幽门螺杆菌JHP947等基因的检测及JHP947表达蛋白的鉴定

目的 研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）可塑区—JHP940、JHP947、JHP949基因与胃、十二指肠疾病的关系;鉴定JHP947基因是否表达蛋白。方法 从胃粘膜活检组织中分离培养Hp,PCR扩增分离菌株的JHP940、JHP947J、HP949基因,分析基因检出与临床疾病的关系;以Biodesign软件确定并合成3个JHP947肽段,KLH交联免疫家兔获得多克隆抗体,免疫印迹方法鉴定JHP947基因是否表达相应蛋白。结果 分离获得108株Hp,目的基因在胃炎、溃疡、胃癌标本中的检出率分别为：JHP940 30.6%、22.6%、40.0%,JHP947 3.2%、32.2%、33.3%,JHP949 0、3.2%、13.3%,经χ^2检验,JHP940在胃炎、溃疡、胃癌各组中的检出率差异均无统计学意义（P〉0.05）;JHP947在胃癌、溃疡组中的检出率显著高于胃炎组（χ^2=12.04,P〈0.002 27;χ^2=8.64,P〈0.004 17）,而在胃癌、溃疡组中的检出率差异无统计学意义（P〉0.012 5）;JHP949在胃癌组中的检出率显著高于胃炎组（χ^2=8.48,P〈0.004 17）,而在其他组间差异无统计学意义（χ^2=1.69~2.02,P〉0.012 5）。JHP947和JHP949的检出率呈正相关（χ^2=6.034,P〈0.05）,JHP947和JHP940的检出率无显著相关性（χ^2=2.939,P〉0.05）。HpJ99和临床分离株的JHP947基因均表达相应蛋白。结论 JHP947与胃癌和消化性溃疡的发生密切相关,JHP947和JHP949的检出率呈正相关。JHP947基因表达相应蛋白。

幽门螺杆菌jhp947和cagA的检测及jhp947真核表达载体的构建

目的研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)cagA和可塑区jhp947基因与胃及十二指肠疾病的关系;构建jhp947真核表达载体,为进一步研究jhp947的功能奠定基础。方法从消化性疾病患者胃粘膜活检组织中分离培养Hp,PCR分离cagA和jhp947基因,分析基因与疾病的关系;从Hp国际标准株J99中获取jhp947全长基因,克隆至pcDNA3.1/myc-HisA载体并鉴定。结果分离获得108株Hp,目的基因在胃炎、溃疡、胃癌组织中的检出率分别为:jhp9473.2%、32.2%和33.3%,cagA74.2%、93.5%和86.7%,jhp947检出率胃癌、溃疡组与胃炎组比较差异有统计学意义(χ2值分别为12.04和8.64,P均<0.01)。jhp947和cagA的检出率无显著相关性(P>0.05)。经鉴定jhp947真核表达载体构建正确。结论jhp947与胃癌和消化性溃疡的发生密切相关,jhp947和cagA在致病过程中可能没有协同作用,成功构建jhp947真核表达载体。

幽门螺杆菌jhp947基因对C57BL/6小鼠致病性研究

检测jhp947对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)所致动物胃上皮细胞病变和基因表达的影响。【方法】将27只无特定病原体的(specified-pathogens free,SPF)6W龄C57BL/6小鼠随机分成3组,分别以J99、△J99-947(缺失jhp947基因)和PBS灌胃,菌量为109CFU/mL,0、2、4d各一次,4W后宰杀所有小鼠,无菌操作取胃组织,分别作快速尿素酶试验,Hp培养,组织病理学检查;免疫组化检测ESE-3A、NDRG1、MATP基因表达;半定量RT-PCR检测jhp947基因对小鼠ESE-3A、NADG1、MATP等基因转录的影响。【结果】J99组和△J99-947组快速尿素酶试验和Hp培养的阳性率均为100%,PBS对照组快速尿素酶试验和Hp培养阴性。组织病理学检查,PBS对照组小鼠胃黏膜100%正常,J99组小鼠胃黏膜33.3%(3/9)轻度糜烂,66.7%(6/9)重度糜烂。△J99-947组小鼠胃黏膜22.2%(2/9)正常,77.8%(7/9)轻度糜烂,没有重度糜烂。J99组小鼠胃黏膜的损伤比△J99-947组重。免疫组化检测结果,J99组比△J99-947组ESE-3A、NDRG1、MATP表达显著降低(P<0.05)。半定量RT-PCR检测结果,J99组比△J99-947组ESE-3A、NDRG1、MATP表达显著降低(P<0.05)。【结论】JHP947基因存在可使Hp感染所致的胃黏膜损伤程度加重。在体内jhp947基因可能通过下调NDRG1、MATP等肿瘤抑制基因的表达,这可能与胃癌的发生有关。