青藤碱在JNK/c-Jun信号通路中对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响

目的:探究青藤碱(SIN)通过JNK/c-Jun信号通路对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响。方法:培养肺上皮细胞MLE-12,通过CCK-8检测SIN的毒性。流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光检测自噬体形成数量,Western blot检测细胞中凋亡、自噬以及JNK/c-Jun信号通路相关蛋白表达水平。结果:LPS造模后,细胞凋亡率和自噬体数量升高,Cleaved caspase-3、Bax和Beclin-1蛋白水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-JNK/JNK和p-c-Jun/c-Jun均升高(P<0.05);Bcl-2、P62蛋白水平均降低(P<0.05)。SIN处理可明显改善LPS对细胞凋亡和自噬的影响,以及对JNK/c-Jun信号通路的调控(P<0.05)。细胞自噬抑制剂3-MA或JNK激动剂ANISO处理均可部分逆转SIN对LPS诱导的肺上皮细胞的保护作用(P<0.05)。结论:SIN可通过调控JNK/c-Jun信号通路相关蛋白提高细胞自噬,保护被LPS损伤的肺上皮细胞。

JNK/c-Jun信号通路在肾脏疾病发生发展中的调控作用

JNK是MAPK超家族成员之一,c-Jun是JNK的主要下游因子,是一种受JNK调控的即早基因。JNK和c-Jun是创伤、应激、细胞凋亡相关的调节因子,参与调控多种疾病的发生发展过程。近年来,研究发现,JNK/c-Jun信号通路在IgA肾病、抗GBM肾小球肾炎、肾纤维化、急性肾损伤等多种肾脏疾病中表现为异常活化,调控着相关肾脏疾病的发生和发展过程。本文就JNK/c-Jun信号通路在肾脏疾病发生发展过程中的调控作用作简要综述。JNK is one of the members of the MAPK superfamily, and c-Jun is the main downstream factor of JNK, which is an early gene regulated by JNK. JNK and c-Jun are regulators related to trauma, stress and apoptosis, and are involved in regulating the occurrence and development of a variety of diseases. In recent years, studies have found that the JNK/c-Jun signaling pathway is abnormally activated in a variety of kidney diseases, such as IgA nephropathy, anti-GBM glomerulonephritis, renal fibrosis, and acute kidney injury, which regulates the occurrence and development of related kidney diseases. This article briefly reviews the regulatory role of JNK/c-Jun signaling pathway in the occurrence and development of kidney diseases.

广藿香酮通过JNK/c-Jun信号通路调控肺癌A549细胞凋亡及自噬

目的探讨广藿香酮对肺癌A549细胞增殖、凋亡、自噬和JNK/c-Jun信号通路的影响。方法采用0、10、20、40μmol/L广藿香酮处理肺癌A549细胞,将细胞随机分为4组:0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L广藿香酮处理组,同时将5μmol/L顺铂处理后的肺癌A549细胞作为阳性对照组。EdU染色检测细胞增殖;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;Western blotting检测LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin-1、p62、JNK、p-JNK、c-Jun和p-c-Jun蛋白表达。10μmol/L JNK抑制剂SP600125与40μmol/L广藿香酮共处理A549细胞2 h及24 h,检测细胞增殖、凋亡及相关蛋白表达。结果与广藿香酮0μmol/L组比较,广藿香酮20、40μmol/L组EdU阳性细胞数降低,细胞凋亡率升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin-1蛋白表达升高,p62蛋白表达降低,LC3+含量升高,p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun比值升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,SP600125组p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、细胞凋亡率及Beclin-1蛋白表达显著降低,EdU阳性细胞数、p62蛋白表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与SP600125组比较,广藿香酮40μmol/L+SP600125组p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、细胞凋亡率及Beclin-1蛋白表达显著升高,EdU阳性细胞数、p62蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论广藿香酮通过JNK/c-Jun信号通路抑制肺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡及自噬。

MicroRNA-21靶向PDCD4调控JNK/c-Jun信号通路促进胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探究MicroRNA-21 (miR-21)通过靶向PDCD4调控JNK/c-Jun信号通路对胶质瘤细胞的增殖和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR和Western blot分别检测胶质瘤及瘤旁组织标本、人脑正常胶质细胞HEB、胶质瘤细胞U251、U87中miR-21和PDCD4的表达水平;将miR-21 inhibitor、inhibitor-NC、miR-21 mimics组、miR-NC组、PDCD4 siRNA、siRNA-NC分别转染至U87细胞中,记为miR-21 inhibitor组、inhibitor NC组、PDCD4 siRNA组和siRNA-NC组;将inhibitor-NC与siRNA-NC共转染至U87细胞,记为inhibitor NC+siRNA NC组;将miR-21 inhibitor分别与siRNA NC组和DCD4 siRNA组共转染,记为miR-21 inhibitor+siRNA-NC组、miR-21 inhibitor+PDCD4 siRNA组。采用qRT-PCR检测转染后细胞miR-21和PDCD4的表达;CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-21与PDCD4的靶向关系;Western blotting检测细胞p-JNK1/2、JNK1/2、p-cJun和c-Jun的蛋白表达量。结果 与癌旁组织和人脑正常胶质细胞HEB比较,miR-21在胶质瘤组织和U251、U87细胞中表达量显著升高(P<0.05),PDCD4表达水平显著降低(P<0.05);与Control组和miR-NC组比较,miR-21 inhibitor组miR-21表达和细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05),p-ERK1/2和p-c-Jun蛋白水平显著降低(P<0.05);与Control组和si-NC组比较,PDCD4 siRNA组PDCD4表达显著下降、细胞增殖、迁移和侵袭能力显著升高(P<0.05),p-ERK和p-c-Jun蛋白水平显著升高(P<0.05)。双荧光素报告实验结果表明,miR-21可调控PDCD4表达。此外,与Control组和miR-21 inhibitor+siRNA NC组比较,miR-21 inhibitor+PDCD4 siRNA组细胞PDCD4表达显著升高,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增加(P <0.05),p-ERK1/2和p-c-Jun蛋白水平显著升高(P <0.05)。结论 在胶质瘤细胞中,MicroRNA-21通过靶向PDCD4调控JNK/c-Jun信号通路影响细胞增殖、迁移和侵袭能力。

基于JNK/c-Jun信号通路探讨孟鲁司特钠抑制小鼠腹主动脉瘤形成的机制

目的探讨孟鲁司特钠通过c-Jun氨基端激酶(JNK)/c-Jun信号通路抑制血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠腹主动脉瘤(AAA)形成的机制。方法将120只8~10周龄雄性ApoE-/-小鼠随机分为四组,每组30只,皮下埋植AngⅡ缓释泵1000 ng/(min·kg)构建动物AAA模型,阳性组和实验组分别每天给予50 mg/kg硼替佐米和孟鲁司特钠灌胃,灌胃剂量2 ml,假手术组和模型组给予等体积的生理盐水灌胃,连续用药4 w。停药后空腹采血检查血浆总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)含量,手术取材测量统计腹主动脉最大直径及AAA发生率,苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉组织病变,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检小鼠血清中炎症因子白细胞介素(IL)-1、IL-4、IL-6、IL-10的水平,TUNEL法观察主动脉细胞凋亡,Western印迹检测p-JNK、p-c-Jun、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关x蛋白(Bax)蛋白的表达。结果模型组小鼠主动脉壁增厚、多见内膜斑块、外膜增厚、内膜多见出血点且有炎症浸出;假手术组动脉壁细胞排列整齐、细胞结构清晰,未见急性出血点和斑块,管壁较薄;阳性组、实验组小鼠管壁可见较少的胶原沉积,管壁细胞完整的且排列有序,外膜明显比模型组薄且少见炎症反应。与假手术组相比,模型组TC、TG、LDL、主动脉最大直径及AAA发生率、IL-1、IL-4、IL-6、IL-10、AI数值、p-JNK及p-c-Jun的水平明显升高(P<0.05),HDL、Bcl-2/Bax明显降低(P<0.05);与模型组相比,阳性组和实验组TC、TG、LDL、主动脉最大直径及AAA发生率、IL-1、IL-4、IL-6、IL-10、AI数值、p-JNK及p-c-Jun的水平明显降低(P<0.05);HDL、Bcl-2/Bax明显升高(P<0.05);阳性组与实验组相比,上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论孟鲁司特钠可以保护AngⅡ诱导的ApoE基因敲除小鼠AAA的形成,其机制可能是通过JNK/c-Jun信号通路来完成。

EB病毒编码的BARF1基因通过JNK/c-Jun信号通路调节鼻咽癌细胞bcl-2的表达

目的:探讨EB病毒编码的BARF1基因对鼻咽癌细胞JNK/c-Jun信号通路活性及bcl-2表达的影响。方法:以p SG5空载体转染鼻咽癌细胞系CNE1(CNE1-SG)为对照,采用蛋白质印迹法检测稳定表达BARF1的CNE1细胞(CNE1-BARF1)中JNK/c-Jun通路的活性及BCL-2的表达;经JNK特异性抑制剂SP600125处理后,检测CNE1-BARF1细胞中JNK/c-Jun通路的活性及BCL-2的表达。结果:与CNE1-SG细胞相比,CNE1-BARF1细胞中cJun、BCL-2表达以及JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平明显增加(P<0.05)。经SP600125处理后,CNE1-BARF1细胞中c-Jun及BCL-2表达明显降低(P<0.05),c-Jun磷酸化水平也降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BARF1基因可能通过激活JNK/c-Jun信号通路上调原癌基因bcl-2的表达。

神经酰胺通过JNK/c-Jun信号通路诱导胶质瘤细胞自噬性死亡

目的探讨神经酰胺对胶质瘤细胞87-MG和U251自噬性死亡的作用及机制。方法采用MTT和流式细胞的方法检测不同浓度神经酰胺刺激87-MG和U251细胞后细胞存活和凋亡的改变;电镜和Western blotting技术检测自噬和JNK/c-Jun信号通路的改变,JNK药理性抑制剂SP600125特异性抑制JNK通路,观察其对神经酰胺诱导自噬死亡的影响。结果神经酰胺刺激24 h后,87-MG和U251存活呈现时间依赖性下降(P<0.05);相应的细胞死亡数目剂量依赖性升高(P<0.05),但凋亡性死亡比例较低;神经酰胺刺激后镜下观察到的自噬小体计数,LC3B/LC3A和Beclin-1的表达以及JNK/c-Jun的磷酸化程度都增加(P<0.05)。提前给予SP600125抑制JNK信号通路的活性后,可以阻断神经酰胺诱导的细胞自噬性死亡(P<0.05)。结论神经酰胺可诱导胶质瘤细胞87-MG和U251出现自噬性死亡,机制可能与JNK信号通路的活化有关。

JNK/c-Jun信号通路对非酒精性脂肪性肝炎脂性凋亡的影响

非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是非酒精性脂肪性肝病的一个重要病理阶段,其可以发展为肝硬化,甚至肝细胞癌,对疾病的进展起决定性作用。对NASH发生、发展机制的研究普遍接受"二次打击"学说。其中,肝细胞脂毒性凋亡是NASH的一个重要病理组织学特征。c-Jun氨基端激酶(JNK)是丝裂原活化蛋白激酶家族的成员。JNK/应激活化蛋白激酶应激信号通路与NASH的发病机制密切相关,在NASH中多种应激刺激都能激活肝脏内的JNK信号通路,诱导细胞凋亡。

体外培养神经元内JNK/c-jun信号通路对nNOS表达的影响

目的:在中枢神经系统,损伤神经元内通常出现c-jun和nNOS基因的高表达,然而两者之间的关系还不清楚。本实验探讨PC12细胞JNK/c-jun信号通路对nNOS基因的调控作用。方法:体外培养分化的PC12细胞,免疫组化检测PC12细胞内JNK/c-jun,p-c-jun和nNOS的定位表达;应用SP600125抑制JNK/c-jun信号通路,MTT法检测不同浓度SP600125对分化的PC12细胞活力的影响,Western blot检测SP600125对JNK/c-jun,p-c-jun和nNOS基因表达的影响,验证c-jun和nNOS之间的关系。结果:全部分化的PC12的细胞核都表达c-jun基因,部分细胞表达p-c-jun,全部分化的PC12细胞均表达nNOS蛋白。与对照组相比,50μmol/L和100μmol/L的SP600125可明显降低细胞活力(P<0.05),50μmol/L的SP600125能有效抑制c-jun的磷酸化,即p-c-jun的表达(P<0.05),而对c-jun的表达无影响(P>0.05),同时引起nNOS蛋白表达的上调(P<0.05)。结论:c-jun,p-cjun和nNOS蛋白共表达于分化的PC12细胞中,SP600125有效抑制了c-jun的磷酸化激活,JNK/c-jun信号激活的抑制同时上调了nNOS的表达。这些结果表明在分化的PC12细胞内c-jun与nNOS之间的功能密切相关。

JNK/c-Jun信号通路在络气虚滞大鼠胸主动脉组织中的变化及通络干预的实验研究

目的:通过观察络气虚滞大鼠动脉组织中c-Jun氨基末端激酶(c-Jun-N-terrninal Kinase,JNK/ c-Jun)通路的变化及人参、双参、通心络的干预作用,以探讨络气虚滞形成的相关分子生物学基础。方法:健康雄性Wistar大鼠随机分为5组(对照组、络气虚滞组、人参组、双参组、通心络组),每组14只。免疫组织化学和激光共聚焦显微镜观察JNK、c-Jun、磷酸化c-Jun(phosphorylated c-Jun,P-c-Jun)在动脉组织中的表达及JNK、P-c-Jun在细胞内的定位;RT-PCR及Western blot方法检测JNK、c-Jun mRNA、c-Jun蛋白的磷酸化情况,同时检测动脉组织中一氧化碳(carbon monoxide,CO)含量的变化。结果:与对照组比较,络气虚滞组JNK和c-Jun mRNA表达显著降低,JNK和磷酸化c-Jun蛋白水平均降低;人参、双参、通心络可分别使JNK和c-Jun mRNA水平不同程度升高,且JNK蛋白和c-Jun蛋白磷酸化水平亦明显高于络气虚滞组。免疫组织化学和激光共聚焦显微镜观察结果显示,对照组大鼠动脉组织有微量的JNK和P-c-Jun阳性信号。与对照组比较,络气虚滞组JNK和c-Jun的表达明显减少,大鼠动脉组织细胞内JNK和P-c-Jun阳性信号减弱;人参组、双参组、通心络组均可见更为增强的JNK和P-c-Jun阳性信号,且在内皮细胞和平滑肌细胞表达明显,大部分JNK和P-c-Jun阳性信号位于同一细胞。结论:络气虚滞时可伴有JNK/c-Jun通路的活性降低、CO含量减少,人参、双参、通心络可不同程度改善该通路活性,提示人参、双参、通心络细胞保护作用的发挥可能与其改善JNK/c-Jun通路活性,增加CO释放有关,而且JNK激活后,主要通过磷酸化c-Jun发挥作用。

内质网应激介导的JNK/c-Jun信号通路在雷公藤内酯醇诱导小鼠体内黑色素瘤A375细胞凋亡中的作用研究

目的探讨雷公藤内酯醇(TP)通过内质网应激介导的JNK/c-Jun信号通路诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的相关机制。方法裸鼠背部皮下注射接种黑色素瘤A375细胞, 建立黑色素瘤动物模型。肿瘤形成3周后, 将裸鼠随机分为0(对照组)、0.1、0.2、0.4 mg/kg浓度TP组, 每组4只, 每周注射相应浓度药物2次, 3周后摘除肿瘤, 测量瘤体大小及重量。用TUNEL法检测肿瘤组织的凋亡水平。采用qPCR检测肿瘤组织肌醇酶1(IRE-1)、c-Jun氨基酸末端激酶(JNK)、c-Jun的mRNA水平, 采用Western印迹检测IRE-1、JNK、c-Jun及磷酸化JNK、c-Jun(p-JNK、p-c-Jun)蛋白水平。多组间比较采用单因素方差分析, 采用Dunnett''s检验进行多重比较。结果对照组和0.1、0.2、0.4 mg/kg TP组肿瘤质量、体积及抑瘤率差异均有统计学意义(均P < 0.05), 各药物组肿瘤质量、体积均低于对照组(均P < 0.05), 抑瘤率均高于对照组(均P < 0.05)。对照组和0.1、0.2、0.4 mg/kg TP组肿瘤凋亡指数(7.67% ± 1.15%、9.67% ± 3.21%、62.00% ± 6.08%、85.67% ± 5.51)差异有统计学意义(F = 305.91, P < 0.001), 0.2、0.4 mg/kg TP组肿瘤凋亡指数高于对照组(t = 17.56、27.72, 均P < 0.05)。qPCR和Western印迹显示, 对照组、0.1 ~ 0.4 mg/kg TP组肿瘤IRE1、JNK、c-Jun mRNA水平差异均有统计学意义(F = 112.23、27.51、112.37, 均P < 0.05), IRE1、JNK、c-Jun、p-JNK、p-c-Jun相对表达水平差异均有统计学意义(均P < 0.05), 0.4 mg/kg TP组IRE1、JNK、c-Jun mRNA及蛋白(包括p-JNK、p-c-Jun)表达均高于对照组(均P < 0.05)。肿瘤组织中IRE1、JNK、c-Jun mRNA和蛋白表达水平均随药物作用浓度增加有升高趋势, p-JNK和p-c-Jun蛋白表达水平变化也呈相同的趋势。结论 TP可以激活内质网应激介导的JNK/c-jun信号通路并诱导黑色素瘤A375细胞凋亡。

氯氰菊酯通过JNK/c-Jun信号通路诱导肝脏氧化性DNA损伤

目的明确氯氰菊酯(cypermethrin,CYP)的肝脏损伤效应,探讨促分裂素丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)信号通路的潜在作用。方法选取24只青春期雄性SD大鼠,使用不同剂量β-CYP(0、5、10和20 mg/kg)连续灌胃染毒31 d。苏木素-伊红染色和透射电镜分析肝脏组织形态学和超微结构变化;酶联免疫吸附法检测丙二醛(malonaldehyde,MDA)和8-羟脱氧鸟苷(8-hydroxylated deoxyguanosine,8-OHdG)水平;免疫组织化学分析磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phospho-c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)表达;免疫荧光分析磷酸化组蛋白H2A.X(phospho-histone H2A.X,γ-H2A.X)表达;实时荧光定量PCR检测谷胱甘肽过氧化物酶(glutathion peroxidase,GPx)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)以及过氧化氢酶(catalase,CAT)基因水平;蛋白质印迹法检测GPx1、SOD2、CAT、γ-H2A.X及MAPK信号通路相关蛋白表达。结果CYP染毒可致大鼠肝脏形态学和超微结构发生异常改变,肝窦扩张、肝板间隙形成、线粒体嵴断裂等。肝脏中抗氧化酶GPx1、GPx4、SOD1和SOD2基因表达水平降低,同时GPx1和SOD2蛋白表达受抑。与对照组相比,β-CYP高剂量染毒组GPx1和SOD2蛋白表达水平分别降低了57.9%和50.0%(P<0.05),高剂量组脂质过氧化产物MDA水平升高了56.2%(P<0.05)。肝脏MAPK信号通路中的JNK/c-Jun信号通路被激活,JNK和c-Jun蛋白磷酸化水平增强,与对照组相比,β-CYP高剂量染毒组p-JNK和p-c-Jun蛋白表达水平分别升高了47.7%和46.5%(P<0.05),但细胞外信号调节激酶和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK,p38)信号通路不受影响。肝脏中8-OHdG水平和γ-H2A.X蛋白表达水平上升,与对照组相比,β-CYP中、高剂量染毒组γ-H2A.X蛋白表达水平分别升高了16.9%、33.9%(P<0.05)。结论氯氰菊酯具有肝脏损伤效应,能直接引起大鼠肝脏形态学与超微结构的异常改变,还能促使肝脏氧化应激,并通过激活JNK/c-Jun信号通路诱导肝细胞氧化性DNA损伤。

基于JNK-p62/SQSTM1信号通路探讨糖肾煎对2型糖尿病肾病大鼠足细胞的保护作用

目的 基于c-Jun氨基末端激酶(JNK)-p62/螯合体(SQSTM1)信号通路探讨糖肾煎对2型糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞的保护作用。方法 SD大鼠随机分成正常组、DN组、糖肾煎低、中、高[生药5、10、20 g/(kg·d)]剂量组(糖肾煎-L、M、H组)、二甲双胍组[100 mg/(kg·d)]。除正常组外,其余各组通过喂养高脂高糖饲料和腹腔注射链脲佐菌素(STZ)进行DN模型构建。药物干预结束后,检测大鼠血生化指标空腹血糖(FBG)、负荷后2 h血糖(P2 h BG)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平;苏木素-伊红(HE)、六胺银(PASM)染色观察肾组织病理学变化;透射电镜(TEM)观察肾小球基底膜损伤和足细胞变化情况;Western印迹检测肾组织中微管相关蛋白1A/1B-轻链(LC)3、p-JNK、JNK、p62/SQSTM1、肾病蛋白(Nephrin)蛋白表达。结果 与正常组比较,DN组FBG、P2 h BG、SCr、BUN水平及p62/SQSTM1蛋白表达明显升高,LC3-Ⅱ、Nephrin蛋白表达和p-JNK/JNK明显降低(P<0.05);光镜下观察到肾小球缩小、管丛系膜明显扩张,并有基底膜增生增厚等现象;TEM下观察到肾小球基底膜增厚、足细胞排列紊乱、形态改变、足突融合等现象。与DN组比较,糖肾煎-L、M、H组和二甲双胍组FBG、P2 h BG、SCr、BUN水平及p62/SQSTM1蛋白表达明显降低,LC3-Ⅱ、Nephrin蛋白表达和p-JNK/JNK明显升高(P<0.05);并且肾小球基底膜增厚、足细胞足突融合等情况均获得一定程度减轻。结论 糖肾煎对2型DN大鼠足细胞具有一定保护作用,可能是通过调控JNK-p62/SQSTM1信号通路,提高足细胞自噬,从而起到肾脏保护功效。

叶酸通过JNK/p38 MAPK信号通路调节小鼠C2C12成肌细胞分化

目的:观察叶酸(folic acid,FA)对小鼠C2C12成肌细胞增殖和分化的影响并探讨其作用机制。方法:(1)在小鼠C2C12成肌细胞增殖阶段,采用不同浓度(0、2.5、5、10和20μmol/L)的FA处理C2C12细胞,显微镜下观察各组细胞的状态,MTT法检测细胞活力,EdU法检测细胞增殖情况。(2)在小鼠C2C12成肌细胞分化阶段,将细胞分为对照(control,Ctrl)组(0μmol/L FA)和FA组(10μmol/L FA),于分化的第2天和第4天,采用免疫荧光染色和Western blot检测成肌细胞分化相关蛋白成肌细胞决定蛋白1(myoblast determination protein 1,MyoD)、成肌蛋白(myogenin,MyoG)和肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHC)的表达水平,并统计各组细胞肌管形成情况。(3)在小鼠C2C12成肌细胞分化第4天时,加入FA处理0、1、3和6 h,采用Western blot检测各时点c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、磷酸化JNK(phosphorylated JNK,p-JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和磷酸化p38 MAPK(phosphorylated p38 MAPK,p-p38 MAPK)蛋白水平。(4)将分化4 d的小鼠C2C12成肌细胞分为Ctrl组、FA组、SP600125(JNK特异性抑制剂)组、SB2035805(p38 MAPK特异性抑制剂)组、FA+SP600125组和FA+SB203580组。C2C12成肌细胞先接受10μmol/L的SP600125或SB203580处理1 h,再经10μmol/L的FA处理24 h,FA组经10μmol/L FA处理24 h,Ctrl组不作处理。采用Western blot检测p-JNK、JNK、p-p38 MAPK、p38 MAPK和MyHC蛋白水平。结果:(1)与0μmol/L FA组相比,其余各浓度组的细胞数量明显增多,细胞活力显著提高(P<0.05),EdU阳性细胞率均显著增加(P<0.05)。(2)与Ctrl组相比,FA组MyoD、MyoG和MyHC的表达水平均显著提高(P<0.05),肌管融合指数显著增加(P<0.05或P<0.01)。(3)与0 h组相比,FA处理1、3和6 h后p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值均显著升高(P<0.05或P<0.01),且随着处理时间的延长,p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值呈现逐渐升高的趋势。(4)与Ctrl组相比,FA组p-JNK、p-p38 MAPK和MyHC蛋白水平显著升高(P<0.01);与FA组相比,FA+SP600125组p-JNK和MyHC蛋白水平显著降低(P<0.05),FA+SB203580组p-p38 MAPK和MyHC蛋白水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:FA可以通过激活JNK/p38 MAPK信号通路促进小鼠C2C12成肌细胞分化。

基于肌醇需求激酶1α/c-Jun氨基末端激酶信号通路探讨胆宁片干预非酒精性脂肪性肝病的作用及机制

目的基于肌醇需求激酶1α/c-Jun氨基末端激酶(IRE1α/JNK)信号通路,探讨胆宁片对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠的作用及机制。方法将32只SD大鼠随机分为正常饮食组(A组,等体积生理盐水,8只)和高脂饮食组(24只);高脂饮食组大鼠喂养10周复制NAFLD模型成功后,再随机分为模型组(B组,等体积生理盐水)、多烯磷脂酰胆碱组[C组,142.5 mg/(kg·d)]和胆宁片组[D组,562.5 mg/(kg·d)],各8只。各组小鼠均灌胃相应药物干预6周。测定大鼠的体质量、血糖(GLU);采用苏木精-伊红染色(HE)法观察大鼠肝组织病理形态变化,采用油红染色法观察肝组织脂质沉积;检测血清胰岛素(INS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、游离脂肪酸(NEFA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;采用免疫印迹(Western blot)法检测肝组织IRE1α、JNK1、磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1)的蛋白表达水平。结果与B组比较,D组大鼠血糖和TC,TG,LDL-C,NEFA,ALT,AST水平均显著降低(P<0.01),血清INS和HDL-C水平显著升高(P<0.01);脂肪变性程度及细胞肿胀明显减轻,脂滴空泡体积缩小,数量减少;肝脏IRE1α,JNK1,p-IRS1蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。结论胆宁片可能通过下调IRE1α/JNK信号通路,减轻肝脏脂肪变性,从而改善NAFLD。

苦杏仁苷通过抑制JNK信号通路改善卒中后抑郁

目的研究苦杏仁苷通过抑制JNK信号通路对卒中后抑郁的改善作用。方法将56只健康SD大鼠随机分为假手术组(n=8)、造模1组(n=8)、造模2组(n=40),造模1组大鼠制备卒中模型,造模2组大鼠制备卒中后抑郁模型。造模成功后,卒中后抑郁模型大鼠随机分为卒中+抑郁组、卒中+抑郁+苦杏仁苷低剂量组(40 mg·kg^(-1))、卒中+抑郁+苦杏仁苷中剂量组(80 mg·kg^(-1))、卒中+抑郁+苦杏仁苷高剂量组(120 mg·kg^(-1))、卒中+抑郁+氟西汀组(1.8 mg·kg^(-1))。随后按相应剂量给药,连续给药30 d。观察大鼠Zea Longa评分,测定蔗糖水消耗量;H&E染色观察海马组织病理变化;TUNEL染色观察海马组织神经元细胞凋亡;透射电镜观察海马组织超微结构变化;Western blot检测海马组织PSD95、SYN、BDNF及JNK、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、cleaved-caspase 3、Bcl-2蛋白表达。结果与假手术组比较,卒中组、卒中+抑郁组大鼠Zea Longa神经行为学评分,细胞凋亡百分率,以及海马组织p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、cleaved-caspase 3蛋白表达明显升高(P<0.05);蔗糖水消耗量,海马组织PSD95、SYN、BDNF、Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05)。与卒中+抑郁组比较,卒中+抑郁+苦杏仁苷低剂量组、卒中+抑郁+苦杏仁苷中剂量组、卒中+抑郁+苦杏仁苷高剂量组、卒中+抑郁+氟西汀组大鼠Zea Longa神经行为学评分,细胞凋亡百分率,以及海马组织p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、cleaved-caspase 3蛋白表达明显降低(P<0.05),蔗糖水消耗量、海马组织PSD95、SYN、BDNF、Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05)。与卒中+抑郁+氟西汀组比较,卒中+抑郁+苦杏仁苷高剂量组大鼠Zea Longa神经行为学评分,细胞凋亡百分率,以及海马组织p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、cleaved-caspase 3蛋白表达明显降低(P<0.05),海马组织PSD95、SYN、BDNF、Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论苦杏仁苷改善卒中后抑郁样行为,可能与抑制海马JNK信号通路有关。

黄连碱预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠JNK/p38MAPK信号通路的影响

目的:探讨黄连碱预处理对心肌缺血再灌注(MI/RI)大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)/促分裂素原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路的影响。方法:将60只大鼠随机分为MI/RI组、假手术组、黄连碱低剂量组(黄连碱-L组,50 mg/kg黄连碱)、黄连碱中剂量组(黄连碱-M组,100 mg/kg黄连碱)、黄连碱高剂量组(黄连碱-H组,200 mg/kg黄连碱)及黄连碱-H+激活剂组(50 mg/kg黄连碱+25 mg/L JNK/p38MAPK通路激活剂茴香霉素),每组10只。除假手术组外,其余各组均进行冠状动脉结扎构建MI/RI大鼠模型,造模后,观察血流动力学参数左室内压最大上升(LVdp/dt_(max))、左室内压最大下降速率(LVdp/dt_(min))、收缩压以及舒张末压变化;采集大鼠腹部主动脉血,评估心肌损伤程度指标肌酸激酶同工酶(CK-MB)及乳酸脱氢酶(LDH)含量;分离心肌组织,检测心肌组织病理学变化、细胞凋亡、炎性因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)]水平及JNK/p38MAPK通路相关蛋白表达。结果:与假手术组比较,MI/RI组存在大量炎性细胞浸润、组织结构紊乱,病理损伤严重,LVdp/dt_(max)、LVdp/dt_(min)、收缩压均降低,但凋亡率、舒张压、LDH、CK-MB、TNF-α、IL-6含量、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK表达增加(P<0.05);与MI/RI组比较,黄连碱-L组、黄连碱-M组、黄连碱-H组病理损伤得到改善,LVdp/dt_(max)、LVdp/dt_(min)、收缩压均增加,凋亡率、舒张压、LDH、CK-MB、TNF-α、IL-6含量、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK表达降低(P<0.05);与黄连碱-H组比较,黄连碱-H+激活剂组病理损伤进一步加剧,LVdp/dt_(max)、LVdp/dt_(min)、收缩压均降低,但凋亡率、舒张压、LDH、CK-MB、TNF-α、IL-6含量、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK表达增加(P<0.05)。结论:黄连碱预处理可通过抑制JNK/p38MAPK通路减轻MI/RI大鼠心肌损伤。

槲皮素通过介导JNK信号通路抑制线粒体凋亡途径的神经保护作用

目的研究槲皮素(quercetin,Que)通过调节JNK信号通路抑制Aβ25-35引起PC12细胞线粒体损伤的作用机制。方法培养PC12细胞,使用Aβ25-35诱导其构建阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)受损模型,Que、17β-雌二醇(17β-E2)和金雀异黄素(genistein,Gen)进行干预,并设定SP600125(JNK特异性抑制剂)预处理组。Fluo-4 AM染料荧光检测PC12细胞钙离子;Rhodamine123染色液检测PC12细胞线粒体膜电位;Caspase-3活性检测Caspase-3酶活性;免疫荧光检测p-JNK蛋白表达;Western blot法检测ERα、ERβ、p-JNK、JNK、Bcl-W、Bim和Cytochrome C蛋白表达。并使用雌激素受体α/β拮抗剂MPP/PHTPP和SP600125进行干预,探讨Que发挥神经保护介导的分子机制。结果与Aβ25-35组相比,Aβ25-35+Que组能提高线粒体膜电位(P<0.01);降低钙离子浓度(P<0.01)。免疫荧光、Caspase-3检测和Western blot结果显示,与Aβ25-35组相比,Que可以逆转Aβ25-35诱导的ERα表达降低(P<0.01),当加入MPP抑制Que与雌激素受体α结合后,Caspase-3表达增加(P<0.05);Que抑制p-JNK表达(P<0.01);降低促凋亡蛋白Bim的表达(P<0.01),减少Cyt C的释放(P<0.01),促进抗凋亡蛋白Bcl-W的表达(P<0.01),当加入SP600125后,Que对Bcl-W、Bim和Cyt C的作用和SP600125对Aβ25-35诱导PC12细胞线粒体凋亡途径的保护作用机制相同(P<0.01)。结论Que可通过介导JNK信号通路抑制线粒体凋亡,进而发挥神经保护作用。

隐丹参酮通过TLR4/NF-κB/JNK信号通路减轻脂多糖对肺泡上皮细胞炎性损伤的作用研究

目的 本研究旨在探讨隐丹参酮(CTS)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞(MLE-12)的影响。方法 通过CCK-8法检测细胞活力,酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR(q-PCR)检测IL-1β、IL-6、TNF-α含量及基因表达水平,筛选出具有最佳造模效果的LPS浓度;之后通过CCK-8考察CTS对细胞的非毒性剂量范围;将试验分为对照组、LPS组和CTS+LPS组3个组,ELISA检测细胞上清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,qPCR检测细胞内IL-1β、IL-6、TNF-α、Bax和Bcl-2基因表达水平,Western Blot检测Bax、Bcl-2、TLR4、p-p65和p-JNK蛋白水平。结果 与对照组相比,LPS浓度≥1.0μg/mL时细胞活力显著下降(P<0.01);2.0和5.0μg/mL LPS组IL-1β、IL-6和TNF-α含量及基因表达水平显著上升(P<0.05);CTS浓度为0~5.0μM时,细胞活力无显著变化(P>0.05),即药物的无毒范围。与LPS组相比,CTS+LPS组IL-1β、IL-6和TNF-α含量及基因表达水平显著下降(P<0.05);CTS+LPS组Bax蛋白及基因表达水平显著下降(P<0.01)、Bcl-2蛋白及基因表达水平显著上升(P<0.05)。另外,与对照组相比,LPS组TLR4、p-p65、p-JNK蛋白水平显著上升(P<0.01);与LPS组相比,CTS+LPS组TLR4、p-p65、p-JNK蛋白水平显著下降(P<0.01)。结论 CTS可能通过抑制TLR4/NF-κB/JNK信号通路减轻LPS诱导的MLE-12细胞炎性损伤作用。

金雀根、黄芪及其配伍对糖尿病肾脏疾病大鼠JNK/SAPK信号通路的影响

目的探究金雀根、黄芪及其配伍对糖尿病肾脏疾病(DKD)模型大鼠肾脏保护作用及机制。方法将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、恩格列净组(10 mg/kg)、金雀根组(3.1 g/kg)、黄芪组(3.1 g/kg)、金雀根加黄芪组(6.2 g/kg),除正常组外,各组大鼠行左侧肾摘除手术并腹腔注射链脲佐菌素(STZ,35 mg/kg)建立DKD模型,各组分别给予相应药物灌胃8周。期间定期检测FBG、24 h尿微量蛋白(24 h U-mAlb)。给药8周后处死大鼠,检测Scr、BUN、Cystatin C水平,HE、PAS、Masson染色观察肾组织病理改变,免疫组织化学法检测巨噬细胞标志蛋白CD68、iNOS表达,Western blot法检测肾组织JNK/SAPK通路蛋白JNK、p-JNK和TNF-α、IL-1β、ICAM-1表达,ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β、ICAM-1水平。结果与正常组比较,模型组大鼠FBG、24 h U-mAlb、BUN、Scr、Cystatin C水平均升高(P<0.01),肾组织出现病理损伤,肾组织和血清TNF-α、IL-1β、ICAM-1水平升高(P<0.01),肾组织JNK和p-JNK蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠FBG、24 h U-mAlb、BUN、Scr、Cystatin C水平均降低(P<0.05,P<0.01),肾组织病理损伤减轻,肾组织和血清TNF-α、IL-1β、ICAM-1水平降低(P<0.01),肾组织JNK和p-JNK蛋白表达降低(P<0.01);金雀根组与黄芪组比较各指标均无明显变化(P>0.05);与金雀根组或黄芪组比较,金雀根加黄芪组各指标均有不同程度的改善(P<0.05,P<0.01)。结论金雀根、黄芪及其配伍可改善DKD大鼠肾功能,抑制M1型巨噬细胞,减少炎症因子分泌,减轻肾脏病理损伤,其机制可能与抑制JNK/SAPK信号通路激活有关,金雀根与黄芪配伍药效较好。