CB1拮抗剂利莫那班联合CB2激动剂JWH133对脑缺血再灌注病理损伤保护作用的研究

目的探讨大麻系统(ECS)药物CB1拮抗剂利莫那班联合CB2激动剂JWH133预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用机制。方法将健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、JWH133组和LHGY组(利莫那班+JWH133)。造模前1 h用二甲基亚砜(DMSO)溶解药物,预处理腹腔注射给药;其他两组注射等体积生理盐水,改良ZEA-LONGA线栓法建立大鼠右脑中动脉缺血再灌注模型。采用Longa评分法进行神经功能评分,TTC染色测量脑梗死体积,测定缺血侧脑组织及周围血清中和白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)含量,比色法检测诱导型一氧化氮合酶(i NOS)活性的表达。结果模型组、JWH133组和LHGY组均出现不同程度的神经行为功能异常,两组神经行为功能恢复明显好于其他两组(P<0.05),LHGY组表现略优于JWH133组(P>0.05)。其中,脑切片TTC染色显示JWH133组和LHGY组均较模型组白色梗死灶缩小(P<0.05),后者梗死面积程度小于前者(P>0.05)。模型组大鼠脑组织及血清中IL-6含量比假手术组含量有较显著的升高,IL-10则相反;而JWH133组和LHGY组治疗后两种炎性因子呈现不同程度的反相变化(P<0.05)。与假手术组相比,模型组脑组织中i NOS活性明显升高;JWH133组和LHGY组脑组织中i NOS活力均明显降低(P<0.05)。结论 JWH133组和LHGY组预处理后通过抑制脑缺血再灌注损伤过程中的炎性反应而发挥神经保护作用,其机制可能与调节IL-6、IL-10和i NOS等因子水平有关。而CB1拮抗剂利莫那班联合CB2激动剂JWH133给药方案产生一定程度的叠加效果,这也提示ECS对脑缺血再灌注损伤产生神经保护作用机制尚待进一步探讨。

Ⅱ型大麻受体激动剂JWH133对大鼠局灶性脑缺血—再灌注损伤的神经保护作用

目的探讨Ⅱ型大麻受体(CB2)激动剂JWH133预处理对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后作用的机制。方法将健康成年雄性SD大鼠40只随机分为假手术组、脑缺血-再灌注模型组(模型组)、JWH133给药组和溶剂对照组。用改良Zea Longa线栓法建模。Longa评分法评价神经功能,TTC染色法测定缺血侧脑组织及周围血清中白细胞介素(IL)-6和IL-1β水平,TUNEL免疫荧光染色检测大鼠神经元凋亡情况。结果 4组试验大鼠均不同程度出现神经行为功能异常,但JWH133给药组大鼠的神经行为功能恢复明显优于其他3组(P<0.05)。脑切片染色显示,3个手术组大鼠均出现供血区白色梗死灶,但JWH133给药组白色梗死灶较模型组和溶剂对照组缩小(P<0.05)。模型组大鼠脑组织及血清中IL-6、IL-1β水平较假手术组显著升高,JWH133给药组治疗后2种炎性因子水平均有不同程度降低,与溶剂对照组对比均有显著性差异(P<0.05)。TUNEL染色显示,假手术组几乎无凋亡细胞,模型组及溶剂对照组凋亡细胞数量显著增加,JWH133给药组凋亡神经细胞显著减少。结论 JWH133预处理通过抑制脑缺血-再灌注损伤过程发挥神经保护作用,其机制可能与降低IL-6、IL-1β水平及发挥抗凋亡作用有关,尚待进一步探讨。

大麻素2型受体激动剂JWH133干预对肺纤维化小鼠的保护作用

目的探讨大麻素2型受体激动剂JWH133对肺纤维化小鼠的保护作用。方法选24只C57BL/6J雄性小鼠按随机数字法分为对照组、模型组、JWH133干预组、JWH133+大麻素2型受体拮抗剂AM630拮抗组,每组6只。气管滴注博来霉素(5 mg/kg)制作小鼠肺纤维化模型,造模后第1天起,对照组小鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液0.1 ml,模型组小鼠腹腔注射0.9%氯化钠溶液0.1 ml,JWH133干预组小鼠腹腔注射JWH133(2.5 mg/kg,溶于生理盐水中)0.1 ml,JWH133+AM630拮抗组小鼠腹腔注射JWH133(2.5 mg/kg)和AM630(2.5 mg/kg)0.1 ml,28 d后处死所有小鼠,取肺组织,病理观察肺组织改变,并进行肺泡炎评分和Ashcroft评分,采用免疫组化测4组小鼠肺组织Ⅰ型胶原含量,酶联免疫吸附测定(ELISA)测4组小鼠血清中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,测4组小鼠肺组织中羟脯氨酸含量,Western-blot测4组小鼠肺组织中Ⅲ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)、磷酸化核糖体S6激酶1(P-p90RSK)蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应测4组小鼠肺组织中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA mRNA表达水平。结果与对照组比,模型组小鼠肺组织病理改变加重,肺泡炎评分升高[(3.833±0.408)分比(0.833±0.408)分,P<0.05],Ashcroft评分升高[(7.333±0.516)分比(2.000±0.633)分,P<0.05],Ⅰ型胶原吸光度值升高(0.065±0.008比0.018±0.006,P<0.05),炎性细胞浸润加重,羟脯氨酸含量升高[(1.551±0.051)μg/mg比(0.974±0.060)μg/mg,P<0.05];与模型组比,JWH133干预组小鼠肺组织病理改变减轻,肺泡炎评分降低[(1.833±0.408)分,P<0.05],Ashcroft评分降低[(4.167±0.753)分,P<0.05],Ⅰ型胶原吸光度值降低(0.032±0.004,P<0.05),炎性细胞浸润减轻,羟脯氨酸含量下降[(1.148±0.055)μg/mg,P<0.05];与JWH133干预组比,JWH133+AM630拮抗组小鼠肺组织病理改变加重,肺泡炎评分和Ashcroft评分升高,Ⅰ型胶原吸光度值升高,炎性细胞浸润加重,羟脯氨酸含量升高。与对照组比,模型组小鼠肺组织α-SMA、Ⅲ型胶原、P-ERK1/2、P-p90RSK蛋白表达升高,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA mRNA表达升高;与模型组比,JWH133干预组α-SMA(相对表达量0.60±0.17比1.34±0.19,P<0.05)、Ⅲ型胶原(相对表达量0.52±0.09比1.35±0.14,P<0.05)、P-ERK1/2(相对表达量0.32±0.11比1.14±0.14,P<0.05)、P-p90RSK(相对表达量0.43±0.14比1.15±0.07,P<0.05)蛋白表达下降;Ⅰ型胶原(相对表达量2.190±0.362比5.078±0.792,P<0.05)、Ⅲ型胶原(相对表达量1.750±0.290比4.935±0.456,P<0.05)、α-SMA(相对表达量1.588±0.060比5.192±0.506,P<0.05)mRNA表达降低;与JWH133干预组比,JWH133+AM630拮抗组小鼠肺组织α-SMA、Ⅲ型胶原、P-ERK1/2、P-p90RSK蛋白表达升高,Ⅲ型胶原、α-SMA mRNA表达升高。结论大麻素2型受体激动剂JWH133可抑制小鼠肺组织炎症,通过改善细胞外基质沉积减轻肺纤维化,其机制可能与抑制ERK1/2-RSK1信号通路有关。

Protective effect of intervention with cannabinoid type-2 receptor agonist JWH133 on pulmonary fibrosis in mice

Objective JWH133,a cannabinoid type 2 receptor agonist,was tested for its ability to protect mice from bleomycin-induced pulmonary fibrosis.Methods By using a random number generator,24 C57BL/6J male mice were randomly divided into the control group,model group,JWH133 intervention group,and JWH133+a cannabinoid type-2 receptor antagonist(AM630)inhibitor group,with 6 mice in each group.A mouse pulmonary fibrosis model was established by tracheal instillation of bleomycin(5 mg/kg).

大麻素受体2激动剂对人胚肺成纤维细胞株HLF1增殖和分化的影响及机制

目的探讨大麻素受体2(CB2)激动剂JWH133对人胚肺成纤维细胞株HLF1增殖、分化的影响及机制。方法取对数生长期HLF1细胞株,采用细胞计数试剂-8(CCK8)法检测不同浓度(0.01、0.10、1.00、10.00及20.00μmol/L)JWH133及CB2(0.0、0.5、5.0及50.0μmol/L)拮抗剂AM630对HLF1的增殖能力影响;取对数生长期HLF1细胞分为正常(N)组、5μg/L转化生长因子β1(TGF-β1)组(即0μmol/L JWH133)、10.00μmol/L JWH133(J10)组及J10+5.0μmol/L AM630(AM630)组,培养48 h,采用Western blot和逆转录-聚合酶链反应PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中胶原蛋白1α1(Col1α1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、磷酸化-AKT(p-AKT)蛋白及Col1α1、α-SMA mRNA,采用细胞免疫荧光检测各组细胞中α-SMA蛋白荧光信号及应力纤维细胞百分比。结果随着JWH133浓度的增大,HLF1细胞的吸光度(OD)值逐渐降低,0.0、0.5、5.0及50.0μmol/L AM630组HLF1存活率均在1附近(P>0.05);J10组HLF1细胞中Col1α1、α-SMA蛋白及p-AKT表达均较TGF-β1组降低(P<0.05),J10+AM630组则较J10组升高(P<0.05);J10组HLF1细胞Col1α1、α-SMA mRNA均较TGF-β1组降低(P<0.05),J10+AM630组则较J10组升高(P<0.05);J10组HLF1细胞α-SMA蛋白荧光信号及应力纤维细胞占总细胞比值均较TGF-β1组减少(P<0.05),J10+AM630组则较J10组增多(P<0.05)。结论CB2受体激动剂JWH133可抑制HLF1细胞的增殖及分化,其机制可能与下调PI3K-AKT通路有关。