铁皮石斛多糖调控JAK2/STAT5通路抑制非酒精性脂肪肝小鼠肝脏内质网应激作用分析

目的 探讨分析铁皮石斛多糖调控JAK2/STAT5通路抑制非酒精性脂肪肝小鼠肝脏内质网应激作用。方法 将50只小鼠随机分为对照组、模型组、低剂量组(20μg/mL)、中剂量组(40μg/mL)及高剂量组(80μg/mL),每组10只,除对照组外,其余小鼠使用高脂饲料诱发脂肪肝模型,低、中、高剂量组小鼠分别使用不同剂量铁皮石斛灌胃。连续给药8周后,取各组小鼠肝组织样本进行HE染色,检测各组小鼠血清肝功能及血脂指标,并采用RT-qPCR法检测小鼠肝组织中JAK2、STAT5、GRP78、CHOP、Caspase 12、Bcl-2、Bax基因表达情况。结果 模型组及给药组小鼠体质量、肝脏重量以及肝脏指数均较对照组显著升高(P<0.05),而给药组小鼠体质量、肝脏重量以及肝脏指数均较模型组降低(P<0.05),且呈剂量依赖关系。模型组及给药组AST、ALT、TC、TG、LDL-C均较对照组显著升高(P<0.05),HDL-C较对照组显著降低(P<0.05),而给药组小鼠AST、ALT、TC、TG、LDL-C均较模型组降低(P<0.05),HDL-C较模型组升高(P<0.05),且呈剂量依赖关系。肝组织HE染色结果显示,模型组肝小叶结构出现严重破坏,可见大量脂肪空泡聚集,铁皮石斛多糖各组小鼠肝细胞可见明显地排列不整齐,脂肪空泡汇聚,较模型组有不同程度的改善。模型组及给药组小鼠肝组织JAK2、STAT5以及Bcl-2基因相对表达量显著降低(P<0.05),GRP78、CHOP、Caspase 12以及Bax基因相对表达量显著升高(P<0.05),各铁皮石斛多糖药物干预组JAK2、STAT5以及Bcl-2基因相对表达量显著升高(P<0.05),GRP78、CHOP、Caspase 12以及Bax基因相对表达量显著降低(P<0.05),且呈明显的剂量依赖性。结论 铁皮石斛多糖可有效改善非酒精性脂肪肝小鼠肝损伤,且疗效呈显著的剂量依赖,其机制可能与激活JAK2/STAT5通路抑制内质网应激有关。

MDS-RA骨髓造血细胞JAK2/STAT5通路活化及AG490干预研究

目的探索一种非受体型酪氨酸激酶2/信号转导子和转录活化子5(JAK2/STAT5)通路特异性抑制剂———苯亚甲基丙二腈脂类衍生物AG490对骨髓增生异常综合征-难治性贫血(MDS-RA)骨髓造血细胞细胞因子及信号转导的影响。方法建立MDS-RA骨髓造血细胞培养体系JAK2、STAT5、Bc l-xL基因表达的荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测方法;粒单集落刺激因子(GM-CSF)激活10例MDS-RA骨髓单个核细胞培养液JAK2、STAT5、Bc l-xL表达,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测AG490组、空白对照组培养体系上清细胞因子白细胞介素(IL)-2、IL-3、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平,FQ-PCR检测上述两组培养体系单个核细胞JAK2、STAT5、Bc l-xL基因表达拷贝数。结果AG490组IL-3、IFN-γ水平明显低于空白对照组(P<0.01),IL-2、INF-α水平差异无显著性;AG490组JAK2、STAT5、Bc l-xL基因表达与空白对照组比较,差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。结论AG490可以调整MDS-RA骨髓造血细胞培养体系上清细胞因子水平,进而影响JAK2/STAT5通路信号转导,下调Bc l-xL表达。

有氧运动干预非酒精性脂肪肝小鼠肝脏JAK2/STAT5信号通路的变化

背景:酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路在脂质代谢中起重要作用,运动有效预防与治疗非酒精性脂肪肝与改善内脏脂质沉积和脂质代谢密切相关。目的:探讨有氧运动对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路的影响及可能作用机制。方法:6周龄C57BL/6雄性小鼠48只,分为普通膳食组及高脂膳食诱导组(n=24),第10周末2组各随机抽取4只进行油红O染色观察肝脏病理形态变化。确定造模成功后,普通膳食组随机分为普通膳食+安静组、普通膳食+运动组(n=10);高脂膳食诱导组随机分为非酒精性脂肪肝+安静组、非酒精性脂肪肝+运动组(n=10),连续干预8周,直至实验结束。观察小鼠肝脏病理形态变化,检测小鼠肝脏组织泌乳素受体、肝脏酪氨酸激酶2、信号传导及转录激活因子5a、肝脏酪氨酸激酶2磷酸化、信号传导及转录激活因子5磷酸化蛋白表达量。结果与结论:(1)与普通膳食+安静组相比,非酒精性脂肪肝+安静组肝细胞脂肪变性加重,肝脏内酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子信号通路蛋白表达量降低;(2)与非酒精性脂肪肝+安静组相比,非酒精性脂肪肝+运动组的肝细胞脂肪变性减轻,肝脏内酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路蛋白表达量升高;(3)肝脏病理形态指标与催乳素受体、肝脏酪氨酸激酶2、肝脏酪氨酸激酶2磷酸化、信号传导及转录激活因子5磷酸化均呈显著负相关(P<0.05);(4)提示有氧运动干预可通过调节非酒精性脂肪肝小鼠肝脏酪氨酸激酶2/信号传导及转录激活因子5信号通路,改善肝内脂质沉积及肝脏脂肪变性程度。

EPO通过JAK2/STAT5信号通路减轻大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的研究促红细胞生成素(EPO)减轻血管钙化的信号通路。方法为了分别探索JAK2/STAT5、PI3K/Akt和ERK三条信号通路在EPO减轻血管钙化中的作用,将大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)各分为4组:对照组、钙化组、钙化+EPO组和钙化+EPO+各信号通路阻断剂组(AG490或LY294002或PD98059)。采用高磷诱导细胞钙化。Western blot法检测VSMCs收缩表型标志分子平滑肌蛋白(Smoothelin)和钙结合蛋白(Calponin)以及成骨表型标志分子骨桥蛋白(OPN)的蛋白表达;碱性磷酸酶(ALP)活性、钙含量检测和茜素红染色检测钙化水平。结果与对照组相比,钙化组Smoothelin和Calponin蛋白表达水平降低(P<0.01),而OPN蛋白表达水平上升(P<0.05)。与钙化组相比,钙化+EPO组Smoothelin和Calponin蛋白水平显著升高(均P<0.01),OPN蛋白表达降低(P<0.05);ALP活性、钙含量和钙盐沉积均减少(均P<0.01)。与钙化+EPO组相比,钙化+EPO+AG490组Smoothelin和Calponin蛋白水平降低(P<0.05),而OPN蛋白水平显著上升(P<0.01);ALP活性、钙含量和钙盐沉积均增加(P<0.01或0.05)。与钙化+EPO组相比,钙化+EPO+LY294002组和钙化+EPO+PD98059组的钙含量和ALP活性均无明显变化。结论JAK2/STAT5通路可能介导了EPO减轻VSMCs钙化的作用。

rhEPO通过调节JAK2/STAT5信号通路减少大鼠脑出血后神经细胞凋亡

目的探讨重组人促红细胞生成素rhEPO是否通过JAK2/STAT5信号通路减少脑出血后神经细胞的凋亡。方法将8周龄的Wistar雄性大鼠30只随机分3组:假手术组、ICH模型组、rhEPO组,每组10只。ICH模型组大鼠进行ICH造模,假手术组除不注血外,其余步骤同ICH模型组,rhEPO组术后5 min给予腹腔注射rhEPO,所有动物24 h后进行神经功能学评分,收集大鼠脑组织,利用原位缺口末端标记法检测神经细胞凋亡的变化;采用免疫组织化学SP法检测凋亡蛋白Caspase3表达;并采用Real-time PCR和Western blot检测磷酸化JAK2、磷酸化STAT5基因和蛋白表达情况。结果手术建立脑出血模型后24 h进行神经功能评分。按Longa5分制标准判定,ICH组4只评价为1分,3只评价为2分,2只评价为3分;rhEPO组治疗后,5只评价为1分,2只评价为2分,1只评价为3分,说明rhEPO可以改善大鼠脑出血后神经元损伤,恢复神经功能。与假手术组相比,ICH模型组和rhEPO组中神经元凋亡细胞及Caspase3的蛋白表达阳性细胞数明显增多(P<0.05),而rhEPO组中凋亡细胞与ICH模型组相比明显减少(P<0.05);与假手术组相比,ICH模型组和rhEPO组中JAK2和STAT5的蛋白表达和m RNA表达显著上升(P<0.05),与ICH模型组相比,rhEPO组中JAK2和STAT5的蛋白表达和m RNA表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论外源性rhEPO可以通过调节JAK2/STAT5信号改善大鼠脑出血后神经元损伤,对于神经系统具有保护作用。

大鼠肾小球系膜细胞活性氧簇JAK2/STAT5通路与TIMP-1之间的关系及对其凋亡的影响

目的:探讨高糖(HG)条件下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)活性氧簇(ROS)、JAK2/STAT5信号通路与金属蛋白酶1组织抑制剂(TI MP-1)之间的关系及对其凋亡的影响。方法:在HG培养条件下的RMC中,根据是否使用DPI(NADPH氧化酶特异性抑制剂,可抑制ROS产生)和AG490(JAK2特异性抑制剂)刺激24 h,将RMC分为HG组、HG+AG490组、HG+DPI组和HG+AG490+DPI组四组。采用流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,RT-PCR检测各组RMC Bcl-xl、Cyclin D1、P27kip1、JAK2和TI MP-1 mRNAs的表达,Western blot检测胞浆中JAK2、STAT5及相应磷酸化蛋白的表达。结果:HG组、HG+AG490组、HG+DPI组和HG+AG490+DPI组的细胞总凋亡率分别为:(10.69±0.26)%、(20.52±0.51)%、(24.56±0.36)%和(26.01±0.28)%;加入AG490和(或)DPI后RMC总凋亡率明显升高(P<0.01),Bcl-xl、Cyclin D1、JAK2和TI MP-1 mRNAs表达显著减少,P27kip1 mRNA表达增加。AG490和(或)DPI可使各组RMC P-JAK2和P-STAT5的表达显著减少,尤其在加入DPI后减少更加明显。结论:HG条件下JAK2/STAT5信号通路受ROS调控;阻断ROS生成和(或)JAK2/STAT5信号通路,可使RMC TI MP-1 mRNA表达减少,凋亡增加。

miR-370-3P通过调节JAK2/STAT5B信号通路抑制人关节软骨细胞增殖

目的研究非编码单链RNA(micro RNA,miRNA)miR-370-3P是否通过调控JAK2/STAT5B信号通路调节人关节软骨细胞(human chondrocytes-articular,HC-a)的增殖,并探讨其潜在作用机制。方法 (1)通过脂质体转染HC-a细胞构建miR-370-3P过表达/低表达人关节软骨细胞模型,分为5组:miR-370-3P模拟物mimic组(miR-370-3P过表达组)、miR-370-3P遏制物inhibitor组(miR-370-3P低表达组)、正常对照组、mimic空载体对照组(mimic normal control,mNC)、inhibitor空载体对照组(inhibitor normal control,iNC)。(2)miRNA实时荧光定量PCR检测各组HC-a细胞miR-370-3P的表达。(3)qRT-PCR检测各组HC-a细胞JAK2、STAT5B mRNA表达。(4)Western blot检测各组HC-a细胞中JAK2、STAT5B蛋白表达。(5)MTT比色法检测各组HC-a细胞相对增殖情况。(6)双荧光素酶实验:构建JAK2、STAT5B野生型和突变型双荧光素酶报告基因载体,分别与miR-370-3P模拟物和阴性对照序列共转染293T细胞,检测各组荧光素酶活性。结果 miRNA实时荧光定量PCR结果显示:与正常对照组相比,mimic组miR-370-3P表达上调(P<0.05),inhibitor组miR-370-3P表达下调(P<0.05),且空载体对照组和正常对照组之间的差异无统计学意义,表明miR-370-3P过表达/低表达软骨细胞模型构建成功。qRT-PCR结果显示:相比于正常对照组,JAK2和STAT5B在mimic组的mRNA相对表达量下调,在inhibitor组JAK2 mRNA和STAT5B mRNA相对表达量上调(P<0.05)。Western blot检测结果显示:JAK2和STAT5B蛋白表达在mimic组也有显著下调,在inhibitor组上调。MTT检测结果显示:miR-370-3P的过表达会降低HC-a的存活率(P<0.05),提示miR-370-3P的过表达会抑制人关节软骨细胞(HC-a)的增殖。双荧光素酶实验结果显示:miR-370-3P和JAK2-WT(野生型)、STAT5B-WT(野生型)质粒共转染后,荧光表达较对照组有显著下调(P<0.05),提示miR-370-3P可与JAK2-3′UTR、STAT5B-3′UTR直接结合发挥作用。结论 miR-370-3P可通过直接靶向调控JAK2/STAT5B信号通路进而抑制人关节软骨细胞(HC-a)的增殖。

糖皮质激素调节JAK2/STAT5信号抑制小鼠气道重塑平滑肌细胞的增殖作用

目的观察糖皮质激素(glucocorticoid,GCS)通过调节JAK2/STAT5信号通路,抑制小鼠气道重塑气道平滑肌细胞增殖的作用。方法以卵白蛋白致敏和雾化激发制备慢性小鼠哮喘气道重塑模型,计数支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)占白细胞总数的百分比;肺组织切片HE染色观察小鼠气道平滑肌厚度的病理改变;Western Blot检测肺组织中磷酸化p-JAK2和p-STAT5的蛋白表达。结果糖皮质激素能显著降低哮喘模型小鼠BALF中EOS的百分比(P<0.05);糖皮质激素组小鼠气道平滑肌厚度低于模型组(P<0.05);糖皮质激素能显著降低p-JAK2和p-STAT5的蛋白表达(P<0.05)。结论糖皮质激素能通过调节JAK2/STAT5信号通路够有效缓解小鼠气道重塑气道平滑肌细胞增殖的作用,具有一定的气道保护作用。

补肾益髓生血法AA大鼠含药血清对大鼠造血干细胞红系分化JAK2/STAT5信号通路的影响

目的:探讨补肾益髓生血法再生障碍性贫血(Aplastic Anemia,AA,简称再障)大鼠含药血清对大鼠骨髓造血干细胞红系分化JAK2/STAT5信号通路的影响。方法:在前期整体动物实验的基础上,体外培养正常大鼠造血干细胞,诱导其定向红系分化,分为空白对照组、正常对照组、模型组、司坦唑醇组(康力龙组)、益髓生血组、温肾生血组和滋肾生血组,在培养体系中加入含药血清干预4d后,提取红系细胞总RNA及蛋白,分别采用RT-PCR和Western blot检测细胞JAK2、STAT5mRNA及蛋白表达情况。结果:与正常对照组相比,模型组细胞JAK2、STAT5mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.01);与模型组相比,各治疗组JAK2、STAT5mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.01或P<0.05);滋肾生血组JAK2、STAT5mRNA及蛋白表达高于益髓生血组和温肾生血组(P<0.05)。结论:补肾益髓生血法能够增强JAK2、STAT5的表达,可能通过影响JAK2/STAT5信号通路来促进红系细胞的分化成熟,其中滋肾生血法优于益髓生血法和温肾生血法。

糖皮质激素对高氧诱导的新生小鼠肺功能损伤、炎症反应和JAK2/STAT5通路的影响

目的探究糖皮质激素(Glucocorticoid,Gluc)对高氧诱导的新生小鼠肺功能损伤、炎症反应和JAK2/STAT5通路的影响,为治疗肺功能损伤提供理论依据。方法构建肺损伤小鼠模型,将小鼠随机分为:对照组、Hyperoxia组、低剂量Gluc组、中剂量Gluc组、高剂量Gluc组。通过动物肺功能分析系统检测静息通气量、气道阻力、气道压力、肺容积、最大吸气流量。HE染色和TUNEL染色观察小鼠肺脏组织形态和细胞凋亡情况;RT-PCR、Western Blot检测α-SMA、TGF-β表达量;Elisa检测IL-6、MCP-1、iNOS含量;Western Blot检测JAK2、STAT5的磷酸化情况。结果与对照组相比,Hyperoxia组小鼠静息通气量、气道阻力、气道压力、肺容积、最大吸气流量显著降低(P<0.05),细胞凋亡数、α-SMA与TGF-β表达量、EOS比值、IL-6、MCP-1、iNOS含量均显著增加(P<0.05),且JAK2、STAT5磷酸化水平显著升高(P<0.05)。而中、高剂量Gluc可显著逆转高氧对小鼠以上指标的影响。此外,Hyperoxia组小鼠出现肺实质结构紊乱、肺泡间隔增宽等组织形态的改变,在低、中、高剂量Gluc组中组织形态改变程度逐渐降低。结论糖皮质激素可缓解肺组织损伤并下调模型小鼠肺脏组织中炎症因子含量,同时抑制JAK2/STAT5通路活性,对高氧诱导的肺组织损伤具有较好的治疗作用。

基于EPO介导的JAK2/STAT5信号通路研究百会、大椎刺络促缺血性脑卒中后血管新生的调控机制

目的基于促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)介导的JAK2/STAT5信号通路探讨百会、大椎刺络促缺血性脑卒中后血管新生的调控机制。方法选取健康SD雄性大鼠150只,随机分为正常对照组、假手术组、模型对照组、刺络治疗组、刺络+EPO拮抗组,每组30只;正常对照组不进行手术,假手术组仅分离血管而不插线栓,模型对照组、刺络治疗组、刺络+EPO拮抗组采用改良的Zea-Longa法制备大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注模型(middle cerebral artery occlusion/reperfusion model,MCAO/R)大鼠。模型制备后刺络治疗组、刺络+EPO拮抗组采用“百会”“大椎”穴刺络进行干预,刺络+EPO拮抗组在针刺前将脂质体-siEPO2复合物按5 mg/kg剂量对大鼠进行腹腔注射,使之进入合成EPO的靶细胞,在细胞内引起针对EPO的RNA干扰效应。采用苏木精-伊红染色观察各组大鼠脑皮质病理形态,RT-PCR法检测各组大鼠脑皮质中EPO、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)mRNA表达水平,Western Blot法检测各组大鼠脑皮质中P-JAK2、P-STAT5、VEGF蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型对照组及刺络+EPO拮抗组大鼠脑皮质病理损伤严重;与模型对照组比较,刺络治疗组大鼠脑皮质病理损伤明显改善。与正常对照组比较,模型对照组大鼠脑皮质中EPO、VEGF mRNA表达水平显著升高(P<0.05),P-JAK2、P-STAT5、VEGF蛋白表达水平显著升高(P<0.05),刺络治疗会进一步增强这种趋势;与刺络治疗组比较,刺络+EPO拮抗组大鼠脑皮质中EPO、VEGF mRNA表达水平降低(P<0.05),P-JAK2、P-STAT5、VEGF蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论通过百会、大椎刺络能上调MCAO/R模型大鼠EPO的表达水平,激活JAK2/STAT5信号通路,促进下游VEGF的表达而促进缺血性脑卒中后血管的新生。

黄芪-莪术对C5a介导JAK2/STAT3通路调控Lewis肺癌小鼠Th17/Treg细胞平衡影响的实验研究

目的探讨黄芪-莪术影响C5a介导JAK2/STAT3通路调控肿瘤微环境中Th17/Treg细胞平衡,从而阐明其在此途径抑制肿瘤进展的相关机制。方法40只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型对照组、中药干预组、阳性对照药(PMX53)组,每组各10只。腋下接种Lewis细胞建立肺癌小鼠模型,于接种后第3天开始,中药干预组按8.2 g/kg剂量给予中药浓煎液灌胃,模型对照组和PMX53组予等容积灭菌双蒸水灌胃,连续14 d;PMX53组分别于第3、6、9、12、15天按1mg/kg剂量给予腹腔注射PMX53,模型对照组和中药干预组同时腹腔注射等容PBS溶液。每2 d测算各组小鼠肿瘤体积、绘制肿瘤生长曲线;于第15天处死,剖取瘤块,ELISA法检测血清C5a、IL6、IL-10、IL-17、TGF-β等因子水平,流式细胞术检测并计算外周血和肿瘤组织中Th17/Treg细胞比例,Western Blot和Real-time PCR法检测肿瘤组织中JAK2/STAT3信号通路相关蛋白及mRNA表达。结果与模型对照组比较,中药干预组和PMX53组肿瘤生长较缓慢,补体C5a、JAK2和STAT3蛋白及mRNA水平、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值、Treg占比均降低,SOCS3蛋白及mRNA水平、Th17/Treg比例增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪-莪术可降低补体C5a进而抑制JAK2/STAT3通路活化,并调节肿瘤微环境中Th17/Treg平衡达到抑制肿瘤生长的作用。

基于JAK2/STAT3通路研究周氏固金消瘤汤含药血清对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移能力的影响

目的:探讨周氏固金消瘤汤(ZSGJXLT)含药血清对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移能力的影响及其机制。方法:应用健康SD大鼠制备ZSGJXLT含药血清与空白血清,将0%(空白血清)及5%、10%、20%、30%、40%ZSGJXLT含药血清作用于A549细胞,CCK-8法测算细胞活性抑制率和半数抑制浓度(IC_(50))。用0%ZSGJXLT(空白对照组)、5%ZSGJXLT(ZSGJXLT低剂量组)、10%ZSGJXLT(ZSGJXLT中剂量组)及20%ZSGJXLT(ZSGJXLT高剂量组)含药血清培养A549细胞,细胞划痕实验及高内涵细胞成像技术观察细胞运动情况;Transwell侵袭及迁移实验观察细胞侵袭及迁移情况;Western blot法检测A549细胞JAK2/STAT3通路相关蛋白表达情况。结果:与空白对照组相比,不同浓度ZSGJXLT含药血清组A549细胞活性受到不同程度的抑制,与时间及浓度呈正相关性,24 h的IC_(50)为25.42%。与空白对照组相比,ZSGJXLT中、高剂量组A549细胞划痕愈合率、细胞移动速度均显著下降(均P<0.05),不同浓度ZSGJXLT含药血清组A549细胞侵袭及迁移数量明显减少(均P<0.05)。与空白对照组比较,ZSGJXLT中、高剂量组A549细胞的p-JAK2、p-STAT3、VEGFA蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);不同浓度ZSGJXLT含药血清组MMP-2、MMP-9、N-cadherin蛋白表达有下调趋势,而E-cadherin蛋白表达有上调趋势,呈剂量依赖性,其中ZSGJXLT高剂量组与空白对照组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:周氏固金消瘤汤含药血清能抑制A549细胞侵袭迁移能力,其机制可能与调控JAK2/STAT3通路有关。

真武汤加减治疗中重度变应性鼻炎的疗效及对JAK2/STAT信号通路的影响

目的:观察真武汤加减治疗中重度变应性鼻炎肾阳虚证的疗效及对JAK2/STAT信号通路的影响。方法:120例变应性鼻炎患者随机分为2组,每组60例。对照组给予糠酸莫米松联合盐酸左西替利嗪,观察组口服真武汤加减,治疗4周。比较两组患者鼻症状积分(TNSS)、圣乔治呼吸问卷(SGRQ)、中医症状、鼻腔最小横截面积(NMCA)、0~7 cm阶段鼻腔容积(NCV_(0-7))、吸气过程中鼻通气阻力(iNAR)和呼气过程中鼻通气阻力(eNAR)、血清免疫功能指标(IgE、IgG、IgA、IgM)、血清和鼻分泌液中炎性因子(EOT、CCR3、EOS、IL-17)及鼻分泌液中JAK2、STAT3、STAT4、STAT5水平。比较两组临床疗效及不良反应。结果:观察组总有效率96.3%,显著高于对照组的80.4%(P<0.05)。治疗后,与对照组比较,观察组TNSS、SGRQ、中医症状评分及iNAR、eNAR水平显著降低(P<0.05),NMCA、NCV_(0-7)、IgG、IgA、IgM水平显著升高,IgE、EOT、CCR3、EOS、IL-17、JAK2、STAT3、STAT4、STAT5水平显著降低(P<0.05)。观察组不良反应发生率(1.7%)显著低于对照组(23.2%)(P<0.05)。结论:真武汤加减可明显缓解中重度变应性鼻炎肾阳虚证患者的鼻部症状,其作用机制可能与调节JAK2/STAT信号通路有关。

静态磁场通过激活FGFR1/JAK2/STAT3信号通路促进皮肤成纤维细胞的增殖活性和迁移表型

目的:通过体外实验探讨静态磁场(SMF)对皮肤成纤维细胞增殖活性和迁移表型的调控作用与潜在机制。方法:将人皮肤成纤维细胞(HSFs)分为5组,包括对照组、SMF组、SMF+阿魏酸组、SMF+芦可替尼组、SMF+Stattic组。对照组为正常培养的HSFs;SMF组的HSFs细胞暴露于1mT的SMF中。其余三组分别将FGFR1、JAK2、STAT3的抑制剂(3μmoL/L阿魏酸、3nmoL/L芦可替尼、20μmoL/L的Stattic)与HSFs一起预培养,并暴露于1mT的SMF中,所有组均处理24h。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析细胞的增殖活性。用ELISA试剂盒法检测人类B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(BAX)的水平。用Western blot检测凋亡标志蛋白cleaved-caspase3及FGFR1、JAK2、STAT3、磷酸化的(p)-FGFR1、p-JAK2、p-STAT3的表达以及细胞迁移相关表型高迁移率组蛋白1(HMGB1)、波形蛋白(vimentin)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2的表达。结果:与对照组比,SMF组的细胞增殖活性增加,BAX的水平减少,cleaved-caspase3的蛋白表达水平下调,p-FGFR1、p-JAK2、p-STAT3、HMGB1、vimentin、VEGFA、MMP-9、MMP-2的表达水平均显著上调(均P<0.05)。与SMF组比,SMF+阿魏酸组的细胞增殖活性降低,BAX的水平增加,cleaved-caspase3的蛋白表达水平上调,而p-FGFR1、p-JAK2、p-STAT3、HMGB1、vimentin、VEGFA、MMP-9、MMP-2的表达均显著下调(均P<0.05)。与SMF组比,SMF+芦可替尼组的细胞增殖活性降低,BAX的水平增加,cleaved-caspase3的蛋白表达水平上调,JAK2、p-JAK2、p-STAT3、HMGB1、vimentin、VEGFA、MMP-9、MMP-2的表达水平均显著下调(均P<0.05)。与SMF组比,SMF+Stattic组的细胞增殖活性降低,BAX的水平增加,cleaved-caspase3的蛋白表达水平上调,STAT3、p-STAT3、HMGB1、vimentin、VEGFA、MMP-9、MMP-2的表达水平均显著下调(均P<0.05)。结论:SMF通过激活FGFR1/JAK2/STAT3信号通路促进皮肤成纤维细胞的增殖活性和迁移表型。

miR-205通过JAK2/STAT3信号通路影响三阴性乳腺癌细胞的体外转移活性

目的探究miR-205与JAK2/STAT3在三阴性乳腺癌发展中的作用关系,以期为三阴性乳腺癌的治疗提供新思路。方法使用实时荧光定量PCR法和Western印迹检测癌组织和癌旁组织中miR-205和JAK2的表达水平。用miR-205 mimic、miR NC、pcDNA3.1 JAK2和pcDNA3.1 NC转染MDA-MB-231细胞后,Western印迹实验检测JAK2途径蛋白的表达。划痕实验检测MDA-MB-231细胞的迁移情况,Transwell实验检测细胞的侵袭能力,集落形成实验分析MDA-MB-231细胞的生长能力,流式细胞术分析MDA-MB-231细胞凋亡情况,荧光素酶报告基因实验分析miR-205和JAK2的相互作用情况。结果在三阴性乳腺癌组织中,miR-205表达水平降低,JAK2的表达水平升高。通过在MDA-MB-231细胞实验中过表达miR-205后,三阴性乳腺癌细胞的生长、侵袭和转移能力均受到抑制,同时凋亡率显著增加。另外,在MDA-MB-231细胞实验中过表达JAK2后,三阴性乳腺癌细胞的生长、侵袭和转移能力均增加,同时凋亡率显著降低。荧光素酶报告基因实验发现,miR-205能够靶向抑制JAK2活性。结论miR-205能够靶向调控JAK2/STAT3途径,进而抑制三阴性乳腺癌细胞的生长、侵袭和转移,并同时促进三阴性乳腺癌细胞凋亡。

基于JAK/STAT通路探究温阳通络针灸法对缺血缺氧脑瘫幼鼠相关蛋白JAK2、STAT3的影响

目的探讨温阳通络针灸法对缺血缺氧脑瘫幼鼠的JAK2、p-JAK2、STAT 3、p-STAT3蛋白的影响,方法选用SD清洁级新生大鼠,随机分为空白组、假手术组、模型+药物组、模型+针灸组、模型+针灸+药物组,共6组,每组30只;采用2%戊巴比妥钠麻醉,小心剪开颈部皮肤,分离出迷走神经,并且暴露出颈总动脉,选用6-0的丝线双重结扎颈总动脉,并且中间离断颈总动脉,造成永久性失流,接着将含8%氧气的92%氮氧混合气体以1L/min的流速持续通入缺氧箱中,假手术组仅作皮肤切口,不做缺血处理亦不做缺氧处理,于术后第3天开始干预,药物治疗选用神经节苷脂治疗,隔天1次腹腔注射,针灸治疗穴位选取:百合、大椎、至阳,斜刺百会0.5 cm留针25 min,艾灸大椎、至阳25 min,采用Western Blot(WB)方法分析不同分组中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3表达。结果与假手术组比较,模型+药物组、模型+针灸组、模型+药物+针灸组的p-JAK2、p-STAT3的表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,模型+药物组、模型+针灸组、模型+药物+针灸组的p-JAK2、p-STAT3表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论温阳通络针灸可明显下调缺血缺氧脑瘫幼鼠p-JAK2、p-STAT3的蛋白表达,减少缺血缺氧对脑组织造成的损伤,促进神经功能恢复。

基于IL-6/JAK2/STAT3信号轴研究阳和平喘颗粒调控哮喘大鼠气道重塑作用机制

目的:研究阳和平喘颗粒对哮喘大鼠气道重塑及白细胞介素-6(IL-6)/Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录活化因子3(STAT3)信号轴在其中的作用机制。方法:选取健康雄性SD大鼠42只,随机数字法分为正常对照组7只与造模组35只,造模组采用卵清蛋白(OVA)联合氢氧化铝腹腔注射2周的方式进行致敏,正常对照组采用等量的生理盐水;2周后将造模组随机分为模型组、阳和平喘高、中、低剂量组和地塞米松组,每组7只;后4周采用OVA雾化+灌胃的方式进行激发和治疗,阳和平喘高中低组每日分别予以15.48、7.74、3.87 g/kg阳和平喘颗粒灌胃,地塞米松组予以0.0625 mg/kg地塞米松进行灌胃,其余组灌胃等量生理盐水。HE、PAS、Masson染色观察大鼠肺组织病理学变化;ELISA检测大鼠血清中IL-6、IL-23、IL-17A水平;Western blot检测肺组织中JAK-2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3蛋白表达量;qRT-PCR检测大鼠肺组织中IL-6、JAK2、STAT3的mRNA水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠肺组织有大量炎性细胞浸润,杯状细胞增生、上皮下胶原纤维沉积、气道上皮增厚较为明显;血清中IL-6、IL-23、IL-17A水平显著升高(P<0.01),肺组织JAK-2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3的蛋白表达量和IL-6、JAK2、STAT3的mRNA表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组炎性细胞浸润、杯状细胞增生、上皮下胶原纤维沉积、气道上皮增厚程度明显减轻,血清中IL-6、IL-23、IL-17A水平显著降低(P<0.01),肺组织JAK-2、P-JAK2、STAT3、P-STAT3的蛋白表达量和IL-6、JAK2、STAT3的mRNA水平显著降低(P<0.01)。结论:阳和平喘颗粒可明显缓解哮喘大鼠气道重塑,其机制可能是通过抑制IL-6/JAK2/STAT3信号轴发挥作用。

IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路增强小鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能

目的 探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法 脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型,ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6的含量。体外培养MH-S细胞,在信号转导子与转录激活子3 (STAT3)抑制剂Stattic(5μmol/L)存在与否的情况下,再加入IL-6(10 ng/mL~500 ng/mL)刺激6 h,加入荧光微球孵育2 h后,采用流式细胞术检测MH-S细胞吞噬荧光微球情况;Western blot法检测磷酸化的Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、肌动蛋白相关蛋白2(Arp2)、纤维型肌动蛋白(F-actin)的表达水平。结果 鼻腔滴入LPS后,小鼠BALF中IL-6含量显著升高。随着IL-6刺激剂量的增加,MH-S细胞吞噬荧光微球的作用增强,Arp2、 F-actin蛋白的表达水平升高。100 ng/mL IL-6刺激MH-S细胞后,p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达水平升高。阻断MH-S细胞STAT3信号后,IL-6促进细胞吞噬的效应完全消失,IL-6诱导的Arp2、 F-actin蛋白表达增加被抑制。结论 IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路促进MH-S细胞Arp2、 F-actin蛋白的表达增强吞噬功能。