阿帕替尼通过ERK/JAK2-STAT3途径对MDA-MB-468荷瘤动物模型肿瘤细胞生长抑制和凋亡的影响及其作用机制探讨

目的:探究阿帕替尼(APA)通过ERK/JAK2-STAT3途径对三阴性乳腺癌(TNBC)模型的影响和作用机制。方法:通过皮下注射MDA-MB-468细胞构建荷瘤裸鼠模型,随机分为对照组、低剂量阿帕替尼组(4.15 mg·kg^(-1),灌胃)和高剂量APA组(8.30 mg·kg^(-1),灌胃),每组各6只。比较各组细胞凋亡、增殖、ERK/JAK2-STAT3水平。结果:高剂量APA组抑瘤率为(31.37±1.95)%,高于低剂量APA组。高剂量APA组细胞凋亡率为(24.52±3.27)%,显著高于低剂量APA组和对照组,P<0.05。高剂量APA组Ki-67染色评分为(4.63±1.26)分,显著低于低剂量APA组和对照组,P<0.05。低剂量APA组和高剂量APA组的血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)、ERK/JAK2-STAT3途径显著低于对照组(P<0.05)。高剂量APA组的VEGFR-2蛋白水平显著低于低剂量APA组(P<0.05)。结论:阿帕替尼可能通过抑制ERK/JAK-STAT通路抑制TNBC进展。

JAK2-STAT3途径介导凝血酶诱导的小胶质细胞iNOS的激活致多巴胺能神经元变性

目的探讨JAK2-STAT3途径与凝血酶诱导多巴胺能神经元变性作用的关系。方法20U/ml凝血酶或AG490(10μmol/L)预处理+凝血酶(20U/ml)处理原代培养的小胶质细胞或中脑腹侧混合培养体系,用Westernblot检测小胶质细胞P-JAK1、P-JAK2、JAK2、STAT3、P-STAT3的表达;免疫荧光观察多巴胺能神经元的变性;Westernblot、RT-PCR及激光共聚焦观察iNOS的表达。结果凝血酶处理小胶质细胞2h后诱导JAK2、STAT3的磷酸化,2h和4h分别增加小胶质细胞iNOS的转录和表达,并且24h诱导中脑培养体系多巴胺能神经元变性。而AG490预处理显著地减少对应凝血酶处理组小胶质细胞JAK2和STAT3的磷酸化,抑制iNOS的表达,并且缓解多巴胺能神经元的变性。结论JAK2-STAT3途径介导凝血酶诱导的小胶质细胞iNOS的激活,导致多巴胺能神经元变性。

基于JAK2-STAT3信号通路探讨热毒宁注射液治疗大鼠急性肺损伤的作用机制

目的:探讨热毒宁注射液通过调节JAK2-STAT3信号通路干预急性肺损伤(ALI)大鼠作用机制。方法:30只Wistar大鼠随机分为五组,分别为模型对照组、空白对照组、地塞米松组、热毒宁高剂量组和热毒宁低剂量组。每组大鼠均进行腹腔注射给药,每日1次,连续5 d,末次给药后,采用脂多糖滴注咽后壁气管建立ALI大鼠模型。造模24 h后,比较各组大鼠动脉氧分压,HE染色法观察肺组织的病理学改变,ELISA法检测大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的表达水平,Western blot测定各组大鼠肺组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠PaO 2水平明显下降,病理评分升高,PaCO 2、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达升高(均P<0.05)。与模型对照组比较,地塞米松组和热毒宁高剂量组大鼠PaO 2水平升高,病理评分下降,PaCO 2、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达降低(均P<0.05)。结论:热毒宁注射液对ALI大鼠有保护作用,其机制可能与调节JAK2-STAT3信号通路的活化、降低炎症反应有关。

JAK2-STAT3信号通路与心肌缺血再灌注损伤的研究进展

心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)是由于血流灌注减少引起心肌细胞短期内出现缺血、缺氧,恢复灌注后损伤反而加重的一种病理状态。MIRI的病理过程主要涉及炎症反应、氧化应激损伤、细胞凋亡、内皮细胞损伤、钙超载等。JAK2-STAT3信号通路作为细胞功能的通讯节点,参与组织的缺血、缺氧、氧化应激以及细胞的生长、增殖、凋亡及炎症等多种病理过程。研究证实,多种细胞因子及药物通过调控JAK2-STAT3信号通路发挥抗炎、抗氧化应激、抗凋亡及促进血管内皮新生等作用。本文对JAK2-STAT3信号通路与心肌缺血再灌注损伤的病理机制的相关性进行综述,以期为心肌缺血再灌注损伤提供新的治疗靶点。

叶酸修饰脂质体槲皮素经JAK2/STAT3信号通路介导的线粒体凋亡途径诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡

目的探讨叶酸修饰脂质体槲皮素对三阴性乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及潜在的调控机制。方法叶酸修饰脂质体槲皮素处理三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231后,CCK-8法检测细胞活力;平板克隆实验检测细胞增殖克隆能力;流式细胞术检测细胞凋亡、细胞活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位的变化;Western blot检测酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)-信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平。结果叶酸修饰脂质体槲皮素抑制MDA-MB-231细胞增殖(P=0.023)、促进其凋亡(P<0.001),促进MDA-MB-231细胞线粒体膜电位坍塌(P=0.003),提升MDA-MB-231细胞内ROS水平(P=0.034),抑制JAK2和STAT3磷酸化水平(P<0.001),下调抗凋亡蛋白Bcl2、Bcl-xL表达(P=0.037,0.028),上调促凋亡蛋白Bax、Bak、Cyt C、Cleaved-Caspase-3表达(P<0.001)。结论叶酸修饰脂质体槲皮素抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路活化并激活线粒体凋亡途径有关。

β-榄香烯阻断JAK2-STAT3信号通路促进紫杉醇对肺癌细胞增殖和凋亡作用研究

目的:研究分析讨论β-榄香烯对紫杉醇抑制肺癌细胞增殖、诱导凋亡的作用,并探讨其可能的机制。方法:建立耐药细胞株A549/Taxol,MTT法测定β-榄香烯对A549/Taxol细胞株的抑制率及IC50;使用Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率;并通过Western Blot法检测JAK2、STAT3、p-STAT3、Bcl-2、Bax、Caspase3蛋白的表达水平,借以分析β-榄香烯对紫杉醇抑制肺癌细胞增殖、诱导凋亡的作用和机制。结果:药物干预48 h后,可见β-榄香烯对A549/Taxol肺癌细胞活性均显示出抑制作用,并且抑制作用表现出明显的剂量依赖性,对肺癌细胞抑制的IC50水平为108.5μg/mL。研究中采用IC50浓度108.5μg/mL榄香烯干预A549/Taxol肺癌细胞, 24 h后可见A549/Taxol肺癌细胞的凋亡水平显著增加(P<0.05);与此同时,肺癌细胞JAK2、STAT3、p-STAT3和Bcl-2可见降低(P<0.05),而Bax和Caspase3则见升高(P<0.05)。结论:β-榄香烯可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路,发挥拮抗肺癌细胞对紫杉醇的耐药性作用,抑制肿瘤细胞增殖,诱导凋亡。

IL-1β通过JAK2-STAT3促进大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成

目的探讨IL-1β促进脊髓损伤后胶质瘢痕形成的机制。方法将大鼠随机分为模型组(采用钳夹脊髓的方法建立SCI模型)、假手术组(sham group)、IL-1β特异性抑制剂组(IL-1RA)、IL-1β组(IL-1β)及IL-1β+JAK2-STAT3特异性抑制剂组(IL-1β+AG490)。假手术组只打开椎板,不作其他处理。在术后相应时间点(术后8及12 h和1、3、7及14 d)进行大鼠后肢BBB评分,用Western blot、免疫荧光和免疫组化技术检测GFAP、vimentin、p-STAT3的表达变化。结果 p-STAT3(术后第8 h和第12 h)及GFAP、vimentin(术后第7和第14天)表达趋势:模型组显著高于假手术组(P<0.01),IL-1RA组明显低于模型组(P<0.05),但仍高于假手术组(P<0.05);IL-1β+AG490组明显低于模型组(P<0.05),但仍高于假手术组(P<0.05);IL-1β组均显著高于模型组(P<0.05)。术后第14天,BBB评分模型组显著低于假手术组(P<0.01),IL-1RA组显著高于模型组(P<0.05),但仍低于假手术组(P<0.01);IL-1β组显著低于模型组(P<0.05)。结论 IL-1β可通过JAK2-STAT3促进脊髓损伤后胶质瘢痕形成,抑制IL-1β或JAK2-STAT3可减弱胶质瘢痕形成,促进脊髓神经功能恢复。

保肝宁对瘦素刺激HSC增殖及其JAK_2-STAT_3信号通路影响的实验研究

目的观察中药复方保肝宁对瘦素刺激肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖功能的作用及其对JAK2-STAT3信号通路的影响。方法给正常Wistar大鼠灌胃保肝宁煎剂7d,制备含药血清,用噻唑兰(MTT)比色法检测保肝宁对100ng/ml的瘦素刺激HSC-LX2增殖的影响;应用蛋白印迹试验检测保肝宁对100ng/ml的瘦素刺激HSC-LX2中的JAK2、STAT3蛋白的表达水平。结果保肝宁组对瘦素刺激的HSC-LX2增殖有显著的抑制作用;保肝宁作用6h后,JAK2、STAT3蛋白表达水平开始降低,此时JAK2降低较为明显;24h时STAT3蛋白降低较为明显。结论中药复方保肝宁有抑制瘦素促HSC-LX2增殖的作用,而JAK2-STAT3通路被阻断,JAK2、STAT3蛋白表达的降低可能是其发生的主要机制之一,而这一作用主要是通过阻断瘦素发生生物学效应的JAK2-STAT3经典通路,降低JAK2、STAT3蛋白表达来实现的。

JAK2-STAT3信号通路在舒芬太尼预处理诱导大鼠心肌保护效应中的作用

目的 探讨舒芬太尼预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响以及JAK2-STAT3信号通路的作用.方法 雄性SD大鼠60只,体质量250～300 g,随机均分为假手术组（S组）、缺血再灌注组（I/R组）、舒芬太尼预处理组（SPC组）、舒芬太尼预处理联合JAK2激酶抑制剂组（S＋A组）及JAK2激酶抑制剂组（A组）.采用结扎冠状动脉左前降支的方法制作心肌缺血再灌注模型.SPC组于心肌缺血前股静脉泵注舒芬太尼1μg/kg,泵注5 min,间隔5 min,重复处理3次,总量共3 μg/kg;S＋A组：舒芬太尼预处理前5 min给予JAK2激酶抑制剂AG490（1 mg/kg）,缺血前30min舒芬太尼预处理;A组：缺血前35 min给予JAK2激酶抑制剂AG490（1 mg/kg）.心肌缺血前30min（T0）、缺血前即刻（T1）、缺血30 min（T2）、再灌注30 min（T3）和再灌注120 min（T4）时记录心率（HR）和平均动脉压（MAP）.再灌注120 min抽取动脉血,离心取血清测定肌酸激酶同工酶（CK-MB）和乳酸脱氢酶（LDH）.实验结束时,各组取6只大鼠心脏测算心肌梗死面积,其余6只大鼠采用Western blot测定心肌组织磷酸化STAT3 （P-STAT3）的表达.结果 比较各组间不同时点HR的差异无统计学意义（P＞0.05）.与S组相比,其余各组T2～T4时MAP降低（P＜0.05或P＜0.01）;血清CK-MB和LDH活性明显增高（P＜o.01）.与I/R组相比,SPC组MAP数值稍高,但差异无统计学意义;CK-MB和LDH活性降低（P＜0.01）;心肌梗死范围减小（P＜0.01）.与S组比较,I/R组和SPC组P-STAT3表达上调（P＜0.01）,且SPC组上调高于I/R组（P＜0.01）.结论 舒芬太尼预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制可能与激活JAK2-STAT3信号通路、上调P-STAT3的表达有关.

JAK_2-STAT_3信号通路在白介素-1β经动脉外膜给药致平滑肌细胞增殖迁移中的作用

目的研究白细胞介素-1β经血管外膜给药导致动脉平滑肌细胞发生的改变及其与JAK2-STAT3信号通路的关系,明确JAK2-STAT3信号通路在血管增殖性病变中的作用。方法 6～8周龄SD雄性大鼠24只,分离左侧颈总动脉,实验组(n=18)血管外膜包裹含白介素-1β2.5μg的琼脂缓释悬液,对照组(n=6)包裹不含白介素的琼脂悬液,术后2、8、24、48 h,1、2周分别处死实验组大鼠3只,对照组1只,血管标本经切片HE染色观察形态,Western blot法检测JAK2、STAT3、磷酸化JAK2以及磷酸化STAT3的表达,免疫组化标记定位磷酸化JAK2及磷酸化STAT3;另取SD雄性大鼠9只,分离两侧颈总动脉,左侧滴加JAK2抑制剂AG490缓释凝胶,右侧滴加等量空白凝胶后两侧均包裹等量白介素-1β,术后8、48 h,1周处死动物分别行HE染色及Western blot检测。结果白介素-1β包裹血管外膜后出现血管平滑肌细胞的增殖、迁移,通道蛋白JAK2、STAT3在不同时间点出现不同程度的磷酸化,经Western blot检测并行灰度分析,p-JAK2相对灰度值对照组(0.337±0.216),8 h组(1.764±0.513),1周组(0.451±0.229);p-STAT3相对灰度值对照组(0.125±0.870),24 h组(1.909±0.309),2周组(0.448±0.516),各组间有明显差异(P<0.05)。加用抑制剂后,8 h组p-JAK2相对灰度值实验侧(0.085±0.031),对照侧(1.416±0.468),48 h组p-STAT3相对灰度值实验侧(0.460±0.065),对照侧(2.425±0.638),提示JAK2、STAT3的磷酸化水平被明显抑制(P<0.05),平滑肌细胞变化程度下降。结论炎性因子白细胞介素-1β经动脉外膜给药可致动脉平滑肌细胞增殖、迁移,这种改变与JAK2-STAT3信号通路有直接关系。

JAK2-STAT3通路介导肢体缺血后处理脑缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的探讨肢体缺血后处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑保护的作用机制。方法健康雄性SD大鼠48只,随机分为4组即假手术组(sham)、缺血再灌注组(I/R组)、肢体缺血后处理组(Lpost组)、肢体缺血后处理+AG490组(AG组)。I/R组、Lpost组、AG组均做缺血2 h再灌注24 h,Lpost组:再灌注前实施肢体缺血后处理(缺血15 min,灌注15 min)3个循环,AG组:再灌注前5 min时腹腔注射AG490(l mg/kg),其他处理与Lpost组相同。各组大鼠神经功能评分后,采用TTC染色测脑梗死体积,TUNEL法测定脑细胞凋亡。结果 1与sham组相比,I/R组大鼠神经功能缺损加重(P<0.05);与I/R组相比,Lpost组大鼠神经功能缺损减轻(P<0.05);与Lpost组相比,AG组大鼠神经功能缺损加重(P<0.05);2 sham组大鼠无梗死灶,与I/R组相比,Lpost组大鼠梗死体积减小(P<0.05);与Lpost组相比,AG组梗死体积增大(P<0.05);3与I/R组相比,Lpost组大鼠脑细胞凋亡率明显降低(P<0.05);与Lpost组相比,AG组脑细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。结论肢体缺血后处理具有显著的脑保护作用,这一作用是由JAK2-STAT3通路介导的。

阿曼托双黄酮通过JAK2-STAT3通路影响甲状腺癌SW579细胞的增殖和凋亡

目的:探讨阿曼托双黄酮(AF)对甲状腺癌SW579细胞中JAK2-STAT3通路活化及其细胞增殖和凋亡的影响。方法:用0、50、100、150、200μmol/L的AF处理SW579细胞24、48、72 h,采用CCK-8和Celigo计数、FCM、WB及qPCR法检测AF对SW579细胞的增殖、凋亡、JAK2-STAT3通路活化及其下游调控基因c-Myc、Bcl2、survivin的mRNA及蛋白表达水平的影响。结果:AF处理后,SW579细胞增殖能力显著下降(P<0.05)且呈浓度依赖性,细胞凋亡呈浓度依赖性增多(P<0.05),细胞中JAK2-STAT3通路的活化受到显著抑制(P<0.05),其下游基因c-Myc、Bcl2、survivin的mRNA及蛋白表达均明显下降(均P<0.05)。结论:AF可通过抑制SW579细胞中JAK2-STAT3通路活化及其下游基因的表达而抑制SW579细胞的增殖并促进其凋亡,有望成为治疗甲状腺癌的有效药物。

加味四逆散对大鼠肝星状细胞株HSC-T6JAK2-STAT3信号通路的影响

目的观察加味四逆散对大鼠肝星状细胞株HSC-T6 JAK2-STAT3信号通路的影响。方法正常大鼠灌胃加味四逆散药物煎剂7 d,制备含药血清;应用蛋白印迹试验检测加味四逆散对100 mg/L瘦素刺激HSC-T6中JAK2、STAT3蛋白的表达水平。结果加味四逆散作用6 h后,JAK2、STAT3蛋白表达水平开始降低,且JAK2降低较为明显,24 h STAT3降低最明显。结论加味四逆散能降低增殖后的肝星状细胞JAK2、STAT3蛋白表达,并阻断JAK2-STAT3经典通路的信号转导作用,这可能是加味四逆散抗肝纤维化的作用之一。

JAK2／STAT3途径在IL-6抑制LPS诱导的树突状细胞分化成熟中的作用

目的观察JAK2/STAT3信号途径在IL-6抑制LPS诱导的小鼠髓源性树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)分化成熟中的作用。方法分离小鼠骨髓细胞,采用黏附法结合GM-CSF和IL-4刺激法在体外培养BMDCs;用相差倒置显微镜观察BMDCs的形态特点;用LPS诱导DCs成熟;采用流式细胞术观察IL-6处理与否,LPS诱导的BMDCs在表型上的变化;Western blot检测BMDCs细胞质p-JAK2、总STAT3和p-STAT3的表达水平。结果形态观察和FCM分析的结果表明:体外成功培养了纯度较高的高表达CD11c的BMDCs,LPS能明显诱导BMDCs表面MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD80、CD86、CD40的表达上调;而经过IL-6处理后,LPS诱导BMDCs表面MHC-Ⅱ类分子、CD80、CD86、CD40表达上调的能力被显著削弱(P<0.01)。Western blot结果显示,与单独用LPS处理的BMDCs相比,经IL-6处理后的BMDC中p-JAK2、p-STAT3表达随作用时间增加而明显上调,提示IL-6促进JAK2/STAT3信号途径活化。结论JAK2/STAT3信号途径参与了IL-6抑制LPS诱导的BMDCs成熟过程。

JAK2-STAT3信号通路在树鼩脑缺血后适应中的作用机制

目的:观察JAK2-STAT3信号转导通路在树鼩缺血后适应(ischemic postconditioning,IPo C)神经保护中的调控作用,探讨阻断JAK2-STAT3通路后脑损伤加重的机制。方法:通过光化学反应建立树鼩血栓性脑缺血模型;于缺血后4 h夹闭患侧颈总动脉3次(每次5 min)实施IPo C。于IPo C前10 min侧脑室注射AG490(JAK2抑制剂)后,采用TTC染色观察树鼩脑梗死面积的变化,通过HE染色和电镜观察脑皮层神经元形态改变及超微结构变化,应用Western blot检测IPo C及AG490处理后皮层t-STAT3和p-STAT3蛋白水平的变化。结果:缺血24 h,皮层神经元固缩,线粒体肿胀,嵴溶解;脑梗死面积占半脑面积的(24.78±3.30)%;此时皮层神经元STAT3磷酸化水平明显增高(P<0.01)。IPo C后皮层神经元损伤减轻,线粒体肿胀改善,脑梗死面积占半脑面积的百分比减小为(17.67±1.83)%(P<0.01),STAT3磷酸化水平进一步增高(P<0.01)。然而,给予AG490处理后,皮层神经元损伤加重,脑梗死面积再次增大为(23.85±2.77)%(P<0.05),STAT3磷酸化水平则明显降低(P<0.05)。结论:IPo C可能通过调控STAT3的磷酸化而减轻树鼩缺血性脑损伤,抑制JAK2-STAT3信号通路可抵消IPo C的保护效应而加重脑损伤。

舒芬太尼后处理对犬心肌缺血/再灌注损伤中MDA和SOD的影响及其与JAK2-STAT3的关系

目的探讨舒芬太尼后处理对犬心肌缺血再灌注氧化损伤中心肌组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的影响,及其与JAK2-STAT3通道的关系。方法 24只犬随机分为假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、舒芬太尼后处理组(Sufentanil组)和舒芬太尼后处理+AG490组(Sufentanil+AG490组)。观察心肌组织MDA含量和SOD活性。结果与Sham组比较,I/R组、Sufentanil组和Sufentanil+AG490组MDA含量明显升高,SOD活性显著下降。与I/R组比较,Sufentanil组能明显降低MDA含量,提高SOD活性。与Sufentanil组比较,Sufentanil+AG490组MDA含量明显升高,SOD活性显著下降。结论舒芬太尼后处理对犬心肌缺血再灌注氧化损伤有保护作用,机制与JAK2-STAT3通道的作用有关。

加味四逆散及拆方对肝星状细胞JAK2-STAT3信号通路的影响

目的:观察复方加味四逆散及拆方的药物血清对肝星状细胞(HSC-T6)JAK2-STAT3信号通路的影响。方法:用加味四逆散及拆方煎剂给正常Wistar大鼠灌胃7天,制备含药血清;培养肝星状细胞;用100ng/mL的瘦素刺激HSC-T6使其增殖;应用蛋白印迹试验检测各组药物血清对增殖后的肝星状细胞JAK2、STAT3蛋白的表达水平。结果:加味四逆散作用6h后,JAK2、STAT3蛋白的表达水平开始降低,且JAK2降低较为明显,24h STAT3降低最为明显。加味四逆散各拆方组作用12h后,STAT3蛋白水平降低,且存在差异。结论:(1)加味四逆散全方及拆方均有降低增殖后的肝星状细胞JAK2、STAT3蛋白的表达。(2)加味四逆散全方阻断JAK2-STAT3通路信号转导的作用显著优于拆方的效果,综合运用比拆方有更好疗效。

姜黄素对瘦素刺激HSC增殖及JAK2-STAT3信号通路影响的研究

目的:观察姜黄素对瘦素刺激肝星状细胞(HSC)增殖及对JAK2-STAT3信号通路的影响。方法:SD大鼠36只灌胃姜黄素煎剂7 d,制备各药物含药血清,用噻唑蓝(MTT)比色法检测药物血清对100 pg·L^(-1)的瘦素刺激HSC-T6增殖的影响;应用蛋白印迹试验检测姜黄素散对100 pg·L^(-1)瘦素刺激HSC-T6中JAK2、STAT3蛋白的表达水平。结果:姜黄素药物血清有抑制HSC-T6的作用(P<0.05或P<0.01));姜黄素作用6 h后,JAK2、STAT3蛋白的表达水平开始出现降低,且JAK2降低较为明显,24 h后STAT3降低最为明显。结论:姜黄素药物血清具有抑制瘦素刺激HSC-T6增殖的作用;而JAK2-STAT3通路被阻断,JAK2-STAT3蛋白表达的降低可能是其发生的主要机制之一。

毛壳菌素通过作用于JAK2-STAT3信号通路抑制神经母细胞瘤的增殖及迁移

目的探讨毛壳菌素影响神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖和迁移的机制。方法应用DMSO作为对照,与毛壳菌素分别与SH-SY5Y细胞进行孵育,应用荧光定量PCR(RT-qPCR)和WB检测毛壳菌素的靶分子HIF-1α的mRNA相对表达水平以及蛋白表达水平。采用流式细胞术和CCK8实验检测细胞的增殖,利用Transwell试验检测细胞的迁移能力。采用流式细胞术和WB检测JAK2-STAT3信号通路的活化情况。结果人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中HIF-1α的mRNA相对表达量为1.68±0.06,显著高于人正常胶质细胞(0.98±0.05,均P<0.001),SH-SY5Y细胞系HIF-1α的WB检测的蛋白水平相对灰度值为1.81±0.04,显著高于人正常胶质细胞(0.97±0.06,均P<0.001)。毛壳菌素孵育后的SH-SY5Y细胞的Ki-67-high的占比为(35.89±7.23)%,显著低于DMSO对照组[(76.81±5.12)%,P<0.01];Ki-67的平均荧光强度为573.7±80.25,显著低于DMSO对照组(1522±53.41,P<0.001)。CCK8检测细胞的增殖能力,毛壳菌素组在16h,24h和48h的OD450nm值分别为0.25±0.06,0.30±0.02,0.38±0.03,显著低于对照组(0.40±0.05,0.56±0.02,0.77±0.05,P<0.01)。迁移实验结果表明,DMSO对照组的迁移能力显著高于毛壳菌素组,细胞数分别为22816±4267.2和68172±9733.5,P<0.001。WB分析JAK2和STAT3的磷酸化水平,毛壳菌素孵育细胞的p-JAK2和p-STAT3的蛋白相对表达水平显著低于DMSO对照组,差异具有统计学意义(P<0.001)。流式细胞术分析SH-SY5Y细胞的p-JAK2和p-STAT3所占的比例及平均荧光强度,毛壳菌素组显著低于DMSO对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。WB和流式细胞术分别检测IL-6与毛壳菌素共同孵育后的JAK和STAT3的磷酸化水平,IL-6能够逆转毛壳菌素对JAK2和STAT3磷酸化的抑制作用。结论毛壳菌素可能通过抑制HIF-1α,抑制JAK2-STAT3信号通路的活化,从而抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖和迁移。

JAK2-STAT3通路和E-cadherin在结直肠癌进展中的相互作用分析

目的:探讨JAK2-STAT3通路和E-cadherin在结直肠癌进展中的相互作用。方法:选取择期行手术治疗的结直肠癌患者87例,利用Westernblot检测结直肠癌及癌旁组织中STAT3、p-STAT3和E-cadherin蛋白的表达,并计算p-STAT3/STAT3值。结果:结直肠癌组织中STAT3、p-STAT3蛋白相对表达量和p-STAT3/STAT3值均高于癌旁组织,而E-cadherin蛋白相对表达量则低于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05);结直肠癌患者STAT3、p-STAT3和E-cadherin蛋白表达均与肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、浸润深度和TNM分期有关(P<0.05);Pearson相关分析显示,结直肠癌组织中STAT3表达与p-STAT3呈正相关(r=0.736,P<0.05),而与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.497,P<0.05),p-STAT3表达与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.642,P<0.05)。结论:STAT3和p-STAT3蛋白在结直肠癌组织中表达上调,可能通过激活JAK2-STAT3通路抑制E-cadherin蛋白表达而实现对肿瘤细胞浸润、转移的调控作用。