成都地区献血人群Jk(a-b-)表型筛查

目的了解成都地区献血人群中Jk(a-b-)表型的分布。方法用尿素溶血试验(96孔微量板法)筛选出不溶血个体,然后用血清学方法确定表型,PCR-SSP法确定基因型。结果共筛查标本36 188份,筛查到血清学Jk(a-b-)表型8份,其基因分型均含有Jkb。结论成都地区献血人群中Jk(a-b-)表型频率为0.022%,建立本地区Jk(a-b-)表型献血者库是解决该类血型患者输血问题的有效措施。

某地区儿童Kidd血型JK(a-b-)表型的筛选

目的筛选深圳地区儿童Kidd血型中JK(a-b-)表型。方法采用96孔微量板法尿素溶血实验从20 453例样本中筛选溶血阴性样本,血清学实验确认JK(a-b-)表型。结果 20 453例样本中筛选出4例JK(a-b-)表型,检出率为4∶20 453,频率为0.019 6。结论深圳地区儿童Kidd血型JK(a-b-)表型的检出率略低于广东番禺地区,但明显高于广东韶关、上海、中国台湾、中国澳门、日本等其他地区。

一例稀有血型JK(a-b-)表型家系调查分析

本研究旨在检测Kidd血型系统的稀有JK(a-b-)表型的先证者及其家系中其他个体的表型及基因型,探讨本例JK(a-b-)表型的分子机理,分析遗传背景,为稀有血型个体输血治疗寻找相合供者提供科学依据。采用4 mol/L尿素溶血试验,筛选JK(a-b-)表型先证者,并对其进行家系调查。用血清学方法确认表型;用PCR-SSP方法检测基因型,并对JK基因外显子4-11及其侧翼的区域扩增后测序,分析序列信息。结果表明,先证者及其哥哥具有相同的表型JK(a-b-)和基因型Jkb/Jkb;其父母的表型为JK(a+b-),基因型为Jka/Jkb;妹妹的表型和基因型分别为JK(a+b-)和Jka/Jka。对外显子及其侧翼测序发现,先证者及其哥哥的内含子5的3'端拼接接受位点碱基g>a突变,其父母的该位点均为a/g杂合,其妹妹的该位点没有突变;内含子3(外显子4侧翼)nt-99位的碱基为g,其父母的该位点均为g/a杂合,其妹妹的该位点是a。结论:先证者及其哥哥具有相同的表型JK(a-b-)和基因型Jkb/Jkb,JK基因内含子5的3'端拼接接受位点的g>a突变可能是造成其JK(a-b-)表型的原因之一;家系中内含子3的nt-99位的碱基也具有多态性(ncbi:rs8090908),该位点多态性是否与JK(a-b-)表型相关值得进一步研究。本例家系Kidd血型系统符合显性遗传规律。对于稀有JK(a-b-)表型个体的家系,尤其是同胞兄妹进行血型调查,发现表型和基因型均相同的个体可能性大。

福建地区稀有血型JK(a-b-)表型筛选及分子遗传学分析

目的了解福建地区无偿献血者Kidd血型系统中JK(a-b-)表型的分布频率并分析其遗传学特征。方法用尿素溶解试验筛查福建地区180 626例无偿献血者JK(a-b-)表型;用经典血清学方法确证其表型;对JK基因的启动子、11个外显子及其侧翼区域(50~150 bp)扩增后测序并分析序列信息;用SNa Pshot技术分析福建地区200例献血者JK基因的单核苷酸多态性(SNP)。结果 180 626例无偿献血者中检出15例JK(a-b-)表型个体。分析15例JK(a-b-)表型个体JK基因,检测出的4种隐性基因分别为JK*B(IVS5-1G>A)、JK*B(896G>A)、JK*A(130G>A,220A>G)和JK*B(130G>A,956C>T),这4种隐性基因分别占检出无效基因的66.67%、23.33%、6.67%和3.33%。分析上述200例献血者JK基因SNP发现,JK*B(IVS5-1G>A)为0.75%,JK基因的G130A是一种常见的多态性,未检测到A220G、C222T、C956T、G896A变异。结论福建地区无偿献血人群中JK(a-b-)表型频率估计约为0.008%,JK*B(IVS5-1G>A)和JK*B(896G>A)是该地区JK(a-b-)表型的主要流行基因,发现1个新的引起JK(a-b-)表型的JK-null基因,即SLC14A1 130A,220G。

Jk(a-b-)表型和基因多态性分析方法的建立及其应用

目的建立筛检Jk(a-b-)表型及其基因分型的方法,探讨Jk(a-b-)形成的分子机制。方法采用红细胞在2mol/L尿素中溶血试验筛选20000名无偿献血者的Jk(a-b-)表型;以IgM型单克隆抗-Jka和-Jkb确认Jk(a-b-);PCR-SSP对Kidd血型做基因分型;PCR扩增JK基因4-11外显子及侧翼内含子,并对扩增产物进行测序。结果在2mol/L尿素溶血试验中,除1例红细胞未发生溶血,初步认定为Jk(a-b-)型外,其他19999例标本均发生溶血。该例不溶血的Jk(a-b-)型与单克隆抗-Jka和-Jkb不发生凝集反应,该Jk(a-b-)表型个体的JK基因在第5内含子3'端拼接接受位点g突变为a,携带纯合子的IVS5-1g>a基因突变,第7外显子499A>G杂合,588A>G突变。结论尿素溶血初筛、单克隆抗体确认、基因分型和测序方法可以用于Kidd系统Jk(a-b-)血型的表型和分子机制研究。

JK(a-b-)表型分子生物学研究进展

Kidd血型系统(JK,ISBT009)在临床输血中具有重要的意义,其血型抗原为尿素转运蛋白。JK(a-b-)表型为Kidd系统罕见的表型,其红细胞上缺乏相应的抗原,但能够在2mol/l尿素溶液中相当长的时间内不溶解,此表型在研究尿素转运中具有重要的价值。本文就JK(a-b-)表型的分子机理、临床及其诊断等作一综述。

番禺地区无偿献血人群中Jk(a-b-)表型的筛选与研究

目的研究番禺地区献血人群中Jk(a-b-)表型的分布特点。方法用2mol/L尿素攻膜试验(96孔微量板法)筛选出阴性(不溶血)样本,然后作血清学表型鉴定,对Jk(a-b-)表型进行基因分型及基因组DNA编码区外显子4-11及其侧翼区的分段扩增和测序。结果从本站2004年6月-2006年8月献血的50034名汉族人中筛选出10例Jk(a-b-)表型,频率为0.02%;发现3种突变序列:1)Intron5:3'剪切位点AG>AA,Exon7:nt588A>G、AA196CCA(Pro)>CCG(Pro),推测基因型为JKb(△6)/JKb(△6);2)Exon5:nt222C>A、AA74AAC(Asn)>AAA(Lys),Exon7:nt536C>G、AA179CCT(Pro)>CGT(Arg),Exon7:nt588A>G、AA196CCA(Pro)>CCG(Pro),推测基因型为JKb(222A)/JKb(536G);3)Intron5:3'剪切位点AG>AA,Exon7:nt499A>G,AA167ATG(Met)>GTG(Val),Exon7:nt588A>G、AA196CCA(Pro)>CCG(Pro),推测基因型为JKb(△6)/JKb(499G)。结论在番禺地区献血人群Jk(a-b-)表型查中发现的Exon7:nt499A>G和Exon7:nt536C>G2种突变为首次报道。

稀有抗体抗-Jk^3的发现及Jk(a-b-)血型家系遗传背景研究

目的研究抗-Jk3的血清学特异性及产生该抗体的Jk(a-b-)稀有血型的遗传途径,了解该血型在广州地区人群的分布。方法患者血清与试剂谱红细胞在盐水介质,低离子介质凝聚胺和coomb's微柱凝胶中反应,分析鉴定其抗体特异性;对kidd血型进行家系调查,分析Jk(a-b-)稀有血型的遗传背景;采用2mol/L尿素溶血试验初筛,coomb's微柱凝胶试验确认,对广州地区32 000名献血者的红细胞作Jk(a-b-)血型筛查。结果患者血清与试剂红细胞在低离子凝聚胺介质和coomb's微柱凝胶介质中的反应格局显示患者血清中含有抗-Jk3,kidd血型家系遗传研究提示母方带有Jkb/Jknull基因,推测父方至少带有1条Jknull基因;在32 000名献血者中发现8名Jk(a-b-)个体。结论该例同种抗体为IgG抗-Jk3特异性抗体;隐性基因Jknull可以遗传,当该基因为纯合子时表现为Jk(a-b-)表型个体,该血型在广州地区人群分布频率为0.025%,解决稀有血型患者输血问题的有效措施是建立本地区的稀有血型献血者队伍。

温州地区稀有血型Jk(a-b-)献血者筛选和临床应用

Kidd血型系统（ISBT,009）包括3种血型抗原,分别是Jka（Jk1）、Jkb（Jk2）和Jk3（Jk3）,存在4种不同的表型：Jk（a＋b-）、Jk（a-b＋）、Jk（a＋b＋）和Jk（a-b-）。其中Jk（a-b-）表型在人群中十分罕见,在中国人特别是汉族人群的血清学调查中,发现其频率可能很低,或低于万分之一～数万分之一.

济宁地区无偿献血人群Jk(a-b-)表型的频率及分子遗传学分析

目的筛查济宁地区无偿献血人群的Jk(a-b-)表型,并分析其分子遗传学基础,完善本地的稀有血型库。方法选取济宁市中心血站2019年7月至2021年1月的无偿献血人群为研究对象。用2 mol/L尿素法筛查Jk(a-b-)表型,用经典血清学方法确认结果,并对SLC14A1基因第3~10外显子及其侧翼区进行Sanger测序分析。结果在95500份无偿献血者的样本中,尿素溶血实验共3例未发生溶血现象,经血清学方法复核为Jk(a-b-)表型且均无抗-Jk3抗体。济宁地区Jk(a-b-)表型的分布频率为0.0031%(3/95500)。经基因测序和单体型分析,确认3例样本的基因型分别为JK*02N.01/JK*02N.01、JK*02N.01/JK-02-230A以及JK*02N.20/JK-02-230A。结论SLC14A1基因第4内含子c.342-1G>A剪接变异、第4外显子c.230G>A以及第6外显子c.647648delAC为本地区人群Jk(a-b-)表型相关的变异位点,与国内其他地区有所不同,其中c.230G>A变异既往未见报道。

罕见抗-JK3引起新生儿溶血病及家系Kidd血型基因研究

目的研究Kidd系统稀有血型Jk(a-b-)产生抗-JK3引起的新生儿溶血病,Jk(a-b-)表型的分子机理及其家系Kidd血型的基因遗传。方法对患儿血样做新生儿溶血病三项检测:直接抗人球蛋白试验、血清游离抗体和红细胞放散试验;患儿母血样做抗体鉴定及Kidd血型鉴定;患儿父血样做Kidd血型鉴定;采用PCR-SSP方法对患儿及其父母做Kidd血型的基因检测,并对Jk4-11外显子及其侧翼区域扩增后测序,分析其序列信息。结果患儿为B型RhD阳性、Kidd表型为Jk(a-b+)、基因型为JKB/JKB(IVS5-1);患儿母为O型RhD阳性,Kidd表型为Jk(a-b-)、基因型为Jkb(IVS5-1)/JKb(IVS5-1);患儿父为B型RhD阳性,Kidd表型为Jk(a-b+)、基因型为Jkb/Jkb;患儿母血浆中存在抗-Jk3,患儿为抗-Jk3引起的新生儿溶血病。结论患儿母在Jk^b等位基因第5内含子3’端保守区剪切结合位点处发生了G到A的突变,导致mRNA转录本中从第6外显子开始缺失,致其Kidd表型为J k(a-b-),其因妊娠免疫产生了抗-JK3并导致患儿发生新生儿溶血病。

肝癌组织miR-146b-5p和miR-134的表达下调及临床意义

目的探讨微小RNA(miR)-146b-5p和miR-134在肝癌组织中的表达及其临床病理意义。方法选取2017年6月~2018年12月我院收治的原发性肝癌患者73例,取患者的原发肿瘤组织为观察组,同时选取相对应的癌旁正常组织标本为对照组。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测癌组织和癌旁正常组织中miR-146b-5p和miR-134的表达水平,并分析两者的表达水平与临床病理特征的相关性。结果miR-146b-5p和miR-134在观察组中的相对表达量均低于对照组(P<0.05);miR-146b-5p的表达下调与肿瘤大小(>5cm)、无静脉浸润和TNM分期(Ⅲ/Ⅳ期)相关(均P<0.05);miR-134的表达下调与肿瘤大小(>5cm)、有肝硬化、TNM分期(Ⅲ/Ⅳ期)和无肿瘤包膜相关(均P<0.05)。结论肝癌组织中,miR-146b-5p和miR-134表达水平下调,可能参与肝癌的发生和发展,与肝癌临床恶性表型密切相关。

北京地区汉族献血者Kidd血型系统调查

目的了解北京地区汉族献血人群Kidd血型系统的分布和基因分型。方法采用尿素溶血试验,对北京地区15984名汉族献血者进行Jk(a-b-)表型筛查。尿素溶血试验阳性标本用血清学方法确认,PCR-SSP法进行基因分型。结果筛选出1例未溶血标本,血清学试验确认为Jk(a-b-)表型,基因分型为Jk b/Jk b。结论北京汉族献血者人群中有Jk(a-b-)表型存在,稀有血型筛选对解决临床稀有血型患者紧急用血、完善稀有血型库具有重要意义。

成都地区献血人群Jk(a-b-)表型的)NA序列分析

目的调查成都地区献血人群Jk（a—b-）表型的分子遗传特征。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物技术对成都地区8名Jk（a—b-）表型献血者Jg基因第4～11外显子及其侧翼区域进行扩增，并对产物进行测序分析。结果8份样本均为第9外显子C．838AA纯合型，含有无效Jk“等位基因。发现4种突变序列：（1）IVS5-IG〉A纯合突变、第7外显子C．588A〉G（P．Pr0196Pro）纯合突变；（2）第9外显子C．896G〉A（p．Gly299Glu）纯合突变、第7外显子C．588A〉G（P．Pr0196Pro）纯合突变；（3）IVS5—1G〉A杂合突变、第5外显子C．222C〉A（P．Asn74Lys）杂合突变、第7外显子C．499A〉G（Metl67Val）杂合突变、第7外显子c．588A〉G（P．Prol96Pro）纯合突变；（4）IVS5—1G〉A杂合突变、第9外显子C．896G〉A（P．Gly299Glu）杂合突变、第7外显子C．588A〉G（P．Pr0196Pro）纯合突变。结论IVS5—1G〉A突变、第5外显子C．222C〉A突变（P．Asn74Lys）和第9外显子C．896G^A突变（P．Gly299Glu）可能是成都地区献血人群Jk（a—b-）表型的分子遗传基础。

血清学和分子生物学鉴定Lewis血型抗体引起的输血反应

为了分析1例溶血性输血反应产生的原因,用谱细胞和Le(a-b-)表型细胞鉴定患者血清中的抗体,用抗Lea和抗Leb血型试剂鉴定患者红细胞表型,用PCR测序方法分析LE基因(FUT3基因)全编码区序列。结果表明:患者血清中有抗Lea和抗Leb抗体,血型表型为Le(a-b-),LE基因型为无效等位基因纯合子(le59,508)。结论:抗Leb抗体可引起溶血性输血反应,患者FUT3基因突变导致Le(a-b-)表型。

骨髓形态联合免疫分型检测对慢性淋巴细胞白血病诊断及预后价值研究

目的:探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者骨髓形态、免疫表型特征,以及它们之间的关系。方法;采用流式细胞术对89例CLL患者骨髓或外周血标本进行免疫表型检测,依据细胞形态学分析将CLL患者分为典型CLL和混合型CLL两组,比较两组之间各抗原表达差异,并分析其对预后的影响。结果:89例CLL患者抗原表达阳性率由高至低依次为CD_(19)(98.9%)、HLA-DR(97.8%)、CD_5(88.8%)、CD_(20)(85.4%)、CD_(22)(71.9%)、CD_(23)(61.8%)、CD_(38)(39.3%)、FMC-7(11.2%)、CD_3(2.2%)。细胞形态学分型89例CLL中,典型CLL72例(80.9%),混合型CLL17例(19.1%)。CD_(38)在典型CLL及混合型CLL组间的阳性表达存在显著的统计学差异,CD_5、CD_(19)、CD_(20)、CD_(22)、CD_(23)、HLA-DR、FMC-7各抗原在两组间表达差异无统计学意义.预后分析显示混合型CLL生存期较典型CLL短(P<0.01),死亡患者与存活患者之间CD_(38)表达差异有明显的统计学意义。结论:细胞形态学结合免疫表型分析不仅是CLL诊断、鉴别诊断的主要手段,而且对预后判断具有重要价值。

温州地区稀有血型Jk(a-b-)献血者筛选和临床应用

Kidd血型系统（ISBT,009）包括3种血型抗原,分别是Jka（Jk1）、Jkb（Jk2）和Jk3,存在4种不同的表型：Jk（a＋b-）、Jk（a-b＋）、Jk（a＋b＋）和Jk（ab-）。其中JK（a-b-）表型在人群中十分罕见,在中国人特别是汉族人群的血清学调查中,发现其频率可能很低,或低于万分之一至数万分之一.

Kidd血型基因多态性位点连锁突变及作为快速分型分子标记的探讨

目的研究中国人群Jk基因单核苷酸多态性与Jk^a、Jk^b抗原表型的关系,寻找其规律性,作为Kidd血型快速分子分型的标记。方法选取183份血液标本,其中174来自于中国深圳地区汉族健康无偿献血者,另外还包括3例Jk（a^w＋b-）以及6例Jk（a-b-）标本。首先,采用尿素溶解试验与血清学方法鉴定Kidd表现型。然后,扩增Jk基因第4—11外显子及部分内含子片段,进行DNA测序,比对测序结果寻找SNPs,并分析其与表型的关联。结果1）经DNA序列分析与表型比对,发现在183例标本中,无论何种Kidd表型,intron 7—68与exon 9 838两个位点的单核苷酸置换始终一致,表现出明显的连锁突变特征。2）在这183例标本中同时发现,Kidd血型的Jk^a和Jk^b抗原多态性与这两个位点的多态性之间也具有明显规律：80例Jk（a＋b＋）标本全部检测出Jk基因intron 7（-68C/T）与exon 9（838G/A）基因型; 40例Jk（a＋b-）则是intron 7 （-68C/C）与exon 9 （838G/G）纯合突变;相反,所有的Jk（a^（w/-））标本,包括54例Jk（a-b＋）、3例Jk（a^w＋b-）与6例Jk（a-b-）,则表现为intron 7 （-68T/T）与exon 9 （838A/A）纯合突变。结论我们使用DNA测序技术对Jk基因的分子背景进行研究,发现了intron 7—68与exon 9 838两个位点单核苷酸多态性的连锁突变特征,及其与Kidd表型的一致性规律。我们提出了1种血型分型的新思路：通过对大量筛查,找出与表型呈现出明确规律性的SNPs作为分子标记,通过对其进行单一性检测从而达到对血型快速分型的目的。

睾丸弥漫性大B细胞淋巴瘤58例临床病理及免疫表型

目的观察睾丸弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）的临床病理及免疫表型特点，探讨其病理诊断及预后。方法对58例睾丸DLBCL进行回顾性临床病理研究，包括形态学复习、免疫组织化学（EnVision法）染色、EB病毒编码小RNA（EBER）1／2原位杂交以及预后相关因素分析。结果58例睾丸DLBCL患者平均年龄62．1岁，中位年龄65岁。多数病程较短，51例（87．9％）就诊时处于临床I～Ⅱ期；48例（82．8％）为单侧睾丸受累。12例（20．7％）伴同侧腹股沟淋巴结肿大，少有其他器官累及。52例（89．7％）病理形态学表现为中心母细胞样细胞在睾丸间质内弥漫性浸润，并浸润曲细精管。睾丸白膜受侵、血管浸润分别见于14例（24．1％）和10例（17．2％）。Hans分型以非生发中心B细胞型为主（48／58，82．8％）。缺乏EB病毒感染。所有病例行病变睾丸切除，35例（60．3％）接受了术后化疗和（或）放疗。随访率为82．8％（48／58），其中28例（58．3％）患者死亡；1、3、5年总体生存率分别为55．7％、31．6％和27．6％。年龄〉60岁、B症状、血清乳酸脱氢酶水平升高、高临床分期及未接受术后联合治疗者预后差。结论睾丸DLBCL确诊时以局部病变为主，低临床分期，有一定的病理形态学特征，多为非生发中心型DLBCL，预后不良；术后联合化疗可延长患者的生存期。

弥漫大B细胞淋巴瘤患者临床病理特征及预后分析

目的 探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的临床病理特征、分子遗传学特征及预后。 方法 回顾性分析北京大学第三医院及北京大学基础医学院2008年1月至2015年12月会诊及常规外检的152例DLBCL患者的临床病理资料,采用免疫组织化学法检测CD10、bcl-6、MUM1、GCET1、FOXP1的表达情况,采用原位杂交检测EB病毒编码小RNA;采用荧光原位杂交(FISH)检测bcl-2、bcl-6和c-myc基因异常情况,筛选双重打击淋巴瘤(DHL)。采用Kaplan-Meier法进行生存分析。 结果 152例DLBCL中,男女比例为1.49∶1,中位发病年龄59岁(7~90岁),原发于淋巴结内79例(52.0%)。全部患者中位总生存(OS)时间为16个月(1~101个月),1、3、5年OS率分别为70.2%、44.7%及30.3%。R-CHOP方案治疗组OS好于CHOP方案治疗组及未治疗组( P =0.001)。137例进行双重打击免疫组织化学评分(DHS评分)的患者中,0分56例,1分57例,2分24例,不同DHS评分组间OS差异无统计学意义( P =0.311)。FISH检测结果,29例检测c-myc基因患者中,c-myc基因断裂2例,扩增3例;26例行bcl-2基因检测的患者中,bcl-2扩增2例;26例行bcl-6基因检测的患者中,bcl-6扩增2例,基因断裂3例。1例患者同时存在myc和bcl-2基因扩增,合并bcl-6基因断裂,即三重打击淋巴瘤。DHS评分0分组发现1例双基因异常,1分组发现1例单基因异常,2分组发现5例单基因异常及1例三基因异常,基因异常与蛋白表达不一致。 结论 我国DLBCL中DHL发生率低,基因异常以c-myc或bcl-2、bcl-6单基因异常为主。