辣根过氧化物酶标记JWA抗体及其在免疫检测反应中的应用

目的:运用辣根过氧化物酶标记JWA单克隆抗体,并且将标记的抗体应用于ELISA法和western blot等免疫检测反应中。方法:运用高碘酸盐-四氢硼化钠氧化还原体系活化辣根过氧化物酶,活化的辣根过氧化物酶按1∶1标记JWA单克隆抗体;将HRP标记的抗体分别运用直接和双夹心ELISA测试;同时将标记单克隆抗体运用于western blot检测。结果:辣根过氧化物酶成功标记JWA单克隆抗体。其中HRP-JWA(4C9)抗体在直接法ELISA试验中和多肽的结合能力高于HRP-JWA(7C3);其在450 nm处的最大吸光度值为0.96。双夹心ELISA实验中,预先包被JWA(4C9)单抗,检测抗体使用HRP-JWA(7C3)可以得到较好的实验结果,在450nm处的最大吸光度值为1.30。在western blot实验HRP-JWA抗体浓度1.0μg·m L-1可以检测出SGC7901细胞中目的蛋白。结论:运用氧化还原方法成功标记JWA单克隆抗体,并可以初步应用于免疫反应的检测。