JNJ-26481585对人肺腺癌培美曲塞耐药裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制探讨

目的:探讨JNJ-26481585对人肺腺癌培美曲塞耐药裸鼠移植瘤的抑制作用及其抗癌机制。方法:构建人肺腺癌A549/培美曲塞耐药细胞(A549/PEM)的移植瘤裸鼠模型,随机分为模型组、培美曲塞组、JNJ组、联合组(培美曲塞+JNJ),第28天治疗观察结束时处死裸鼠,剥离肿瘤组织标本待测。测定4组裸鼠肿瘤体积与体质量,计算抑瘤率,观察各治疗组药物对荷瘤裸鼠的毒副反应,TUNEL方法检测4组移植瘤细胞凋亡情况的差异,qRT-PCR检测4组移植瘤细胞FAM96A、Bax、Bcl-2基因mRNA表达水平差异,Western blot检测4组移植瘤细胞FAM96A、Bax、Bcl-2蛋白表达的差异。结果:联合组的肿瘤体积、体质量低于JNJ组,JNJ组的肿瘤体积、体质量低于培美曲塞组,联合组的抑瘤率高于JNJ组,JNJ组抑瘤率高于培美曲塞组(均P<0.05)。联合组的细胞凋亡率高于JNJ组,JNJ组细胞凋亡率高于培美曲塞组(均P<0.05)。联合组肿瘤细胞的FAM96A、Bax表达水平高于JNJ组,JNJ组FAM96A、Bax表达水平高于培美曲塞组,联合组Bcl-2表达水平低于JNJ组,JNJ组Bcl-2表达水平低于培美曲塞组(均P<0.05)。联合组与单药组比较,血细胞计数均明显下降,肝功能指标均明显升高(P<0.05);培美曲塞组与JNJ组比较,血细胞及肝功能指标无统计学差异(P>0.05)。结论:JNJ-26481585可通过激活抑癌基因FAM96A的表达、上调Bax表达及下调Bcl-2的表达来促进癌细胞凋亡,逆转肺腺癌对培美曲塞的耐药性,并与培美曲塞协同发挥抗癌作用。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂JNJ-26481585抗食管癌活性及其作用机制研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂JNJ-26481585的抗食管癌活性及其分子机制。方法使用溶剂对照和浓度梯度的JNJ-26481585作用于食管癌细胞株TE-1,采用MTT法和克隆形成实验检测处理后的细胞活力;EdU染色检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;划痕和Transwell侵袭实验检测JNJ-26481585的抗转移活性;Western blot实验检测JNJ-26481585对食管癌生长相关信号通路的影响。结果 JNJ-26481585在较低浓度即可有效抑制TE-1细胞的活力、克隆形成和增殖,诱导细胞G_2/M期阻滞和凋亡,同时可抑制细胞迁移和侵袭的活性。Western blot实验结果显示,JNJ-26481585可明显提升TE-1细胞中p21蛋白表达水平,并有效抑制PI3K/mTOR和MAPK通路中的关键蛋白Akt、ERK的磷酸化。结论 HDAC抑制剂JNJ-26481585可通过上调细胞周期抑制剂p21表达,以及抑制Akt/mTOR、ERK信号通路,发挥抗食管癌作用。

JNJ-7706621对人乳腺癌细胞周期及凋亡的影响

目的:探讨周期素依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)抑制剂JNJ-7706621对人乳腺癌细胞周期及凋亡的影响。方法:常规培养乳腺癌T47D、MD-MB-231细胞,MTT法检测不同浓度JNJ-7706621(0、1、2、4μM)对乳腺癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测JNJ-7706621对细胞周期的影响,AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测JNJ-7706621对细胞凋亡的影响;West ern blot检测JNJ-7706621对凋亡及周期相关蛋白表达的影响。结果:JNJ-7706621能够抑制乳腺癌T47D、MDA-MB-231细胞增殖,具有浓度和时间依赖性;流式细胞术显示,JNJ-7706621可将T47D、MDA-MB-231细胞的周期阻滞于G2/M期,具有浓度依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);AnnexinⅤ-FITC/PI双染法示随着JNJ-7706621浓度增加或作用时间的延长,T47D、MDA-MB-231细胞凋亡所占比例逐渐增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示,随JNJ-7706621浓度增加,Bcl-2的表达明显下调,Caspase3、PARP的剪切明显增高,而p53的表达无明显变化;周期相关蛋白CDK1的表达无明显变化;CDK1在Thr161位点的磷酸化水平降低,而在Tyr15位点的磷酸化水平增高;结论:在体外条件下,JNJ-7706621可通过阻滞细胞周期与诱导细胞发生凋亡的方式,有效抑制乳腺癌细胞增殖,可能与抑制CDK1在Thr161位点的磷酸化水平有关。

JNJ-7706621对阿霉素耐药乳腺癌细胞生长的抑制作用研究

目的研究JNJ-7706621对人阿霉素耐药MCF-7/ADR乳腺癌细胞生长的作用。方法采用MTT试验检测JNJ-7706621对MCF-7/ADR耐药细胞生长的影响;采用TUNEL染色试验分析JNJ-7706621对MCF-7/ADR耐药细胞凋亡的激活作用;Caspase酶活性检测分析JNJ-7706621处理后,MCF-7/ADR细胞中Caspase-8、Caspase-9活化程度;应用流式细胞周期分析检测JNJ-7706621对MCF-7/ADR耐药细胞周期的影响。结果 JNJ-7706621能有效抑制阿霉素耐药细胞MCF-7/ADR的生长,并呈现明显的浓度依赖性,作用48 h的IC50仅为0.83μmol/L。2μmol/L JNJ-7706621作用24 h后,TUNEL染色阳性的MCF-7/ADR细胞比率较对照组显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);MCF-7/ADR细胞中Caspase-8、-9酶活性均显著升高,差异亦具有统计学意义(P<0.05)。在1μmol/L JNJ-7706621作用24 h后,G2/M期细胞比率由对照(7.1±1.3)%升高至(23.8±3.1)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 JNJ-7706621能同时激活内外源性凋亡途径,诱导MCF-7/ADR细胞凋亡的发生,并将MCF-7/ADR细胞周期阻滞在G2/M期,从而对阿霉素耐药MCF-7/ADR细胞的生长发挥有效抑制作用。

JNJ-40411813合成工艺研究

目的研究抗精神分裂症药物JNJ-40411813合成新方法。方法以4-溴吡啶-2(1H)-酮为起始原料,经烷烃化、偶合及卤代3步反应得到目标产物JNJ-40411813。结果与结论目标化合物的结构经1H-NMR、13C-NMR、LRMS和HRMS等确证。该合成路线反应步骤简短,操作简便,反应条件温和,适合工业化生产。