抑制Jak3激酶活性诱导NALM-6白血病细胞凋亡

目的 研究 Jak3的活化与急性淋巴细胞白血病 (AL L)之间的关系。方法 在不同浓度的 Jak3抑制剂 AG490处理 Jak3活化的 AL L 前 B细胞株 NAL M- 6细胞后 ,用流式细胞术及噻唑蓝法分析细胞的凋亡、增殖情况。结果 除 5 μm ol/ L 组外 ,经 10、15、2 0 μm ol/ L AG490处理后 NAL M- 6细胞均有明显的亚 G1 峰 ,与 DMSO对照相比 ,凋亡率均有显著增加 (P<0 .0 5 ) ;噻唑蓝法示除 5 μmol/ L 组外 ,与 DMSO对照相比 ,10、15、2 0 μm ol/ LAG490均能显著抑制 NAL M- 6细胞的增殖 (P<0 .0 5 )。以上作用呈剂量依赖性关系。结论 Jak3抑制剂 AG490能抑制 NAL M- 6细胞的增殖并诱导凋亡 ,提示 Jak3的活化与前 B型 AL L

抗NO生成的JAK3抑制剂的合成及其抗炎活性研究

为了探索抗一氧化氮(NO)生成的两面神激酶3(JAK3)抑制剂的抗炎效果,采用药效团拼接原理设计并合成5个7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶衍生物。体外活性评价表明,化合物N-(3-((5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(D3)和N-(3-((5-(苯并[d][1,3]二氧杂环戊烯-5-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙酰胺(D4)不仅能有效地抑制NO的合成(5.13±0.48)μmol/L,D4:IC_(50)=(4.67±0.98)μmol/L),对RAW264.7细胞毒性较低(IC_(50)>60μmol/L),而且可以微弱抑制JAK3激酶活性(D3:IC_(50)=272 nmol/L,D4:IC_(50)=849 nmol/L)。其中,化合物D4对角叉菜胶诱导小鼠模型的急性抗炎能力优于D3,可作为抗NO生成的JAK3抑制剂的先导化合物继续研发。

吡咯并嘧啶类化合物的合成及其抑制JAK3激酶活性的研究

目的设计合成吡咯并嘧啶类化合物并研究其抑制JAK3激酶的活性。方法以4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶为原料,经过取代、氨基脱保护和N-酰化反应合成两类(Ⅰa和Ⅰb)吡咯并嘧啶类化合物,经体外细胞试验测定其对JAK3激酶的抑制活性。结果设计并合成了8个新化合物,结构经1H-NMR和HR-MS确证。初步活性测试结果显示Ⅰa-1和Ⅰb-3对JAK3的抑制强度与阳性对照药tofacitinib相近。结论目标化合物对JAK3依赖的DAUDI细胞抑制活性较好,对非JAK3依赖的BT-20细胞抑制作用弱。

酪氨酸激酶Jak3抑制剂的研究进展

Jak3抑制剂对器官移植以及自身性免疫疾病的治疗有着非常重要的意义。本文根据Jak3抑制剂的化学结构,将其分为WHI系列化合物、CP690550衍生物及其他Jak3抑制剂等3类,并对其作用机制、构效关系及生物活性进行综述,指出提高化合物对Jak3作用的选择性是新的Jak3抑制剂的研究重点和难点。

胃癌患者JAK3表达的研究

目的探讨胃癌患者JAK3的表达与胃癌发病的关系。方法采用荧光定量逆转录聚合酶链反应检测33例胃癌患者胃癌组织及其相应切缘组织中JAK3mRNA的表达,并分析JAK3mRNA在胃癌中的表达水平与癌胚抗原(CEA)之间的关系。结果①胃癌及其相应切缘组织中均有JAK3的表达,胃癌中的JAK3mRNA表达(6.27±0.89)极显著高于其相应切缘组织中的表达(0.93±0.18),P<0.01。②CEA阳性的胃癌患者胃癌组织中JAK3mRNA的表达水平较CEA阴性的胃癌患者高(P<0.05)。结论正常胃组织及胃癌组织均存在JAK3,JAK3的高表达在胃癌发病机制中有着重要意义。

地黄饮通过调控JAK1/STAT3信号通路治疗特应性皮炎小鼠的作用机制

目的:探讨地黄饮对2,4-二硝基氯苯(DNCB)诱导的特应性皮炎(AD)模型小鼠的作用及潜在机制。方法:通过DNCB反复刺激小鼠背部皮肤建立小鼠AD模型,造模成功后,随机分为模型组、润燥组(0.78 g·kg^(-1))、地黄饮高、中、低剂量组(40.30、20.15、10.08 g·kg^(-1)),每组12只,空白组12只,共72只。给药组按剂量灌胃给予相应药液,空白组和模型组灌胃给予同体积纯净水,1次/d,连续给药2周后观察小鼠皮损及搔抓次数;取小鼠背部皮损进行苏木素-伊红(HE)染色和甲苯胺蓝染色观察病理情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time-PCR)检测皮损组织中IFN-γ、IL-4、IL-6、Janus激酶1(JAK1)、转录激活因子3(STAT3)mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测皮损组织JAK1、磷酸化(p)-JAK1、STAT3、p-STAT3蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠背部皮肤可见大量结痂、干燥、糜烂、肥厚伴搔抓,皮损组织可见表皮增生,伴角化过度和角化不全,棘层肥厚伴水肿,真皮层可见大量肥大细胞浸润,部分处于脱颗粒状态,小鼠血清中IgE、IL-4、IL-6、IFN-γ含量显著升高(P<0.01),皮损组织中p-JAK1、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平及IL-4、IL-6、IFN-γ、JAK1、STAT3 mRNA表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组小鼠背部皮肤仅见少量干燥、脱屑,细胞水肿减轻,炎性浸润明显减轻,肥大细胞浸润数明显降低,小鼠血清中IgE、IL-4、IL-6、IFN-γ均有不同程度降低(P<0.05,P<0.01),皮损组织中p-JAK1、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平及IL-4、IL-6、IFN-γ、JAK1、STAT3 mRNA表达明显降低,其中以地黄饮高剂量组效果最佳(P<0.01)。结论:地黄饮能改善AD小鼠的皮损及瘙痒症状,其作用机制可能与干预JAK1/STAT3信号通路有效调节辅助性T细胞(Th)1/Th2轴上的细胞因子,影响皮肤屏障功能有关。

桂枝芍药知母汤对胶原诱导性关节炎小鼠软骨破坏及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:研究桂枝芍药知母汤在胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠软骨破坏中的作用及其作用机制。方法:取SPF级DBA/1小鼠36只,随机分组为正常组、模型组、甲氨蝶呤组(MTX)、桂枝芍药知母汤低、中、高剂量组6组。除正常组外,其余5组小鼠采用二次免疫法构建CIA模型,并在小鼠开始出现后肢肿胀当天分别予生理盐水,MTX(1.5 mg·kg^(-1),每周2次)和桂枝芍药知母汤低、中、高剂量(6.3、12.6、25.2 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃,共给药4周。观察并记录各组小鼠足肿胀度变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、MMP-3、MMP-9、MMP-13含量,苏木素-伊红(HE)染色观察踝关节病理改变,番红固绿染色法观察软骨破坏,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠踝关节酪氨酸激酶2(JAK2)/转录激活因子3(STAT3)信号通路蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组足肿胀度,血清MMP-1、MMP-3、MMP-9和MMP-13含量和踝关节磷酸化(p)-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3的表达水平均显著上升(P<0.01),关节破坏加重。与模型组比较,MTX组和桂枝芍药知母汤低、中、高剂量组明显减轻小鼠足肿胀度(P<0.05,P<0.01),明显降低小鼠血清MMP-1、MMP-3、MMP-9和MMP-13含量(P<0.05,P<0.01),关节病理破坏减轻,明显降低踝关节p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:桂枝芍药知母汤能减轻CIA小鼠的关节肿胀程度,抑制MMP-1、MMP-3、MMP-9和MMP-13的表达,改善关节软骨破坏,其作用机制与JAK2/STAT3信号通路有关。

转基因JAK3体外长期扩增T淋巴祖细胞的实验研究

目的探讨激活JAK3信号传导通路是否能够体外长期扩增调控T淋巴祖细胞并评价其定向分化潜能的可行性。方法构建含有JAK3基因的逆转录病毒载体MG I-F2JAK3,内含有绿色荧光蛋白(GFP)和两个可以结合小分子二聚化合物AP20187的结合位点F36v。将该载体转入小鼠的骨髓造血干细胞中,在无血清培养基X-V ivo15培养体系中扩增,分为4组:空白对照组;AP20187组;干细胞因子(SCF)组;AP20187+SCF组。对扩增的细胞进行流式细胞仪检测免疫分型,定向分化、胸腺内注射等研究。结果AP20187+SCF组可以使转导的造血细胞获得长期大量对数级的扩增,扩增50 d后细胞可以达到1.2×1012倍±0.2×1012倍,所扩增的细胞为最早期的T淋巴祖细胞,表型为C-k ith iCD44+CD25-TN。该祖细胞群在SCF+IL-7+IL-3培养条件下,可定向分化为Thy1.2阳性的T淋巴细胞,并在小鼠的胸腺内可定向分化为GFP+CD3+和GFP+CD4+双阳性的成熟T淋巴细胞。结论AP20187联合SCF激活JAK3信号,可以大量扩增最早期的T淋巴祖细胞。该祖细胞具有定向分化为成熟T淋巴细胞的功能。该系统有助于研究T淋巴细胞的发生发育。

Synthesis and molecular docking study of(E)-4-(6,7-dimethoxyquinazolin-4-ylamino)phenyl-3-(4-chlorophenyl)acrylate as a JAK3 inhibitor

A 4-anilinoquinazoline derivative(1) designed as a JAK3 inhibitor was synthesized in high yield by a practical and efficient method.The molecular docking study was also performed to elucidate the molecular mechanism of the JAK3 inhibitory potency of compound 1.The results indicated that compound 1 had various interactions with the key amino acid residues at the ATP-binding cavity of JAK3 protein and presented high affinity to JAK3 protein,which was even higher than JANEX-1 and Tasocitinib.