Cupriavidus necator JMP134细菌人工染色体基因组文库的构建与鉴定

Cupriavidus necator JMP134(C.necator JMP134)可以降解60多种芳香族化合物,在环境污染治理方面具有良好的应用前景.该菌株基因组含有两个苯酚降解基因簇,克隆并研究其功能具有重要的理论和应用价值.以pIndigo-BAC 5为载体,构建了C.necator JMP134的细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)基因组文库.该文库约有9 600个克隆,插入频率为99%,平均插入片段大小达到65 kb,由此推测该BAC文库覆盖该菌株基因组约860倍.通过PCR筛选该文库的800个单克隆,得到11个含有C.necator JMP134菌株的苯酚羟化酶大亚基基因phlN2的阳性克隆.研究结果表明,该文库是一个高质量、高覆盖率的BAC文库,能有效用于目的基因簇的分离.