基于JNK-p62/SQSTM1信号通路探讨糖肾煎对2型糖尿病肾病大鼠足细胞的保护作用

目的 基于c-Jun氨基末端激酶(JNK)-p62/螯合体(SQSTM1)信号通路探讨糖肾煎对2型糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞的保护作用。方法 SD大鼠随机分成正常组、DN组、糖肾煎低、中、高[生药5、10、20 g/(kg·d)]剂量组(糖肾煎-L、M、H组)、二甲双胍组[100 mg/(kg·d)]。除正常组外,其余各组通过喂养高脂高糖饲料和腹腔注射链脲佐菌素(STZ)进行DN模型构建。药物干预结束后,检测大鼠血生化指标空腹血糖(FBG)、负荷后2 h血糖(P2 h BG)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平;苏木素-伊红(HE)、六胺银(PASM)染色观察肾组织病理学变化;透射电镜(TEM)观察肾小球基底膜损伤和足细胞变化情况;Western印迹检测肾组织中微管相关蛋白1A/1B-轻链(LC)3、p-JNK、JNK、p62/SQSTM1、肾病蛋白(Nephrin)蛋白表达。结果 与正常组比较,DN组FBG、P2 h BG、SCr、BUN水平及p62/SQSTM1蛋白表达明显升高,LC3-Ⅱ、Nephrin蛋白表达和p-JNK/JNK明显降低(P<0.05);光镜下观察到肾小球缩小、管丛系膜明显扩张,并有基底膜增生增厚等现象;TEM下观察到肾小球基底膜增厚、足细胞排列紊乱、形态改变、足突融合等现象。与DN组比较,糖肾煎-L、M、H组和二甲双胍组FBG、P2 h BG、SCr、BUN水平及p62/SQSTM1蛋白表达明显降低,LC3-Ⅱ、Nephrin蛋白表达和p-JNK/JNK明显升高(P<0.05);并且肾小球基底膜增厚、足细胞足突融合等情况均获得一定程度减轻。结论 糖肾煎对2型DN大鼠足细胞具有一定保护作用,可能是通过调控JNK-p62/SQSTM1信号通路,提高足细胞自噬,从而起到肾脏保护功效。

缺氧诱导因子1α、Bcl-2/腺病毒E1B19kDa相互作用蛋白3在儿童创伤性脑损伤中的表达及意义

目的动态观察缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、Bcl-2/腺病毒E1B19kDa相互作用蛋白3(Bcl-2/adenovirus E1B19kDa-interacting protein 3,BNIP3)在儿童创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)中的变化,并评估其预测儿童TBI病情轻重及预后的临床价值。方法前瞻性纳入2021年1月—2023年7月47例中重度TBI患儿为研究对象,根据格拉斯哥昏迷评分分为中度亚组(9~12分)和重度亚组(3~8分);以同期因腹股沟斜疝诊治且无基础疾病的30例患儿为对照组。比较各组HIF-1α、BNIP3、自噬相关蛋白Beclin-1及S100B水平的差异,采用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)评估HIF-1α、BNIP3、Beclin-1及S100B对TBI病情轻重及预后的预测价值。结果TBI组患儿血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平高于对照组(P<0.05);TBI患儿中,重度亚组HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平高于中度亚组(P<0.05)。相关性分析显示,血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平与格拉斯哥昏迷评分呈负相关(P<0.05)。治疗7 d后,非手术TBI和手术TBI患儿的血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1及S100B水平均较治疗前下降(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、S100B水平预测重度TBI的曲线下面积分别为0.782、0.835、0.872、0.880(P<0.05),预测TBI预后不良的曲线下面积分别为0.749、0.775、0.814、0.751(P<0.05)。结论TBI患儿血清HIF-1α、BNIP3及Beclin-1水平显著升高,检测其水平有助于临床判断TBI患儿的病情轻重及预后。

EB病毒编码的BARF1基因通过JNK/c-Jun信号通路调节鼻咽癌细胞bcl-2的表达

目的:探讨EB病毒编码的BARF1基因对鼻咽癌细胞JNK/c-Jun信号通路活性及bcl-2表达的影响。方法:以p SG5空载体转染鼻咽癌细胞系CNE1(CNE1-SG)为对照,采用蛋白质印迹法检测稳定表达BARF1的CNE1细胞(CNE1-BARF1)中JNK/c-Jun通路的活性及BCL-2的表达;经JNK特异性抑制剂SP600125处理后,检测CNE1-BARF1细胞中JNK/c-Jun通路的活性及BCL-2的表达。结果:与CNE1-SG细胞相比,CNE1-BARF1细胞中cJun、BCL-2表达以及JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平明显增加(P<0.05)。经SP600125处理后,CNE1-BARF1细胞中c-Jun及BCL-2表达明显降低(P<0.05),c-Jun磷酸化水平也降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BARF1基因可能通过激活JNK/c-Jun信号通路上调原癌基因bcl-2的表达。

JNK/c-Jun信号通路参与介导EB病毒编码的BARF1基因上调胃癌细胞Bcl-2的表达

目的:探讨EB病毒编码的BARF1基因对胃癌细胞JNK-MAPK信号通路活性及Bcl-2基因表达的影响。方法:以p SG5空载体转染的胃癌细胞系BGC823(BGC-SG)为对照,采用蛋白质印迹分析稳定表达BARF1的BGC823细胞(BGC-BARF1)中,以及采用JNK-MAPK的特异性抑制剂SP600125处理后JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平以及cJun和Bcl-2蛋白的表达。结果:与BGC-SG相比,BGC-BARF1细胞中JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平,以及c-Jun和Bcl-2蛋白的表达均显著提高(P<0.05)。SP600125处理后,c-Jun蛋白的磷酸化水平以及c-Jun和Bcl-2蛋白的表达均显著下降。结论:JNK/c-Jun信号通路参与介导BARF1上调胃癌细胞中Bcl-2的表达。

延龄草总皂苷通过调控GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路抑制内质网应激而减轻PSCI大鼠海马神经元损伤

目的:探讨延龄草总皂苷(TST)对卒中后认知障碍(PSCI)大鼠海马神经元的保护作用及分子机制。方法:将采用改良Zea Longa线栓法造模成功的大鼠随机分为模型(model)组、TST(100 mg/kg)组和盐酸多奈哌齐(DON;0.45 mg/kg)组,另设假手术(sham)组,每组10只,连续给药4周。采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;TTC染色检测大鼠脑梗死体积变化,HE、Nissl和TUNEL染色观察大鼠海马组织神经元病理变化;免疫组化及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇需求酶1α(IRE1α)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、胱天蛋白酶12(caspase-12)、Bax和Bcl-2的蛋白水平。结果:与sham组相比,model组大鼠逃避潜伏期显著延长,穿越平台次数及目标象限停留时间显著减少(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著增大,神经元尼氏小体数量显著减少,凋亡细胞显著增多;海马组织中GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与model组比较,TST组及DON组大鼠逃避潜伏期显著缩短,穿越平台次数及目标象限停留时间显著增加(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著缩小,神经元尼氏小体数量显著增多,凋亡细胞显著减少;GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著降低,Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论:TST对PSCI大鼠海马神经元具有保护作用,其机制可能与减轻内质网应激、减少神经元凋亡并抑制GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路有关。

理中汤合四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠JNK/Beclin 1/Bcl-2信号通路相关蛋白及基因表达的影响

目的观察以温补脾肾法为指导的理中汤合四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)大鼠的影响,探讨其可能的作用机制。方法制备脾肾阳型UC大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、柳氮磺吡啶组(SASP组)、肠胃宁组和理中汤合四神丸低、中、高剂量组,每组16只,同时设空白组16只。各给药组予相应药物灌胃,空白组和模型组予等体积蒸馏水灌胃,连续21 d。观察大鼠结肠黏膜组织损伤情况,对结肠黏膜损伤指数(CMDI)进行评分;HE染色观察大鼠结肠组织病理变化;免疫组化和RT-qPCR分别检测大鼠结肠组织JNK1、Beclin 1、Bcl-2、LC3B蛋白和m RNA表达;Western blot检测大鼠结肠组织JNK1、p-JNK1、Bcl-2、p-Bcl-2、Beclin 1和LC3B蛋白表达,并计算LC3BⅡ/LC3BⅠ比值。结果与空白组比较,模型组大鼠CMDI评分显著升高(P<0.01),结肠组织腺体排列紊乱,黏膜层消失,有大量炎性细胞浸润,黏膜基层与基底层分界不清;结肠组织JNK1、Beclin 1、Bcl-2、LC3B mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01),p-JNK1、p-Bcl-2蛋白表达及LC3BⅡ/LC3BⅠ比值显著升高(P<0.01)。与模型组比较,SASP组、肠胃宁组和理中汤合四神丸中、高剂量组大鼠CMDI评分显著降低(P<0.05,P<0.01),各给药组大鼠结肠黏膜损伤减轻,炎性细胞浸润减少;理中汤合四神丸高剂量组、SASP组、胃肠宁组大鼠结肠组织JNK1、Beclin 1、Bcl-2、LC3B mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),p-JNK1、p-Bcl-2蛋白表达及LC3BⅡ/LC3BⅠ比值显著降低(P<0.01)。结论以温补脾肾法为指导的理中汤合四神丸可能通过抑制JNK/Beclin 1/Bcl-2信号通路的激活,降低结肠组织过度自噬,进而修复脾肾阳虚型UC大鼠结肠黏膜。

基于JNK1/Bcl-2通路探讨益肾通络方对膜性肾病大鼠足细胞的影响

目的:研究益肾通络方对膜性肾病大鼠足细胞凋亡的影响及初步机制。方法:将44只SD大鼠随机选取10只为正常组,造模其余34只,造模成功后将造模组大鼠随机分为中药组、盐酸贝那普利组及模型组,各组均10只,每组按相应剂量给药,在给药4周后测定大鼠24h尿蛋白(UTP)及血清标本中的总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、总胆固醇(TC);留取肾脏组织,用电镜、免疫荧光观察肾脏病理变化,免疫组化及用Western blot检测p-Bcl-2、JNK1、p-JNK1、Caspase-3在肾脏组织的表达。结果:与模型组比较,益肾通络方组和盐酸贝那普利组大鼠UTP、TC明显下降(P<0.05),TP、ALB明显上升(P<0.05);中药组与盐酸贝那普利组大鼠基底膜增厚程度及足突融合程度轻微改善,上皮下少量电子致密物沉积;IgG荧光沉积较模型组明显减弱;Bax、Caspase-3蛋白表达明显下调(P<0.05),其中益肾通络方组程度最显著;p-Bcl-2蛋白表达下调,p-JNK1/JNK1表达也明显下调(P<0.05)。结论:益肾通络方可能基于调节JNK1/Bcl-2信号通路,调节Bax、Caspase-3蛋白的表达水平来抑制MN大鼠肾脏足细胞凋亡,延缓膜性肾病进展。

miR-203a-5p调节Bcl-2/beclin-1通路对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨miR-203a-5p对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法2020年1月至12月筛选靶向B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)的微小核糖核酸(microRNA,miRNA),对瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KFs)进行转染,检测细胞增生、迁移和凋亡情况,同时检测细胞中Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 related X protein,Bax)半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、beclin-1、自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associated-protein light-chain-3,LC3Ⅱ)、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)蛋白表达水平。结果miR-203a-5p与Bcl-2有潜在的结合位点;瘢痕疙瘩中miR-203a-5p mRNA低于正常皮肤、Bcl-2 mRNA高于正常皮肤(P<0.05)。miR-203a-5p抑制剂组KFs细胞增殖率(136.42±15.36)、迁移细胞数(117.14±15.92)、Bcl-2(1.56±0.20)和beclin-1(0.96±0.13)、LC3Ⅱ(1.86±0.32)和collagenⅠ(0.82±0.09)升高,KFs细胞凋亡率(2.63±0.32)、Bax(0.23±0.04)和Caspase-3(0.19±0.03)降低(P<0.05);miR-203a-5p模拟组则相反。结论miR-203a-5p通过Bcl-2/beclin-1通路能抑制KFs细胞增殖和迁移,促进KFs细胞凋亡。

基于Bcl-2/Beclin-1复合体探讨黄连素对脑缺血再灌注损伤大鼠模型的保护作用

目的基于B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)/Beclin-1复合体研究黄连素对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。方法 SPF级SD大鼠108只,按照随机数字表法分为假手术组(sham组)、模型组(I/R)、黄连素低、中、高剂量组(BBR-L、BBR-M、BBR-H),尼莫地平预处理组(NMDP组),造模后对大鼠进行神经功能评分;TTC染色观察大鼠脑梗死面积;HE染色观察大鼠脑组织病理学变化;RT-PCR法检测脑组织中Bcl-2、caspase-3、Bax mRNA的表达;Western blot检测脑皮质中Bcl-2、caspase-3、Bax、Beclin-1蛋白表达水平。结果 I/R组 6、24、48 h3个时间点的神经功能评分均显著高于Sham组,24 h的神经功能评分最高;与模型组比较,BBR处理组和NMDP组24、48 h的神经功能缺损评分显著降低( P<0.05);与Sham组比较,I/R组梗死面积百分比、细胞坏死比例显著升高,与I/R组比较,BBR治疗组和NMDP组显著减少( P<0.05);与Sham组比较,I/R组Bcl-2、caspase-3、Bax mRNA和蛋白水平均显著升高;与I/R组比较,BBR治疗组和NMDP组Bcl-2 mRNA和蛋白水平均显著升高,caspase-3、Bax mRNA和蛋白水平均显著降低;与Sham组比较,I/R组Bcl-2/Bax比值显著降低;与I/R组比较,各治疗组Bcl-2/Bax比值均显著上升,且呈剂量依赖性升高;与Sham组比较,I/R组Beclin-1蛋白水平及Bcl-2/Beclin-1比值升高( P<0.05);与I/R组比较,BBR组和NMDP组Beclin-1蛋白水平显著升高( P<0.05),Bcl-2/Beclin-1比值均降低,且BBR-M组、BBR-H组、NMDP组Bcl-2/Beclin-1无显著差异。结论黄连素对大鼠脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用,其可通过调节自噬蛋白与凋亡蛋白的水平,使自噬达到合适水平,发挥神经保护作用。

自噬基因Beclin-1与凋亡基因Bax、Bcl-2在食管鳞癌中的表达及意义

目的探讨自噬基因Beclin-1、凋亡基因Bax、Bcl-2在食管鳞癌中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法检测45例食管鳞癌组织中Beclin-1、Bax和Bcl-2的表达水平,并分析其与临床病理因素的关系。结果食管鳞癌中Beclin-1表达水平低于正常食管组织(P<0.05);Beclin-1表达随食管鳞癌的组织分化程度、T分期、N分期的升高而下调(P均<0.05)。在正常食管组织中Bax微弱表达,Bcl-2未见表达,两者在食管鳞癌中的表达均显著上调。Bax蛋白表达随食管鳞癌组织分化程度的增加而增加,Bcl-2的表达则相反(P均<0.05)。结论自噬基因Beclin-1、凋亡基因Bax及Bcl-2在食管鳞癌的发生、发展中起协调作用,对其联合检测有助于食管鳞癌的早期诊断和预后判断。

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对脑缺血再灌注大鼠Bcl-2、Bax和Beclin-1的表达及细胞凋亡的影响

目的:应用不同浓度的半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C,Cys C)干预脑缺血再灌注大鼠,检测Bcl-2、Bax、Beclin-1阳性细胞的表达,探讨自噬蛋白Beclin-1与凋亡之间的关系。方法:成年雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham组),缺血再灌注组(I/R组),Cys C低、中、高浓度组。用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h再灌注24 h。采用免疫印迹半定量检测损伤中心脑皮质组织凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Beclin-1的表达;免疫组织化学检测Bcl-2、Bax和Beclin-1阳性细胞数;TUNEL染色法检测脑组织细胞凋亡。结果:与I/R组相比,Cys C低、中浓度组Bcl-2的表达有不同程度的升高,Bax的表达降低,细胞凋亡减少;而Cys C高浓度组Bcl-2的表达明显降低,Bax的表达显著上升,细胞凋亡增加;Cys C各浓度组Beclin-1的表达都有不同程度的升高。凋亡细胞与Beclin-1表达的相关性分析显示,Cys低、中浓度组细胞的自噬和凋亡呈负相关;Cys C高浓度组细胞的自噬和凋亡呈正相关。结论:Cys C在一定浓度范围内,随自噬蛋白Beclin-1表达的升高可抑制细胞的凋亡,对缺血再灌注损伤脑组织具有保护作用。其作用机制和Bcl-2的表达上调,Bax的表达下调有关;而Cys C较高浓度则无上述作用。

复方苦参汤对溃疡性结肠炎DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路的干预作用

目的:探讨复方苦参汤对溃疡性结肠炎大鼠DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路的干预作用.方法:SD♂大鼠84只(体质量200g±20g)随机分为空白对照组、模型组、美沙拉嗪组、复方苦参汤大剂量组、复方苦参汤中剂量组和复方苦参汤小剂量组,每组14只.除对照组外,其余5组均依据Morris等三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)建立大鼠溃疡性结肠炎模型.造模后观察记录大鼠的大便和精神状态,并于第3天随机处死2只造模大鼠,取结肠镜下观察其病理组织学变化发现:大鼠结肠糜烂、充血及溃疡,证明造模成功.建立大鼠溃疡性结肠炎模型后给予美沙拉嗪组大鼠3mL/d(0.5g/L)美沙拉嗪混悬液灌胃,复方苦参汤大、中、小剂量组分别按不同含生药浓度的复方苦参汤液3mL/d(0.67、0.34、0.17g/L)灌胃,对照组和模型组给予等量的生理盐水3mL/d灌胃,连续灌胃15d后,禁食24h,处死大鼠,取结肠组织石蜡包埋切片,HE染色比较各组结肠组织病理组织学改变,Realtime-PCR和免疫组织化学技术检测实验大鼠结肠组织的Bcl-2、β-arrestin1及δ阿片受体(delta opioid receptor,DOR)mRNA和蛋白表达表达变化.结果:各组大鼠结肠组织中Bcl-2、β-arrestin1和DOR表达有显著差异(P<0.05).与对照组比较,模型组的大鼠结肠黏膜组织Bcl-2、β-arrestin1和DOR表达明显升高(24.11±12.61vs11.88±5.90,38.90±5.30vs14.34±8.97,23.57±9.96vs9.68±3.94,均P<0.05);与模型组比较,美沙拉嗪组和复方苦参汤大、中、小剂量组的大鼠结肠黏膜组织Bcl-2、β-arrestin1、DOR表达均显著下降,但美沙拉嗪组和复方苦参汤大、中、小剂量组之间比较Bcl-2、β-arrestin1、DOR表达无显著差异.结论:在实验性溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中DOR、β-arrestin1和Bcl-2的表达升高,DOR-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路可能参与了溃疡性结肠炎的病理过程,复方苦参汤可改善溃疡性结肠炎大鼠的结肠组织病理学改变,机制可能与调节该信号通路有关.

Bcl-2/Beclin-1复合体在自噬中的调节作用

自噬(autophagy)是一种进化保守的溶酶体依赖性分解代谢途径,是细胞维持自稳态的重要机制之一,并参与多种疾病的发生.Beclin-1作为自噬体成核的关键分子之一,是1个调节自噬的关键靶点.Beclin-1有1个BH3结构域,Bcl-2、Bcl-XL等可以通过这个BH3结构域与Beclin-1结合而影响其活性.抗凋亡Bcl-2家族蛋白和Beclin-1的表达水平、磷酸化、分子的亚细胞定位以及BH3-only蛋白等,均可调节Beclin-1蛋白和Bcl-2家族蛋白结合水平,进而调控自噬的发生,并可能对细胞最终走向自噬还是凋亡起着关键作用.

搜风祛痰中药复方对AopE基因敲除小鼠动脉粥样硬化易损斑块Beclin-1和Bcl-2基因表达的影响

目的:观察搜风祛痰中药复方稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化易损斑块Beclin-1和Bcl-2基因表达的影响。方法:建立ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块模型,并设立空白组、模型组、西药组、稳斑汤低、中、高剂量组。13周后将小鼠麻醉处死,取经HE染色的主动脉组织在光学显微镜下进行病理学观察,并采用半定量RT-PCR技术检测Beclin-1和Bcl-2基因表达的变化。结果:与空白组相比,模型组Beclin-1mRNA表达水平明显下降(P<0.01);与模型组相比,西药组和稳斑汤各剂量组均能提高Beclin-1mRNA表达水平(P<0.01);与西药组相比,中药高剂量组Beclin1mRNA表达水平无明显差异(P>0.05)。与空白组对比,模型组Bcl-2mRNA表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,西药组和稳斑汤各剂量组均能提高Bcl-2mRNA表达水平(P<0.01);与西药组相比,稳斑汤高剂量组Bcl-2mRNA表达水平无明显差异(P>0.05)。光镜下观察西药组和稳斑汤各剂量组炎症反应均明显弱于模型组。结论:搜风祛痰中药复方稳斑汤可能通过上调ApoE基因敲除小鼠AS易损斑块中Beclin-1和Bcl-2的基因表达而干预AS不稳定斑块的形成及破裂,具有良好的心血管保护作用。

Bcl-2和Beclin-1在肝癌组织中的表达及其相关性

目的:探讨Bcl-2和Beclin-1在肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者术后复发中的作用,并分析肝癌组织中Bcl-2和Beclin-1的蛋白表达是否具有相关性。方法:收集肝癌组织114例,采用免疫组织化学法检测各组中Bcl-2蛋白和Beclin-1蛋白的表达情况。与患者临床资料进行统计学分析。结果:利用χ~2检验发现Bcl-2在HCC中的表达仅与患者的肿瘤个数程度相关,Beclin-1在HCC中的表达仅与患者的肿瘤分化程度相关,差异具有统计学意义。HCC中Bcl-2和Beclin-1蛋白的表达呈负相关(r=-0.61,P<0.000 1)。Bcl-2表达阳性影响患者的预后(Log-rank=8.892,P=0.002 9),Beclin-1表达阴性影响患者的预后(Log-rank=5.350,P=0.020 7)。多因素分析显示肿瘤的肝内复发与肝内肿瘤个数、Bcl-2表达有关。结论:Bcl-2和Beclin-1在肝癌中具有相关性,共同影响患者的预后。

槲皮素通过抑制TGF-β/TAK1/JNK和TGF-β/Smad2信号通路发挥抗肝纤维化的作用

目的探讨槲皮素抗肝纤维化的潜在作用机制。方法通过腹腔注射10 mg·kg^(-1)二甲基亚硝胺构建大鼠肝纤维化模型,于造模第3周开始灌胃槲皮素(12.5、25、50 mg·kg^(-1))治疗,造模第4周末处死;对肝组织进行HE和胶原染色,检测羟脯氨酸含量;检测肝功能指标和肝纤维化指标的变化;实时定量PCR检测肝星状细胞活化相关因子的表达水平;免疫组织化学法测定肝组织中TGF-β/TAK1/JNK和TGF-β/Smad2信号途径相关蛋白表达水平的变化。采用MTT法和Western blot法检测槲皮素对大鼠肝星状细胞系HSC-T6的增殖的影响以及对TGF-β1诱导的TAK1、JNK、Smad2蛋白磷酸化的抑制作用。结果与模型组相比,槲皮素25和50 mg·kg^(-1)组大鼠肝纤维化程度明显降低;槲皮素(20和40μmol·L^(-1))能显著抑制HSC-T6细胞的增殖,并能有效地降低TGF-β/TAK1/JNK和TGF-β/Smad2信号途径相关蛋白磷酸化程度。结论槲皮素可通过调节TGF-β/TAK1/JNK和TGF-β/Smad2信号通路影响肝星状细胞活化以发挥抗肝纤维化作用。

术前PC方案对肺癌基因Bcl-2和Beclin-1表达的影响及与患者预后的关系

目的:探讨Bcl-2和Beclin-1基因在Ⅲa期肺腺癌中的表达与术前PC化疗方案之间的关系及其对患者预后的影响。方法:通过免疫组化检测40例Ⅲa期肺腺癌患者Bcl-2和Beclin-1蛋白表达水平。利用real-time PCR法检测术前PC方案化疗对Bcl-2和Beclin-1基因表达水平影响。通过回归分析研究Bcl-2和Beclin-1基因表达水平与PC方案化疗对患者预后的影响。结果:Bcl-2和Beclin-1蛋白表达水平仅与肿瘤分化有关(P=0.027);Bcl-2和Beclin-1蛋白表达呈负相关(r=-0.48,P<0.001)。经过PC方案化疗后,Bcl-2表达水平下降,Beclin-1表达水平增高(P<0.05)。单因素分析显示患者DFS时间与区域淋巴结转移(P=0.025)、肿瘤分化(P<0.001)、Bcl-2表达水平(P<0.001)、Bcline-1表达水平(P=0.038)之间具有统计学意义。多因素分析表明DFS只与肿瘤的分化程度有关(P=0.013),而与Bcl-2和Bcline-1及淋巴结转移情况无关(P<0.05)。对于Ⅲa期N2型肺腺癌患者中的Bcl-2(+)Beclin-1(-)患者术前PC方案能显著影响Bcl-2的表达从而影响患者的DFS时间(P<0.05)。结论:利用新辅助PC方案术前化疗可以影响肺腺癌组织中Bcl-2和Beclin-1的表达水平,促进肿瘤细胞凋亡,影响患者DFS生存时间。

Beclin-1和Bcl-2表达与非小细胞肺癌患者病理特征及预后间关系的研究

目的:检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中Beclin-1和Bcl-2蛋白的表达,分析其与患者临床病理特征及预后间的关系,探讨Beclin-1和Bcl-2蛋白检测在NSCLC疾病发展及预后评估中的应用价值。方法:采用免疫组织化学(免疫组化)染色法检测120例经外科手术切除的NSCLC组织及配对癌旁组织中Beclin-1和Bcl-2蛋白的表达情况,分析其与患者疾病进展及预后间的关系。结果:Beclin-1蛋白在癌旁组织中的高表达率显著高于NSCLC组织(49.2%比31.7%,P<0.01);而Bcl-2蛋白在NSCLC组织中的高表达率显著高于癌旁组织(45.8%比21.7%,P<0.01)。Beclin-1蛋白的表达情况与NSCLC的分化程度、病理分期及淋巴结转移有关,NSCLC患者的肿瘤分化程度越差、病理分期越高及存在淋巴结转移,Beclin-1蛋白的表达量也越低(P<0.05);Bcl-2蛋白的表达量则与NSCLC的肿瘤分化程度及淋巴结转移有关,肿瘤分化程度越差或存在肿瘤淋巴结转移,则Bcl-2蛋白的表达量越高(P<0.05)。Beclin-1和Bcl-2蛋白的表达与患者年龄、性别、吸烟、术前血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)水平及肿瘤病理类型无关(P>0.05)。多因素Cox风险比例回归分析结果显示,NSCLC的肿瘤细胞分化越差、病理分期越高及Beclin-1蛋白表达量越低可作为NSCLC患者预后差的独立标志物(P分别为<0.05、<0.01、<0.01)。NSCLC组织Bcl-2蛋白高表达组中,Beclin-1蛋白高表达者较低表达患者有更好的5年术后总生存率,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:NSCLC患者肿瘤组织中自噬活性下降,Beclin-1蛋白低表达、Bcl-2蛋白高表达与NSCLC的发生及进展有关。高Beclin-1可作为Bcl-2蛋白高表达NSCLC患者的较好的独立预后标志物。

LncRNA Mirt2通过调控MKP-1/JNK通路保护心肌细胞避免缺氧复氧损伤

目的探讨LncRNA Mirt2在心肌细胞H9C2缺氧复氧损伤过程中的作用及其机制。方法检测LncRNA Mirt2在急性心肌损伤患者血液中的水平。建立H9C2心肌细胞缺氧复氧模型,检测LncRNA Mirt2在H9C2缺氧复氧模型中的表达。采用脂质体转染法将LncRNA Mirt2 mimics和阴性对照转染入H9C2细胞中,qRT-PCR验证转染效率。实验分为对照组、缺氧复氧组、过表达对照组和Mirt2过表达组。Western blot分析IL-1β和IL-6的蛋白表达;EILSA分析IL-1β和IL-6浓度变化;CCK-8分析细胞活力,Caspase-3相对活性检测,TUNEL染色分析细胞凋亡;Western blot分析核糖聚合酶(PARP)、剪切的核糖聚合酶(Cleaved PARP)、Caspase-3前体(Pro-Caspase-3)、Caspase-3剪切体(Cleaved Caspase-3)、丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)、c-Jun氨基末端激酶(t-JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK),t-c-Jun,磷酸化c-Jun蛋白(p-c-Jun)的蛋白表达。结果Mirt2在急性心肌损伤患者血液中表达下调,同时在H9C2缺氧2 h复氧12 h细胞中表达下调。在H9C2细胞缺氧复氧模型中:与对照组相比,Mirt2过表达组炎性因子IL-1β和IL-6的表达显著降低;CCK-8实验和凋亡实验检测结果表明,与过表达对照组相比,Mirt2过表达组细胞活力增强,凋亡数减少;Western blot结果表明,与过表达对照组相比,过表达Mirt2减少Cleaved PARP/Cleaved Caspase-3的表达,p-JNK、p-c-Jun的表达并增加了MKP-1的蛋白表达。结论Mirt2在缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞损伤过程中发挥保护作用,其作用机制可能是通过激活MKP-1/JNK通路。

白细胞介素-1通过JNK信号通路调控Schlafen2基因的表达

目的:在多效生长因子(Ptn)基因稳定沉默的小鼠胚胎成纤维细胞Ptn-siRNA B/MEF241中,研究白细胞介素-1(IL-1)调控Schlafen2(Slfn2)基因表达的机制。方法:应用Northernblot检测Ptn沉默细胞Ptn-siRNAB/MEF241处于不同生长密度时Slfn2基因的表达变化,以确定Ptn沉默细胞中Slfn2基因的表达是否受到某种分泌性细胞因子的调控;用不同浓度的IL-1α中和抗体及IL-1受体拮抗剂处理Ptn沉默细胞,通过Northern blot检测细胞内Slfn2表达的抑制情况;用不同浓度的IL-1α中和抗体及IL-1受体拮抗剂处理Ptn沉默细胞不同时间,通过Western blot检测细胞中JNK磷酸化水平;Northern blot检测SP600125(JNK/MAPK通路抑制剂)对Ptn沉默细胞中Slfn2基因表达的影响。结果:Ptn沉默细胞中Slfn2基因的表达水平同细胞密度相关;用中和抗体和受体拮抗剂阻断IL-1通路,Slfn2表达受到显著抑制;IL-1受到抑制会影响JNK通路的活化;阻断JNK通路,Slfn2的表达受到显著抑制。结论:IL-1可以通过JNK通路诱导Slfn2的表达。