LncRNA FOXD3-AS1靶向miR-127-3p对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)叉头盒转录基因D3反义RNA1(FOXD3-AS1)对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法采用0.001 mol/L的AngⅡ处理人主动脉VSMCs。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测FOXD3-AS1和miR-127-3p的表达水平。CCK-8、流式细胞术、Transwell、Western印迹检测细胞活力、凋亡、迁移、侵袭及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证FOXD3-AS1和miR-127-3p的靶向调控关系。结果AngⅡ诱导后VSMCs细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、FOXD3-AS1、p-PI3K和p-AKT表达显著升高,凋亡率、miR-127-3p表达显著降低(P<0.05)。抑制FOXD3-AS1表达或过表达miR-127-3p后,AngⅡ处理的VSMCs细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、p-PI3K和p-AKT表达显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05)。FOXD3-AS1靶向负性调控miR-127-3p表达。抑制FOXD3-AS1能够逆转抑制miR-127-3p对AngⅡ处理的VSMCs细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及p-PI3K和p-AKT表达的影响(P<0.05)。结论抑制FOXD3-AS1能够降低AngⅡ诱导的VSMCs细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与上调miR-127-3p和抑制PI3K/AKT信号通路有关。

结肠癌患者组织中NCAPD2、Lnc RNA NR2F1-AS1、Nup107表达及其与预后的关系

目的探究结肠癌患者组织中染色体凝缩蛋白复合物I的亚基D2(NCAPD2)、Lnc RNA核受体亚家族2F组成员1-反义RNA1(Lnc RNA NR2F1-AS1)、核孔蛋白107(Nup107)的表达及其与患者预后的关系。方法选择2017年6月至2019年6月在广州中医药大学第一附属医院及暨南大学附属广州市红十字会医院进行根治性切除术的60例结肠癌患者作为研究对象,术中采集患者的结肠癌组织标本和距离结肠癌组织>2 cm的癌旁正常组织标本。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法测定结肠癌组织和癌旁组织的Lnc RNA NR2F1-AS1表达水平,采用免疫组化SP法测定结肠癌组织和癌旁组织的NCAPD2和Nup107表达情况。比较结肠癌组织和癌旁组织的Lnc RNA NR2F1-AS1、NCAPD2、Nup107表达情况,同时比较Lnc RNA NR2F1-AS1、NCAPD2、Nup107不同表达患者的临床资料。采用COX回归模型分析Lnc RNA NR2F1-AS1、NCAPD2、Nup107表达对结肠癌患者预后的影响,采用Kaplan-Meier法绘制结肠癌患者的生存曲线,分析Lnc RNA NR2F1-AS1、NCAPD2、Nup107表达情况与结肠癌患者预后的相关性。结果结肠癌组织的Lnc RNA NR2F1-AS1相对表达量为1.09±0.28,明显低于癌旁组织的0.69±0.09,结肠癌组织的Lnc RNA NR2F1-AS1高表达率、NCAPD2阳性率和Nup107高表达率分别为55.00%、61.67%和70.00%,明显高于癌旁组织的26.67%、30.00%和31.67%,差异均有统计学意义(P<0.05);Lnc RNA NR2F1-AS1高表达和低表达患者、NCAPD2阳性患者和阴性患者、Nup107高表达患者和低表达患者在肿瘤分化程度、浸润程度、淋巴结转移和远端转移方面比较,差异均有统计学意义(P<0.05);COX回归分析结果显示,Lnc RNA NR2F1-AS1、NCAPD2和Nup107表达均是结肠癌患者预后的影响因素(P<0.05);Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,Lnc RNA NR2F1-AS1高表达、NCAPD2阳性和Nup107高表达患者的中位生存期分别低于Lnc RNA NR2F1-AS1低表达、NCAPD2阴性和Nup107低表达患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Lnc RNA NR2F1-AS1、NCAPD2、Nup107的表达与结肠癌患者的肿瘤分化程度、浸润程度、淋巴结转移和远端转移等临床病理特征有关,三者可能共同参与了结肠癌的发生、发展,对患者的预后造成一定影响。

急性缺血性脑卒中患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平与病情及预后的关系

目的探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清长链非编码RNA叉头盒D3反义RNA1(LncRNA FOXD3-AS1)水平与疾病风险、严重程度及预后的关系。方法选取该院收治的92例AIS患者为AIS组,92例体检健康者为对照组。按入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将AIS患者分为轻度组(42例)、中重度组(50例)。AIS患者出院后随访3个月,依据改良Rankin量表(mRS)评分将其分为预后良好组(48例)、预后不良组(44例)。检测血清LncRNA FOXD3-AS1和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。比较AIS组和对照组临床资料、LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平,并比较不同严重程度的AIS患者、不同预后的AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平;分析AIS发生的危险因素,AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平与甘油三酯(TG)、尿酸的相关性,血清LncRNA FOXD3-AS1水平与AIS发生风险的关系。结果AIS组患者高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于对照组(P<0.05),血清TG、尿酸、LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平高于对照组(P<0.05)。高水平TG、尿酸、LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α是AIS发生的独立危险因素(P<0.05)。AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平与TG、尿酸均呈正相关(P<0.05),血清LncRNA FOXD3-AS1水平与TNF-α呈正相关(P<0.05)。AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平越高,AIS发生风险越高。中重度组AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平高于轻度组(P<0.05)。预后不良组AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平高于预后良好组(P<0.05)。结论AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平较高,LncRNA FOXD3-AS1与AIS发生风险、严重程度、预后均有关。

结直肠癌患者血清外泌体的JHDM1D-AS1水平及临床意义

目的探讨结直肠癌(CRC)患者血清外泌体的JHDM1D反义RNA 1(JHDM1D-AS1)水平及临床意义。方法利用GEPIA在线数据库分析TCGA肿瘤组织数据库中CRC组织的JHDM1D-AS1水平,Ualcan网站在线分析JHDM1D-AS1与CRC预后的关系。采用实时定量PCR(qPCR)检测119例CRC患者血清外泌体的JHDM1D-AS1水平并以93例健康体检者和34例良性肠道疾病患者为参考采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清外泌体的JHDM1D-AS1水平鉴别CRC的效能,根据临床病理特征和随访资料结合Cox比例风险回归模型来进一步分析血清外泌体的JHDM1D-AS1水平在CRC中的临床意义。结果CRC组织(275例结肠癌和92例直肠癌)的JHDM1D-AS1水平均高于正常组织(P<0.05),且组织JHDM1D-AS1水平仅与结肠癌的总生存期(OS)有关,其中高JHDM1D-AS1水平者的OS较差(P<0.05)。119例CRC患者血清外泌体的JHDM1D-AS1水平为2.652±0.882,高于健康体检者的1.267±0.442和良性肠道疾病患者的1.175±0.362(P<0.05),ROC曲线分析显示CRC对比健康对照和良性肠道疾病的血清外泌体JHDM1D-AS1的曲线下面积为0.927(95%CI:0.894~0.959,最优截断点1.970的诊断灵敏度和特异度分别为77.31%和94.62%)和0.949(95%CI:0.918~0.981,最优截断点1.779的诊断灵敏度和特异度分别为83.19%和94.12%)。血清外泌体JHDM1D-AS1水平与CRC的肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度、TNM分期和浸润深度有关(P<0.05),而与年龄、性别、肿瘤位置和远处转移无关(P>0.05)。单因素分析显示血清外泌体JHDM1D-AS1水平与OS有关,其中低水平组的中位OS为57.0个月及1、3、5年总生存率分别为94.3%、82.7%和45.6%,优于高水平组的42.0个月及92.6%、61.2和11.7%(P<0.05),多因素分析发现高外泌体JHDM1D-AS1水平是OS的危险因素(OR=2.615,95%CI:1.697~4.274,P=0.004)。结论CRC患者血清外泌体JHDM1D-AS1水平升高且与恶性病理特征和预后有关,该指标有望成为CRC诊断及预后评估的潜在指标。

苦荞黄酮通过JHDM1D-AS1对缺氧/复氧心肌细胞损伤的影响

目的探讨苦荞黄酮通过JHDM1D反义RNA1(JHDM1D-AS1)对缺氧/复氧心肌细胞损伤的影响及机制。方法将心肌细胞H9c2分为Con组、缺氧/复氧(H/R)组、H/R+苦荞黄酮低剂量组、H/R+苦荞黄酮中剂量组、H/R+苦荞黄酮高剂量组、H/R+pcDNA组、H/R+pcDNA-JHDM1D-AS1组、H/R+苦荞黄酮+si-NC组、H/R+苦荞黄酮+si-JHDM1D-AS1组;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western Blot)法检测蛋白表达;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测JHDM1D-AS1和miR-421的表达水平;双荧光素酶报告实验检测JHDM1D-AS1和miR-421的靶向关系。结果缺氧/复氧诱导的心肌细胞的凋亡率升高,Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低,SOD活性降低,MDA水平升高,JHDM1D-AS1表达水平降低,miR-421表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);不同剂量苦荞黄酮处理后,心肌细胞凋亡率降低,Bax表达水平降低,Bcl-2表达水平升高,SOD活性升高,MDA水平降低,JHDM1D-AS1表达水平升高,miR-421表达水平降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。过表达JHDM1D-AS1后,心肌细胞凋亡率降低,Bax表达水平降低,Bcl-2表达水平升高,SOD活性升高,MDA水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。JHDM1D-AS1靶向调控miR-421;抑制JHDM1D-AS1逆转了苦荞黄酮对缺氧/复氧心肌细胞损伤的影响。结论苦荞黄酮通过调控JHDM1D-AS1/miR-421抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤。

视黄酸依赖反义cyclin D1对HL-60细胞分化效应研究

目的 检测视黄酸 (Retinoicacid ,RA)依赖反义cyclinD1表达载体转染HL 6 0细胞后启动的诱导分化效应 ,并探讨其分子机制。方法 成功构建视黄酸依赖反义cyclinD1表达载体 ,以脂质体转染HL 6 0白血病细胞 ,经NBT还原实验、免疫荧光检测CD14表面抗原表达、RT PCR以及Westernblot等方法观测视黄酸处理后细胞分化效应的发生以及Rb基因的mRNA和蛋白表达水平的改变。结果 反义cyclinD1转染和未转染的HL 6 0细胞经RA处理后 ,NBT还原能力明显增强、CD14表面抗原表达显著增加 ,Rb基因的mRNA和蛋白表达水平均有所降低 ,其中 ,以反义cyclinD1转染细胞经RA处理后变化更为明显。结论 RA及其诱导的反义cyclinD1可协同诱导HL 6 0细胞分化成熟 。

视黄酸依赖反义cyclin D1对HL-60细胞细胞周期素依赖性激酶的影响

目的 探讨视黄酸 (retinoicacid ,RA)及其诱导的反义 (anti sense,AS)cyclinD1对HL 6 0细胞的细胞周期素激酶CDK4的影响。方法 通过构建含有视黄酸反应元件 (retinoicacidresponseelement,RARE)的反义cyclinD1RNA表达载体 pCI neo/RARE3 TK/AscyclinD1,使反义cyclinD1的表达可受视黄酸诱导调控。以脂质体转染HL 6 0白血病细胞后 ,运用MTT比色法检测细胞增殖功能、NBT还原实验观测细胞分化状况 ,RT PCR以及western blot等方法观测视黄酸处理后CDK4的mRNA和蛋白表达水平的改变。结果 RA处理后 ,细胞生长显著减慢 ,分化能力明显增强 ,CDK4mRNA和蛋白表达水平均有所降低 ,其中 ,以反义cyclinD1转染细胞经RA处理后变化更为显著。结论 RA及其诱导的反义cyclinD1对HL 6

长链非编码RNA DLX6-AS1调控微小RNA-15b和磷脂酶D1影响口腔鳞状细胞癌侵袭转移的分子机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)生长停滞特异性蛋白6-反义RNA1(growth arrest specific protein 6-antisense RNA1,DLX6-AS1)对口腔鳞状细胞癌(口腔鳞癌)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测口腔鳞癌组织及癌旁组织中DLX6-AS1、微小RNA-15b(microRNA-15b,miR-15b)和磷脂酶D1(phospholipase D1,PLD1)mRNA的表达水平。转染DLX6-AS1小干扰RNA至口腔鳞癌细胞HSC3,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)、Transwell小室和Western印迹法(Western blot)检测抑制DLX6-AS1表达对HSC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,以及对p21、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和E-钙黏附素(E-cadherin)蛋白表达的影响。分别共转染miR-15b抑制剂或PLD1过表达载体与DLX6-AS1小干扰RNA至HSC3细胞,用上述相同方法观察抑制miR-15b或过表达PLD1对DLX6-AS1表达抑制的HSC3细胞增殖、迁移和侵袭能力,以及对p21、MMP-2和E-cadherin蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证DLX6-AS1与miR-15b及miR-15b与PLD1的调控关系。结果:与癌旁组织比较,口腔鳞癌组织中DLX6-AS1和PLD1 mRNA表达水平升高(P<0.001),miR-15b表达水平降低(P<0.001)。抑制DLX6-AS1表达可降低HSC3细胞存活率、迁移和侵袭,以及MMP-2的蛋白表达水平(P<0.001),提高p21和E-cadherin蛋白表达水平(P<0.001)。抑制miR-15b表达或过表达PLD1均可降低抑制DLX6-AS1表达对HSC3细胞的存活率、迁移和侵袭及P21、MMP-2和E-cadherin蛋白表达的影响。DLX6-AS1在HSC3细胞中靶向负调控miR-15b,miR-15b靶向负调控PLD1。结论:抑制DLX6-AS1表达可能通过靶向调控miR-15b和PLD1轴抑制口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

细胞周期蛋白D1反义RNA对胃癌细胞恶性表型的逆转

细胞增殖周期失控是恶性肿瘤无限制增殖的重要原因［１］。细胞周期蛋白Ｄｌ（ｃｙｃｌｉｎＤｌ）作用于决定细跑增殖分化关键时相的Ｇｌ期，其异常高表达被认为可能是肿瘤发生发展的一个重要原因。为了进一步探讨ｃｙｃｌｉｎＤｌ对肿瘤生物学行为的影响及用于基因治疗的...

依托咪酯通过下调叉头框转录因子D3反义RNA 1对胃癌细胞恶性表型调控作用

目的探讨依托咪酯对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制。方法体外培养胃癌细胞HGC-27,将细胞分为8组:正常对照组(细胞用常规培养基培养24 h)、依托咪酯组(细胞分别用含40μg·mL^(-1)依托咪酯的培养基培养24 h)、第1转染组(转染小干扰RNA阴性对照的细胞用常规培养基培养24 h)、第2转染组(转染FOXD3-AS1小干扰RNA的细胞用常规培养基培养24 h)、第3转染组(用含40μg·mL^(-1)依托咪酯的培养基培养转染空载体的细胞24 h)和第4转染组(用含40μg·mL^(-1)依托咪酯的培养基培养转染FOXD3-AS1过表达载体的细胞24 h)。用细胞计数试剂盒-8检测细胞增殖(OD值),流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞迁移和侵袭,实时定量-PCR法检测细胞中叉头框转录因子D3反义RNA 1(FOXD3-AS1)基因表达(2^(-△△Ct)值)。结果与正常对照组比较,依托咪酯组HGC-27细胞增殖水平(0.32±0.02 vs 0.66±0.07,)、迁移数[(42.80±5.35)个vs(165.28±12.86)个]、侵袭数[(31.57±3.46)个vs(125.26±11.56)个]及细胞中FOXD3-AS1基因表达(0.41±0.03 vs 1.01±0.03)均显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);而凋亡率升高[(29.83±2.58)%vs(2.89±0.21)%,],差异有统计学意义(P<0.05)。与第1转染组比较,第2转染组HGC-27细胞增殖水平(0.40±0.03 vs 0.67±0.06)、迁移数[(59.11±7.15)个vs(163.11±11.99)个]和侵袭数[(40.33±3.12)个vs(121.89±10.39)个]均显著降低(P<0.05),而凋亡率显著升高[(23.87±1.98)%vs(2.53±0.33)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。与第3转染组比较,第4转染组HGC-27细胞增殖水平(0.56±0.02 vs 0.34±0.02)、迁移数[(138.33±12.01)个vs(44.89±3.62)个]和侵袭数[(103.89±7.72)个vs 30.56±1.81)个]均显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05),而凋亡率显著降低[(9.96±0.73)%vs(29.39±2.36)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论依托咪酯可抑制胃癌HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡,其作用机制与下调FOXD3-AS1表达有关。