一氧化碳中毒后迟发性脑病患者S100β、JNK通路蛋白及相关细胞因子水平变化及其临床意义

目的探讨急性一氧化碳中毒后迟发性脑病(delayed encephalopathy after acute carbon monoxide poisoning,DEACMP)患者脑脊液中S100β、Jun氨基末端激酶(jun amino-terminal kinase,JNK)通路蛋白、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、IL-10、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)及干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)的变化及其临床意义。方法选取2010-01—2016-12作者医院收治的DEACMP患者20例(DEACMP组),另收集同期发生一氧化碳中毒但未发生迟发性脑病的患者37例作为对照组,检测两组患者入院后第2天脑脊液中S100β、JNK通路蛋白(JNK1、JNK2)及TNF-ɑ、IL-4、IL-10、TGF-β1、IFN-γ水平,并于治疗2周后对两组患者进行简易精神状态量表(mini-mental state examination,MMSE)评分,分析脑脊液S100β蛋白、JNK通路蛋白及相关细胞因子与MMSE评分的相关性。结果DEACMP组脑脊液中S100β、JNK1、JNK2、TNF-ɑ、IFN-γ水平均高于对照组(P<0.05),而IL-4、IL-10、TGF-β1水平及MMSE评分均低于对照组(P<0.05)。DEACMP组患者MMSE评分与患者脑脊液中S100β、JNK1、JNK2、TNF-ɑ、IFN-γ水平呈负相关(P<0.05),与IL-4、IL-10、TGF-β1水平呈正相关(P<0.05)。结论 DEACMP患者脑脊液中S100β、JNK通路蛋白及相关细胞因子发生明显改变,且其水平与患者恢复期认知功能损害有关。

JNK磷酸化14-3-3在大鼠缺血性脑损伤中的作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化14-3-3在大鼠缺血性脑损伤中的作用。方法 20只大鼠均分为4组:假手术组、缺血复灌组、SP600125组和溶剂对照组。制作大鼠全脑缺血模型,应用免疫沉淀和免疫印迹法检测4组大鼠脑缺血复灌12 h海马CA1区神经元14-3-3磷酸化(p-14-3-3)、14-3-3与Bax结合、Bax在胞浆和线粒体的蛋白表达情况。结果与假手术组相比,缺血复灌组、溶剂对照组及SP600125组胞浆中的p-14-3-3蛋白、线粒体中的Bax蛋白均增高,14-3-3与Bax的结合降低,SP600125组的胞浆p-14-3-3蛋白、线粒体Bax蛋白低于缺血复灌组和溶剂对照组,14-3-3与Bax的结合高于缺血复灌组和溶剂对照组(均P<0.05)。结论 JNK磷酸化14-3-3在大鼠缺血性脑损伤中发挥了重要作用。

JNK磷酸化Bad在脑缺血神经元凋亡中的作用

目的探讨JNK磷酸化Bad在大鼠缺血性神经元凋亡中的作用。方法 20只大鼠均分为4组:假手术组、缺血复灌组、溶剂对照组和SP600125组。制作大鼠全脑缺血模型,应用免疫沉淀和免疫印迹法检测大鼠脑缺血复灌1 d海马CA1区神经元Bad与14-3-3及Bad与Bcl-Xl的结合、Bad丝氨酸128位磷酸化[p-Bad(S128)]水平、Caspase-3蛋白表达情况。结果与缺血复灌组相比,SP600125组海马CA1区神经元Bad与14-3-3的结合明显增高,Bad与Bcl-Xl的结合、p-Bad(S128)、Caspase-3表达显著减少(均P<0.05)。结论 JNK介导的Bad(S128)磷酸化在大鼠缺血性脑损伤中发挥了重要作用。

治疗性低温减轻大鼠脑缺血再灌注损伤时GSTM1与ASK1-JNK-p38MAPK信号通路的关系

目的评价治疗性低温减轻大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)时谷胱甘肽S转移酶μ1(GSTM1)与细胞凋亡信号调节激酶1(ASK1)-c-Jun氨基末端激酶(JNK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的关系。方法清洁级健康雄性SD大鼠100只,8周龄,体质量260~280 g,采用随机数字表法分为5组(n=20):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)、治疗性低温组(H组)、GSTM1抑制剂+治疗性低温组(IH组)和GSTM1抑制剂+ASK1抑制剂+治疗性低温组(IAH组)。采用线栓法建立CIRI模型,阻断大鼠左侧大脑中动脉2 h后拔出线栓恢复血流灌注,手术期间维持大鼠脑温36~37℃。H组于再灌注即刻用75%酒精擦拭大鼠头部及颈部,维持脑温32~33℃3 h,其余同I/R组;IH组分别于造模前24和1 h时腹腔注射GSTM1抑制剂依他尼酸8.6 mg/kg,其余同H组;IAH组于造模前4 d开始口服ASK1抑制剂Selonsertib 10 mg/kg,1次/d,连续4 d,其余同IH组。于再灌注24 h行改良神经功能缺损评分(mNSS),随后处死大鼠后取脑,采用TTC染色法观察脑梗死情况并计算梗死体积百分比,Western blot法检测GSTM1、ASK1、磷酸化ASK1(p-ASK1)、JNK、磷酸化JNK(p-JNK)、p-38 MAPK、磷酸化p-38 MAPK(p-p38 MAPK)的表达水平;HE染色观察神经细胞形态改变,TUNEL法检测神经细胞凋亡率。结果与S组比较,I/R组mNSS、神经细胞凋亡率、脑梗死体积百分比、p-ASK1/ASK1比值、p-JNK/JNK比值及p-p38 MAPK/p38MAPK比值升高,GSTM1表达下调(P<0.05);与I/R组和IH组比较,H组mNSS、神经细胞凋亡率、脑梗死体积百分比、p-ASK1/ASK1比值、p-JNK/JNK比值及p-p38 MAPK/p38 MAPK比值降低,GSTM1表达上调(P<0.05),神经细胞损伤减轻;与IH组比较,IAH组mNSS、神经细胞凋亡率、脑梗死体积百分比、p-ASK1/ASK1比值、p-JNK/JNK比值及p-p38 MAPK/p38 MAPK比值降低(P<0.05),GSTM1表达差异无统计学意义(P>0.05),神经细胞损伤减轻。结论治疗性低温减轻大鼠CIRI的机制与上调GSTM1表达,抑制ASK1-JNK-p38 MAPK信号通路激活有关。

二氮嗪预处理对缺氧复氧后大鼠海马神经元凋亡及JNK表达的影响

目的探讨二氮嗪(DZ)预处理能否抑制C-Jun氨基末端激酶(JNK)表达而减轻缺氧复氧后大鼠海马神经元的凋亡。方法原代培养9～10 d的SD大鼠海马神经元随机分为5组:对照组、DZ 0,30,100μmol/L和DZ 100μmol/L+5-羟癸酸(5-HD)100μmol/L预处理组。除对照组外,其余4组神经元自缺氧前2 d开始,每天实施以上对应浓度DZ预处理1 h,连续3 d。于体外缺氧4 h复氧48 h后,采用四唑蓝比色法测定海马神经元活力,AnnexinⅤ-FITC流式细胞术测定凋亡率,Western blotting法检测JNK蛋白表达。结果与对照组比较,缺氧复氧后海马神经元的活力下降,凋亡率增大,JNK蛋白表达增强(P<0.05)。与其他预处理组比较,DZ100μmol/L预处理组的神经元活力高,凋亡率低(P<0.05),其他预处理组间比较无统计学意义。DZ预处理后,JNK蛋白表达减低,且DZ 100μmol/L组表达弱于DZ 30μmol/L组(P<0.05)。同时给于5-HD预处理后,DZ未能抑制JNK蛋白表达。结论DZ预处理可能抑制JNK表达而减轻缺氧复氧后大鼠海马神经元的凋亡。

大鼠缺血半暗带区神经元凋亡与磷酸化C-Jun氨基末端激酶及原癌基因c-Myc表达的相关性

目的观察大鼠永久性局灶脑缺血皮质缺血半暗带区(IP)磷酸化应激活化激酶/C-Jun氨基末端激酶(P-SAPK/JNK)及原癌基因c-Myc mRNA转录的表达情况,探讨IP区神经细胞凋亡的可能机制。方法健康雄性Sprague-Dawley大鼠72只,随机分为假手术组和永久性大脑中动脉阻塞(pMCAO)后1、3、6、12、24 h组,每组12只。线栓法制备大鼠pMCAO模型,提取缺血不同时间点大鼠脑皮质IP区的组织。应用原位细胞凋亡(TUNEL)检测法分析IP区皮质神经元的凋亡情况,采用免疫组织化学法分析脑缺血后P-SAPK/JNK细胞的表达情况,采用Western-blot检测P-SAPK/JNK蛋白含量;采用实时定量PCR技术检测c-Myc mRNA的转录水平。结果①大鼠pMCAO后3 h,IP区TUNEL阳性细胞和P-SAPK/JNK阳性细胞均明显增加,12 h达高峰,与假手术组比较,差异有统计学意义,P<0.01。②Western-blot结果证明,大鼠pMCAO后3 h,P-SAPK/JNK蛋白水平增加,12 h达高峰,各时间点与假手术组比较,差异有统计学意义,P<0.01。③实时定量PCR结果表明,大鼠pMCAO后6 h,IP区c-Myc mRNA的转录水平明显上调,12 h达高峰,均高于假手术组,差异有统计学意义,P<0.01。④IP区皮质P-SAPK/JNK蛋白水平与神经元凋亡及c-Myc mRNA转录水平均呈正相关系(r=0.985,P<0.01;r=0.887,P<0.05)。结论 pMCAO模型IP区神经元的凋亡可能与JNK/c-Myc信号通路的激活有关。

急性一氧化碳中毒迟发性脑病患者的S100-β、JNK通路蛋白表达情况及其临床意义分析

目的观察急性一氧化碳中毒迟发性脑病患者的S100-β、c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路蛋白表达情况,并分析其临床意义。方法选取2015年2月至2017年8月在本院接受治疗的急性一氧化碳中毒患者为研究对象,根据其是否发生迟发性脑病分为未发生组和发生组,同时选取同期在本院治疗的颅脑占位患者为对照。观察三组患者脑脊液中S100-β、JNK通路蛋白[神经元特异烯醇化酶(NSE)、β-淀粉样蛋白(Aβ)]表达情况,比较三组患者细胞因子(IL-6、CRP)、认知功能的差异。分析急性一氧化碳中毒迟发性脑病患者S100-β、JNK通路蛋白表达情况与IL-6、CRP、认知功能的相关性。结果三组患者脑脊液中S100-β、NSE、Aβ(β-淀粉样蛋白)、IL-6和CRP水平由高到低分别为发生组、未发生组和对照组,三组患者认知功能水平由高到低分别为对照组、未发生组和发生组,组间差异均有统计学意义(P <0. 05)。急性一氧化碳中毒迟发性脑病患者S100-β、NSE和Aβ水平与IL-6、CRP水平均呈正相关(P <0. 05),与认知功能均呈负相关(P <0. 05)。结论急性一氧化碳中毒迟发性脑病患者的S100-β、NSE和Aβ表达水平较高,且与细胞因子水平和认知功能密切相关。

姜黄素对自发性高血压大鼠脑缺血再灌注时海马神经元凋亡及c-Jun氨基末端激酶3和突触后密度蛋白95表达的影响

目的 探讨姜黄素对自发性高血压（SH）大鼠脑缺血再灌注时海马神经元凋亡及c-Jun 氨基末端激酶3（JNK3）和突触后密度蛋白95（PSD95）表达的影响.方法 与雄性WKY同源的SH大鼠135只和雄性WKY大鼠90只,清洁级,体重275～325 g,采用随机数字表法,将WKY大鼠随机分为2组（n=45）：假手术组（W-S组）及脑缺血再灌注组（W-I/R组）,将SH大鼠随机分为3组（n=45）：假手术组（S-S组）和脑缺血再灌注组（S-I/R组）及姜黄素组（S-C组）.采用四血管阻断法制备全脑缺血再灌注模型.W-S组和S-S组仅分离双侧颈总动脉,W-I/R组和S-I/R组于再灌注30 min时腹腔注射玉米油10 ml/kg,S-C组于再灌注30 min时腹腔注射姜黄素100 mg/kg.于再灌注2 h,6 h、1 d、3 d和7d时进行海马凋亡神经元计数,并测定海马JNK3和PSD95蛋白的表达水平.结果 与W-S组比较,S-S组海马凋亡神经元计数增加（P〈0.05）,JNK3蛋白表达差异无统计学意义（P〉0.05）;与S-S组比较,S-I/R组海马凋亡神经元计数增加,JNK3蛋白表达上调（P〈0.05）;与S-I/R组比较,S-C组海马凋亡神经元计数减少,JNK3蛋白表达下调（P〈0.05）.各组海马PSD95蛋白表达比较差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 姜黄素可抑制SH大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡,其机制与下调海马JNK3蛋白表达有关,姜黄素下调海马JNK3蛋白表达可能与PSD95途径无关.

JNK在神经病理性痛大鼠中脑导水管周围灰质星形胶质细胞活化中的作用

目的评价c-Jun氨基末端激酶（JNK）在神经病理性痛大鼠中脑导水管周围灰质（PAG）星形胶质细胞活化中的作用。方法清洁级雄性SD大鼠72只，9周龄，体重160～200 g，采用随机数字表法分为4组：正常对照组（C组，n＝8）、神经病理性痛组（NP组，n＝40）、二甲基亚砜溶剂对照组（DS组，n＝12）和JNK抑制剂SP600125组（SP组，n＝12）。采用慢性坐骨神经缩窄性损伤（CCI）法制备大鼠神经病理性痛模型。于CCI后14 d时，SP组PAG内注射10 nmol JNK抑制剂SP600125 0.5 μl，DS组注射10%二甲基亚砜0.5 μl。C组取8只大鼠，NP组于CCI前、CCI后3、7、14、21 d时取8只大鼠，DS组和SP组取8只大鼠分别于CCI前、CCI后14 d给药前、给药后30、45、60、75和90 min时测定机械痛阈。C组机械痛阈测定结束后处死，取PAG组织，采用Western blot法测定PAG区磷酸化JNK（p-JNK）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达；NP组于各时点痛阈测定结束后处死，测定PAG区p-JNK表达；DS组和SP组取4只大鼠于给药后45 min时机械痛阈测定结束后处死，测定PAG区GFAP的表达。结果与C组比较，NP组CCI后各时点机械痛阈降低，CCI后7～21 d时p-JNK表达上调（P〈0.01）；与DS组比较，SP组给药后30 min时机械痛阈升高，给药后45 min时GFAP表达下调（P〈0.01）；与给药前比较，SP组给药后30～75 min时机械痛阈升高（P〈0.01）。结论神经病理性痛大鼠PAG星形胶质细胞活化机制与JNK激活有关。

右美托咪定对神经病理性痛大鼠脊髓背根神经节c-Jun氨基末端激酶活化的影响

目的 评价右美托咪定对神经病理性痛大鼠脊髓背根神经节c-Jun氨基末端激酶（JNK）活化的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠54只,体重180 ～ 220 g,采用随机数字表法,将其分为3组（n=18）：假手术组（S组）、神经病理性痛组（NP组）和右美托咪定组（D组）.采用坐骨神经慢性压迫性损伤法建立大鼠神经病理性痛模型.D组于术后即刻腹腔注射右美托咪定50 μg/kg,1次/d,连续14 d.S组和NP组以等容量生理盐水替代.于术前ld、术后3、7和14 d时测定机械缩足反应阈（MWT）和热缩足反应潜伏期（TWL）;于术后3、7和14 d测定痛阈后处死,取损伤侧L4-6脊髓背根神经节,采用免疫组化法测定JNK磷酸化（p-JNK）水平.结果 与S组比较,NP组和D组术后各时点MWT降低,TWL缩短,脊髓背根神经节p-JNK表达上调（P＜0.05）;与NP组比较,D组术后各时点MWT升高,TWL延长,脊髓背根神经节p-JNK表达下调（P＜0.05）.结论 右美托咪定减轻大鼠神经病理性痛的机制与抑制脊髓背根神经节JNK活化有关.

JNK信号通路在右美托咪定减轻利多卡因致大鼠脊髓神经毒性中的作用

目的 评价c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路在右美托咪定减轻利多卡因致大鼠脊髓神经毒性中的作用.方法 取鞘内置管成功的成年雄性SD大鼠72只,体重280～ 320 g,采用随机数字表法分为6组（n=12）：对照组（C组）、JNK信号通路阻断剂组（SP组）、右美托咪定组（D组）、利多卡因组（L组）、右美托咪定＋利多卡因组（DL组）和JNK信号通路阻断剂＋利多卡因组（SPL组）.C组鞘内注射二甲基亚砜20μl,SP组和L组分别鞘内注射JNK信号通路阻断剂SP600125 30μg和10％利多卡因20μl,DL组和SPL组鞘内注射10％利多卡因前20 min时分别腹腔注射右美托咪定75 μg/kg和鞘内注射JNK信号通路阻断剂SP600125 30 μg;D组腹腔注射右美托咪定75 μg/kg.于鞘内置管前（T0）、鞘内给药前（T1）、鞘内给药后4、8、12 h、1、2、3、4、5和6d（T2-10）时测定大鼠后肢机械缩足反应阈（MWT）和热缩足潜伏期（TWL）;于给药24 h后每组随机取6只大鼠,取L4.5脊髓组织,采用TUNEL法检测凋亡细胞并计算细胞凋亡指数;采用Western blot法检测磷酸化JNK （p-JNK）表达.结果 与C组比较,SP组和D组MWT、TWL、细胞凋亡指数及p-JNK表达差异无统计学意义（P＞0.05）,L组T2.8时、DL组T2.6时及SPL组T2-5时MWT升高,L组T2-8时、DL组T2-5时及SPL组T2-4时TWL延长,DL组、SPL组及L组细胞凋亡指数及p-JNK表达水平升高（P＜0.05）;与L组比较,DL组和SPL组T2-8时MWT下降、TWL缩短,细胞凋亡指数及p-JNK表达水平下降（P＜0.05）.结论 右美托咪定减轻利多卡因致大鼠脊髓神经毒性的机制可能与抑制JNK信号通路活化有关.

亚低温对前脑缺血再灌注损伤沙土鼠海马p-ERK、p-JNK水平的影响

目的 研究亚低温对前脑缺血再灌注损伤沙土鼠海马磷酸化胞外信号调节激酶（p-ERK）及磷酸化c-Jun氨基末端蛋白激酶（p-JNK）水平的影响。方法 蒙古沙土鼠120只，随机分为4组（n=30）：常温假手术组（SH组）、常温缺血再灌注组（IR组）、低温假手术组（HSH组）、常温缺血低温再灌注组（HIR组）。腹腔注射1％戊巴比妥钠40mg／kg麻醉后，分离出双侧颈总动脉，IR组、HIR组分别夹闭双侧颈总动脉，5min后恢复脑血流灌注，IR组再灌注时维持正常体温（36．5—37．5℃），HIR组再灌注即刻开始降温，10min内降至32．5—33．5℃，并维持4h；SH组、HSH组只分离双侧颈总动脉不夹闭，SH组维持正常体温，HSH组分离双侧颈总动脉后5min开始降温，10min内降至32．5—33．5℃，并维持4h。每组于再灌注2h,4h、1d、3d、5d分别随机取6只动物，采用开阔法观察沙土鼠的行为学，行为学观察完毕立即处死大鼠，取脑组织，采用TUNEL法检测海马CA1区、CA3区细胞凋亡情况，免疫组化法测定海马CA1区、CA3区、DG区p-ERK、p-JNK的水平。结果HIR组再灌注1—5d沙土鼠行为学异常及海马凋亡细胞计数较IR组降低（P〈0．01）；与SH组或HSH组比较，IR组及HIR组再灌注期间海马CA3区及DG区p-ERK水平增加（P〈0．05），但IR组与HIR组比较差异无统计学意义；4组海马CA1区均无p-ERK表达。与sH组比较，IR组再灌注2h-5d海马CA1区、CA3区p-JNK水平增加，且HIR组再灌注2h-1d海马CA1区、CA3区p-JNK水平低于IR组（P〈0．05）。结论 亚低温（32．5-33．5℃）4h可减轻沙土鼠脑缺血再灌注损伤，其机制与抑制再灌注早期p-JNK的激活有关，而与p-ERK水平无关。

ATP敏感性钾通道在异氟醚预处理减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用：与JNK信号通路的关系

目的 评价线粒体ATP敏感性钾通道在异氟醚预处理减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及其与c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路的关系.方法 清洁级健康成年雄性SD大鼠32只,体重280 ～ 320 g,采用随机数字表法分为4组（n=8）：假手术组（S组）、脑缺血再灌注组（I/R组）、异氟醚预处理组（Ⅰ-pre组）和5-羟葵酸组（5-HD组）.I/R组采用改良Pulsinelli四血管阻断法制备大鼠全脑缺血再灌注模型;Ⅰ-pre组在缺血前每天吸入1.5％异氟醚1h,连续5 d;5-HD组处理同Ⅰ-pre组,在缺血处理前30 min腹腔注射5-羟癸酸15 mg/kg.于再灌注24 h时行神经行为学评分,于再灌注72h时处死大鼠取海马组织,采用TUNEL法检测凋亡神经元,计算神经元凋亡率,免疫组化法检测caspase-3表达,Westem blot法检测磷酸化JNK （p-JNK）蛋白表达.结果 与S组比较,I/R组、Ⅰ-pre组和5-HD组格子爬行数减少,悬挂时间缩短,海马神经元凋亡率升高,caspase-3表达上调,I/R组和5-HD组p-JNK蛋白表达上调（P＜0.05）,Ⅰ-pre组p-JNK蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）;与I/R组比较,Ⅰ-pre组格子爬行数增多,悬挂时间延长,海马神经元凋亡率降低,caspase-3和p-JNK蛋白表达下调（P＜0.05）,5-HD组上述指标差异无统计学意义（P＞0,05）;与Ⅰ-pre组比较,5-HD组格子爬行数减少,悬挂时间缩短,海马神经元凋亡率升高,caspase-3和p-JNK蛋白表达上调（P＜0.05）.结论 线粒体ATP敏感性钾通道可通过阻断JNK信号通路参与异氟醚预处理减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的过程.

c-Jun氨基末端激酶在全脑缺血再灌注大鼠海马神经元DNA修复中的作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）在全脑缺血再灌注大鼠海马神经元DNA修复中的作用。方法健康清洁级雄性SD大鼠108只,4月龄,体重290～310g,随机分为3组（n=36）：假手术组（SH组）、缺血再灌注组（IR组）和JNK抑制剂SP600125组（SP组）。采用四血管结扎法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,在夹闭双侧颈总动脉前30min,IR组侧脑室注射1%二甲基亚砜（DMSO）10μl,SP组给予SP600125（溶于1%DMSO,30g/L）10μl。SH组仅游离、暴露双侧颈总动脉,于上述相应时点给予1%DMSO 10μl。分别于再灌注2、6、12、24、48和72 h处死6只大鼠,测定海马CA1区中1/3段磷酸化JNK（p-JNK）和DNA修复蛋白X线修复交叉互补蛋白1（XRCC1）表达水平,观察神经元病理学结果及神经元凋亡情况。结果与SH组比较,IR组和SP组神经元凋亡指数升高,XRCC1表达下调,IR组p-JNK表达上调（P〈0.05或0.01）,SP组差异无统计学意义（P〉0.05）;与IR组比较,SP组神经元凋亡指数降低,p-JNK表达下调,XRCC1表达上调（P〈0.01）。结论JNK可使全脑缺血再灌注大鼠海马神经元DNA修复功能受损,导致细胞凋亡,其机制可能与下调DNA修复蛋白XRCC1的表达有关。

异丙酚预先给药对大鼠局灶性脑缺血再灌注时脑组织p-JNK、MMP-9和AQP-4表达的影响

目的 评价异丙酚预先给药对大鼠局灶性缺血再灌注时脑组织磷酸化c-Jun氨基末端蛋白激酶（p-JNK）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和水通道蛋白-4（AQP-4）表达的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠72只,体重250～280g,随机分成4组（n=18）：假手术组（S组）;脑缺血再灌注组（IR组）于缺血前30 min腹腔注射生理盐水10ml/kg;不同浓度异丙酚预先给药组（P1组和P2组）于缺血前30 min分别腹腔注射0.5%或1%异丙酚10 ml/kg.IR组、P1组和P2组采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注24 h.大鼠清醒后,进行神经功能缺陷评分.再灌注24 h时处死大鼠,处死前1 h股静脉注射2%伊文氏蓝（EB）溶液3 ml/kg,处死后取脑组织,测定含水量、EB含量、p-JNK、MMP-9和AQP-4的表达水平.结果 与S组比较,IR组、P1组和P2组神经功能缺陷评分、脑组织含水量和EB含量升高,p-JNK、MMP-9和AQP-4的表达上调（P＜0.05）;与IR组比较,P1组和P2组神经功能缺陷评分、脑组织含水量和EB含量降低,p-JNK、MMP-9和AQP-4的表达下调（P＜0.05）;与P1组比较,P2组脑组织p-JNK和MMP-9的表达下调（P＜0.05）,神经功能缺陷评分、脑组织含水量、EB含量和AQP-4表达差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 异丙酚预先给药可通过抑制JNK信号通路的激活,抑制脑组织MMP-9和AQP-4的表达上调,减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.

c-jun氨基末端激酶在弥漫性脑创伤大鼠脑中表达及对神经元自噬的影响

目的 探讨大鼠弥漫性脑创伤后c-jun氨基末端激酶（JNK）通路的表达和对大鼠神经元自噬的影响和机制.方法选用雄性SD大鼠216只,随机分为（1）颅脑创伤组（n=54）；（2）SP600125干预组（n=54）；（3）DMSO对照组（n=54）；（4）假手术对照组（n=54）.每组又随机平均分为伤后1、6、12、24、48和72 h6个亚组.观察伤后皮质区神经细胞组织形态变化,Western blot法、免疫组化法检测顶叶皮质区p-JNK、p-P53、DRAM和Beclin-1的表达.结果 颅脑创伤组伤后6h光镜下即可见大脑皮质区神经细胞胞体收缩呈三角形,胞浆嗜色性减弱,核皱缩浓染,细胞周围出现空隙,即神经细胞变性坏死改变；SP600125干预组上述改变明显减轻,与颅脑创伤组比较DMSO对照组变化不大,假手术对照组可见神经元数量多,排列整齐,形态完整,核质均匀,核仁清晰.免疫组化与Western blot法结果显示,与SP600125干预组比较,颅脑创伤组p-JNK活性在伤后6、12和24 h显著增高（F=17.902,P＜0.05）,p-P53活性在伤后12、24、48和72 h显著增高（F=7.107,P＜0.05）,DRAM活性在伤后6、12、24、48和72 h显著增高（F=15.455,P＜0.05）和Beclin-1活性在伤后6、12、24、48和72 h显著增高（F=11.517,P＜0.05）；与颅脑创伤组比较,DMSO对照组中p-JNK、p-P53、DRAM、Beclin-1在各时间点差异均无统计学意义（F=1.509,P＞0.05）.结论 本研究表明SP600125可改善脑创伤后神经元的自噬性损伤,其机制与调节脑创伤后JNK信号活化水平有关,提示颅脑创伤后JNK通路的激活可能是调控神经元自噬的重要机制之一.

JNK信号通路在异氟醚预处理和七氟醚预处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤中的作用

目的评价c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路在异氟醚预处理和七氟醚预处理减轻大鼠海马脑片缺氧无糖（OGD）损伤中的作用。方法雄性成年SD大鼠，体重270～290g，断头处死，剥离海马，制备海马脑片。取大鼠海马脑片96张，采用随机数字表法，将其随机分为8组（n=12）：对照组（c组）、OGD组、异氟醚预处理组（Iso组）、七氟醚预处理组（Sevo组）、SP600125＋异氟醚预处理组（SP＋Iso组）、SP600125十七氟醚预处理组（SP＋Sevo组）、二甲基亚砜（DMSO）＋异氟醚预处理组（DM—SO＋Iso组）和DMSO＋七氟醚预处理组（DMSO＋Sevo组）。采用电生理技术，细胞外记录CA1区群锋电位（PS）波幅，计算PS恢复程度。采用碘化丙啶染色法，测定细胞活力。结果与c组比较，其余各组PS恢复程度和细胞活力降低（P〈0．01）；与OGD组比较，Iso组、Sevo组、SP＋Iso组、SP＋Sevo组、DMSO＋Iso组和DMSO＋Sevo组Ps恢复程度和细胞活力升高（P〈0．01）；与Iso组比较，SP＋Iso组PS恢复程度和细胞活力升高（P〈0．01），DMSO＋Iso组PS恢复程度和细胞活力差异无统计学意义（P〉0．05）；与Sevo组比较，SP＋Sevo组PS恢复程度和细胞活力升高（P〈0．01），DMSO＋Sevo组PS恢复程度和细胞活力差异无统计学意义（P〉0．05）。结论异氟醚预处理和七氟醚预处理可通过抑制JNK信号通路，减轻大鼠海马脑片缺氧无糖损伤。

JNK信号转导通路在利多卡因诱发大鼠脊髓神经毒性中的作用

目的 评价c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号转导通路在利多卡因诱发大鼠脊髓神经毒性中的作用.方法 成年雄性SD大鼠72只,体重220 ～ 260 g,采用随机数字表法分为6组（n=12）：对照组（Ⅰ组）不做任何处理；假手术组（Ⅱ组）仅行鞘内置管术；JNK抑制剂组（Ⅲ组）和二甲基亚砜（DMSO）组（Ⅳ组）分别鞘内注射JNK抑制剂SP600125 25μg和DMS0 20 μl;10％利多卡因组（Ⅴ组）鞘内注射10％利多卡因20 μl; JNK抑制剂＋10％利多卡因组（Ⅵ组）先鞘内注射SP600125 25 μg,30 min后鞘内注射10％利多卡因20μl.于鞘内置管前（T0）、鞘内给药前（T1）、鞘内给药后4、8、12 h、1、2、3、4、5和6 d（T2-10）时测定大鼠后肢机械痛阈和热痛阈.于给药后24h时每组随机取4只大鼠,取脊髓腰膨大标本,采用Western blot法检测磷酸化JNK（p-JNK）的表达,TUNEL法检测脊髓凋亡神经细胞,计算细胞凋亡指数.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组机械痛阈和热痛阈、Ⅱ组和Ⅳ组脊髓p-JNK表达差异无统计学意义（P＞0.05）,Ⅴ组T2-4,6-8时机械痛阈、T2-4,7时热痛阈、Ⅵ组T2-6时机械痛阈、T2-5时热痛阈升高,Ⅲ组脊髓p-JNK表达下调,细胞凋亡指数降低,Ⅴ组和Ⅵ组脊髓p-JNK表达上调,细胞凋亡指数升高（P＜0.05）；与Ⅴ组比较,Ⅵ组T2-8时机械痛阈和热痛阈降低,给药后24h时脊髓p-JNK表达下调,细胞凋亡指数降低（P＜0.05）.结论 JNK信号转导通路激活可能通过促进脊髓神经细胞凋亡参与利多卡因诱发大鼠脊髓神经毒性的过程.

鞘内注射盐酸羟考酮下调脊髓小胶质细胞中c-JNK/CXCL1信号减弱坐骨神经结扎大鼠的神经病理性痛

目的 观察鞘内注射盐酸羟考酮对坐骨神经结扎大鼠痛阈、脊髓小胶质细胞中c-JNK/CXCL1信号的影响.方法 SD大鼠按随机数字表法分为5组（每组40只）：假手术组（Sham组）、坐骨神经结扎组（CCI组）、盐酸羟考酮组[Oxy组,结扎前3d鞘内注射盐酸羟考酮（5μg/30μl）]、米诺环素组[Mino组,结扎前3d鞘内注射米诺环素（5μg/30μl）]及c-JNK抑制剂组[SP组,结扎前3d鞘内注射S1P600125（5μg/30μl）].Sham组仅暴露坐骨神经而不结扎.其余各组均行右侧坐骨神经结扎术,于L5-6鞘内置管并连续注射3d.术后1、3、5、7、14 d分别测定各组大鼠的热痛阈及机械性痛阈;取第4～6节腰段脊髓采用免疫荧光法观察小质细胞的活化状态,Weston blot法检测脊髓组织中小胶质细胞特异性标记物Ⅰ ba-1、p-c-JNK以及CXCL1表达.结果 与Sham组相比,CCI组大鼠术后各观察点热痛阈和机械性痛阈明显降低,损伤后7d脊髓组织中Ⅰ ba-1、p-c-JNK和CXCL1的表达增加（P＜0.05）;与CCI组比较,Oxy组、Mino组和SP组大鼠热痛阈和机械性痛阈值明显提高（P＜0.05）,脊髓组织中p-c-JNK、Ⅰ ba-1和CXCL1的表达降低（P＜0.05）.损伤后7d,免疫荧光染色显示CCI组脊髓背角内可见Ⅰ ba-1阳性的细胞明显增加（P＜0.05）,外形由静息多分支样转变成变形虫样,而Oxy组、Mino组、SP组小胶质细胞多呈树枝样,Ⅰ ba-1阳性细胞数目减少.Oxy组、Mino组和SP组三组比较上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 鞘内注射盐酸羟考酮可以通过下调脊髓小胶质细胞中c-JNK/CXCL1信号减轻坐骨神经结扎引起的神经病理性疼痛程度,为临床治疗神经病理性疼痛提供新的治疗靶点.

右美托咪定对大鼠脑缺血再灌注时c—Jun氨基末端激酶活性的影响

目的 评价右美托咪定对大鼠脑缺血再灌注时c—Jun氨基末端激酶（JNK）活性的影响。方法清洁级健康雄性SD大鼠81只，8周龄，体重180～220g，采用随机数字法分为3组（n=27）：假手术组（s组）、脑缺血再灌注组（CI／R组）和右美托咪定组（Dex组）。CI／R组和Dex组采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型，缺血2h，再灌注24h，S组仅分离动脉不置入线栓；Dex组于缺血前即刻尾静脉注射右美托咪定3~g／kg，随后以3肛g·kg^-1·h。速率输注至再灌注24h，S组和CI／R组给予等容量生理盐水。于再灌注24h时处死大鼠取脑组织，采用TTC法测定脑梗死体积，计算脑梗死体积百分比；采用干湿法测定脑含水量；采用TUNEL法染色，计数凋亡细胞，计算细胞凋亡指数，采用Westernblot法检测磷酸化c—Jun氨基末端激酶（p-JNK）的表达水平。结果与S组比较，CI／R组和Dex组脑含水量、细胞凋亡指数和脑梗死体积百分比升高，p-JNK表达上调（P〈0．05）；与CI／R组比较，Dex组脑含水量、细胞凋亡指数和脑梗死体积百分比降低，p-JNK表达下调（P〈0．05）。结论右美托咪定通过降低JNK活性抑制细胞凋亡减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。