超速离心结合Real-time PCR分离纯化枣疯病植原体DNA

分离纯化枣疯病植原体基因组DNA,有助于进一步开展对此病原全基因组测序的研究,CTAB法提取枣疯病叶片的总DNA后,采用氯化铯双苯酰亚胺密度梯度离心法从枣树总DNA中富集纯化枣疯病植原体DNA,并通过Real-time PCR方法对分离纯化效果进行定量检测。在此基础上,探索了不同CsCl初始密度对DNA分离效果的影响。在20℃,初始密度为1.650 0g/cm3,经206 000×g下离心23h后,感染枣疯病样品(IS)的离心管中出现2条DNA亮带,正常枣树样品(NS)离心管中只有1条。Real-time PCR检测结果表明NS管中的条带为枣树基因组DNA;IS管中与NS管中相同位置的条带为枣树基因组DNA,另1条带为枣疯病植原体基因组DNA。在保留其他试验条件下,不同CsCl初始密度,会影响DNA条带的位置,也会影响枣疯病植原体DNA与枣树DNA的分离效果,在1.562 2g/cm3的初始浓度下分离效果最好。采用超速离心法可以有效地从感染枣疯病的枣树中分离得到纯的枣疯病植原体DNA,同时利用Real-time PCR法可以实现分离效果的评价,利用此方法分离得到的DNA可用于枣疯病植原体的全基因组测序。

带枣疯病组培苗持续培养中疑似抗病变异株的筛选与鉴定

文章以带枣疯病组培苗持续培养群体中出现的疑似抗病株为材料,进行了形态学观察,随后提取其DNA进行植原体测定以及AFLP分析,以筛选确实发生变异的抗病株。结果表明:在患枣疯病冬枣组培苗群体中根据形态指标筛选了10株疑似抗病变异株,经过植原体检测后发现其中3株体内仍携带了少量植原体,并进一步对这些疑似变异株进行DNA水平的AFLP分析,筛选了1株抗病株。