Jk(a-b-)表型和基因多态性分析方法的建立及其应用

目的建立筛检Jk(a-b-)表型及其基因分型的方法,探讨Jk(a-b-)形成的分子机制。方法采用红细胞在2mol/L尿素中溶血试验筛选20000名无偿献血者的Jk(a-b-)表型;以IgM型单克隆抗-Jka和-Jkb确认Jk(a-b-);PCR-SSP对Kidd血型做基因分型;PCR扩增JK基因4-11外显子及侧翼内含子,并对扩增产物进行测序。结果在2mol/L尿素溶血试验中,除1例红细胞未发生溶血,初步认定为Jk(a-b-)型外,其他19999例标本均发生溶血。该例不溶血的Jk(a-b-)型与单克隆抗-Jka和-Jkb不发生凝集反应,该Jk(a-b-)表型个体的JK基因在第5内含子3'端拼接接受位点g突变为a,携带纯合子的IVS5-1g>a基因突变,第7外显子499A>G杂合,588A>G突变。结论尿素溶血初筛、单克隆抗体确认、基因分型和测序方法可以用于Kidd系统Jk(a-b-)血型的表型和分子机制研究。

某地区儿童Kidd血型JK(a-b-)表型的筛选

目的筛选深圳地区儿童Kidd血型中JK(a-b-)表型。方法采用96孔微量板法尿素溶血实验从20 453例样本中筛选溶血阴性样本,血清学实验确认JK(a-b-)表型。结果 20 453例样本中筛选出4例JK(a-b-)表型,检出率为4∶20 453,频率为0.019 6。结论深圳地区儿童Kidd血型JK(a-b-)表型的检出率略低于广东番禺地区,但明显高于广东韶关、上海、中国台湾、中国澳门、日本等其他地区。

成都地区献血人群Jk(a-b-)表型筛查

目的了解成都地区献血人群中Jk(a-b-)表型的分布。方法用尿素溶血试验(96孔微量板法)筛选出不溶血个体,然后用血清学方法确定表型,PCR-SSP法确定基因型。结果共筛查标本36 188份,筛查到血清学Jk(a-b-)表型8份,其基因分型均含有Jkb。结论成都地区献血人群中Jk(a-b-)表型频率为0.022%,建立本地区Jk(a-b-)表型献血者库是解决该类血型患者输血问题的有效措施。

广州地区无偿献血者人群中Jk(a-b-)表型筛选及分子遗传学研究

目的了解广州地区无偿献血者人群中,Kidd血型系统中Jk(a-b-)稀有血型个体的分布频率及分子遗传背景。方法用2 mol/L尿素溶解法,对50 000名广州血液中心无偿献血者中的Jk(a-b-)血型个体进行筛选。用传统的血型血清学方法对筛选到的Jk(a-b-)表型进行确证。随后从静脉血中提取DNA,PCR方法扩增Kidd血型系统编码基因Jk的所有编码外显子,并直接进行测序分析。结果在50 000名无偿献血者中共筛选到10名Jk(a-b-)血型个体,在广州地区无偿献血者人群中其分布频率约为0.02%。在对其中8名先证者基因分型中,共发现了2种基因型,纯合IVS5-1G>A(n=6),杂合IVS5-1G>A/杂合896G>A(299Gly>Glu)(n=2)。结论广州地区无偿献血者人群中,Jk(a-b-)的分布频率高于已报道的北方人群。高频率分布于太平洋波利尼西亚群岛的变异IVS5-1G>A,也是本人群中最常见的基因变异。

福建地区稀有血型JK(a-b-)表型筛选及分子遗传学分析

目的了解福建地区无偿献血者Kidd血型系统中JK(a-b-)表型的分布频率并分析其遗传学特征。方法用尿素溶解试验筛查福建地区180 626例无偿献血者JK(a-b-)表型;用经典血清学方法确证其表型;对JK基因的启动子、11个外显子及其侧翼区域(50~150 bp)扩增后测序并分析序列信息;用SNa Pshot技术分析福建地区200例献血者JK基因的单核苷酸多态性(SNP)。结果 180 626例无偿献血者中检出15例JK(a-b-)表型个体。分析15例JK(a-b-)表型个体JK基因,检测出的4种隐性基因分别为JK*B(IVS5-1G>A)、JK*B(896G>A)、JK*A(130G>A,220A>G)和JK*B(130G>A,956C>T),这4种隐性基因分别占检出无效基因的66.67%、23.33%、6.67%和3.33%。分析上述200例献血者JK基因SNP发现,JK*B(IVS5-1G>A)为0.75%,JK基因的G130A是一种常见的多态性,未检测到A220G、C222T、C956T、G896A变异。结论福建地区无偿献血人群中JK(a-b-)表型频率估计约为0.008%,JK*B(IVS5-1G>A)和JK*B(896G>A)是该地区JK(a-b-)表型的主要流行基因,发现1个新的引起JK(a-b-)表型的JK-null基因,即SLC14A1 130A,220G。

Jk(a-b-)表型分子机理的初步研究

目的 研究Jk(a-b - )表型的分子机理。方法 在标准血清学鉴定的基础上 ,对Jk(a -b - )表型进行第 4～ 11外显子及部分内含子DNA扩增 ,PCR产物经割胶纯化后直接进行测序分析。结果 Jk(a -b - )表型在第 5内含子 3’端拼接接受位点G突变为A ;第 3内含子 3’端第 78位A→G ;第 8内含子 5’端第 84位C→T ;外显子第 5 88位A→G(第 7外显子内 ) ;第 838位G→A(第 9外显子内 )。其中第 5内含子 3’端拼接接受位点G突变为A导致转录后外显子 6的缺失。结论 第 5内含子 3’端拼接接受位点的碱基G突变为A可能是Jk(a -b - )表型的分子遗传机理之一。

深圳地区儿童Kidd血型Jk(a-b-)表型筛选及分子机理研究

目的调查深圳地区人群中Jk(a-b-)表型检出率;探讨深圳地区Jk(a-b-)表型产生的分子机理。方法用尿素溶血实验筛选出Jk(a-b-)表型,采用微柱凝胶法进行Jk(a-b-)表型血清学确认试验,并对Jk(a-b-)表型标本进行DNA提取扩增及纯化测序。结果从20 453儿童标本中筛选出4例Jk(a-b-)表型,检出率为4∶20 453,分布频率为0.019 6。在对其中4名先证者基因分型中,共发现了2种基因型,纯合IVS5-1G>A,杂合IVS5-1G>A合并杂合896G>A。结论深圳地区人群中Jk(a-b-)表型分布频率明显高于国内其它地区,检测到的基因型IVS5-1G>A、杂合IVS5-1G>A合并杂合896G>A是中国人群中最常见的基因变异。

一例稀有血型JK(a-b-)表型家系调查分析

本研究旨在检测Kidd血型系统的稀有JK(a-b-)表型的先证者及其家系中其他个体的表型及基因型,探讨本例JK(a-b-)表型的分子机理,分析遗传背景,为稀有血型个体输血治疗寻找相合供者提供科学依据。采用4 mol/L尿素溶血试验,筛选JK(a-b-)表型先证者,并对其进行家系调查。用血清学方法确认表型;用PCR-SSP方法检测基因型,并对JK基因外显子4-11及其侧翼的区域扩增后测序,分析序列信息。结果表明,先证者及其哥哥具有相同的表型JK(a-b-)和基因型Jkb/Jkb;其父母的表型为JK(a+b-),基因型为Jka/Jkb;妹妹的表型和基因型分别为JK(a+b-)和Jka/Jka。对外显子及其侧翼测序发现,先证者及其哥哥的内含子5的3'端拼接接受位点碱基g>a突变,其父母的该位点均为a/g杂合,其妹妹的该位点没有突变;内含子3(外显子4侧翼)nt-99位的碱基为g,其父母的该位点均为g/a杂合,其妹妹的该位点是a。结论:先证者及其哥哥具有相同的表型JK(a-b-)和基因型Jkb/Jkb,JK基因内含子5的3'端拼接接受位点的g>a突变可能是造成其JK(a-b-)表型的原因之一;家系中内含子3的nt-99位的碱基也具有多态性(ncbi:rs8090908),该位点多态性是否与JK(a-b-)表型相关值得进一步研究。本例家系Kidd血型系统符合显性遗传规律。对于稀有JK(a-b-)表型个体的家系,尤其是同胞兄妹进行血型调查,发现表型和基因型均相同的个体可能性大。

JK(a-b-)表型分子生物学研究进展

Kidd血型系统(JK,ISBT009)在临床输血中具有重要的意义,其血型抗原为尿素转运蛋白。JK(a-b-)表型为Kidd系统罕见的表型,其红细胞上缺乏相应的抗原,但能够在2mol/l尿素溶液中相当长的时间内不溶解,此表型在研究尿素转运中具有重要的价值。本文就JK(a-b-)表型的分子机理、临床及其诊断等作一综述。

番禺地区无偿献血人群中Jk(a-b-)表型的筛选与研究

目的研究番禺地区献血人群中Jk(a-b-)表型的分布特点。方法用2mol/L尿素攻膜试验(96孔微量板法)筛选出阴性(不溶血)样本,然后作血清学表型鉴定,对Jk(a-b-)表型进行基因分型及基因组DNA编码区外显子4-11及其侧翼区的分段扩增和测序。结果从本站2004年6月-2006年8月献血的50034名汉族人中筛选出10例Jk(a-b-)表型,频率为0.02%;发现3种突变序列:1)Intron5:3'剪切位点AG>AA,Exon7:nt588A>G、AA196CCA(Pro)>CCG(Pro),推测基因型为JKb(△6)/JKb(△6);2)Exon5:nt222C>A、AA74AAC(Asn)>AAA(Lys),Exon7:nt536C>G、AA179CCT(Pro)>CGT(Arg),Exon7:nt588A>G、AA196CCA(Pro)>CCG(Pro),推测基因型为JKb(222A)/JKb(536G);3)Intron5:3'剪切位点AG>AA,Exon7:nt499A>G,AA167ATG(Met)>GTG(Val),Exon7:nt588A>G、AA196CCA(Pro)>CCG(Pro),推测基因型为JKb(△6)/JKb(499G)。结论在番禺地区献血人群Jk(a-b-)表型查中发现的Exon7:nt499A>G和Exon7:nt536C>G2种突变为首次报道。

上饶市献血人群JK(a-b-)表型筛查及分子生物学特征分析

目的了解JK(a-b-)表型在上饶献血人群中的分布频率,研究其分子生物学特征。方法红细胞尿素溶血实验筛选出JK(a-b-)表型献血者,血清学进行确认实验。对Jk基因编码第4-11外显子进行PCR扩增,并测定序列。结果 38483份血液筛查标本中有1份标本未出现尿素溶血,血清学实验,确认为JK(a-b-)血型,分布频率约为0.0025%。Kidd血型基因分型为JKBΔ6/JKBΔ6。第6外显子测序结果为第5内含子剪切位点突变AG>AA。结论上饶地区分布频率低于上海地区0.0039%、温州0.014%、广州0.02%。第6外显子的编码序列在转录和翻译过程中被遗漏,是一种导致Jk(a-b-)表型的常见变异,这是导致Jk(a-b-)的个体红细胞尿渗透障碍的遗传基础。明确该表型在本地献血人群中的分布频率,储存该表型的献血者血液,对保证该类表型患者的安全输血有重要意义。

宜昌地区献血者Jk(a-b-)频率与Jka弱表达表型分子遗传机制研究

目的了解宜昌地区献血人群Kidd血型系统Jk(a-b-)稀有血型频率与分子遗传学背景。方法用2 mol/L尿素溶血试验对49 999名宜昌中心血站献血者进行Jk(a-b-)筛选,利用单克隆抗-Jk^(a),抗-Jk^(b)对Jk(a-b-)先证者及家系进行表型确证,并对Kidd血型系统编码SLC14A1基因进行全外显子测序。结果 49 999名献血者共筛选出Jk(a-b-)个体2名,频率为0.004%。SLC14A1基因外显子测序中确认2名先证者皆为Jk^(a)02N.01(c.342-1G>A纯和突变所致),并在家系调查中观察到Jk^(*)01W.01等位基因,11例家系调查样本中共出现Jk^(a)弱表达4例。结论宜昌地区献血人群Jk(a-b-)频率与上海人群0.004%(2/48 400)相似,皆为东南亚地区高频分布的Jk^(a)02N.01等位基因所致,Jk^(a)01W.01等位基因频率值得进行后续流调研究。

稀有抗体抗-Jk^3的发现及Jk(a-b-)血型家系遗传背景研究

目的研究抗-Jk3的血清学特异性及产生该抗体的Jk(a-b-)稀有血型的遗传途径,了解该血型在广州地区人群的分布。方法患者血清与试剂谱红细胞在盐水介质,低离子介质凝聚胺和coomb's微柱凝胶中反应,分析鉴定其抗体特异性;对kidd血型进行家系调查,分析Jk(a-b-)稀有血型的遗传背景;采用2mol/L尿素溶血试验初筛,coomb's微柱凝胶试验确认,对广州地区32 000名献血者的红细胞作Jk(a-b-)血型筛查。结果患者血清与试剂红细胞在低离子凝聚胺介质和coomb's微柱凝胶介质中的反应格局显示患者血清中含有抗-Jk3,kidd血型家系遗传研究提示母方带有Jkb/Jknull基因,推测父方至少带有1条Jknull基因;在32 000名献血者中发现8名Jk(a-b-)个体。结论该例同种抗体为IgG抗-Jk3特异性抗体;隐性基因Jknull可以遗传,当该基因为纯合子时表现为Jk(a-b-)表型个体,该血型在广州地区人群分布频率为0.025%,解决稀有血型患者输血问题的有效措施是建立本地区的稀有血型献血者队伍。

温州地区稀有血型Jk(a-b-)献血者筛选和临床应用

Kidd血型系统（ISBT,009）包括3种血型抗原,分别是Jka（Jk1）、Jkb（Jk2）和Jk3（Jk3）,存在4种不同的表型：Jk（a＋b-）、Jk（a-b＋）、Jk（a＋b＋）和Jk（a-b-）。其中Jk（a-b-）表型在人群中十分罕见,在中国人特别是汉族人群的血清学调查中,发现其频率可能很低,或低于万分之一～数万分之一.

1例罕见的Jk(a-b-)产生抗-Jk3及输血对策

Kidd血型系统（ISBT，009）包括3种血型抗原：Jk^a、Jk^b、Jk3，3种常见的表型分别为：Jk（a＋b-）、Jk（a＋b＋）、Jk（a-b＋），这3种表型均表达Jk3抗原，还有1种罕见表型Jk（a-b-），其红细胞表面不表达Jk^a、Jk^b和Jk3抗原。Jk（a-b-）个体因输血或妊娠免疫产生抗-Jk3，抗-Jk3可引起立即型和迟发型溶血性输血反应。由于Jk（a-b-）个体非常罕见，而一旦产生抗体，寻找相配合的血液就及其困难。

济宁地区无偿献血人群Jk(a-b-)表型的频率及分子遗传学分析

目的筛查济宁地区无偿献血人群的Jk(a-b-)表型,并分析其分子遗传学基础,完善本地的稀有血型库。方法选取济宁市中心血站2019年7月至2021年1月的无偿献血人群为研究对象。用2 mol/L尿素法筛查Jk(a-b-)表型,用经典血清学方法确认结果,并对SLC14A1基因第3~10外显子及其侧翼区进行Sanger测序分析。结果在95500份无偿献血者的样本中,尿素溶血实验共3例未发生溶血现象,经血清学方法复核为Jk(a-b-)表型且均无抗-Jk3抗体。济宁地区Jk(a-b-)表型的分布频率为0.0031%(3/95500)。经基因测序和单体型分析,确认3例样本的基因型分别为JK*02N.01/JK*02N.01、JK*02N.01/JK-02-230A以及JK*02N.20/JK-02-230A。结论SLC14A1基因第4内含子c.342-1G>A剪接变异、第4外显子c.230G>A以及第6外显子c.647648delAC为本地区人群Jk(a-b-)表型相关的变异位点,与国内其他地区有所不同,其中c.230G>A变异既往未见报道。

Kidd血型系统Jk基因非编码区3个新突变位点的多态性

目的研究Kidd血型系统Jk基因非编码区3个新突变位点的多态性。方法选取深圳地区和惠州地区发现的7例Jk(a-b-)表型血液标本以及115例汉族健康无偿献血者血液标本,经尿素溶解试验及常规血型血清学方法鉴定Kidd表现型,并对于Jk基因启动子,第1~11外显子及部分内含子片段进行直接测序比对分析。结果(1)检出两种Jk隐性基因,Exon 9 c.896G>A和IVS5-1g>a;同时发现3个新的突变位点Intron 2-51 c>t、Exon 3 42 c>a、Intron 3 72 c>t。(2)7例Jk(a-b-)中,5例携带IVS5-1 a/a,2例携带Exon 9 c.896 A/A隐性基因。并且7例标本均携带Intron 2-51 t/t和Exon 3 42 a/a纯合子等位基因,而对照组115例标本中只有29例携带。7例Jk(a-b-)样本均携带JkB基因。(3)7例Jk(a-b-)和对照组115例样本Jk基因均表现为Intron 3 72 t/t纯合子突变。结论IVS5-1 g>a和Exon 9 c.896G>A是中国人群中常见的Jk隐性基因。另外,Jk基因非编码区的2个新突变位点Intron 2-51 t/t、Exon 3 42 a/a基因型可能与Jk隐性基因相关。

北京地区汉族献血者Kidd血型系统调查

目的了解北京地区汉族献血人群Kidd血型系统的分布和基因分型。方法采用尿素溶血试验,对北京地区15984名汉族献血者进行Jk(a-b-)表型筛查。尿素溶血试验阳性标本用血清学方法确认,PCR-SSP法进行基因分型。结果筛选出1例未溶血标本,血清学试验确认为Jk(a-b-)表型,基因分型为Jk b/Jk b。结论北京汉族献血者人群中有Jk(a-b-)表型存在,稀有血型筛选对解决临床稀有血型患者紧急用血、完善稀有血型库具有重要意义。

罕见抗-Jk^3合并抗-cE的鉴定

目的对罕见的抗-Jk^3合并抗-c E的标本进行鉴定。方法对被检标本分别做ABO血型、Rh血型和Kidd血型鉴定,并作Kidd血型的基因分型;尿素溶血实验以辅助鉴定Jk（a-b-）表型;血清学实验包括自身对照实验、直接抗人球蛋白实验和不规则抗体筛查;因实验室抗体鉴定用Jk（a-b-）表型红细胞为A型,故采用吸收放散实验鉴定标本是否有抗-Jk^3。结果被检患者血型为B型,DCCee,自身对照阴性,抗体筛查阳性,直接抗人球蛋白实验阴性;血清学和基因分型鉴定标本kidd血型为Jk（a-b-）;尿素溶血实验结果为尿素抵抗。标本检出有抗-Jk^3合并抗-cE抗体。结论对罕见的抗高频抗原抗体,应采用灵活的血清学技术手段并细致分析,以达到鉴定的目的。

成都地区献血人群Jk(a-b-)表型的)NA序列分析

目的调查成都地区献血人群Jk（a—b-）表型的分子遗传特征。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物技术对成都地区8名Jk（a—b-）表型献血者Jg基因第4～11外显子及其侧翼区域进行扩增，并对产物进行测序分析。结果8份样本均为第9外显子C．838AA纯合型，含有无效Jk“等位基因。发现4种突变序列：（1）IVS5-IG〉A纯合突变、第7外显子C．588A〉G（P．Pr0196Pro）纯合突变；（2）第9外显子C．896G〉A（p．Gly299Glu）纯合突变、第7外显子C．588A〉G（P．Pr0196Pro）纯合突变；（3）IVS5—1G〉A杂合突变、第5外显子C．222C〉A（P．Asn74Lys）杂合突变、第7外显子C．499A〉G（Metl67Val）杂合突变、第7外显子c．588A〉G（P．Prol96Pro）纯合突变；（4）IVS5—1G〉A杂合突变、第9外显子C．896G〉A（P．Gly299Glu）杂合突变、第7外显子C．588A〉G（P．Pr0196Pro）纯合突变。结论IVS5—1G〉A突变、第5外显子C．222C〉A突变（P．Asn74Lys）和第9外显子C．896G^A突变（P．Gly299Glu）可能是成都地区献血人群Jk（a—b-）表型的分子遗传基础。