地黄多糖诱导大鼠BMSCs向神经元样细胞分化及对Notch1和Jagged1蛋白表达的影响

目的探讨地黄多糖诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞的作用及对Notch1和Jagged1蛋白表达的影响。方法取大鼠P3-P5代BMSCs,随机分为正常对照组(CON组)、神经生长因子组(BDNF组,10μg/ml)和地黄多糖诱导A、B、C组(RGP组,浓度分别为50、100、200μg/ml),诱导后连续培养7d。观察细胞一般形态。采用Western blotting检测CON组与RGP C组神经标志物相关蛋白神经巢蛋白(Nestin)、βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,免疫荧光法和Western blotting分别检测各组诱导后0、1、3、7d时Notch1、Jagged1蛋白和Notch1胞内段NICD的表达。结果 CON组始终以梭形细胞为主,RGP C组第5天起出现神经元样细胞。Western blotting检测到RGP C组Nestin蛋白表达由强到弱,NSE和βⅢ-tubulin蛋白表达由弱到强,GFAP蛋白呈弱表达。免疫荧光结果显示,RGP各组各时间点Notch1蛋白阳性细胞率均显著低于CON组(P<0.05),且随时间延长Notch1蛋白表达阳性率逐渐降低;RGP C组中Jagged1阳性细胞率诱导后1d时具有明显的上升趋势,而后显著下降(P<0.05),BDNF组基本无Jagged1蛋白表达。Western blotting检测结果与免疫荧光检测结果类似。结论地黄多糖具有诱导BMSCs向神经元样细胞分化的作用,且可影响Notch1和Jagged1蛋白的表达。

Jagged1蛋白对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的作用

目的研究Jagged1蛋白(Ja1)对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤(SI/RI)的作用,为探明Notch信号通路在心肌缺血再灌注损伤(I/RI)中的作用提供理论依据。方法实验分为5组,分别为正常对照组、SI/RI组、缺氧复氧+不同浓度Ja1组(5、10、20μM),四氮唑盐比色(MTT)法测定各组细胞存活率;缺口末端标记(TUNEL)法测定各组细胞凋亡率;专用试剂盒检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。结果与对照组相比,SI/RI组细胞活力明显下降(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01),同时期培养液中SOD水平明显降低(P<0.01),MDA水平显著升高(P<0.01);不同浓度Ja1可以使上述指标明显改善(P<0.01),并呈浓度依赖性。结论 Ja1蛋白对SI/RI造成的心肌细胞损伤具有保护作用,作用机制与增强细胞抗凋亡、抗氧化以及减轻脂质过氧化物导致的细胞膜损伤有关,Notch信号通路可能在心肌缺血再灌注损伤中发挥重要的调控作用。

利枢针刺法对局灶性脑缺血大鼠Jagged1蛋白表达的影响

目的:探讨利枢针刺法对局灶性脑缺血大鼠Jagged1蛋白表达的影响及可能作用机制。方法:选取健康雄性SD大鼠60只,体重200~250 g,适应性喂养1周后选取50只大鼠以线栓法制作右大脑中动脉阻塞(MCAO)局灶性脑缺血模型,将模型制备成功大鼠随机分为模型对照组、利枢针刺组、普通针刺组、西药灌胃组。剩余10大鼠只游离右侧颈总动脉、颈外动脉,颈内动脉作为假手术对照组,共5组。每组干预治疗14 d后以神经功能评分、TTC染色变化,观察模型建立情况和各组大鼠脑缺血脑组织病理变化情况,用Western-Blot法检测Notch信号通路中Jagged1的相对灰度值的表达变化。结果:假手术组无神经功能的缺失,其他各组神经功能的评分在术后1 d、3 d下降无明显差异,术后7 d、14 d下降比较明显,利枢针刺组及普通针刺组在治疗第14天后的神经功能评分显著低于模型对照组、西药灌胃组,有显著性差异(P<0.01);且利枢针刺组与普通针刺组比较也存在统计学差异(P<0.05)。TTC染色:假手术组大鼠脑组织无梗死;利枢针刺组的脑梗死体积百分比显著小于模型组对照、普通针刺组、西药灌胃组,有显著性差异(P<0.01)。Jagged1的表达:利枢针刺法组脑缺血大鼠Jagged1表达显著高于其余5组,与假手术组、模型对照组、西药灌胃组比,有统计学差异(P<0.01);与普通针刺组比较,有统计学差异(P<0.05)。结论:通利枢机针刺法能够改善脑缺血大鼠神经功能评分和梗死体积;增加Jagged1蛋白的表达,激活Notch信号通路,促进海马神经干细胞的增殖,实现对脑缺血的治疗作用。

Jagged1蛋白在肌源性干细胞分化为神经样细胞过程中的表达差异

目的Jagged1蛋白在大鼠肌源性干细胞(MDSCs)体外增殖分化为神经样细胞过程中的表达差异研究。方法大鼠乳鼠骨骼肌消化后体外培养增殖,第5代传代后细胞分为2组:对照组完全培养基培养,诱导组加入诱导剂诱导。6 d后观察2组细胞的形态变化,并进行NSE免疫细胞化学鉴定。然后通过免疫荧光观察Jagged1蛋白的表达差异。结果诱导组细胞NSE染色阳性,免疫荧光结果显示对照组Jagged1蛋白表达阳性,实验组基本不表达。结论大鼠肌源性干细胞分化为神经样细胞过程中Jagged1蛋白表达存在明显差异。

Jagged1蛋白在银屑病、基底细胞癌及皮肤鳞状细胞癌中的表达

目的探讨Jagged1蛋白在银屑病、基底细胞癌及皮肤鳞状细胞癌中的表达及意义。方法采用免疫组化Envision法检测Jagged1蛋白在银屑病、基底细胞癌及皮肤鳞状细胞癌皮损中的表达。结果 Jagged1蛋白在寻常性银屑病患者皮损中呈阴性表达,在基底细胞癌及皮肤鳞状细胞癌中的表达较正常人皮肤增强,差异有统计学意义(P<0.01);Jagged1蛋白在基底细胞癌及皮肤鳞状细胞癌中的表达较银屑病增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Jagged1蛋白在银屑病发病机制中与角质形成细胞异常增生及真皮乳头血管增生等组织病理变化可能不相关,提示此蛋白可能与皮肤恶性肿瘤的异常增生有关。

冠心病患者GDF-15、Jagged1蛋白表达及意义

目的:探讨GDF-15、Jagged1蛋白表达与冠心病病情的相关性。方法:选取2017年1月-2018年1月在我院治疗的冠心病患者87例(观察组),同时选取冠脉造影无异常者80例作为对照组,检测两组GDF-15、Jagged1蛋白表达水平。结果:观察组GDF-15和Jagged1蛋白分别为879.02(510.22,1 201.47)ng/L和(37.89±4.23)ng/L,明显高于对照组(P<0.05);GDF-15与改良Gensini评分呈正相关(r=0.561,P <0.05),而Jagged1蛋白表达与改良Gensini评分无相关性(r=0.082,P>0.05);观察组Rentrop分级2～3级患者Jagged1蛋白为(44.22±7.11)ng/L,明显高于0～1级患者(P<0.05);观察组Rentrop分级2～3级和0～1级患者GDF-15表达差异比较无统计学意义(P>0.05)。结论:冠心病患者GDF-15、Jagged1蛋白表达明显升高,其中GDF-15与疾病严重程度有关,而Jagged1蛋白可能与侧支循环情况有关。

Jagged1蛋白在早期自然流产患者绒毛组织中表达的研究

目的探讨Jagged1蛋白在早期自然流产患者绒毛组织中的表达及其对妊娠结局的影响。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术和免疫印迹法检测15例自然流产患者和20例正常早期妊娠妇女绒毛Jagged1 mRNA和蛋白的表达水平。结果自然流产组患者Jagged1mRNA表达水平(0.062 3±0.000 7),低于正常早期妊娠妇女(0.031 5±0.0065),差异有统计学意义(P<0.05);Western-blot检测显示,早期自然流产患者Jagged1蛋白的表达水平低于正常早期妊娠妇女,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Jagged1蛋白在早期自然流产患者绒毛组织中表达呈下调趋势,可能与母胎界面血管发育及滋养细胞缺氧有关,从而导致自然流产。

冠心病患者血浆Jagged1蛋白与冠状动脉侧支循环形成的关系

目的:探讨冠心病患者血浆中Jagged1蛋白水平与冠状动脉侧支循环(CCC)形成的关系。方法:根据冠状动脉造影结果入选我院左前降支、左回旋支或右冠状动脉中至少有一支血管直径狭窄≥95%的冠心病患者89例(冠心病组)和造影结果无明显异常的患者30例(正常对照组)。根据Rentrop分级评分将冠心病组患者再分成侧支循环良好亚组(Rentrop分级≥2级,n=42)与侧支循环不良亚组(Rentrop分级≤1级,n=47)。采用酶联免疫吸附法检测所有入选患者血浆中Jagged1蛋白及血管内皮生长因子(VEGF)的浓度,并进行相关性分析。结果:与正常对照组相比,冠心病组患者血浆Jagged1蛋白[(38.74±10.60)ng/L vs(23.04±8.97)ng/L]及VEGF[(113.98±30.80)pg/L vs(72.73±14.55)pg/L]水平均明显升高(P均<0.01)。侧支循环良好亚组与侧支循环不良亚组比血浆Jagged1蛋白[(46.77±8.49)ng/L vs(31.56±6.26)ng/L]及VEGF[(128.10±20.24)pg/L vs(92.43±21.09)pg/L]水平均显著升高(P均<0.01)。冠心病患者血浆Jagged1蛋白与VEGF水平呈正相关(r=0.730,P<0.01)。多元回归分析显示,Jagged1蛋白(OR=1.318,P=0.000)和VEGF(OR=1.043,P=0.043)是影响CCC形成的独立预测因素。结论:侧支循环良好亚组血浆Jagged1蛋白水平较侧支循环不良亚组明显升高,表明Jagged1蛋白在CCC形成过程中可能起重要作用,这为冠心病患者临床治疗提供新的研究方向。

JAG2、INHBA、PD-L1蛋白在老年大肠癌组织中表达及与预后的关系

目的 探讨老年大肠癌患者肿瘤组织中Jagged 2蛋白(JAG2)、抑制素βA(INHBA)、细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)表达与预后的关系。方法 选择2017年5月至2019年5月在湖南省肿瘤医院接受手术治疗的112例老年大肠癌患者为研究对象,采用免疫组织化学法检测癌组织和癌旁组织中JAG2、INHBA、PD-L1表达。随访患者的生存时间,Cox回归模型分析JAG2、INHBA、PD-L1表达与老年大肠癌患者预后的关系。结果 患者癌组织中JAG2、INHBA、PD-L1阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。低分化患者JAG2、INHBA、PD-L1阳性表达率高于中高分化患者,TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者JAG2、INHBA、PD-L1阳性表达率高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05)。Cox回归模型显示,肿瘤低分化、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、JAG2、INHBA、PD-L1表达阳性为影响老年大肠癌患者无进展生存时间的独立危险因素(OR>1,P<0.05)。大肠癌患者癌组织中JAG2、INHBA、PD-L1阴性患者总生存率高于JAG2、INHBA、PD-L1阳性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。大肠癌患者癌组织中JAG2、INHBA、PD-L1阴性患者无进展生存率高于JAG2阳性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 老年大肠癌患者癌组织中JAG2、INHBA、PD-L1阳性表达率较高,且对预后评估具有重要意义。

TCDD诱发昆明小鼠腭突畸形过程中对Jagged2蛋白表达的影响

目的:检测四氯二苯并二恶英(TCDD)诱发昆明小鼠腭裂畸形过程中对Jagged2蛋白表达的影响。方法:将30只昆明孕鼠随机分为实验组和对照组,实验组GD12天孕鼠一次性灌服40μg/kg TCDD,对照组灌服等剂量花生油,分别于GD13、GD14、GD15剖腹取胎鼠头部标本,作冠状位组织切片。采用免疫组化方法检测胚胎腭中Jagged2蛋白表达。结果:Jagged2主要表达于胚胎腭突上皮组织;GD14、GD15时,对照组中Jagged2蛋白表达显著下降(P<0.05),但实验组未出现明显表达变化。结论:Jagged2在胚胎腭突上皮的异常表达可能参与了TCDD诱发小鼠腭裂畸形发生。

可溶性Jagged1/Fc融合蛋白对CD4^+CD25^+T细胞分化的作用

目的:探讨可溶性Jagged1/Fc融合蛋白对小鼠淋巴细胞CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory Tcell,Tr)分化的作用。方法:利用荧光标记的单克隆抗体(mAb)双染技术结合流式细胞术(FCM)观察不同时间Jagged1/Fc融合蛋白及不同浓度Jagged1-Notch信号通路抑制剂DAPT对小鼠淋巴细胞表面分子CD4和CD25表达的影响。通过Luminex蛋白液相芯片技术检测Jagged1/Fc作用下T细胞培养上清中白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)和转化生长因子β(TGF-β)的表达水平。结果:浓度为1000μg/L时,Jagged1/Fc在第1、3、5天均能增强淋巴细胞表面CD4,CD25的表达,以第3天的增强作用最为明显(P<0.01);DAPT浓度从2μmol/L逐渐增至16μmol/L时,对CD4、CD25表达的抑制作用逐渐增强,以16μmol/L DAPT的抑制作用最为明显,呈剂量依赖关系(P<0.01,r=0.96),而Jagged1/Fc能够逆转DAPT对CD4,CD25表达的抑制;Jagged1/Fc能够促进淋巴细胞培养上清中TGF-β表(P<0.01)。结论:可溶性Jagged1/Fc融合蛋白可能参与诱导小鼠淋巴细胞向CD4+CD25+Tr分化。

EGCG通过降低Notch1和Jagged1表达抑制鼻咽癌干细胞SP18的增殖

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)抑制鼻咽癌干细胞SP18增殖的机制。方法采用MTT法检测EGCG抑制SP18细胞增殖的IC50;选用细胞生长曲线、平皿克隆形成实验和软琼脂集落形成实验观察EGCG对鼻咽癌干细胞SP18增殖的影响;采用Western blot检测Notch1和Jagged1蛋白表达。结果 EGCG抑制SP18细胞增殖的IC50值为149.02 mg/L;EGCG呈浓度和时间依赖性抑制SP18细胞的增殖(n=3,P<0.05);EGCG呈浓度依赖性抑制Notch1和Jagged1蛋白的表达。结论 EGCG能有效抑制鼻咽癌干细胞SP18的增殖,其可能通过降低Notch1和Jagged1蛋白的表达而发挥作用。

Jagged1过表达促进老龄大鼠来源的内皮祖细胞向成熟内皮细胞分化

目的:探讨上调Jagged1表达对内皮培养条件下老龄大鼠来源的内皮祖细胞(EPC)向内皮细胞分化的影响。方法:脱臼处死1～2月龄和19～26月龄SD大鼠,PBS冲洗股骨和胫骨骨髓,Ficoll密度梯度离心分离单个核细胞,应用含10%FBS的DMEM/F12培养基以差速贴壁法进行体外培养,DiI-ac-LDL与FITC-UEA-1荧光双染进行EPC特性鉴定。实验分为4组:对照组、PIRES2-EGFP转染组、PIRES2-EGFP-Jagged1转染组和未转染的年轻大鼠来源EPC组。荧光显微镜下计数GFP阳性细胞数并计算转染效率;免疫荧光、RT-PCR和Western blotting检测Jagged1 mRNA和蛋白、von Willebrand因子(vWF)及血管内皮生长因子激酶插入区受体(KDR)mRNA表达,体外血管生成实验检测EPC的血管形成能力。结果:转染后Jagged1在EGFP-Jagged1组表达较对照组显著增强(P<0.01);Jagged1过表达显著促进老龄大鼠EPC vWF与KDR mRNA表达(P<0.01)和体外血管生成能力(P<0.01);vWF与KDR mRNA表达以及体外血管生成能力在Jagged1转染组与年轻大鼠EPC组间未见有显著差别。结论:Jagged1过表达促进内皮培养条件下老龄大鼠来源EPC向成熟内皮细胞分化。

Jagged1在增生性糖尿病视网膜病变纤维血管膜中的表达及其意义

目的观察Notch配体Jagged1在增生性糖尿病视网膜病变(PDR)纤维血管膜中的表达及其意义。方法于2014年7月至2015年7月在青岛大学附属医院眼科收集PDR患者57例60眼玻璃体切割术中纤维血管膜标本。根据术前是否行抗血管内皮生长因子药物玻璃体内注射将患眼分为未注药组30例32眼和注药组27例28眼,其中注药组患眼于手术前2~7 d行雷珠单抗玻璃体内注射。收集同期非糖尿病伴特发性黄斑前膜患者18例18眼黄斑前膜标本为对照组。采用苏木精-伊红染色观察各组标本结构特征;采用免疫组织化学染色法检测未注药组与注药组病理标本中Jagged1、Delta样配体4(Dll4)和Notch1蛋白的表达;采用实时荧光定量PCR测定各组标本中Jagged1、Dll4和Notch1 mRNA相对表达量。采用Pearson线性相关分析评估PDR纤维血管膜标本中Jagged1 mRNA相对表达量与Dll4 mRNA和Notch1 mRNA相对表达量关系。结果光学显微镜下可见PDR纤维血管膜中新生血管生成,且注药组血管管腔狭窄,未注药组血管管腔相对扩张,黄斑前膜中未见新生血管。未注药组和注药组病理标本中均有Jagged1、Dll4和Notch1蛋白表达,主要位于新生血管内皮组织中。未注药组病理标本中Jagged1、Dll4和Notch1蛋白阳性染色吸光度(A)值分别为6.25±1.82、6.87±1.89和5.12±2.14,高于注药组的1.46±0.37、1.55±0.24和1.32±0.53,差异均有统计学意义(t=5.168,P=0.014;t=6.012,P=0.008;t=3.453,P=0.030)。未注药组、注药组和对照组病理标本中Jagged1、Dll4和Notch1 mRNA相对表达量总体比较,差异均有统计学意义(F=77.337、62.305、51.869,均P<0.01);其中,未注药组和注药组病理标本中Jagged1、Dll4和Notch1 mRNA相对表达量均显著高于对照组,注药组病理标本中Jagged1、Dll4和Notch1 mRNA相对表达量均较未注药组明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Jagged1 mRNA相对表达量与Dll4和Notch1 mRNA相对表达量均呈显著正相关(r=0.925、0.950,均P<0.05)。结论Jagged1在PDR纤维血管膜血管内皮中呈高表达,且与Dll4和Notch1的表达均呈正相关,Jagged1参与新生血管形成的作用途径可能与Dll4及Notch1相关。

胆管细胞癌组织JAG1基因及其蛋白表达水平与患者预后的关系

目的探讨JAG1蛋白表达水平对胆管细胞癌患者肿瘤切除术后预后的判断价值。方法 2010年1月~2014年12月我院诊治的胆管细胞癌患者60例和良性胆道疾病患者60例。检测胆管细胞癌组织、癌旁组织和肝组织JAG1 m RNA及其蛋白表达,测定胆管癌患者术后血清JAG1水平。应用单因素和多因素非条件Logistic回归分析胆管癌患者手术后预后的危险因素。结果癌旁组织、肝组织、胆管癌组织JAG1蛋白阳性率分别为45.0%(27/60)、56.7%(34/60)和81.7%(49/60),组间差异有统计学意义(P<0.05);三种组织JAG1 m RNA水平和蛋白相对表达量分别为(0.91±0.34)和(0.57±0.15)、(1.15±0.48)和(0.84±0.47)、(1.96±0.58)和(1.64±0.58),组间差异有统计学意义(P<0.05);胆管癌患者血清JAG1水平为(205.35±22.51)pg/ml,显著高于良性胆道疾病患者【(102.56±16.52)pg/ml,P<0.05】;肝内胆管癌患者血清JAG1水平与CA125(r=0.41,P<0.05)、CEA(r=0.0.27,P<0.05)、CRP(r=0.17,P<0.05)、肿瘤浸润深度(r=0.13,P<0.05)、淋巴结转移(r=0.08,P<0.05)、TNM分期(r=0.14,P<0.05)、肿瘤分化程度(r=0.15,P<0.05)呈正相关;多因素Cox比例风险回归模型分析显示,肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、分化程度、血清JAG1高水平是影响胆管癌患者无复发生存时间的危险因素(P<0.05),肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、血清JAG1高水平是影响胆管癌患者总生存时间的危险因素(P<0.05)。结论 JAG1蛋白可以作为胆管细胞癌患者肿瘤切除术后的预后指标,血清JAG1水平高患者术后预后差。

胃癌组织中Notch1、Jagged1表达变化及意义

目的观察胃癌组织中Notch1及其配体Jagged1的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化法检测26例胃癌组织及其20例相应的癌旁正常胃组织中的Notch1、Jagged1蛋白,并分析其与胃癌临床病理参数的关系。结果在胃癌组织和癌旁组织中Notch1阳性表达率分别为38.5%、75.0%,Jagged1阳性表达率分别为34.6%、80.0%,P均<0.05;Notch1、Jagged1表达与胃癌有无脉管浸润、分化程度、浸润深度有关(P均<0.05),而与患者的年龄、性别及肿瘤TNM分期、有无淋巴结转移无关(P均>0.05)。Spearman相关性分析显示,在胃癌组织中Notch1和Jagged1表达呈正相关(r=0.032,P<0.05)。结论 Notch信号信号通路中Notch1受体及其配体Jagged1在胃癌组织中低表达,二者在胃癌的发生、发展中起重要作用。

红景天苷调节miR-26a-5p/JAG1/Notch-1信号轴对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学功能的影响

目的探讨红景天苷(SAL)调节微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)/JAG1/神经源性基因Notch同源蛋白1(Notch-1)信号轴对瘢痕疙瘩(KD)成纤维细胞(HKF)生物学功能的影响。方法将HKF细胞随机分为对照组(Control组)、SAL低浓度组(SAL-L组,50μmol/L SAL)、SAL高浓度组(SAL-H组,100μmol/L SAL)、SAL高浓度+miR-NC组(SAL-H+miR-NC组)、SAL高浓度+miR-26a-5p mimics组(SAL-H+miR-26a-5p mimics组)、SAL高浓度+NC-inhibitor组(SAL-H+NC-inhibitor组)、SAL高浓度+miR-26a-5p inhibitor组(SAL-H+miR-26a-5p inhibitor组)。CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期;RT-qPCR检测各组细胞中的miR-26a-5p、JAG1和Notch-1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中JAG1和Notch-1蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-26a-5p与JAG1的关系。结果与Control组相比,SAL-H组HKF细胞增殖能力(24 h)、迁移距离、侵袭细胞个数、S期细胞比例、JAG1和Notch-1 mRNA和蛋白表达显著减少(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、miR-26a-5p表达显著增加(P<0.05);与SAL-H组和SAL-H+miR-NC组相比,SAL-H+miR-26a-5p mimics组相应指标变化与上述变化相同;miR-26a-5p inhibitor减弱了SAL-H对HKF细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用,减弱了HKF细胞凋亡。miR-26a-5p靶向负调控JAG1表达。结论SAL可能通过上调miR-26a-5p,靶向抑制JAG1/Notch-1信号轴抑制HKF细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,改善KD。

JAG1蛋白表达水平对结直肠癌患者切除术后预后影响的临床研究

目的:探讨JAG1蛋白表达水平对结直肠癌患者切除术后预后的影响。方法:选择2008年1月—2013年12月接受手术切除的结直肠癌患者48例,另选择同期48例结直肠良性疾病患者作为对照。检测结直肠癌组织、癌旁组织、结直肠良性组织中JAG1 mRNA和蛋白,测定结直肠癌患者术后血清JAG1水平、实验室检测指标及临床病理学参数,并比较它们之间的相关性,分析结直肠癌患者术后预后的危险因素。结果:结直肠良性组织JAG1蛋白阳性表达率为10.42%(5/48)、癌旁组织JAG1蛋白阳性表达率为45.83%(22/48),显著低于结直肠癌组织的83.33%(40/48)(P<0.05)。结直肠良性组织JAG1 mRNA和蛋白相对表达量水平为(0.35±0.08)、(0.12±0.04),癌旁组织JAG1 mRNA和蛋白相对表达量水平为(0.92±0.38)、(0.52±0.16),显著低于直肠癌组织的(1.98±0.43)(1.67±0.54)(P<0.05)。结直肠癌患者血清JAG1水平为(198.14±35.67)pg/mL,显著高于对照组中的(94.37±25.43)pg/mL(P<0.05)。JAG1与CA125、CEA、CRP呈正相关(P<0.05),与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度呈正相关(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、分化程度、血清JAG1高表达是影响结直肠癌患者RFS的危险性因素(P<0.05);浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、血清JAG1高表达是影响结直肠癌患者OS的危险性因素(P<0.05)。结论:JAG1蛋白可以作为诊断结直肠癌切除术后影响预后的特异性指标,也可成为结直肠癌癌基因治疗的新靶点。血清JAG1水平偏高不利于结直肠癌患者术后预后。

微核糖核酸-124靶向Jagged2对低氧性肺动脉高压新生大鼠血管重塑的影响

目的探究微核糖核酸-124(简称miR-124)对低氧性肺动脉高压(HPH)新生大鼠血管重塑的影响,及其与Jagged2的靶向关系。方法将48只Wistar新生大鼠随机分为常氧组、低氧组、miR-124组和miR-124阴性对照(NC)组,每组12只。miR-124组和miR-124 NC组大鼠分别给予相应的miR-124激动剂或miR-124 NC行尾静脉注射。除常氧组正常饲养外,将其余3组大鼠置于氧气体积分数为0.1的常压低氧舱中28 d,制备HPH大鼠模型。使用压力信号采集系统记录平均肺动脉压(mPAP);计算右心室肥大指数[RV/(LV+S)];采用H-E染色检测肺组织病理学变化,并计算肺血管内壁厚度与外径的比值(MT%)、内膜横截面积与总动脉横截面积的比值(MA%);检测血清NO、内皮素(ET)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的水平;实时荧光定量PCR检测大鼠肺组织miR-124、Jagged2 mRNA水平;免疫印迹实验检测大鼠肺组织Jagged2、split多毛增强子1(Hes-1)蛋白质水平;双荧光素酶实验验证miR-124与Jagged2的靶向关系。结果与常氧组相比,低氧组和miR-124 NC组大鼠的mPAP和右心室肥大指数、MT%和MA%、ET和AngⅡ水平均显著升高(P值均<0.05),NO水平显著降低(P<0.05)。与低氧组和miR-124 NC组相比,miR-124组大鼠的mPAP和右心室肥大指数、MT%和MA%、ET和AngⅡ水平均显著降低(P值均<0.05),NO水平显著升高(P<0.05)。肺组织H-E染色结果显示,低氧组和miR-124 NC组大鼠肺动脉壁明显增厚,管腔变窄,细胞排列紊乱,呈现肺动脉重塑特征。与miR-124 NC组相比,miR-124组大鼠的肺动脉壁增厚程度明显减轻,管腔狭窄不明显。与常氧组相比,低氧组和miR-124 NC组大鼠肺组织的miR-124水平显著降低(P值均<0.05),Jagged2 mRNA、Jagged2和Hes-1蛋白质水平均显著升高(P值均<0.05)。与低氧组和miR-124 NC组相比,miR-124组大鼠的miR-124水平显著升高(P值均<0.05),Jagged2 mRNA、Jagged2和Hes-1蛋白质水平均显著降低(P值均<0.05)。双荧光素酶实验结果证实,miR-124与Jagged2存在靶向结合位点。结论miR-124可能通过靶向下调Jagged2表达改善HPH诱导的肺血管重塑。

沉默JAG1基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究沉默Jagged 1(JAG1)基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及其分子生物学机制。方法:用已构建的pRS-JAG1重组质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用Western blotting方法检测重组质粒对JAG1蛋白表达的影响;MTT比色法测定沉默JAG1对细胞生长的抑制情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;蛋白印记分析细胞周期蛋白1(cyclin D1)、p21CIP1/WAF1、p27KIP1、p-Rb、Bcl-2、Bax、Bcl-xL和cleaved caspase-3蛋白水平的变化。结果:Western blotting结果证实重组质粒可在72h内有效抑制JAG1蛋白表达;人乳腺癌MDA-MB-231细胞JAG1被沉默后,细胞的生长速度明显减慢,细胞明显阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),cyclin D1、p-Rb、Bcl-2和Bcl-xL蛋白水平被下调(P<0.05),而p21CIP1/WAF1、p27KIP1、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:沉默JAG1可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡。本研究为以JAG1为分子靶点的三阴乳腺癌治疗提供实验依据。