青藤碱在JNK/c-Jun信号通路中对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响

目的:探究青藤碱(SIN)通过JNK/c-Jun信号通路对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响。方法:培养肺上皮细胞MLE-12,通过CCK-8检测SIN的毒性。流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光检测自噬体形成数量,Western blot检测细胞中凋亡、自噬以及JNK/c-Jun信号通路相关蛋白表达水平。结果:LPS造模后,细胞凋亡率和自噬体数量升高,Cleaved caspase-3、Bax和Beclin-1蛋白水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-JNK/JNK和p-c-Jun/c-Jun均升高(P<0.05);Bcl-2、P62蛋白水平均降低(P<0.05)。SIN处理可明显改善LPS对细胞凋亡和自噬的影响,以及对JNK/c-Jun信号通路的调控(P<0.05)。细胞自噬抑制剂3-MA或JNK激动剂ANISO处理均可部分逆转SIN对LPS诱导的肺上皮细胞的保护作用(P<0.05)。结论:SIN可通过调控JNK/c-Jun信号通路相关蛋白提高细胞自噬,保护被LPS损伤的肺上皮细胞。

叶酸通过JNK/p38 MAPK信号通路调节小鼠C2C12成肌细胞分化

目的:观察叶酸(folic acid,FA)对小鼠C2C12成肌细胞增殖和分化的影响并探讨其作用机制。方法:(1)在小鼠C2C12成肌细胞增殖阶段,采用不同浓度(0、2.5、5、10和20μmol/L)的FA处理C2C12细胞,显微镜下观察各组细胞的状态,MTT法检测细胞活力,EdU法检测细胞增殖情况。(2)在小鼠C2C12成肌细胞分化阶段,将细胞分为对照(control,Ctrl)组(0μmol/L FA)和FA组(10μmol/L FA),于分化的第2天和第4天,采用免疫荧光染色和Western blot检测成肌细胞分化相关蛋白成肌细胞决定蛋白1(myoblast determination protein 1,MyoD)、成肌蛋白(myogenin,MyoG)和肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHC)的表达水平,并统计各组细胞肌管形成情况。(3)在小鼠C2C12成肌细胞分化第4天时,加入FA处理0、1、3和6 h,采用Western blot检测各时点c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(phosphorylated JNK,p-JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK)蛋白水平。(4)将分化4 d的小鼠C2C12成肌细胞分为Ctrl组、FA组、SP600125(JNK特异性抑制剂)组、SB2035805(p38 MAPK特异性抑制剂)组、FA+SP600125组和FA+SB203580组。C2C12成肌细胞先接受10μmol/L的SP600125或SB203580处理1 h,再经10μmol/L的FA处理24 h,FA组经10μmol/L FA处理24 h,Ctrl组不作处理。采用Western blot检测p-JNK、JNK、p-p38 MAPK、p38 MAPK和MyHC蛋白水平。结果:(1)与0μmol/L FA组相比,其余各浓度组的细胞数量明显增多,细胞活力显著提高(P<0.05),EdU阳性细胞率均显著增加(P<0.05)。(2)与Ctrl组相比,FA组MyoD、MyoG和MyHC的表达水平均显著提高(P<0.05),肌管融合指数显著增加(P<0.05或P<0.01)。(3)与0 h组相比,FA处理1、3和6 h后p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值均显著升高(P<0.05或P<0.01),且随着处理时间的延长,p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值呈现逐渐升高的趋势。(4)与Ctrl组相比,FA组p-JNK、p-p38 MAPK和MyHC蛋白水平显著升高(P<0.01);与FA组相比,FA+SP600125组p-JNK和MyHC蛋白水平显著降低(P<0.05),FA+SB203580组p-p38 MAPK和MyHC蛋白水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:FA可以通过激活JNK/p38 MAPK信号通路促进小鼠C2C12成肌细胞分化。

广藿香酮通过JNK/c-Jun信号通路调控肺癌A549细胞凋亡及自噬

目的探讨广藿香酮对肺癌A549细胞增殖、凋亡、自噬和JNK/c-Jun信号通路的影响。方法采用0、10、20、40μmol/L广藿香酮处理肺癌A549细胞,将细胞随机分为4组:0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L广藿香酮处理组,同时将5μmol/L顺铂处理后的肺癌A549细胞作为阳性对照组。EdU染色检测细胞增殖;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;Western blotting检测LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin-1、p62、JNK、p-JNK、c-Jun和p-c-Jun蛋白表达。10μmol/L JNK抑制剂SP600125与40μmol/L广藿香酮共处理A549细胞2 h及24 h,检测细胞增殖、凋亡及相关蛋白表达。结果与广藿香酮0μmol/L组比较,广藿香酮20、40μmol/L组EdU阳性细胞数降低,细胞凋亡率升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin-1蛋白表达升高,p62蛋白表达降低,LC3+含量升高,p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun比值升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,SP600125组p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、细胞凋亡率及Beclin-1蛋白表达显著降低,EdU阳性细胞数、p62蛋白表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与SP600125组比较,广藿香酮40μmol/L+SP600125组p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、细胞凋亡率及Beclin-1蛋白表达显著升高,EdU阳性细胞数、p62蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论广藿香酮通过JNK/c-Jun信号通路抑制肺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡及自噬。

MicroRNA-21靶向PDCD4调控JNK/c-Jun信号通路促进胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探究MicroRNA-21 (miR-21)通过靶向PDCD4调控JNK/c-Jun信号通路对胶质瘤细胞的增殖和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR和Western blot分别检测胶质瘤及瘤旁组织标本、人脑正常胶质细胞HEB、胶质瘤细胞U251、U87中miR-21和PDCD4的表达水平;将miR-21 inhibitor、inhibitor-NC、miR-21 mimics组、miR-NC组、PDCD4 siRNA、siRNA-NC分别转染至U87细胞中,记为miR-21 inhibitor组、inhibitor NC组、PDCD4 siRNA组和siRNA-NC组;将inhibitor-NC与siRNA-NC共转染至U87细胞,记为inhibitor NC+siRNA NC组;将miR-21 inhibitor分别与siRNA NC组和DCD4 siRNA组共转染,记为miR-21 inhibitor+siRNA-NC组、miR-21 inhibitor+PDCD4 siRNA组。采用qRT-PCR检测转染后细胞miR-21和PDCD4的表达;CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-21与PDCD4的靶向关系;Western blotting检测细胞p-JNK1/2、JNK1/2、p-cJun和c-Jun的蛋白表达量。结果 与癌旁组织和人脑正常胶质细胞HEB比较,miR-21在胶质瘤组织和U251、U87细胞中表达量显著升高(P<0.05),PDCD4表达水平显著降低(P<0.05);与Control组和miR-NC组比较,miR-21 inhibitor组miR-21表达和细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05),p-ERK1/2和p-c-Jun蛋白水平显著降低(P<0.05);与Control组和si-NC组比较,PDCD4 siRNA组PDCD4表达显著下降、细胞增殖、迁移和侵袭能力显著升高(P<0.05),p-ERK和p-c-Jun蛋白水平显著升高(P<0.05)。双荧光素报告实验结果表明,miR-21可调控PDCD4表达。此外,与Control组和miR-21 inhibitor+siRNA NC组比较,miR-21 inhibitor+PDCD4 siRNA组细胞PDCD4表达显著升高,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增加(P <0.05),p-ERK1/2和p-c-Jun蛋白水平显著升高(P <0.05)。结论 在胶质瘤细胞中,MicroRNA-21通过靶向PDCD4调控JNK/c-Jun信号通路影响细胞增殖、迁移和侵袭能力。

EB病毒编码的BARF1基因通过JNK/c-Jun信号通路调节鼻咽癌细胞bcl-2的表达

目的:探讨EB病毒编码的BARF1基因对鼻咽癌细胞JNK/c-Jun信号通路活性及bcl-2表达的影响。方法:以p SG5空载体转染鼻咽癌细胞系CNE1(CNE1-SG)为对照,采用蛋白质印迹法检测稳定表达BARF1的CNE1细胞(CNE1-BARF1)中JNK/c-Jun通路的活性及BCL-2的表达;经JNK特异性抑制剂SP600125处理后,检测CNE1-BARF1细胞中JNK/c-Jun通路的活性及BCL-2的表达。结果:与CNE1-SG细胞相比,CNE1-BARF1细胞中cJun、BCL-2表达以及JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平明显增加(P<0.05)。经SP600125处理后,CNE1-BARF1细胞中c-Jun及BCL-2表达明显降低(P<0.05),c-Jun磷酸化水平也降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BARF1基因可能通过激活JNK/c-Jun信号通路上调原癌基因bcl-2的表达。

JNK/c-Jun信号通路在络气虚滞大鼠胸主动脉组织中的变化及通络干预的实验研究

目的:通过观察络气虚滞大鼠动脉组织中c-Jun氨基末端激酶(c-Jun-N-terrninal Kinase,JNK/ c-Jun)通路的变化及人参、双参、通心络的干预作用,以探讨络气虚滞形成的相关分子生物学基础。方法:健康雄性Wistar大鼠随机分为5组(对照组、络气虚滞组、人参组、双参组、通心络组),每组14只。免疫组织化学和激光共聚焦显微镜观察JNK、c-Jun、磷酸化c-Jun(phosphorylated c-Jun,P-c-Jun)在动脉组织中的表达及JNK、P-c-Jun在细胞内的定位;RT-PCR及Western blot方法检测JNK、c-Jun mRNA、c-Jun蛋白的磷酸化情况,同时检测动脉组织中一氧化碳(carbon monoxide,CO)含量的变化。结果:与对照组比较,络气虚滞组JNK和c-Jun mRNA表达显著降低,JNK和磷酸化c-Jun蛋白水平均降低;人参、双参、通心络可分别使JNK和c-Jun mRNA水平不同程度升高,且JNK蛋白和c-Jun蛋白磷酸化水平亦明显高于络气虚滞组。免疫组织化学和激光共聚焦显微镜观察结果显示,对照组大鼠动脉组织有微量的JNK和P-c-Jun阳性信号。与对照组比较,络气虚滞组JNK和c-Jun的表达明显减少,大鼠动脉组织细胞内JNK和P-c-Jun阳性信号减弱;人参组、双参组、通心络组均可见更为增强的JNK和P-c-Jun阳性信号,且在内皮细胞和平滑肌细胞表达明显,大部分JNK和P-c-Jun阳性信号位于同一细胞。结论:络气虚滞时可伴有JNK/c-Jun通路的活性降低、CO含量减少,人参、双参、通心络可不同程度改善该通路活性,提示人参、双参、通心络细胞保护作用的发挥可能与其改善JNK/c-Jun通路活性,增加CO释放有关,而且JNK激活后,主要通过磷酸化c-Jun发挥作用。

体外培养神经元内JNK/c-jun信号通路对nNOS表达的影响

目的:在中枢神经系统,损伤神经元内通常出现c-jun和nNOS基因的高表达,然而两者之间的关系还不清楚。本实验探讨PC12细胞JNK/c-jun信号通路对nNOS基因的调控作用。方法:体外培养分化的PC12细胞,免疫组化检测PC12细胞内JNK/c-jun,p-c-jun和nNOS的定位表达;应用SP600125抑制JNK/c-jun信号通路,MTT法检测不同浓度SP600125对分化的PC12细胞活力的影响,Western blot检测SP600125对JNK/c-jun,p-c-jun和nNOS基因表达的影响,验证c-jun和nNOS之间的关系。结果:全部分化的PC12的细胞核都表达c-jun基因,部分细胞表达p-c-jun,全部分化的PC12细胞均表达nNOS蛋白。与对照组相比,50μmol/L和100μmol/L的SP600125可明显降低细胞活力(P<0.05),50μmol/L的SP600125能有效抑制c-jun的磷酸化,即p-c-jun的表达(P<0.05),而对c-jun的表达无影响(P>0.05),同时引起nNOS蛋白表达的上调(P<0.05)。结论:c-jun,p-cjun和nNOS蛋白共表达于分化的PC12细胞中,SP600125有效抑制了c-jun的磷酸化激活,JNK/c-jun信号激活的抑制同时上调了nNOS的表达。这些结果表明在分化的PC12细胞内c-jun与nNOS之间的功能密切相关。

模拟微重力对猕猴肺组织JNK/c-Jun和c-Fos信号通路的影响

目的探讨模拟微重力对猕猴肺组织结构和JNK/c-Jun和c-Fos信号通路的影响。方法在特殊装置上采用猕猴头低位-10°模型模拟微重力,15只猕猴分为3组,每组5只:对照组(A组)、模拟微重力组(B组)、模拟微重力后恢复组(C组)。HE染色观察各组猕猴肺组织大体结构,Western blotting检测肺组织JNK、cJun、c-Fos及磷酸化表达水平。结果 HE显示,与A组相比,B组和C组猕猴肺组织可见肺泡间隔不同程度的增宽,部分肺泡融合,肺间质内可见炎细胞浸润。C组病理改变较B组稍减轻。Western blotting结果提示,与A组相比,B组和C组JNK、c-Fos和p-c-Fos及p-c-Jun表达增多。结论长期处于微重力状态可引起猕猴肺组织损伤,肺组织中JNK、c-Fos磷酸化和c-Jun磷酸化表达增加,微重力激活JNK/c-Jun和c-Fos信号通路调控其下游特定基因的表达可能是肺损害的机制之一。

锦灯笼对对乙酰氨基酚所致药物性肝损伤大鼠JNK/c-jun/c-fos信号通路的影响

目的:通过检测大鼠血清肝功能指标和肝组织磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、原癌基因(c-jun)、即早基因(c-fos)、高迁移率族蛋白1(HMGB1)蛋白的表达,观察锦灯笼对对乙酰氨基酚(APAP)所致药物性肝损伤(DILI)大鼠的干预作用及机制。方法:将50只wistar大鼠称重后随机分5组,正常组、模型组、阳性药(水飞蓟宾)对照组以及锦灯笼高、低剂量组。给予各用药组相应药液灌胃给药同时,正常组与模型组则灌饲蒸馏水,共计30 d。实验结束时,用生化分析仪检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性;用Western-Blot技术检测肝组织中p-JNK的蛋白表达情况;用免疫组化法观察c-jun、c-fos、HMGB1蛋白表达。结果:锦灯笼高、低2个剂量组皆能明显地降低模型大鼠的AST、ALT活性及DBIL、TBIL的含量(P<0.05,P<0.01),不同程度下调c-jun、c-fos、HMGB1、p-JNK蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:锦灯笼各剂量组对DILI大鼠有明显的保护作用,其作用机制可能与抑制c-fos、c-jun、HMGB1及p-JNK蛋白的表达有关,对APAP所致肝损伤起到保护作用。

温胆汤改良方对Alzheimer病细胞模型JNK、c-jun磷酸化水平的影响

目的:探讨温胆汤改良方含药血清对AD细胞模型JNK、c-jun磷酸化水平的影响。方法:经老化处理的Aβ25-35(终浓度为5μmol/L)与NG108-15细胞共同孵育24h建立AD细胞模型,运用中药血清药理学方法,以温胆汤改良方含药血清作用于AD细胞模型,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,SABC免疫组化法检测p-JNK、p-c-jun蛋白的表达。结果:温胆汤改良方能显著性降低NG108-15细胞JNK、c-jun的表达,降低细胞凋亡率。与模型组比较,抑制剂组和含药血清组JNK、c-jun的表达降低有显著性意义(P<0.05)。结论:温胆汤改良方保护由Aβ25-35引起的NG108-15细胞损伤作用,可能与其作用于JNK信号转导通路有着密切的关系。

Grx1抑制高糖诱导的H9c2细胞中Caspase-8/3和JNK/c-Jun凋亡通路的激活

谷氧还蛋白1(glutaredoxin 1,Grx1)作为一种重要的抗氧化剂,通过响应多种重要蛋白质的活动和功能调节细胞的关键过程.了解Grx1功能,对寻求糖尿病和心肌病等,以凋亡失调和氧化还原稳态改变为发病机制的疾病的新颖治疗策略至关重要.为研究Grx1对高糖诱导的大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及相关信号机制,本研究以高糖诱导大鼠心肌细胞H9c2建立高糖损伤模型,采用免疫印迹实验检测caspase-3、8、9蛋白活性片段的表达和凋亡信号蛋白JNK/c-Jun的磷酸化水平.结果显示,与正常对照组相比,高糖组caspase家族中,剪切的caspase-3、caspase-8、caspase-9相对含量均显著增多,JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平均显著上调.但给予外源性Grx1保护后,剪切的caspase-3和caspase-8相对含量均显著降低,JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平均显著下调.上述结果表明,高糖通过介导caspase-8/3和caspase-9/3凋亡通路,并激活凋亡相关信号通路JNK/c-Jun诱导H9c2心肌细胞凋亡.给予外源性Grx1保护后,可通过抑制caspase-8/3凋亡通路和JNK/c-Jun信号通路的激活,拮抗高糖诱导的心肌细胞凋亡.

c-Jun氨基末端激酶信号通路在大鼠脑缺血再灌注过程中的作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在大鼠脑缺血再灌注过程中所发挥的作用。方法雄性SD大鼠108只,体重290-310 g,随机分成假手术组(SH组)、缺血再灌注组(IR组)和JNK抑制剂SP600125组(SP组),分别于缺血前30 min侧脑室注射10 mL/L二甲基亚砜(DMSO)1、0 mL/L DMSO及JNK抑制剂SP600125。每组再根据再灌注时间分为2、6、12、24、487、2 h 6个亚组,每亚组6只动物。采用4-VO法建立SD大鼠全脑缺血模型,在预定时间点行灌注、固定、取脑、石蜡包埋切片;免疫组化方法检测p-JNK的表达变化,光镜下计数海马CA1区存活细胞,TUNEL法检测CA1区凋亡细胞。结果脑缺血再灌注后海马CA1区p-JNK在IR组有明显表达,于再灌注2 h时即明显升高,6 h时略有降低,后逐渐上升,24 h到高峰,之后表达量减小。SP组p-JNK的表达则无明显增高,各时点与IR组比较均有显著性差异(P<0.01)。海马CA1区神经元存活数目SP组明显高于IR组(P<0.01),凋亡指数显著低于IR组(P<0.01)。结论在大鼠全脑缺血再灌注损伤过程中,JNK信号通路发挥了重要作用,抑制JNK通路的激活可对脑缺血再灌注损伤导致的细胞损伤起到保护作用。

前列地尔对局灶性脑缺血大鼠p-JNK及p-c-Jun表达的影响

目的探讨前列地尔对局灶性脑缺血大鼠大脑皮层磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和磷酸化c-Jun(p-c-Jun)表达的影响。方法将30只健康大鼠随机分为假手术组(A组)、缺血对照组(B组)、前列地尔治疗组(C组)、阳性药物对照组(D组),其中C组又分为1.25、2.50、5.00μg/kg三个亚组,每组5只。采用大脑中动脉闭塞法制作局灶性脑缺血模型,大鼠清醒后行神经功能缺损评分;应用免疫组化法检测其大脑皮层缺血6 h后的p-JNK、p-c-Jun表达。结果 C、D组神经功能缺损评分明显低于B组(P均<0.05)。A组大脑皮层偶见p-JNK、p-c-Jun阳性细胞,B组可见大量阳性细胞;与B组比较,C组各亚组p-JNK、p-c-Jun阳性细胞数明显降低(P均<0.05)。结论前列地尔预处理对大鼠局灶性脑缺血有保护作用,其机制可能与抑制脑组织p-JNK、p-c-Jun表达有关。

JNK信号通路介导化学性缺氧对PC12细胞的损伤作用

目的探讨C-Jun蛋白氨基末端激酶(C-Jun N-termi-nal kinase,JNK)通路在化学性缺氧模拟剂氯化钴(CoCl2)对PC12细胞损伤中的作用。方法应用化学性低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞以建立化学性缺氧损伤模型。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Hoechst33258核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;JC-1染色荧光显微镜照像检测线粒体膜电位(MMP);Western blot法检测JNK蛋白的表达水平。结果 600μmol.L-1CoCl2作用PC12细胞不同时间(12～48 h)后,可时间依赖性地抑制PC12细胞的存活率;600μmol.L-1的CoCl2处理PC12细胞48 h时,可引起细胞出现核固缩等典型的凋亡特征;CoCl2能明显的降低PC12细胞的MMP;CoCl2能诱导JNK的磷酸化,特异性的JNK阻断剂SP600125可抑制CoCl2对PC12细胞的上述损伤作用。结论 CoCl2可引起PC12细胞损伤,此作用可能与其诱导JNK磷酸化有关。

ABT737通过激活JNK/c-Jun通路上调Bim诱导宫颈癌细胞凋亡

【目的】探讨JNK/c-Jun信号通路激活Bim在ABT737诱导宫颈癌细胞凋亡中的作用。【方法】用MTT法检测ABT-737对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用;用流式细胞术检测细胞凋亡率;用Western blot方法检测JNK、phospho-JNK、c-Jun、phospho-c-Jun以及Bim蛋白的表达;用RT-PCR检测Bim在mRNA水平的变化;用JNK特异性抑制剂SP600125和siRNA瞬时转染抑制JNK及c-Jun的活性。【结果】ABT-737能抑制Hela细胞的生长,诱导HeLa细胞发生凋亡。ABT737可激活JNK激酶活性其下游靶分子c-Jun,凋亡相关基因Bim在mRNA水平和蛋白水平的表达也随之上调。应用JNK特异性抑制剂SP600125和靶向JNK及c-Jun的siRNA抑制JNK或c-Jun的活性或表达后,ABT737诱导的Bim上调及细胞凋亡亦被有效阻断。【结论】ABT737通过JNK/c-Jun信号通路上调凋亡相关基因Bim的表达,诱导HeLa细胞发生凋亡。

槐定碱对小鼠巨噬细胞TLR4及JNK/c-jun mRNA表达的影响

目的观察槐定碱预处理对LPS刺激RAW 264.7巨噬细胞表达TLR4、JNK和c-jun mRNA及分泌TNF-α的影响,探讨槐定碱抗内毒素机制。方法培养RAW 264.7巨噬细胞,实验分为4组:空白对照组、槐定碱对照组、LPS组、槐定碱预处理组,用RT-PCR技术检测RAW 264.7细胞TLR4、JNK和c-jun的mR-NA表达量,放免法检测细胞培养液TNF-α分泌量。结果槐定碱对RAW 264.7巨噬细胞TLR4、JNK、c-jun的mRNA及细胞培养液中TNF-α基础表达无影响,但对经LPS激活的巨噬细胞的TLR4、JNK mRNA表达有显著抑制作用(均P<0.01),c-jun mRNA表达亦降低,但与LPS模型组比较差异尚无统计学意义。槐定碱预处理组细胞液中TNF-α含量显著低于LPS模型组(P<0.01)。结论槐定碱抗内毒素机制与其抑制LPS引起的TLR4、JNK的mRNA高表达,并减少TNF-α分泌有关。

C-Jun氨基末端激酶信号通路在急性一氧化碳中毒迟发性脑病中的作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinas,JNK)信号通路在急性一氧化碳中毒迟发性脑病中的作用。方法 120只雄性SD大鼠随机分成空白对照组(BC组)、急性一氧化碳中毒迟发性脑病组(CO组)和JNK抑制剂SP600125组(SP组)3组,每组40只,采用静态吸入式染毒法复制急性一氧化碳中毒迟发性脑病大鼠模型,选取染毒后1、3、7、14、28 d为时相点,应用Morris水迷宫试验检测平均潜伏期等学习记忆能力,免疫组化法检测海马区p-JNK表达,Tunel法检测海马区锥体细胞凋亡。结果 CO组大鼠平均潜伏期较BC组明显延长(P<0.01),SP组较CO组明显缩短(P<0.01),但仍比BC组延长(P<0.01);p-JNK在CO组大鼠海马区表达较BC组明显增强(P<0.01),SP组较CO组表达明显减弱(P<0.01),较BC组明显增强(P<0.01);CO组海马区锥体细胞第3天已经有凋亡增多(9.94%±1.22%),第7和14天增多最明显(39.77%±1.91%,29.72%±4.89%),第28天仍然增多(5.88%±0.55%),凋亡指数与BC组相比有明显增高(P<0.01),而SP组凋亡指数与CO组相比明显降低(P<0.01)。结论 JNK信号通路参与了急性一氧化碳中毒迟发性脑病的发生,应用其特异性抑制剂SP600125阻断其转导可减少海马区神经元的凋亡,减轻急性CO中毒对学习记忆能力的损害。

瑞香素抑制c-Jun氨基末端激酶/核因子κB(JNK/NF-κB)通路减轻大鼠心肌缺血损伤

目的研究瑞香素(DAP)对于心肌缺血损伤大鼠的保护作用及其作用机制。方法将75只SD大鼠随机分为空白组、模型组、(30、60、90)mg/kg DAP处理组。模型的建立则是采用皮下注射85 mg/kg异丙基肾上腺素(ISO)连续2 d建立大鼠心肌缺血模型,持续灌胃给予相应剂量DAP处理7 d,观察DAP对心肌损伤的保护作用。采用大鼠心电图测量装置测定各组实验大鼠的心电图变化,采用分光光度法测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)酶活性和丙二醛(MDA)含量,ELISA检测血清肌肉B型肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CPK)水平以及心肌组织匀浆白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的变化;采用HE染色以及Masson染色观察心肌细胞的损伤及纤维化情况,实时定量PCR检测心肌组织c-Jun氨基末端激酶(JNK)和核因子κB(NF-κB)的mRNA水平,Western blot法检测JNK、NF-κB的磷酸化情况。结果DAP能增加心肌组织SOD、CAT、GSH-Px酶活性,降低MDA,并能降低血清组织中CK-MB、LDH、CPK、TNF-α和IL-1β水平,减少心肌细胞纤维化,抑制JNK和NF-κBp65的表达和磷酸化。结论DAP通过抑制JNK/NF-κB信号通路活化,抑制心肌缺血诱发的心肌细胞凋亡和纤维化。

p,p'-DDE,β-BHC单独及其联合对睾丸Sertoli细胞JNK MAPK信号转导通路机制的研究

目的:研究2,2-双-(对氯苯基)-1,1-二氯乙烯(p,p'-DDE)和β-六氯化苯(β-BHC)单独作用及联合作用对离体培养大鼠睾丸Sertoli细胞c-jun氨基末端激酶(JNK)丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的作用机制。方法:从大鼠睾丸组织中分离Sertoli细胞进行离体原代培养2d,设溶剂(DMSO)为对照组,分别以终浓度为10、30、50μmol/L的p,p'-DDE,β-BHC及二者联合染毒Sertoli细胞24h,采用二步RT-PCR法检测Sertoli细胞JNK、c-junmRNA的表达水平。结果:①染毒24h后,对照组及10、30、50μmol/Lp,p'-DDE组Sertoli细胞JNKmRNA灰度比值分别为0.068±0.001、0.164±0.002、0.207±0.006、0.499±0.017;c-junmRNA灰度比值分别为0.122±0.002、0.157±0.006、0.218±0.007、0.289±0.004,随着p,p'-DDE剂量的增加,JNK、c-junmRNA的表达水平均逐渐升高,且10、30、50μmol/L组与对照组差异存在显著性(P<0.05)。β-BHC及联合染毒各组随着染毒剂量的增大,Sertoli细胞JNK、c-junmRNA表达水平也显著增加,且呈剂量依赖性关系(P<0.05)。②p,p'-DDE、β-BHC二者联合作用与单独作用相比,10μmol/L的p,p'-DDE,β-BHC及二者联合染毒组,JNKmRNA灰度比值分别为0.164±0.002、0.149±0.003、0.178±0.004;c-junmRNA灰度比值分别为0.157±0.006、0.131±0.004、0.172±0.002,联合染毒组JNK、c-junmRNA灰度比值均显著高于两者单独作用且存在显著性差异(JNK:P<0.05;c-jun:P<0.01);30、50μmol/L染毒剂量组JNK、c-junmRNA表达水平联合染毒组也显著高于单独染毒组(JNK:P<0.05,c-jun:P<0.01),而各DMSO对照组之间mRNA表达水平无显著性差异(P>0.05)。结论:p,p'-DDE、β-BHC及二者联合作用于睾丸Sertoli细胞后,JNK及其下游的c-jun基因转录水平均明显升高,且联合作用比单独作用更加明显。

p-JNK/p-c-Jun通路参与大鼠杏仁核点燃癫痫模型

目的:研究杏仁核点燃癫痫模型中c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路的活化。方法:雄性Wistar大鼠20只,随机分为对照组10只和模型组10只。将电极植入大鼠右侧杏仁核,对照组不给予电刺激,模型组每天给予500μA的电流刺激,大鼠连续10 d在刺激后达到5级发作视为点燃成功。成功点燃的大鼠,在最后1次5级发作后2 h处死。Western blot检测2组海马JNK、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun的表达。结果:模型组刺激侧海马p-JNK、p-c-Jun表达明显高于对照组(P<0.05)。结论:p-JNK/p-c-Jun通路可能参与杏仁核癫痫模型点燃。