草鱼呼肠孤病毒GCRV VP56相互作用蛋白的鉴定

为研究Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒外纤维蛋白VP56与宿主蛋白的相互作用,实验采用酵母双杂交Gal4系统鉴定与VP56相互作用的草鱼蛋白。首先利用RT-PCR技术从Ⅱ型GCRV感染的草鱼肾细胞中扩增目的基因VP56,构建p GBKT7-VP56诱饵表达载体;在酵母菌株中检测其自激活性后,以VP56为诱饵在草鱼酵母双杂交文库中筛选阳性菌株,并对阳性克隆的序列进行分析。实验也克隆了草鱼JAM-A(Gc JAM-A)基因,并构建p GADT7-Gc JAM-A载体,在酵母中研究草鱼Gc JAM-A与病毒蛋白VP56相互作用的可能性。研究表明构建的诱饵质粒p GBKT7-VP56无自激活作用,可以应用于酵母双杂交筛选;从草鱼肾细胞文库中筛选得到9株阳性克隆,基因测序及序列分析确定其中包含草鱼7个细胞内蛋白和1个细胞外基质蛋白;VP56蛋白与Gc JAM-A蛋白在酵母中不能发生相互作用。本研究初步确定了与Ⅱ型GCRV蛋白VP56存在潜在相互作用的宿主蛋白,为深入探讨VP56蛋白在Ⅱ型GCRV感染宿主过程中的生物学功能奠定了基础。

鼻咽癌组织中JAM-A表达及意义

[目的]探讨鼻咽癌组织中人交界粘连分子(junctional adhesion molecule,JAM-A)蛋白表达及其意义。[方法]收集100例鼻咽癌病例标本(实验组)及50例鼻咽部黏膜增生息肉标本(对照组)。采用免疫组织化学法染色测定鼻咽癌组织中JAM-A蛋白表达;采用荧光定量PCR法检测JAM-A mRNA表达;采用Western Bolot实验检测JAM-A蛋白表达。[结果]实验组JAM-A阳性表达率(63.00%)高于对照组(12.00%)(P<0.001)。不同性别、年龄、T分期、临床分期、分化程度鼻咽癌患者间JAM-A阳性表达率差异无统计学意义(P均>0.05);有淋巴结转移者JAM-A阳性表达率高于无淋巴结转移者(P=0.003)。实验组JAM-A mRNA表达量高于对照组(P<0.001);不同性别、年龄、T分期、临床分期和分化程度患者间JAM-A mRNA表达量差异无统计学意义(P均>0.05),有淋巴结转移者JAM-A mRNA表达量高于无淋巴结转移者(P<0.001)。实验组JAM-A蛋白表达灰度值高于对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]鼻咽癌组织中JAM-A蛋白呈高表达,且其表达与淋巴结转移相关。