JO2-L-93-2、93-4 100千瓦攻关验证小结

根据一机部的要求,我们组织省内有关电机厂对JO2-L-93-2、93-4 100千瓦两个规格进行攻关,于75年5月完成了样机试制和验证工作,各项性能指标,达到部标JB742—66技术条件的要求,工艺性良好。兹将攻关设计验证中的情况汇报如下。

miR-93-5p通过PI3K/AKT通路调控HepG2细胞自噬

目的:探究miR-93-5p对HepG2细胞增殖、自噬、葡萄糖消耗以及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路的影响。方法:高浓度葡萄糖诱导构建胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,设计合成miR-93-5p inhibitor和NC,结合自噬抑制剂3-MA,将细胞分为Control组、IR组、IR+inhibitor NC组、IR+inhibitor组、IR+3-MA+inhibitor组。CCK8法检测各组细胞增殖活力,试剂盒检测各组细胞葡萄糖消耗量和细胞糖原合成情况,Western-Blot法检测细胞自噬基因微管相关蛋白1轻链3(autophagy genes microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-I、LC3-II、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)蛋白、PI3K/AKT通路蛋白(AKT、p-AKT)的表达。结果:与对照组相比,IR组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达下降(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均增加(P<0.01)。与IR组和IR+inhibitor NC组相比,IR+inhibitor组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达增加(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均下降(P<0.01)。与IR+inhibitor组相比,3-MA能逆转miR-93-5p inhibitor的作用。结论:miR-93-5p通过PI3K/AKT通路促进HepG2细胞自噬,进而抑制胰岛素抵抗,缓解糖尿病造成的机体损伤。

病毒性脑炎患儿脑脊液和血清中SIL-2R、eNOS、CD93水平与疾病进展及预后的关系

目的探究病毒性脑炎(viral encephalitis,VE)患儿脑脊液和血清中可溶性白细胞介素-2受体(soluble interleukin-2 receptor,SIL-2R)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、白细胞分化抗原93(cluster of differentiation 93,CD93)水平与疾病进展及预后的关系。方法前瞻性选取2021年1月—2024年1月收治的VE患儿102例作为VE组,根据疾病进展分为轻症亚组(64例)和重症亚组(38例),根据预后情况分为预后良好亚组(29例)和预后不良亚组(73例);另选取同期经检查排除VE的其他中枢神经系统疾病患儿102例作为对照组。分析VE患儿预后不良的影响因素,以及脑脊液和血清中SIL-2R、eNOS、CD93对VE患儿预后不良的预测价值。结果VE组、重症亚组、预后不良亚组脑脊液和血清SIL-2R、eNOS、CD93水平均显著升高(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,脑脊液和血清SIL-2R、eNOS、CD93水平高为VE患儿预后不良的危险因素(P<0.05)。受试者操作特征曲线分析显示,脑脊液SIL-2R、eNOS、CD93三者联合预测VE患儿预后不良的价值优于各指标单独预测(P<0.05);血清SIL-2R、eNOS、CD93三者联合预测VE患儿预后不良的价值优于各指标单独预测(P<0.05)。结论VE患儿脑脊液和血清中SIL-2R、eNOS、CD93水平均显著升高,且与疾病进展及预后有关。

LncRNA FGD5-AS1调节miR-93-5p/BMP2轴促进人骨髓间充质干细胞成骨分化

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1调节微小RNA miR-93-5p/骨形态发生蛋白-2(BMP2)轴对人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)成骨分化的影响。方法取对数增殖期的hBM-MSCs,分别检测成骨分化前、后lncRNA FGD5-AS1、miR-93-5p、BMP2 mRNA表达水平;将细胞分别转染或共转染pcDNA FGD5-AS1、miR-93-5p inhibitor、miR-93-5p mimics及相应阴性对照,分组为pcDNA NC组、pcDNA FGD5-AS1组、inhibitor NC组、miR-93-5p inhibitor组、pcDNA FGD5-AS1+mimics NC组、pcDNA FGD5-AS1+miR-93-5p mimics组,取未转染细胞作为空白组;CCK-8法检测细胞增殖;碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测其活性;茜素红染色鉴定细胞矿化结节形成;Western blot检测BMP2及成骨相关标志物--骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、成骨相关转录因子(OSX)水平;双荧光素酶报告基因实验分别验证miR-93-5p与FGD5-AS1、BMP2的靶向关系。结果miR-93-5p分别与FGD5-AS1、BMP2存在靶向关系。与分化前相比,hBM-MSCs成骨分化后lncRNA FGD5-AS1、BMP2 mRNA表达显著增加,miR-93-5p表达显著下降(P<0.05);与pcDNA NC组相比,pcDNA FGD5-AS1组FGD5-AS1表达显著增加(P<0.05),表明转染成功。后续实验发现矿化结节产生、细胞增殖、ALP活性及BMP2、OCN、OPN、OSX表达均显著增加(P<0.05);与inhibitor NC组相比,miR-93-5p inhibitor组miR-93-5p表达降低,表明转染成功。后续实验发现矿化结节产生、细胞增殖、ALP活性及BMP2、OCN、OPN、OSX表达均显著增加(P<0.05);miR-93-5p过表达可抑制FGD5-AS1对细胞成骨分化的促进作用(P<0.05)。结论上调FGD5-AS1可以促进细胞成骨分化,可能与miR-93-5p/BMP2轴有关。

呼吸道合胞病毒下呼吸道感染患儿外周血miR-93-5p表达与Th1/Th2平衡的关系

目的 呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus,RSV)下呼吸道感染患儿外周血微小RNA-93-5p表达与辅助型T细胞1/2(Th1/Th2)平衡的关系。方法 选取儿科建档就诊的RSV下呼吸道感染患儿58例为RSV组,同时选取年龄性别匹配的健康儿童60例为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测血清miR-93-5p水平;流式细胞仪计数Th1、Th2百分率,计算Th1/Th2表达,酶联免疫吸附法检测白细胞介素2(interleukin 2,IL-2)、IL-4、IL-10及干扰素γ(interferon γ,IFN-γ)水平,Spearman分析miR-93-5p与Th1/Th2的关系;Logistics回归分析影响RSV下呼吸道感染发生的危险因素。结果 RSV组miR-93-5p水平高于对照组(P<0.05);RSV组Th1、Th1/Th2低于对照组(P<0.05),RSV组Th2高于对照组;RSV组IL-2、IFN-γ水平低于对照组(P<0.05);RSV组IL-4、IL-10水平高于对照组(P<0.05);RSV组miR-93-5p与IL-2、IFN-γ、Th1/Th2比值呈负相关性(P<0.05);与IL-4、IL-10呈正相关性(P<0.05);Logistics回归分析显示高水平miR-93-5p与低水平的Th1/Th2是影响RSV下呼吸道感染的危险因素(P<0.05)。结论 RSV下呼吸道感染患儿外周血miR-93-5p呈高表达,其高表达可能与Th1/Th2平衡密切相关。

膜分离法提纯2-酮基-L-古龙酸的研究

采用超滤膜分离新设备—— Sun- flo超滤膜分离系统一步截留不经预处理的维生素 C发酵液中的菌丝体、蛋白质和悬浮的固体颗粒等杂质 ,滤液质量高 ,过滤收率高达 99.2 4 % .在超滤提纯古龙酸的过程中 ,系统的膜通量可达 99.4 9LMH,且膜通量随超滤时间的延长衰减得极为缓慢 ,表明 Sun- flo超滤膜分离系统完全能克服发酵液不经预处理产生严重膜堵塞的现象 ,大大简化了操作工艺流程 ,降低了生产成本 ,将该系统应用于工业生产 ,在技术上完全可行 。

山梨糖发酵产生2-酮基-L-古龙酸氮源代谢规律

对山梨糖发酵产生2-酮基-L-古龙酸氮源代谢规律进行了初步研究。通过对这一混合发酵体系蛋白和尿素代谢的研究表明,氮源代谢与单一菌体发酵相比有其特殊性,主要表现在尿素的加入有两个作用,即作为生理碱性物质调节体系pH和为菌体代谢提供部分氮源,而体系的蛋白含量随发酵时间的延续不断增加,其增加的原因是巨大芽孢杆菌由营养体转变成芽孢所致,这是该发酵体系的特点。本文还对该发酵体系各种氨基酸变化规律进行了讨论,将一共17种氨基酸按其变化规律分成了三类,较好地解释了各种氨基酸的变化情况,为进一步深入研究该体系的动力学特性提供了数据基础。

液质联用法同时测定烤烟型卷烟中的1-脱氧-1-L-脯氨酸-D-果糖和2-脱氧-2-L-脯氨酸-D-葡萄糖

1-脱氧-1-L-脯氨酸-D-果糖（Pro-Fru）和2-脱氧-2-L-脯氨酸-D-葡萄糖（Pro-Glu）是烤烟中重要的美拉德反应关键中间体（Amadori和Heyns化合物），对烟草香味和外观品质有重要影响。为实现烟草中这两种结构相似化合物的同时分析，建立了一种利用高效液相色谱-三重四极杆质谱（HPLC-MS/MS）测定烤烟型卷烟烟丝样品中Pro-Fru和Pro-Glu含量（质量分数）的方法。采用正离子多反应监测（MRM）模式，根据质谱碎裂机理分析选择各自的特征离子对（m/z）128/278和182/278作为定量离子进行分析，对10个烤烟型卷烟样品进行了测定。结果表明：方法加标回收率93.19%～101.46%，相对标准偏差（RSD）3.53%～8.54%，检测限0.12 ng/mL；10个烤烟型卷烟样品中Pro-Fru和Pro-Glu的含量分别为6.25～11.33和1.15～1.96 mg/g。该方法适用于烤烟型卷烟中Pro-Fru和Pro-Glu含量的同时、准确测定。

2-酮基-L-古龙酸产生菌原生质体的属间融合

用配对法筛选得一株氧化葡萄糖酸杆菌 (Gluconobacter oxydans) 10 - 3的优良伴生菌短小芽孢杆菌 (Bacilluspumilus) 970 0 2。混合菌发酵产生 2 -酮基 - L-古龙酸 ,山梨糖的转化率达 90 %左右。两菌分别经诱变处理 ,获得耐利福平 B.pumilus 970 0 2 - 1- 6 Rifr和耐红霉素 G.oxydans 10 - 3- 2 0 Emr遗传标记菌株。并确定 B.pumilus 970 0 2 - 1- 6Rifr菌原生质体形成和再生最佳条件。初步尝试两菌属间原生质体融合。

5-氟尿嘧啶-聚[(2-羟乙基)-L-谷酰胺]的合成及释药研究

【目的】将小分子的抗癌药 5 氟尿嘧啶键合在具有水溶性良好、可生物降解的高分子材料上 ,得到低毒、良好生物相容性和缓释作用的高分子前药。【方法】以聚谷氨酸苄酯为原料 ,用乙醇胺进行胺解得水溶性的、可生物降解的聚 [( 2 羟乙基 ) L 谷酰胺 ] ;用光气 /甲苯液活化 5 氟尿嘧啶 ,将其以共价键形式键合在高分子上 ,得 5 氟尿嘧啶的高分子前药。【结果】用红外光谱、紫外光谱、核磁共振谱及差热分析对其结构进行表征 ,用紫外光谱测定其药物含量 ,载药高分子的接药率约为 38 4% ,在磷酸盐介质 ( pH =7 2 )中 2 4h和 6周药物累积释放量分别占总载药量的 2 7 2 6 %和 5 7 5 3 %。【结论】 5 氟尿嘧啶以碳酸酯形式键合在聚 [( 2 羟乙基 ) L 谷酰胺 ]之上 ,体外释药实验表现出一定的缓释效果。

S-(2-^(18) F-氟代乙基)-L-蛋氨酸的合成及其放射药理活性

目的 研制肿瘤氨基酸代谢显像剂S (2 1 8F 氟代乙基 ) L 蛋氨酸 (1 8FEMET) ,评价其区分炎症和肿瘤的价值。方法 采用亲核取代反应 ,由两步法合成1 8FEMET。测定正常小鼠、肿瘤及炎症小鼠体内FEMET生物分布 ,对模型小鼠进行1 8FEMETPET显像 ,并与 2 1 8F 2 脱氧 D 葡萄糖 (FDG)和O (2 1 8F 氟代乙基 ) L 酪氨酸 (FET)比较。结果 1 8FEMET手工合成时间约为 70min ,未校正总放化产率为 15 %～ 2 5 % ,放化纯度大于 95 %。正常小鼠中胰腺、肾脏、结肠、肝和心脏等脏器摄取1 8FEMET较高 ,且放射性滞留时间较长 ,血液和脑摄取1 8FEMET较低。肿瘤细胞可高度摄取1 8FEMET ,FDG和FET ,炎症组织也可高度摄取FDG ,但几乎不摄取1 8FEMET和FET。结论 1 8FEMET制备简便 ,能够区分肿瘤和炎症 ,可望成为一种有前景的特异性肿瘤氨基酸代谢PET显像剂。

MgSO4对2-酮基-L-古龙酸发酵影响的实验研究

通过摇瓶实验和2 L搅拌釜式发酵罐实验,研究了发酵培养基中初始MgSO4浓度对维生素C前体2-酮基-L-古龙酸(2-KGA)发酵过程的影响.实验结果表明:2-KGA发酵的最佳MgSO4初始浓度w0≈0.084%,在这一浓度下,产物2-KGA的得率和容积生产率均达到峰值;MgSO4初始浓度过高将降低产物得率和容积生产率.

几种外源物质对氧化葡萄糖酸杆菌生长及产2-酮基-L-古龙酸的影响

通过在发酵培养基中添加不同的外源营养物质及巨大芽孢杆菌的培养上清液,研究其对氧化葡萄糖酸杆菌生长及产2-酮基-L-古龙酸(2-KGA)的影响。结果表明,添加适量的谷氨酸单钠(MSG)、腺苷三磷酸(ATP)、含氮碱基、二氢叶酸和巨大芽孢杆菌的培养上清液都能够促进菌体增殖并提高2-KGA产量,而且2-KGA产量与生物量呈正相关。巨大芽孢杆菌的培养上清液促进菌体生长和产2-KGA的作用远大于以上各种外源营养物质。添加培养36 h的巨大芽孢杆菌胞外液后,氧化葡萄糖酸杆菌的菌落数和2-KGA产量分别是对照的13.39倍和8.81倍,而添加外源营养物质中促进作用最大的二氢叶酸后仅为对照的4.12倍和2.97倍。这表明,2-KGA产量的增加主要是通过促进氧化葡萄糖酸杆菌的菌体增殖实现,巨大芽孢杆菌的培养上清液促进氧化葡萄糖酸杆菌生长和产酸的机制不同于其他外源营养物质,可能是通过某种生物活性物质提高氧化葡萄糖酸杆菌菌群密度来实现。

2-脱氧-L-核糖的合成方法研究概况

综述了2-脱氧-L-核糖的合成方法概况:(1)五碳糖的还原脱氧;(2)六碳糖的降解脱氧;(3)α,β-不饱和内酯的非对映选择性加成;(4)高立体选择性的小分子间缩合;(5)不对称环氧化.并重点讨论了五碳糖还原脱氧合成法的机理和改进的方法.

微生物混合培养从D山梨醇产生维生素C前体——2-酮基-L-古龙酸

氧化葡萄糖酸杆菌 (Gluconobacteroxydans)SCB3 2 9以D 山梨醇为底物培养时可产生微量 2 酮基 L 古龙酸 ;而葡萄糖酸杆菌 (Gluconobactersp .)SCB1 1 0能将D 山梨醇以较高效率转化为L 山梨糖 ,但不产 2 酮基 L 古龙酸。将两种微生物在以山梨醇为底物的培养基中混合培养 ,其代谢产物经分离提纯后进行熔点测定、元素分析、红外吸收光谱测定等 ,确定其主要的代谢产物是 2 酮基 L 古龙酸。

混合菌发酵L-山梨糖生产Vc前体2-酮基-L-古龙酸研究进展

利用混合菌发酵L-山梨糖生产2-酮基-L-古龙酸(2-KGA),再经化学转化合成维生素C(Vc),是我国工业生产Vc的主要途径,具有简化工艺,减少污染,降低能耗等诸多优点。从菌系组合、菌种选育、代谢途径与酶学特性、工程菌构建、伴生作用机制及发酵工艺等方面出发,综述混合菌发酵L-山梨糖生产Vc前体2-KGA的研究现状和最新进展,并提出进一步研究和探索的方向。

地杆菌α-L-岩藻糖苷酶的分子改造及其在合成2’-岩藻糖基乳糖中的应用

对地杆菌α-L-岩藻糖苷酶进行分子改造,以提高其酶法合成2’-岩藻糖基乳糖(2’-fucosyllactose,2’-FL)的转化效率。利用易错聚合酶链式反应构建了α-L-岩藻糖苷酶的突变体文库,筛选得到一个合成2’-FL转化率提高的突变酶(mPbFuc29A1)。酶学性质研究结果表明mPbFuc29A1的最适pH值和温度分别为pH 5.0和40℃,最适温度较野生型PbFuc29A1提高了5℃;突变酶水解2’-FL的比活力提高到3倍,但是水解4-硝基苯基-α-L-岩藻糖苷(4-nitrophenyl-α-L-fucopyranoside,pNP-FUC)和3’-岩藻糖基乳糖(3’-fucosyllactose,3’-FL)的比活力分别降低了22.8%和52.5%。以pNP-FUC和乳糖为底物,采用mPbFuc29A1酶法催化合成2’-FL和3’-FL,转化率分别为23.6%和56.4%,其中2’-FL的转化率较PbFuc29A1提高了9.1%。通过序列及定点突变分析发现mPbFuc29A1的氨基酸序列中有2个位点发生突变(Asp21Val和Glu266Lys),其中位于loop区的Glu266Lys可能是mPbFuc29A1底物特异性和转糖苷产物组成发生改变的关键。优良的酶学特性使mPbFuc29A1在2’-FL合成中具有较大的应用潜力。

水/有机溶剂双相体系中色氨酸合成酶酶法合成2-甲基-L-色氨酸

本文作者研究了水/有机溶剂双相体系中利用色氨酸合成酶催化L-丝氨酸和2-甲基吲哚合成2-甲基-L-色氨酸,考察了有机溶剂、有机溶剂体积分数、p H、反应温度、表面活性剂、金属离子和底物浓度对色氨酸合成酶催化合成2-甲基-L-色氨酸的影响。有机溶剂包括二甲苯、甲苯、乙酸乙酯、乙酸丁酯和辛醇,表面活性剂包括吐温80、聚乙二醇辛基苯基醚(OP)、CTAB和Trion X-100,金属离子包括Mg2+、Ca2+、Cu2+、Co2+和Zn2+。结果表明,酶法最佳转化条件为:有机相溶剂为甲苯,甲苯体积分数为2%,反应温度为40℃,水相p H为8,底物L-丝氨酸浓度为150mmol/L,表面活性剂Trion X-100质量分数为2%,金属离子Ca2+浓度为0.1 mmol/L,色氨酸合成酶酶促反应5 h,2-甲基-L-色氨酸的质量浓度为21.17 g/L。重组大肠杆菌DM206可作为2-甲基-L-色氨酸生产菌,具有较好的2-甲基-L-色氨酸生产潜力。

葡萄糖对维生素C二步发酵法生产2-酮基-L-古龙酸影响的研究

通过在发酵过程中添加适量葡萄糖的方法,对维生素C二步发酵混合菌系生长产酸过程进行了适当的调控。最适加糖调控措施为:装液量为20 mL/250 mL摇瓶,接种量为10%,加糖时间为发酵启动后24 h,加糖量为0.08%,培养温度为29℃。最终调控组与对照组相比糖酸转化率提高了3.02%,发酵周期缩短了4 h。

O-(2-[^(18)F]氟代乙基)-L-酪氨酸的合成及临床实验

目的氨基酸类显像剂O-(2-犤18F犦氟代乙基)-L-酪氨酸(18F-FET)用于脑肿瘤显像的诊断价值。方法通过两步反应合成18F-FET并配成注射液,进行小鼠异常毒性实验、细菌和细菌内毒素检查实验,并对脑瘤患者进行与2-犤18F犦氟代脱氧葡萄糖(18F-FDG)的对比显像。结果18F-FET注射液放化纯度大于95%,室温下放置6h稳定;注射液细菌及细菌内毒素符合中国药典标准;正常脑组织中18F-FET摄取明显低于肿瘤组织,肿瘤组织摄取高于18F-FDG,且显像清晰。结论18F-FET制备简便,体外稳定,毒性小,用于人体非常安全;非肿瘤组织摄取低,获得的图像清晰且优于18F-FDG,是一个较好的脑肿瘤显像剂。