金针菇凝集素基因Fv-mJRL1的生物信息学分析及其共表达

Jacalin凝集素(jacalin-related lectins,JRLs)是一类含有一个或多个JRL结构域的蛋白质,参与生物或非生物环境刺激应答.本研究基于金针菇(Flammulina velutipes)基因组数据,注释筛选到其中一个JRL基因Fv-mJRL1,对其基因结构、蛋白质性质进行了生物信息学分析,并利用其上游调控序列进一步预测到该基因潜在的转录因子Fv-Mbp1.通过实时荧光定量PCR分析得知,无论是在不同栽培基质培养的金针菇菌丝还是在金针菇各发育时期的组织中,Fv-mJRL1基因与潜在的转录因子基因Fv-Mbp1之间都存在极强的共表达规律.生物信息学及实时荧光定量PCR分析为筛选挖掘基因潜在的转录因子提供便利,后期仍需利用下游分子实验进行更为精确的验证.

糖基化缺陷的血清IgA1与人脐静脉内皮细胞结合量的研究

目的:观察糖基化缺陷的血清IgA1是否可以与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)结合,并比较正常血清IgA1及糖基化缺陷的血清IgA1与HUVEC结合量的异同,探讨血清IgA1尤其是糖基化缺陷的IgA1在IgA肾病血管损伤中的作用。方法:Jacalin亲和层析提取正常人血清IgA1,唾液酸酶和 /或半乳糖酶去除血清IgA1分子铰链区O 糖上连接的唾液酸和 /或半乳糖,形成糖基化缺陷的IgA1,分别形成去唾液酸IgA1 (DesIgA1),去唾液酸去半乳糖IgA1 (Des/DeGalIgA1)。分别用特异结合半乳糖或N 乙酰氨基半乳糖的花生凝集素 (PNA)和蚕豆凝集素 (VVL),以ELISA的方法检测酶切的充分性。流氏细胞技术检测并比较正常血清IgA1及糖基化缺陷的血清IgA1与HUVEC的结合量。结果:正常IgA1及DesIgA1,Des/DeGalIgA1均能与HUVEC结合。IgA1, DesIgA1,Des/DeGa lIgA1与HUVEC的结合量用免疫荧光强度的中位数表示分别为 2. 67±0. 35, 4. 62±1. 09, 4. 08±0. 41 (IgA1与DesIgA1相比,P=0. 015;IgA1与DesIgA1 /DeGalIgA1相比,P=0. 049;DesIgA1与DesIgA1 /DeGalIgA1相比,P>0. 05)。结论:IgA1分子可以与HUVEC相结合,唾液酸和 /或半乳糖缺失的IgA1与HUVEC的结合量显著高于正常IgA1分子,提示血清IgA1尤其是糖基化缺陷的IgA1在IgA肾病的血管损伤中可能起着一定的作用。

川桑Jacalin类凝集素基因家族的鉴定与表达分析

Jacalin类凝集素(jacalin-related lectin,JRL)是一类具有1个或多个Jacalin结构域的蛋白质,在植物抗病和抗虫等防御相关过程中具有重要作用。基于川桑基因组数据,通过比对公共蛋白质数据库及对保守氨基酸基序的分析,鉴定到22个含有Jacalin结构域的桑树JRL的编码基因,分别命名为MnJRL1~MnJRL22,其中20个川桑JRL只含有一个Jacalin结构域。川桑JRL基因上游含有多个响应植物激素和胁迫因子的转录调控因子结合位点,推测川桑JRL家族基因能够响应生物和非生物胁迫的刺激。采用实时荧光定量PCR技术,对22个MnJRL基因在川桑根、皮、茎、花和叶5个组织的表达进行检测,结果显示桑树JRL基因呈现组织表达特异性。转录组数据分析发现,有10个桑树JRL基因在经过机械创伤和家蚕咬食处理之后的桑树叶片中上调表达,推测其在桑树防御过程中发挥作用。

白桂木凝集素、红桂木凝集素和Jacalin对人外周血中淋巴细胞激活的研究

以不同浓度的凝集素作为刺激剂，研究人外周血中的淋巴细胞的激活效应。结果白桂木凝集素促淋转浓度为１．２μｇ／ｍｌ，转化串７６％；红桂木凝集素和Ｊａｃａｌｉｎ的促淋转浓度为０．３μｇ／ｍｌ，转化率分别是６７％和８０％。在相同的条件下，对照ＰＨＡ的促淋转浓度是１６８μｇ／ｍｌ。几种凝集素的促转高峰均在７２ｈ出现。