脐血CD34+细胞大量增殖,扩增至第8周时细胞数达109,CD34+细胞GFP的阳性率由基线水平逐渐上升并于第8周时达到90%以上;细胞表型为CD33+、CD61+、Gly-A+部分阳性;CD38+、HLA-DR+强阳性;CD2、CD7、CD19接近阴性。扩增的CD34+细胞可分别形成BFU-E、CFU-GM、CFU-Mix并以CFU-GM集落为主。扩增后CD34+细胞检测染色体核型正常,裸鼠实验无致瘤特性。结论:转染JAK2基因的人脐血CD34+细胞协同FL和TPO细胞因子可以体外长期扩增脐血干祖细胞,对今后研究细胞信号转导、造血调控以及开展干细胞和基因治疗都有潜在的应用价值。

骨髓纤维化JAK2V617F突变的临床意义

目的分析骨髓纤维化患者JAK2V617F突变与外周血常规的关系。方法利用Taqman-MGB探针联合实时聚合酶链反应方法检测30例原发性骨髓纤维化的JAK2V617F突变情况,并比较JAK2V617F突变与无突变患者的外周血常规改变。结果 30例中12例JAK2V617F突变,突变率为40%。JAK2V617F突变12例外周血白细胞平均(13.07±3.71)×109/L显著高于JAK2V617F无突变18例外周血白细胞平均(4.37±2.59)×109/L,两组比较差异有统计学意义(P<0.01),但两组血红蛋白及血小板数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论骨髓纤维化患者中JAK2V617F突变者外周血白细胞数高于JAK2V617F无突变者,这对治疗有一定的指导意义。

高分辨率熔解曲线法检测JAK2基因V617F突变及其应用

目的探讨实时定量PCR方法和高分辨率熔解曲线法(HRM)在检测JAK2基因V617F突变中的应用。方法以JAK2基因V617F发生纯合突变的人红白血病细胞株(HEL)及不含JAK2基因V617F突变的人白血病细胞株(HL60)为阳性对照和阴性对照,优化HRM法检测条件,分别以优化的HRM法和直接测序法对63例临床疑似骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者DNA标本进行JAK2基因V617F突变检测,评价2种检测方法结果的一致性。结果 HRM法可检出系列混合样本中5%的突变型等位基因突变,且重复性较高。以测序法为金标准,HRM法的敏感性和特异性均为100%,两种方法结果一致。结论 HRM法能够在单一闭管体系中实现对JAK2基因V617F突变的检测,具有较高的敏感性和特异性,可用于JAK2基因V617F突变的临床检测。

JAK2 V617F基因突变及网织血小板数量在骨髓增殖性肿瘤并发血栓性疾病的研究

目的:探究JAK2 V617F基因突变及网织血小板与骨髓增殖性肿瘤(MPN)并发血栓性疾病的相关性。方法:选取132例MPN患者为研究对象,依据是否并发血栓分为病例组(n=82)和血栓组(n=50);另选40名同期体检健康志愿者为对照组。比较三组对象外周血网织血小板计数及MPN患者JAK2V617基因突变情况,分析其与MPN并发血栓性疾病的相关性。结果:血栓组网织血小板计数高于病例组及对照组(P<0.05),且病例组高于对照组(P<0.05)。血栓组JAK2 V617F基因突变阳性率高于病例组(P<0.05)。网织血小板计数及JAK2V617基因突变与血栓的发生呈正相关(P<0.05)。结论:MPN患者并发血栓性疾病与网织血小板计数及JAK2 V617F基因突变有一定的相关性,可能成为评估MPN患者血栓早期发生的实验室检查手段。

SOCS1基因对JAK2/STAT通路介导的急性髓系白血病细胞生长抑制的作用

目的:探讨SOCS1基因的甲基化状态与JAK2/STAT信号通路的活性及急性髓系白血病发生发展的关系。方法:采用细胞培养、qPCR、MS-PCR、Western blot、CCK-8检测、流式细胞术及基因转染等技术,分析120例急性髓系白血病患者及白血病细胞株U937和THP-1中SOCS1基因的表达、甲基化状态与疾病发生发展的关系。同时分析SOCS1下游JAK2/STAT信号通路各蛋白的变化及对白血病细胞株生长和凋亡的影响。结果:在SOCS1甲基化组WT1/ABL的阳性率显著高于阴性组,治疗1个疗程完全缓解率明显低于阴性组。在SOCS1基因甲基化率低组中该基因的表达较高,其下游p-JAK2、p-STAT3和p-STAT5表达降低,t-JAK2、t-STAT3和t-STAT5的变化无显著差异。随着去甲基化药物浓度的增加,白血病细胞生长率逐渐降低,细胞凋亡率逐渐增高。结论:SOCS1基因的甲基化导致基因表达沉默,降低其对JAK2/STAT通路信号传导的抑制,最终促进急性髓系白血病细胞的生长和增殖。

抑制食管癌STC-1基因表达对食管癌细胞凋亡、IL-1β和TNF-α表达及JAK2/STAT3信号的影响研究

目的:观察抑制食管癌斯钙素-1(STC-1)基因表达对食管癌细胞凋亡、IL-1β和TNF-α表达及JAK2/STAT3信号的影响。方法:RT-PCR及Western blot检测STC-1在人食管鳞状细胞癌KYSE170、Eca109、TE1和TE10细胞相对于正常人食管鳞状上皮细胞Het-1A的表达;将合成的STC-1的siRNA序列及无干扰作用的si NRA序列转染Eca109细胞,分别标记为STC-1-siRNA组和NC组,并设定空白对照组,收集转染48 h的细胞,RT-PCR及Western blot检测转染后的细胞中STC-1的表达; CCK8及流式细胞仪分别检测Eca109细胞活力及凋亡率; RT-PCR检测IL-1β和TNF-α表达; Western blot检测Ki67、p53、磷酸化的蛋白酪氨酸激酶2(p-JAK2)、磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)的蛋白表达。结果:与Het-1A细胞比较,STC-1在KYSE170、Eca109、TE1和TE10细胞中的mRNA及蛋白表达均显著升高(P<0. 05);与对照组比较,STC-1-siRNA组STC-1的表达显著降低,细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高,IL-1β、TNF-α、Ki67、p-JAK2和p-STAT3的表达均显著降低,p53的表达显著升高(P<0. 05)。结论:STC-1在食管癌细胞中高表达,抑制其表达后癌细胞活力显著降低,凋亡率升高,此作用可能与抑制JAK2/STAT3信号通路及炎症因子如IL-1β和TNF-α表达有关。

地西他滨治疗骨髓增生异常综合征对JAK2基因表达的影响

目的观察地西他滨治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的临床效果及对JAK2基因表达水平的影响。方法选择2011年10月—2014年10月确诊为骨髓增生异常综合征-原始细胞过多性难治性贫血(MDS-RAEB)的患者9例,并选择同期健康体检者21例作为对照组。MDS-RAEB患者给予地西他滨治疗,观察临床效果,检测对照组及MDS-RAEB患者治疗前、治疗2和4个周期后外周血中JAK2-V617F基因的表达水平。结果 MDS-RAEB患者治疗2和4个周期后疾病控制率分别为77.8%和88.9%,总体有效率分别为33.3%和55.6%。MDS-RAEB患者外周血中JAK2-V617F基因表达水平高于对照组,治疗2、4个周期后低于治疗前,且治疗4个周期后低于治疗2个周期(P<0.05)。结论地西他滨治疗MDS-RAEB效果满意,可抑制JAK2-V617F基因的表达。

原发性血小板增多症90例患者JAK2基因突变的分析

目的研究原发性血小板增多症（ET）患者JAK2基因突变的发生情况及其与临床指标的相关性。方法采用等位基因特异性PCR方法及直接测序，检测90例ET患者外周血单个核细胞JAK2V617F的发生情况。结果90例ET患者中检出49例（54．4％）存在JAK2V617F突变；突变型组患者平均年龄为（55±16）岁。高于野生型组的（38±15）岁（P〈0．05），突变型组患者的外周血白细胞计数[（18．9±8．2）×10^9／L]明显高于野生型组[（9．7±6．7）×10^/L机上患者（P〈0．01），两组患者的血红蛋白水平及血小板计数的差异无统计学差异（．P〉0．05）突变型组患者血栓事件发生率（52．9％）明显高于野生型组（15．4％）患者（P〈0．05）。结论ET患者中JAK2V617F突变的发生率较高，JAK2V617F突变与ET患者年龄、外周血白细胞计数及血栓事件具有相关性。

宫颈癌中JAK2/STAT3信号通道介导bax、bcl-2的表达

目的探讨JAK2/STAT3信号通道的激活及其介导bax/bcl-2在宫颈癌中的表达作用。方法选取本院2011-2014年宫颈癌患者40例,CINⅠ级组28例,CINⅡ/Ⅲ级组12例;选择正常宫颈15例为对照组。病理切片采用免疫组织化学方法测定P-JAK2、P-STAT3、bax、bcl-2的表达。结果1）对照组未见P-JAK2、PSTAT3蛋白表达;与对照组比较,CINⅠ级组及CINⅡ/Ⅲ级组表达增多（P〈0.05）;与CINⅠ级组比较,CINⅡ/Ⅲ级组表达增多（P〈0.05）。2）对照组可见少量bax、bcl-2蛋白表达;与对照组比较,CINⅠ级组及CINⅡ/Ⅲ级组表达增多（P〈0.05）;与CINⅠ级组比较,CINⅡ/Ⅲ级组的bax/bcl-2比率降低（P〈0.05）。3）CINⅠ级组和CINⅡ/Ⅲ级组通道蛋白P-JAK2、P-STAT3与bax/bcl-2比率呈正相关（P〈0.05）。结论宫颈癌患者JAK2/STAT3信号通道激活,可能与上调bax/bcl-2的表达和调节细胞凋亡有关。

骨髓增殖性肿瘤患者外周血单个核细胞JAK2-V617F基因突变与血栓事件发生相关性分析

目的研究骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者外周血单个核细胞JAK2-V617F基因突变与血栓事件发生的相关性。方法对391例MPN患者进行血栓事件调查,同时采用实时荧光定量聚合酶链反应(QRT-PCR)法对患者外周血进行JAK2-V617F检测分析。结果 391例MPN患者中发现105例存在血栓性事件(发生率26.9%),273例JAK2-V617F阳性患者中84例发生血栓事件(30.8%),118例JAK2-V617F阴性患者21例发生血栓事件(17.8%),组间差异有统计学意义(x^2=32.30,P<0.01)。真性红细胞增多症(PV)组中,JAK2-V617F阳性患者发生血栓事件45例,发生率为29.2%(45/154),阴性患者发生血栓事件6例,发生率为42.9%(6/14),组间差异无统计学意义(x^2=2.13,P>0.05);原发性血小板增多症(ET)组中,JAK2-V617F阳性患者发生血栓事件18例,发生率为32.2%(18/56),阴性患者发生血栓事件9例,发生率为15.8%(9/57),组间差异有统计学意义(x^2=12.32,P<0.01);原发性骨髓纤维化(PMF)组中,JAK2-V617F阳性患者发生血栓事件21例,发生率为33.3%(21/63),阴性患者发生血栓事件6例,发生率为12.8%(6/47),组间差异有统计学意义(x^2=14.32,P<0.01)。结论 MPN患者血栓事件与JAK2-V617F之间存在相关性,JAK2-V617F阳性的MPN患者更易发生血栓事件,尤其是ET和PMF患者。

姜黄素联合KLF8基因siRNA调控JAK2/STAT3信号通路对乳腺癌细胞生长抑制作用的研究

目的探讨姜黄素联合Krüppel样转录因子8(KLF8)基因小干扰RNA(siRNA)调控蛋白酪氨酸激酶2/信号转导与转录因子3(JAK2/STAT3)信号通路对乳腺癌细胞生长抑制的影响。方法将生长至对数期的人乳腺癌MCF-7细胞随机分为阴性对照组、KLF8-siRNA、姜黄素组和KLF8-siRNA+姜黄素组; CCK-8试剂及流式细胞仪分别检测处理48 h各组细胞的活力及凋亡率; Western blot检测JAK2/STAT3信号通路磷酸化的蛋白酪氨酸激酶2(p-JAK2)和磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)及靶基因细胞周期素D1(Cyclin D1)和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的蛋白表达。结果转染KLF8-siRNA的MCF-7细胞KLF8的表达明显降低; KLF8-siRNA组和姜黄素组的细胞活力及Cyclin D1、Bcl-2、p-JAK2和p-STAT3的蛋白表达均显著低于阴性对照组,高于KLF8-siRNA+姜黄素组,细胞凋亡率显著高于阴性对照组,低于KLF8-siRNA+姜黄素组(P <0. 05);姜黄素、KLF8-siRNA及JAK2/STAT3信号抑制剂AG490共同处理细胞相对于姜黄素和KLF8-siRNA处理的细胞活力明显降低,凋亡率升高,Cyclin D1、Bcl-2、p-JAK2和p-STAT3的表达降低(P <0. 05)。结论下调KLF8基因表达和姜黄素均能通过抑制JAK2/STAT3信号通路降低乳腺癌细胞活力,诱导细胞凋亡,两者联合对细胞活力及凋亡的影响作用更强。

AS-PCR检测慢性骨髓增殖性疾病JAK2 V617点突变及临床意义

目的等位基因特异性聚合酶链反应(alleles specific polymerase chain reaction,AS-PCR)检测慢性骨髓增殖性疾病(CMPD)中JAK2基因V617F点突变情况并应用于临床诊治。方法AS-PCR检测74例CMPD的患者骨髓或外周血白细胞JAK2V617F点突变。其中真性红细胞增多症(PV)20例、原发性血小板增多症(ET)52例、原发性骨髓纤维化(CIMF)2例。随机抽取其中20例基因测序验证。结果JAK2 V617F阳性率分别为:PV中19/20(95.0%),ET25/52(48.1%),CIMF为2/2(100%)。结论AS-PCR法检测JAK2 V617F敏感性和准确性较高,检测阳性率与国外报道相似;该方法简单易行,适合临床应用于CMPD的诊断分类治疗。

原发性血小板增多症患者CALR、JAK2 V617F、MPL W515K基因突变率及临床特征分析

目的:分析原发性血小板增多症患者CALR、MPL W515K与JAK2 V617F基因突变率及临床特征。方法:对本院56例原发性血小板增多症患者,通过基因组DNA-PCR扩增产物直接测序法检测CALR与MPL W515K基因突变,并通过等位基因特异性PCR法检测JAK2 V617F基因突变。结果:56例患者中CALR基因突变14例,发生率为25.00%,其中Ⅰ型6例,Ⅱ型5例,Ⅲ型3例。Ⅰ型与Ⅱ、Ⅲ型CALR基因突变的患者在性别、年龄、血小板计数(Plt)、白细胞计数(WBC)及血红蛋白(Hb)水平的比较均无明显差异(P>0.05);Ⅲ型患者WBC计数较Ⅱ型者显著升高(P<0.05),而Ⅲ型和Ⅱ型组患者的性别、年龄、Hb及Plt的比较均无明显差异(P>0.05)。MPL W515K基因突变3例,发生率为5.36%;JAK2 V617F基因突变21例,发生率为37.50%。MPL W515K与JAK2 V617F阴性患者(18例)中CALR基因突变13例,发生率为72.22%(13/18),并无检出任一2种基因突变共存的病例。CALR突变者外周血Hb、WBC的水平较JAK2 V617F突变者均显著降低(P<0.05)。56例患者中,染色体核型异常3例,发生率为5.36%。染色体核型异常者CALR基因突变率(66.67%)较正常核型者(20.75%)显著升高(P<0.01)。结论:JAK2 V617F基因在原发性血小板增多症患者中的突变率较高,且MPL W515K与JAK2 V617F基因突变阴性者CALR突变率较高,这可能与染色体核型异常存在密切联系;CALR基因突变的原发性血小板增多症患者外周血Hb、WBC的含量较JAK2 V617F突变者均显著降低。

Jak2基因突变的研究进展

慢性骨髓增殖性疾病(chronic myeloproliferative disease CMPD)是一组骨髓增殖性的恶性肿瘤,包括真性红细胞增多症,原发性血小板增多症,原发性骨髓纤维化和慢性髓系白血病等,其特征是一系或多系造血细胞的异常增生。除慢性髓系白血病的发病与bcr-abl融合基因有关外,其他CMPD的发病机制仍不清楚。近年来大量研究证实,在多种CMPD中存在较高的jak2基因突变率。本文就近年来jak2基因突变与多种血液系统疾病的诊断、临床特征及其分子靶向治疗等方面的研究进展进行综述。

鲤JAK2基因分子克隆及组织表达分析

采用同源克隆策略和RACE-PCR技术,克隆得到可能的鲤(Cyprinus carpio)两面神激酶2(JAK2)基因的c DNA全长序列,包括3 378 bp的开放阅读框,732 bp的5'-非编码区,529 bp的3'-非编码区,总长度达4 639bp。开放阅读框可编码1 125个氨基酸,推测分子质量和理论等电点分别为129.33 ku和6.99。同源性分析显示,克隆的鲤鱼基因与斑马鱼(Danio rerio)JAK2同源性最高,其氨基酸序列同一性和相似度分别达89%和95%。结构域预测表明,所编码氨基酸序列包含FERM、SH2及两个酪氨酸激酶结构域,这4个结构域也保守地存在于其他脊椎动物的JAK分子中。高级结构预测显示,鲤JAK2主要包括α-螺旋(α-helix)、β-折叠(β-sheet)和连接环(loop)等3类结构元件。脊椎动物JAK分子系统进化树显示,JAK1、JAK2、JAK3和TYK2等4类JAK分子分别聚类,鲤JAK2处于JAK2支系中,与所有其他的鱼类JAK2聚为一大支,并与两栖类和哺乳类组成的另一大支构成姊妹群,表明它们具有共同的祖先基因,为直系同源关系。实时荧光定量PCR检测结果表明,鲤JAK2在皮肤中表达量最高,其次是肠、血液和脑,而在肌肉、鳃、头肾、心、肝、脾中表达量较低;鲤JAK3在脾中表达量最高,在其他组织中表达量均很低,甚至未检出。

JAK2基因突变阳性骨髓增殖性肿瘤患者临床特征的分析

目的:探讨骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者JAK2基因突变阳性与临床指标的相关性。方法:对2017年9月至2020年1月于中国中医科学院西苑医院血液科就诊的122例MPN患者进行回顾性研究,分析JAK2基因突变与患者性别、年龄、外周血细胞、脾增大和血栓出血事件发生率等相关性。结果:122例MPN患者中包括真性红细胞增多症(PV) 36例(29.5%)、原发性血小板增多症(ET) 56例(45.9%)和原发性骨髓纤维化(MF) 30例(24.6%)。MPN患者JAK2基因突变率为64.6%(79/122),PV、ET和MF各组患者JAK2基因突变率分别为77.7%(28/36)、60.7%(34/56)和56.7%(17/30),PV组的JAK2基因突变率与ET组突变率相比有统计学意义(P<0.05);JAK2基因突变组血红蛋白(Hb)水平[(150.0±39.6) g/L]较野生型组[(129.4±38.9) g/L]明显升高(P<0.05);JAK2基因突变组白细胞数(WBC)[(9.5±4.7)×10^(9)/L]较野生型组[(8.4±46.9)×10^(9)/L]明显升高(P<0.05)。在PV组中,JAK2基因突变组血小板(PLT)数[(370.2±113.1)×10^(9)/L]较野生型组[(264.8±63.9)×10^(9)/L]明显升高(P <0.05)。MPN患者脾增大发生率为35.2%(43/122),MF组患者脾增大发生率是63.3%(19/30),且MF组中JAK2基因突变组脾增大发生率为82.4%(12/17),较野生型组的脾增大发生率(38.5%,5/13)显著升高(P<0.05)。结论:MPN患者JAK2基因突变率较高,PV患者JAK2基因突变率比ET和MF患者更高;MPN患者中JAK2基因的突变与血象指标有关;MF患者脾增大发生率最高,且脾增大与MF患者中JAK2基因突变的发生相关。