猪轮状病毒地方株JL94株VP6基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

以猪轮状病毒地方分离株JL94株病毒核酸为模板,通过RT-PCR扩增内衣壳蛋白基因VP6cDNA,将其插入克隆载体质粒pMD18-T,并进行测序。从T载体上将VP6基因亚克隆到表达载体质粒pET-30a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并利用Ni2+金属螯合亲合层析纯化融合蛋白。结果表明,VP6基因全长1356bp,并在大肠杆菌中获得了高效表达,表达量可占菌体蛋白的26.5%,在表达的蛋白中,除45ku主要蛋白外,还有几条分子量较小的蛋白表达出来,这些融合蛋白经纯化后均具有良好的反应特异性。

猪轮状病毒中国分离株JL94 VP7基因的克隆与序列分析

用 MA10 4细胞培养增殖了轮状病毒地方分离株 JL94。利用一对根据 Genebank中已发表的轮状病毒 VP7基因c DNA序列而设计并合成的引物 ,通过反转录—聚合酶链反应 (RT- PCR)从 JL94毒株扩增出 VP7基因全长 c DNA。将其插入p MD18- T载体中 ,构建了重组质粒 p MD18- T- JL 94 / VP7,并对其进行了 Hind ,Hind 和 Bam H 的单、双酶切初步鉴定及其核苷酸序列测定 ,证明克隆的 p MD18- T- JL94 / VP7为轮状病毒的 VP7基因。通过核苷酸序列比较 ,JL94 / VP7与 A群猪轮状病毒 C134/ VP7、OSU / VP7、ICB2 185 / VP7、YM/ VP7核苷酸序列同源性分别为 87%、99%、74 %和 83%。

猪轮状病毒JL94中国分离株衣壳蛋白基因的分析

根据GenBank发表的猪轮状病毒衣壳蛋白vp4基因、vp6基因和vp7基因保守序列,设计合成3对引物,分别扩增猪轮状病毒中国分离株JL94株的此3段基因并进行序列分析。结果表明,JL94株vp4基因与国外分离株CRW-8株、OSU株、Gottfried株、4F株和4S株的VP4氨基酸同源性分别为97.16％、95％、71.88％、73.45％和70.88％;JL94株vp6与CRW-8株、OSU株、Gottfried株、4F株和4S株的VP6氨基酸同源性分别为96.98％、97.48％、93.20％、97.48％和93％;JL94株vp7基因与CRW-8株、OSU株、Gottfried株、4F株和4S株的VP7氨基酸同源性分别为98％、99.90％、75.40％、84.66％和80％。可见JL94株同CRW-8株、OSU株同源性更高些;vp4和vp7基因在同型间高度保守而不同型间差距较大,vp6基因在同群和非同群间差别不是很明显。同时可以判定JL94属于A群Ⅰ亚群G5P7血清型PRV。研究猪轮状病毒中国分离株JL94株衣壳蛋白基因的特征,为研制高效抗病毒疫苗奠定基础。

猪轮状病毒JL94株VP6基因克隆及同源性比较

通过反转录—聚合酶链反应 (RT— PCR)扩增了猪轮状病毒国内地方分离株 JL 94的 VP6基因 c DNA片段。将其插入克隆载体质粒 p MD18- T的 Eco RV酶切位点处 ,构建了重组质粒 p MD18- T— VP6。对克隆的 VP6基因进行序列测定 ,测序结果显示 VP基因全长 135 6 bp,并与猪 A群轮状病毒 OSU(亚组 )、Gottfried(亚组 )的 VP6进行同源性比较 ,结果显示 ,核苷酸序列同源性分别为 86 .85 %、82 .4 1% ,氨基酸序列同源性分别为 97.4 8%、93.2 0 % ,结果表明 JL 94分离株与

猪轮状病毒的分离鉴定及部分特性研究

从吉林省某猪场发生腹泻的猪群粪便中,用MA＿104细胞培养,分离到一株猪轮状病毒,盲传至4代,感染细胞出现明显病变,经电镜观察,见有典型的轮状病毒颗粒。其RNA电泳型为4:2:3:2型,属A群轮状病毒,同时对其蚀斑特性和血凝特性进行了初步研究,这株病毒被命名为JL94株。