苦杏仁苷通过抑制JNK信号通路改善卒中后抑郁

目的研究苦杏仁苷通过抑制JNK信号通路对卒中后抑郁的改善作用。方法将56只健康SD大鼠随机分为假手术组(n=8)、造模1组(n=8)、造模2组(n=40),造模1组大鼠制备卒中模型,造模2组大鼠制备卒中后抑郁模型。造模成功后,卒中后抑郁模型大鼠随机分为卒中+抑郁组、卒中+抑郁+苦杏仁苷低剂量组(40 mg·kg^(-1))、卒中+抑郁+苦杏仁苷中剂量组(80 mg·kg^(-1))、卒中+抑郁+苦杏仁苷高剂量组(120 mg·kg^(-1))、卒中+抑郁+氟西汀组(1.8 mg·kg^(-1))。随后按相应剂量给药,连续给药30 d。观察大鼠Zea Longa评分,测定蔗糖水消耗量;H&E染色观察海马组织病理变化;TUNEL染色观察海马组织神经元细胞凋亡;透射电镜观察海马组织超微结构变化;Western blot检测海马组织PSD95、SYN、BDNF及JNK、p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、cleaved-caspase 3、Bcl-2蛋白表达。结果与假手术组比较,卒中组、卒中+抑郁组大鼠Zea Longa神经行为学评分,细胞凋亡百分率,以及海马组织p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、cleaved-caspase 3蛋白表达明显升高(P<0.05);蔗糖水消耗量,海马组织PSD95、SYN、BDNF、Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05)。与卒中+抑郁组比较,卒中+抑郁+苦杏仁苷低剂量组、卒中+抑郁+苦杏仁苷中剂量组、卒中+抑郁+苦杏仁苷高剂量组、卒中+抑郁+氟西汀组大鼠Zea Longa神经行为学评分,细胞凋亡百分率,以及海马组织p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、cleaved-caspase 3蛋白表达明显降低(P<0.05),蔗糖水消耗量、海马组织PSD95、SYN、BDNF、Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05)。与卒中+抑郁+氟西汀组比较,卒中+抑郁+苦杏仁苷高剂量组大鼠Zea Longa神经行为学评分,细胞凋亡百分率,以及海马组织p-JNK、c-Jun、p-c-Jun、cleaved-caspase 3蛋白表达明显降低(P<0.05),海马组织PSD95、SYN、BDNF、Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论苦杏仁苷改善卒中后抑郁样行为,可能与抑制海马JNK信号通路有关。

隐丹参酮通过TLR4/NF-κB/JNK信号通路减轻脂多糖对肺泡上皮细胞炎性损伤的作用研究

目的 本研究旨在探讨隐丹参酮(CTS)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞(MLE-12)的影响。方法 通过CCK-8法检测细胞活力,酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR(q-PCR)检测IL-1β、IL-6、TNF-α含量及基因表达水平,筛选出具有最佳造模效果的LPS浓度;之后通过CCK-8考察CTS对细胞的非毒性剂量范围;将试验分为对照组、LPS组和CTS+LPS组3个组,ELISA检测细胞上清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,qPCR检测细胞内IL-1β、IL-6、TNF-α、Bax和Bcl-2基因表达水平,Western Blot检测Bax、Bcl-2、TLR4、p-p65和p-JNK蛋白水平。结果 与对照组相比,LPS浓度≥1.0μg/mL时细胞活力显著下降(P<0.01);2.0和5.0μg/mL LPS组IL-1β、IL-6和TNF-α含量及基因表达水平显著上升(P<0.05);CTS浓度为0~5.0μM时,细胞活力无显著变化(P>0.05),即药物的无毒范围。与LPS组相比,CTS+LPS组IL-1β、IL-6和TNF-α含量及基因表达水平显著下降(P<0.05);CTS+LPS组Bax蛋白及基因表达水平显著下降(P<0.01)、Bcl-2蛋白及基因表达水平显著上升(P<0.05)。另外,与对照组相比,LPS组TLR4、p-p65、p-JNK蛋白水平显著上升(P<0.01);与LPS组相比,CTS+LPS组TLR4、p-p65、p-JNK蛋白水平显著下降(P<0.01)。结论 CTS可能通过抑制TLR4/NF-κB/JNK信号通路减轻LPS诱导的MLE-12细胞炎性损伤作用。

槲皮素通过介导JNK信号通路抑制线粒体凋亡途径的神经保护作用

目的研究槲皮素(quercetin,Que)通过调节JNK信号通路抑制Aβ25-35引起PC12细胞线粒体损伤的作用机制。方法培养PC12细胞,使用Aβ25-35诱导其构建阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)受损模型,Que、17β-雌二醇(17β-E2)和金雀异黄素(genistein,Gen)进行干预,并设定SP600125(JNK特异性抑制剂)预处理组。Fluo-4 AM染料荧光检测PC12细胞钙离子;Rhodamine123染色液检测PC12细胞线粒体膜电位;Caspase-3活性检测Caspase-3酶活性;免疫荧光检测p-JNK蛋白表达;Western blot法检测ERα、ERβ、p-JNK、JNK、Bcl-W、Bim和Cytochrome C蛋白表达。并使用雌激素受体α/β拮抗剂MPP/PHTPP和SP600125进行干预,探讨Que发挥神经保护介导的分子机制。结果与Aβ25-35组相比,Aβ25-35+Que组能提高线粒体膜电位(P<0.01);降低钙离子浓度(P<0.01)。免疫荧光、Caspase-3检测和Western blot结果显示,与Aβ25-35组相比,Que可以逆转Aβ25-35诱导的ERα表达降低(P<0.01),当加入MPP抑制Que与雌激素受体α结合后,Caspase-3表达增加(P<0.05);Que抑制p-JNK表达(P<0.01);降低促凋亡蛋白Bim的表达(P<0.01),减少Cyt C的释放(P<0.01),促进抗凋亡蛋白Bcl-W的表达(P<0.01),当加入SP600125后,Que对Bcl-W、Bim和Cyt C的作用和SP600125对Aβ25-35诱导PC12细胞线粒体凋亡途径的保护作用机制相同(P<0.01)。结论Que可通过介导JNK信号通路抑制线粒体凋亡,进而发挥神经保护作用。

虎黄烧伤搽剂中白藜芦醇苷对皮肤癌大鼠放疗后细胞凋亡、免疫功能和JNK信号通路的影响

目的探究虎黄烧伤搽剂中白藜芦醇苷对皮肤癌大鼠放疗后细胞凋亡、免疫功能和JNK信号通路的影响。方法将80只SD大鼠分为对照组和模型组,对照组20只,模型组60只;模型组进行大鼠皮肤癌模型建立,并使用60Gy剂量射线照射癌变部位,之后分别用10、20、30 mg/kg的虎黄烧伤搽剂白藜芦醇苷对模型组大鼠进行灌胃处理,分为10 mg/kg组、20 mg/kg组、30 mg/kg组。流式细胞术检测细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠免疫功能;蛋白质印迹(Western blot)检测应激活化蛋白酶(c-Jun N-terminal protein kainse,JNK)、磷酸化的JNK(phosphorized JNK,p-JNK)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bcl-2 associated protein,Bax)表达情况。结果与对照组相比,模型组细胞凋亡率显著降低(P<0.05);Bcl-2蛋白表达显著增加(P<0.05);Bax蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组相比,10、20、30 mg/kg虎黄烧伤搽剂白藜芦醇苷显著增加了细胞凋亡率(P<0.05);显著降低了Bcl-2蛋白表达(P<0.05);显著增加了Bax蛋白表达(P<0.05)。与对照组相比,模型组血清白细胞介素-β(Interleukin-β,IL-β)、白细胞介素-6(Interleukiin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)炎症因子水平显著升高(P<0.05);丙二醛(Malonaldehyde,MDA)、肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)、肌钙蛋白I(TroponinI,TnI)活性显著升高(P<0.05);SOD活性显著降低(P<0.05)。与模型组相比,10、20、30 mg/kg虎黄烧伤搽剂白藜芦醇苷显著降低了血清IL-β、IL-6、TNF-α炎症因子水平(P<0.05);MDA、CK、TnI活性显著降低(P<0.05);超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性显著升高(P<0.05)。与对照组相比,模型组JNK蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05);p-JNK蛋白水平显著升高(P<0.05)。与模型组相比,10、20、30 mg/kg虎黄烧伤搽剂白藜芦醇苷对JNK蛋白水平没有显著影响(P>0.05);但显著降低了p-JNK蛋白水平。结论虎黄烧伤搽剂白藜芦醇苷对放疗后皮肤癌大鼠细胞有抑制作用,提高了凋亡水平,增强了机体免疫力,且机制与JNK信号通路有关。

Tip60-FOXO调节果蝇JNK信号通路介导的细胞凋亡

JNK信号通路参与并调控了一系列重要的生理活动,包括细胞增殖、分化、迁移、凋亡及应激反应等,其失调与发育缺陷和肿瘤等多种重大疾病的发生与发展密切相关。筛选鉴定JNK信号通路的新成员,丰富完善该通路网络,对预防和治疗相关癌症具有重要的科学意义和临床价值。本研究利用模式动物果蝇(Drosophila),结合遗传学、发育生物学、生物化学和分子生物学等手段,探究了Tip60与JNK信号通路的互作关系,并揭示了其调控机制。结果表明,Tip60的乙酰基转移酶功能缺失导致JNK信号通路激活,并能诱发JNK依赖的细胞凋亡;遗传上位性分析实验表明,Tip60作用于JNK蛋白的下游,与转录因子FOXO平行;生化结果证明Tip60可以结合FOXO,并将其乙酰化。在果蝇中引入人Tip60,发现其能够很好地挽救果蝇JNK信号激活造成的细胞凋亡表型,证明Tip60对JNK信号的调控从果蝇到人高度保守。本研究进一步完善了JNK信号网络,揭示了Tip60在JNK依赖的细胞凋亡中的作用及机制,为相关癌症的预防和治疗提供了新的思路和潜在的药物靶点。

清胰汤介导JNK信号通路调控急性胰腺炎小鼠免疫系统对全身炎症反应及抗炎反应的作用机制

目的 探讨清胰汤介导氨基末端蛋白激酶(c-jun N-terminal kinases, JNK)信号通路调控急性胰腺炎(Acute pancreatitis, AP)小鼠免疫系统对全身炎症反应及抗炎反应的作用机制。方法 将所有实验小鼠随机将其分成3组,每组30只。A组为对照组,小鼠在对应的时间点注射相同量的生理盐水;B组为重症急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis, SAP)组,小鼠实施腹腔雨蛙素注射,以制作AP模型;C组为清胰汤相应处理的SAP组,在最后一次雨蛙素注射后1、12、24及36h分别实施清胰汤灌胃方式给药;各组在制模后分3、6和12 h各取10只小鼠,腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后剖腹,取胰腺组织肺组织,对胰腺组织和肺组织进行镜下病理评分,检测肺组织磷酸化氨基末端蛋白激酶(Phosphorylated c-jun N-terminal kinases, p-JNK)蛋白的含量以及炎性因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素1β(Interleukin-1 β,IL-1β)水平。结果 3组胰腺组织、肺组织镜下病理评分比较差异存在统计学意义(P<0.05),且B组胰腺组织、肺组织镜下病理评分高于A组、C组,B组胰腺、肺部局部病变持续加重,C组与同时段B组比较,胰腺、肺部病变明显改善;WesternBlot检测p-JNK蛋白浓度水平在肺组织中的表达结果可以发现:A组小鼠的肺组织内的p-JNK蛋白仅有少量表达,B组和同时间的A组相对比,肺组织内的p-JNK浓度水平升高明显(P<0.05),C组和同时间的B组相对比,肺组织内的p-JNK浓度水平下降明显(P<0.05);酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测结果发现,B组小鼠肺组织中的TNF-α和IL-1β表达水平明显高于同时段A组、B组(P<0.05)。结论 可以确认的是针对SAP小鼠模型发生的肺损伤,清胰汤具有较好的治疗效果。早期的SAP肺损伤即会激活JNK的信号通路,转录相关的炎性因子。故清胰汤应争取早期使用,以阻止肺组织持续受损。

基于JNK信号通路探讨自噬、胰岛素抵抗在非酒精性脂肪性肝病中的发病机制

目的:探讨基于JNK信号通路自噬、胰岛素抵抗在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的发病机制。方法:采用高脂饮食喂养SD大鼠建立NAFLD模型,分为正常饮食组(ND组)、高脂饮食组(HFD组)、JNK抑制剂SP600125治疗组(SP600125组)、磷酸盐缓冲盐水PBS对照组(Control组)。ND组喂食正常饲料,HFD组、SP600125组和Control组喂食高脂饲料20周,SP600125组大鼠腹腔注射SP600125、Control组大鼠注射磷酸盐缓冲盐水PBS,每天1次,再延长8周。检测大鼠的胰岛素抵抗、C-Jun N末端激酶(JNK)信号通路及自噬相关蛋白的表达。结果:与ND组大鼠对比HFD组血糖、游离脂肪酸及胰岛素水平升高(均P<0.05),HFD组磷酸化JNK1(p-JNK1)蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。自噬相关蛋白Beclin-1(Beclin-1)、自噬相关蛋白LC-3Ⅱ(LC-3Ⅱ)、自噬相关基因3(Atg 3)和自噬相关基因5(Atg 5)表达水平升高(均P<0.05)。HFD组的胰岛素受体(IR)β亚基、IR底物-1和蛋白激酶B的磷酸化(p-IRβ、p-IRS-1和p-Akt)表达水平升高(均P<0.05)。与Control组对比,SP600125组的磷酸化JNK1(p-JNK1)蛋白表达水平显著下降(P<0.01),SP600125降低了自噬相关蛋白LC-3Ⅱ、Beclin-1、Atg 3和Atg 5的表达水平(均P<0.01),以及p-IRβ、p-IRS-1和p-Akt的表达水平(均P<0.01)。SP600125组游离脂肪酸及胰岛素水平下降(均P<0.01)。结论:抑制JNK可抑制自噬、减轻胰岛素抵抗,JNK抑制可能为NAFLD提供一种新的治疗策略。

散结片对肝癌大鼠巨噬细胞极化及MAPK/JNK信号通路的作用机制

目的 :探究散结片对肝癌大鼠巨噬细胞极化及MAPK/JNK信号通路的作用机制。方法 :选取SPF级SD雄性裸鼠,随机分为正常组、模型组、索拉非尼组、散结片组,记录大鼠死亡数量并绘制生存曲线,H-E染色检测肝组织病理形态,免疫组织化学显色检测肝组织巨噬细细胞特异型标志物的蛋白表达,免疫印迹法检测肝组织MAPK/JNK信号通路相关蛋白表达。结果 :与正常组比较,模型组大鼠死亡数量、肝组织CD163、p38MAPK、JNK蛋白表达明显增多,生存曲线、肝组织中CD11c蛋白表达明显降低;与模型组比较,索拉非尼组、散结片组死亡数量、肿瘤质量及体积、肝组织CD163、p38MAPK、JNK蛋白表达显著减少,生存曲线、肝组织中CD11c蛋白表达显著升高,且散结片组比索拉非尼组变化显著;而抑制剂组与散结片组肝织中p38MAPK、JNK蛋白表达相比差异无统计学意义,联合组比抑制剂组明显降低。结论 :散结片可能是通过抑制MAPK/JNK信号通路,抑制巨噬细胞向M2型极化,促进其向M1型极化,进而抑制肝癌大鼠肿瘤生长。

槲皮素通过PTEN/PI3K/JNK信号通路减轻小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症

目的:探讨槲皮素(quercetin,Que)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠巨噬细胞炎症模型的抗炎效应及其与第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)信号通路联合抗炎的效果和机制。方法:以小鼠巨噬细胞RAW264.7为研究对象。采用CCK-8实验确认0~100μmol/L Que的安全实验浓度。将细胞分为对照组、LPS炎症细胞模型组(LPS组)和不同浓度的Que处理LPS炎症细胞模型组(Que组)。Griess法检测各组细胞内一氧化氮(nitric oxide,NO)的分泌;ELISA法检测各组细胞上清液中白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达;RT-qPCR、Western blot和免疫荧光法检测Que对各组细胞内PTEN/PI3K和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路蛋白的调节作用;利用PI3K抑制剂LY294002及PTEN外源过表达质粒探索Que与PI3K/PTEN的联合抗炎作用。结果:(1)对比LPS组,Que呈浓度依赖性地降低RAW264.7细胞内NO的分泌(P<0.05);(2)Que能显著降低LPS引起的iNOS、IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA表达(P<0.05);(3)与LPS组相比,Que组PTEN蛋白表达显著升高(P<0.05),p-PI3K和p-AKT及p-JNK的蛋白水平显著下降(P<0.05);(4)LY294002的作用证实Que在RAW264.7细胞内抑制炎症反应与调控PI3K信号通路有关;(5)PTEN过表达实验证实PTEN可增强Que在RAW264.7细胞内的抗炎作用。结论:(1)Que在体外培养的小鼠RAW264.7细胞内具有抗炎活性,其机制与活化PTEN的表达、阻断PI3K/AKT及JNK信号通路有关。(2)PTEN可增强Que在RAW264.7细胞内的抗炎能力。

延龄草总皂苷通过调控GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路抑制内质网应激而减轻PSCI大鼠海马神经元损伤

目的:探讨延龄草总皂苷(TST)对卒中后认知障碍(PSCI)大鼠海马神经元的保护作用及分子机制。方法:将采用改良Zea Longa线栓法造模成功的大鼠随机分为模型(model)组、TST(100 mg/kg)组和盐酸多奈哌齐(DON;0.45 mg/kg)组,另设假手术(sham)组,每组10只,连续给药4周。采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;TTC染色检测大鼠脑梗死体积变化,HE、Nissl和TUNEL染色观察大鼠海马组织神经元病理变化;免疫组化及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇需求酶1α(IRE1α)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、胱天蛋白酶12(caspase-12)、Bax和Bcl-2的蛋白水平。结果:与sham组相比,model组大鼠逃避潜伏期显著延长,穿越平台次数及目标象限停留时间显著减少(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著增大,神经元尼氏小体数量显著减少,凋亡细胞显著增多;海马组织中GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.01)。与model组比较,TST组及DON组大鼠逃避潜伏期显著缩短,穿越平台次数及目标象限停留时间显著增加(P<0.01);大鼠脑梗死体积显著缩小,神经元尼氏小体数量显著增多,凋亡细胞显著减少;GRP78、IRE1α、TRAF2、p-JNK、caspase-12和Bax蛋白水平显著降低,Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论:TST对PSCI大鼠海马神经元具有保护作用,其机制可能与减轻内质网应激、减少神经元凋亡并抑制GRP78/IRE1α/TRAF2/JNK信号通路有关。

二氢杨梅素抑制JNK信号减少T2DM大鼠海马神经细胞凋亡、Aβ和p-Tau蛋白水平

海马神经元是中枢神经系统的重要细胞之一,与认知功能有密切的联系[1]。二型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠海马损伤与其海马Tau蛋白磷酸化和Aβ沉积有关[2]。二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)是一种黄酮类物质,具有抗炎、抗氧化等作用[3]。研究显示:减少海马神经细胞凋亡的重要机制之一是抑制JNK信号[4]。本实验通过高糖高脂和低浓度STZ喂养SD大鼠复制T2DM大鼠模型,探讨DHM通过抑制JNK信号降低T2DM大鼠海马神经细胞凋亡、Aβ和p-Tau水平。

miR-146a调控JNK信号通路对高氧下肺泡上皮细胞氧化应激和细胞凋亡的影响

目的研究微小RNA-146a(miR-146a)是否通过调控c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路影响高氧下肺泡上皮细胞的氧化应激和细胞凋亡。方法将肺泡上皮细胞分为Con组(对照),Model组(模型),Model+miR-NC组(转染miR-NC+高氧),Model+miR-146a组(转染miR-146a mimic+高氧),Model+miR-146a+Anisomycin组(转染miR-146a mimic++JNK信号通路激活剂Anisomycin+高氧)。试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、锰(Mn)SOD活性和丙二醛(MDA)含量,膜联蛋白(Annexin V)V-FITC/碘化丙啶(PI)双重染色法评估细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blot)分析活化的(Cleaved)-天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase3)、pro-caspase3、磷酸化JNK(p-JNK)表达,逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-146a表达。结果与Con组相比,Model组肺泡上皮细胞中SOD、MnSOD活性、pro-caspase3蛋白、miR-146a的表达水平降低,MDA含量、凋亡率、Cleaved-caspase3、p-JNK蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与Model组或Model+miR-NC组相比,Model+miR-146a组肺泡上皮细胞中SOD、MnSOD活性、pro-caspase3蛋白、miR-146a表达水平升高,MDA含量、凋亡率、Cleaved-caspase3、p-JNK蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与Model+miR-146a组相比,Model+miR-146a+Anisomycin组肺泡上皮细胞的SOD、MnSOD活性、pro-caspase3蛋白表达水平降低,MDA含量、凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-146a通过激活JNK信号通路,减轻高氧下肺泡上皮细胞的氧化应激,并抑制细胞的凋亡。

扁蒴藤素调节ROS/ASK1/JNK信号通路对二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌的抑制作用

目的探讨扁蒴藤素(Pris)通过调节ROS/ASK1/JNK信号通路对二乙基亚硝胺(DEN)诱导大鼠肝细胞癌(HCC)的影响。方法随机取6只SD大鼠作为对照组,其余大鼠采用注射DEN的方式构建HCC大鼠模型。将造模成功的大鼠随机平分为HCC组、Pris组(0.8 mg/kg Pris)、Vaccarin组(100 mg/kg ROS/ASK1/JNK信号通路抑制剂Vaccarin)、Pris+Vaccarin组(0.8 mg/kg Pris+100 mg/kg Vaccarin),连续注射1周,每组均6只大鼠。HCC组和对照组注射等量生理盐水。测量体质量、肝质量以及肝脏体质量比;ELISA法检测肝功能、炎性因子、抗氧化指标、ROS水平;HE染色检测肝脏病理变化;Western blot检测凋亡标志物(Bax、Bcl-2和cleaved-Caspase-3)以及ROS/ASK1/JNK信号通路蛋白表达。结果对照组大鼠表现出正常的肝脏组织结构;HCC组可以观察到部分肝细胞坏死,出现局灶性结节性增生现象,HCC组较对照组体质量、Bax、cleaved-Caspase-3、ROS、p-ASK1/ASK1、p-JNK/JNK水平显著下降(P<0.05),肝脏质量、肝脏体质量比、ALT、AST、ALP、LDH含量、IL-6、TNF-α、CCL-2含量、SOD、GR、GPx、CAT含量、Bcl-2蛋白水平显著增加(P<0.05);Pris组改善了肝细胞坏死以及局灶性结节性增生现象,Pris组较HCC组体质量以及Bax、cleaved-Caspase-3、ROS、p-ASK1/ASK1、p-JNK/JNK水平显著升高(P<0.05),肝脏质量、肝脏体质量比、ALT、AST、ALP、LDH含量、IL-6、TNF-α、CCL-2含量、SOD、GR、GPx、CAT含量、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),而Vaccarin组趋势相反;Vaccarin逆转了Pris对HCC大鼠的抗癌效果。结论Pris可能通过激活ROS/ASK1/JNK信号通路对HCC大鼠起到一定的抑癌作用。

DLEU1通过调控p38/JNK信号通路促进高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖和血管重塑的实验研究

目的:探讨淋巴细胞白血病缺失基因1(DLEU1)促进高血压大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和血管重塑的机制及相关信号通路。方法:将12只DLEU1转基因大鼠(DTRs)随机分为DTRs组、p38组、JNK组,每组4只,分别经腹腔注射二甲基亚砜溶液、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)特异性抑制剂SB203580、JNK抑制剂SP600125,并以Wistar大鼠(4只)为对照组,采用苏木精-伊红(HE)染色确定主动脉、心脏和肾脏的形态结构。通过转染DLEU1过表达质粒,构建DLEU1过表达的VSMCs,同时给予SB203580、SP600125干预,通过溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)实验、细胞周期及迁移实验比较不同干预细胞的生物活性的差异。结果:DTR组大鼠血管腔面积显著减小、中膜增厚,肾组织中可见小动脉增生,血管壁和肾小球增厚,p38及JNK抑制剂可减轻DLEU1介导的血管中膜增厚的效应,增加中膜/管腔面积比,肾脏小动脉的病理改变也有所改善。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测显示,转染过表达DLEU1质粒后,VSMCs中DLEU1的相对表达量显著提高(P<0.05),表明细胞模型构建成功。蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测发现,磷酸化p38和JNK蛋白的表达上调。DLEU1过表达导致细胞增殖率显著增加。经p38和JNK抑制剂处理后,细胞增殖率均有所下降(P<0.05)。p38和JNK抑制剂可显著阻断细胞周期,处理后,G0/G1期细胞比例均有所上升。过表达DLEU1可显著提高细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的蛋白表达水平,而阻断p38和JNK可部分消除DLEU1对MMP-2和MMP-9蛋白表达的促进作用。Western Blot检测显示,DLEU1过表达细胞骨桥蛋白(OPN)蛋白表达水平明显上调,平滑肌22α(SM-22α)蛋白表达显著下调,经p38抑制剂和JNK抑制剂干预后,OPN蛋白表达水平明显降低,SM-22α蛋白表达水平上调。结论:高血压时DLEU1介导的VSMCs增殖和表型改变需要p38/JNK通路介导。

JNK信号通路与细胞凋亡关系的研究进展

c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal ki-nase,JNK)信号通路是近20年来发现的与细胞分化、细胞凋亡、应激反应以及多种人类疾病的发生和发展关系非常密切的通路之一,其生物化学功能和对细胞生理、病理情况下的调节作用一直被国内外学者所关注。近年来,研究发现JNK信号通路在调控细胞凋亡中发挥重要作用,通过调节JNK信号通路有望成为治疗细胞凋亡引起的疾病的重要靶点。本文就其生物学功能及其与细胞凋亡关系作一阐述。

EB病毒潜伏膜蛋白1通过TRAF/TRADD激活JNK信号途径

为了探讨在鼻咽癌细胞中EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)激活c Jun氨基端激酶 (JNK)信号途径的分子机制 ,利用可调控表达LMP1的鼻咽癌细胞系L7,蛋白质印迹检测 ,发现LMP1能够促进JNK的活化 ;利用稳定表达LMP1的鼻咽癌细胞系HNE2 LMP1及其三种突变体HNE2 LMP1ΔCTAR 1、HNE2 LMP1ΔCTAR2、HNE2 LMP1ΔCTAR 1,2及LMP1阴性的HNE2 为材料 ,采用蛋白质印迹和报告基因法分析JNK和活化蛋白 1(AP1)活化情况 ,结果显示HNE2 LMP1和HNE2 LMP1ΔCTAR1中磷酸化JNK蛋白表达量和AP1活性都无显著差异 ,而与HNE2 LMP1ΔCTAR2、HNE2 LMP1ΔCTAR1,2、阴性对照HNE2及空白载体转染细胞的JNK蛋白表达和AP1活性具有显著差异 ;进一步比较转染TRAF、TRADD显性负性突变体鼻咽癌细胞系HNE2 LMP1中磷酸化的JNK量和AP1活性 ,结果显示 :TRAF DN和TRADD DN的导入使活化的JNK蛋白和AP 1活性显著降低 ,二者间无显著差异 ,提示TRAF和TRADD可能参与了LMP1对JNK和AP 1的活化 .以上结果提示在鼻咽癌细胞系中LMP1功能结构域CTAR2通过结合TRAF/TRADD激活JNK从而活化重要的转录因子AP1.

左归丸含药血清通过JNK信号通路诱导MC3T3成骨细胞分化的研究

目的探讨JNK信号通路对左归丸(熟地、菟丝子、川牛膝、龟甲胶、鹿甲胶、山药、山茱萸、枸杞子)含药血清干预MC3T3成骨细胞分化的影响。方法选用JNK特异抑制剂SP600125,制备大鼠含药血清,实验分为空白对照组、SP600125组、左归丸组、左归丸加SP600125组、倍美力组、倍美力加SP600125组。孵育48 h后,采用PNPP法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,采用Western blot法分析ALP蛋白表达水平;孵育7 d,采用改良钙钴染色法检测ALP活性;孵育14 d,采用茜素红染色法测定矿化沉积情况。结果与空白对照组比较,左归丸组显著促进MC3T3成骨细胞分化,明显上调ALP蛋白表达水平(P<0.01);与左归丸组比较,左归丸加SP600125组孵育48 h对ALP活性及蛋白影响不显著,但显著对抗左归丸含药血清对孵育7 d的ALP活性和孵育14 d的矿化结节的促进作用(P<0.01)。结论左归丸含药血清可能部分通过JNK信号通路干预MC3T3成骨细胞分化,在分化末期尤其依赖JNK通路。

let-7a通过抑制MAP4K3/MKK4/JNK信号通路减少脑出血大鼠神经元调亡

目的:研究微小RNA let-7a对脑出血(ICH)大鼠神经元凋亡的影响及其分子机制。方法:从48只健康SD大鼠中随机选取8只作为假手术组,将2μLⅦ型胶原酶注入其余大鼠苍白球以构建ICH模型。将造模后的大鼠随机分为模型(2μL生理盐水)组、let-7a激动剂(agomir)组、阴性对照(NC)agomir组、let-7a拮抗剂(antagomir)组和NC antagomir组,每组8只,在侧脑室注射相应药物。7 d后进行神经功能评分;HE染色观察病理损伤;RT-qPCR和Western blot检测相关蛋白表达水平;TUNEL染色检测神经元凋亡情况;利用生物信息学软件预测let-7a与丝裂原活化的蛋白激酶激酶激酶激酶3(MAP4K3)的靶向关系,并在HEK293T细胞中用双萤光素酶报告基因实验进一步验证。结果:动物实验中,let-7a过表达时,神经功能评分降低,病理损伤减轻,胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)低表达,神经元凋亡减少,cleaved caspase-3和cleaved PARP低表达(P<0. 05)。细胞实验中,MAP4K3是let-7a的靶基因之一,且两者为负向调控;let-7a过表达抑制MAP4K3/MKK4/JNK的表达。结论:let-7a通过抑制MAP4K3/MKK4/JNK信号通路,减少ICH大鼠神经元凋亡。

JNK信号通路对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的 :初步探讨JNK信号通路调控乙醛刺激的大鼠肝星状细胞 (HSC)增殖的分子机制。方法 :采用细胞培养 ,用c Jun氨基末端激酶 (c JunN terminalkinase ,JNK)特异性阻断剂 (SP60 0 12 5 )对乙醛刺激的HSC进行处理 ,以MTT比色法、Westernblot法检测细胞增殖和磷酸化JNK(p JNK)水平的变化 ,观察JNK通路对HSC增殖影响。 结果 :乙醛刺激后HSC增殖明显 ,同时JNK活性增强 ;使用SP60 0 12 5 (2 0、60ng/ml)后 ,明显抑制HSC增殖 (P <0 0 5 ) ,加大SP60 0 12 5浓度到 10 0ng/ml后 ,抑制作用更明显 (P <0 0 1) ;而p JNK水平也呈相应的降低 (P <0 0 5 )。 结论 :JNK活性变化与乙醛刺激的大鼠HSC的增殖具有相关性 ,提示JNK可能是调节HSC增殖的重要信号通路之一。

高糖毒性通过JNK信号通路对胰岛β细胞系INS-1细胞活性和凋亡的影响

目的:研究高糖毒性通过JNK信号分子对INS-1细胞功能影响的分子机制。方法:在5.6mmol/L(5.6G)、11.2mmol/L(11.2G)、33.3mmol/L(33.3G)葡萄糖浓度下加入或者不加IGF-1培养INS-1细胞,观察细胞的活性和凋亡,并通过添加或不添加JNK抑制剂后,观察JNK信号分子和IRS的丝氨酸磷酸化改变。结果:INS-1细胞活性随暴露高糖环境中的葡萄糖浓度和时间增加而下降,IGF-1有增加细胞活性的作用,但其作用随糖浓度增加而受抑制。流式细胞术检测3组细胞总的凋亡率分别为11.3%、12.7%、28.2%,33.3G组凋亡发生率是5.6G组的2.49倍(P<0.01)。高糖激活JNK和IRS的丝氨酸磷酸化,在33.3G组2种蛋白的磷酸化水平分别是11.2G组的3.33倍(P<0.01)和1.17倍(P<0.01),加入IGF-1以后,进一步抑制它们的丝氨酸磷酸化水平。添加JNK抑制剂SP600125后,可以完全抑制JNK的激活,但仅部分抑制IRS的丝氨酸磷酸化水平,并且使33.3mmol/L葡萄糖培养下细胞活性增加8%(P<0.05),凋亡减少49%(P<0.01)。结论:高糖通过激活JNK信号分子抑制IRS信号系统,从而抑制胰岛β细胞活性,促进凋亡发生。阻断JNK信号分子可以通过抑制IRS的丝氨酸磷酸化而减少细胞凋亡,改善胰岛β细胞功能。