Notch-1与Jagged-1蛋白在大肠癌组织中的表达及其意义

目的探讨Notch-1与Jagged-1蛋白在大肠癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学PV-9000二步法检测大肠癌组织、癌旁组织及癌远端组织中Notch1与Jagged-1蛋白的表达,并分析Notch1与Jagged-1蛋白表达与临床病理参数的关系。结果Notch-1、Jagged-1蛋白在大肠癌中表达的阳性率明显高于癌旁组织及癌远端组织(P<0.05);大肠癌中Jagged-1蛋白表达强度与肿瘤组织学分级、Dukes分期及淋巴结转移密切相关(r=0.355、0.385、0.248,P均<0.05)。大肠癌中Notch-1蛋白与Jagged-1蛋白表达呈正相关(r=0.305,P<0.05)。结论Notch1及Jagged-1蛋白可能在大肠癌发生发展中起重要作用。

Notch2、3、4和Jagged-1在风湿性心脏病患者外周血淋巴细胞上表达及其与IL-1β、IL-8、TNF-α水平的相关性研究

目的探讨Notch-2、Notch-3、Notch-4和Jagged-1在风湿性心脏病患者外周血淋巴细胞上表达与IL-1β、IL-8、TNF-α的水平及意义。方法风湿性心脏病患者38例与健康者37例(对照组)采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞上Notch-2、Notch-3、Notch-4和Jagged-1的表达水平,酶联免疫吸附法测定IL-1β、IL-8、TNF-α水平。结果 Notch-2、Notch-3、Notch-4/Jagged-1在风湿性心脏病患者外周血淋巴细胞表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。风湿性心脏病患者外周血IL-1β、IL-8、TNF-α水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),Notch-2、Notch-3、Notch-4/Jagged-1在风湿性心脏病患者外周血淋巴细胞表达水平与风湿性心脏病患者外周血IL-1β、IL-8、TNF-α水平呈正相关(P<0.05)。结论风湿性心脏病患者Notch-2、Notch-3、Notch-4/Jagged-1在风湿性心脏病患者外周血淋巴细胞上的表达,影响了IL-1β、IL-8、TNF-α水平,导致免疫功能紊乱。

Notch配体Delta-like-1和Jagged-1 mRNA在骨髓增生异常综合征患者骨髓间充质干细胞中表达研究

本研究检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓间充质干细胞Notch信号通路配体Delta-like-1和Jagged-1 mRNA表达水平,探讨其与M DS发病的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测38例M DS患者和16例正常对照者骨髓间充质干细胞中Delta-like-1和Jagged-1的基因表达水平。结果表明,MDS患者的Delta-like-1和Jagged-1 mRNA表达水平较正常对照组均明显升高(P<0.05)。在WHO分组中,RA/RARS、RCMD及RAEB组Delta-like-1的表达量均高于正常对照组(P<0.05),RARB组Jagged-1与正常对照组差异有显著性(P<0.05)。Delta-like-1表达与骨髓原始细胞比例有显著相关性(r=0.502,P<0.05)。伴染色体异常M DS组Deltalike-1和Jagged-1 mRNA表达水平较无染色体异常M DS组明显升高(P<0.05)。在IPSS分组中,较高危组Deltalike-1表达显著高于较低危组(P<0.01),而Jagged-1表达在两组间无统计学差异(P>0.05)。结论:M SC中Delta-like-1和Jagged-1高表达可能参与了M DS的发病过程。

自噬抑制剂3-MA对结直肠癌细胞Jagged-1蛋白表达及其增殖的影响

目的:探索自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine 3-MA)对结直肠腺癌细胞Jagged-1蛋白表达及其增殖活性的影响。方法:实验分为对照组和3-MA药物组(5 mmol/L),利用CCK-8法检测细胞活性;用Annexin/PI双染法检测细胞凋亡率;采用免疫组化和Western blot检测Jagged-1蛋白在两组中的表达差异。结果:Western blot及免疫组化结果表明:3-MA作用后,与对照组比较,结直肠腺癌细胞内Jagged-1蛋白的表达显著被抑制(P<0.05);3-MA作用后,结直肠腺癌细胞增殖率为(85.23%±5.61%),与对照组增值率比较具有显著差异(P<0.05);3-MA作用后,结直肠腺癌细胞凋亡率为(11%±4.3%),与对照组凋亡率(4.5%±2.1%)比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:3-MA可能通过抑制结直肠腺癌细胞中Jagged-1蛋白表达和结直肠腺癌细胞增殖、促进凋亡,从而发挥抗肿瘤生物学作用。

Notch-1、Jagged-1及p-mTOR在胰腺癌中的表达及意义

目的检测Notch-1、Jagged-1及p-mTOR三种蛋白在胰腺癌组织中的表达并探讨它们与临床病理特征的关系及三者之间的相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测40例胰腺癌组织和20例正常胰腺组织中Notch-1、Jagged-1及p-mTOR三种蛋白的表达。结果Notch-1的阳性表达主要位于肿瘤细胞胞膜和胞浆,Jagged-1、p-mTOR的阳性表达主要位于细胞浆。Notch-1、Jagged-1及p-mTOR在胰腺癌组织中的阳性表达率分别为80%、75%和72.5%,均显著高于正常胰腺组织中的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。Notch-1、Jagged-1及p-mTOR的异常表达均与胰腺癌的淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05),与患者的性别、年龄、部位、分化程度和病理分型无关(P>0.05)。Notch-1、Jagged-1及p-mTOR三者间的表达均呈正相关。结论Notch-1、Jagged-1及p-mTOR的过表达促进胰腺癌的发生发展、浸润转移,Notch-1信号通路可能间接调节mTOR的活性。

NF-κ B、Notch-1及Jagged-1在口腔扁平苔藓中的表达及临床意义

目的检测NF-κB、Notch-1及Jagged-1在口腔扁平苔藓及正常口腔黏膜组织中的表达,分析三种蛋白间的相关性,探讨Notch-1/NF-κB信号传导系统在口腔扁平苔藓病损形成及发展过程中的作用。方法采用免疫组化方法检测NF-κB、Notch-1及Jagged-1在52例口腔扁平苔藓和30例正常口腔黏膜组织标本中的表达情况,并分析三种蛋白间的相关性。结果口腔扁平苔藓组织中NF-κB、Notch-1及Jagged-1的表达均明显高于正常口腔黏膜组,差异具有统计学意义(P<0.05);NF-κB、Notch-1、Jagged-1在口腔扁平苔藓组织中的表达具有显著相关性(P<0.05)。结论 Notch-1/NF-κB信号通路的异常激活对口腔扁平苔藓的发生发展有重要意义。

Jagged-1对骨髓来源树突状细胞生成细胞因子的影响

目的:探讨可溶性Jagged-1/Fc嵌合蛋白(Jagged-1)对重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和白细胞介素4(rmIL-4)体外诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)产生细胞因子的影响。方法:建立rmGM-CSF和rmIL-4体外诱导DC的模型,观察Jagged-1/Fc对DC分化的形态学影响,通过Luminex蛋白液相芯片技术和ELISA检测其细胞因子的表达水平,藉MTT法测定可溶性Jagged-1/Fc诱导的DC对同种异基因淋巴细胞增殖的刺激能力。结果:除了TGF-β,Jag-ged-1/Fc诱导的DC与细菌脂多糖(LPS)或酵母聚糖A诱导的DC不同,表现为生成TNF-α的水平明显降低,IL-4显著增高,而IL-10、IL-6、IL-2、IL-12和IFN-γ的水平与对照组无明显差异。γ分泌酶抑制剂DAPT能逆转Jagged-1/Fc抑制DC生成TNF-α。混合淋巴细胞反应显示Jagged-1/Fc诱导的DC对T细胞增殖的刺激能力最弱,LPS诱导的DC的刺激能力最强。结论:Jagged-1/Fc诱导的DC倾向介导免疫耐受,指导初始T细胞向Th2细胞偏离。

Jagged-1在子宫颈癌组织中的表达

目的检测Jagged-1在子宫颈癌组织中的表达情况,探讨其在子宫颈癌发生、发展中的作用机制。方法采用免疫组织化学EnVision法检测60例子宫颈癌和21例正常子宫颈组织中Jagged-1的表达情况。结果Jagged-1在子宫颈鳞癌、腺癌组织中及正常组织中的阳性率分别为72.5%、80.0%和23.8%,在子宫颈鳞癌、腺癌组织中的表达水平高于正常子宫颈组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Jagged-1在子宫颈癌中的表达升高,提示其可能参与了子宫颈癌的发生、发展过程。

Jagged-1在肿瘤新生血管形成中的双重作用

Jagged-1是存在于哺乳动物细胞膜上Notch受体的主要配体之一,在许多组织的生长发育中起着重要作用。研究表明Jagged-1-Notch信号参与肿瘤新生血管化,表现为诱导血管特异性酶活化促进内皮细胞分化,导致内皮-间质细胞移行促进血管发育;上调内皮细胞标志分子如血管内皮钙黏附蛋白、血小板内皮细胞黏附分子-1、血管生成素受体-2、纤维连接蛋白、血小板源生长因子受体和α-平滑肌肌动蛋白等的表达,促进内皮和平滑肌细胞分化;与TGF-α和EGF等生长因子激活的通路共同作用促进血管样结构的形成。但也发现Jagged-1-Notch信号通路下游的HERP1通过阻止myocardin而抑制血管平滑肌细胞标志蛋白SM-MHC和平滑肌22-α的表达,同时通过干扰血清应答因子与SM-MHC中含CArG的启动子结合而抑制血管平滑肌细胞的分化;Jagged-1信号通过p21Cip1抑制cyclinD和cdk4的核定位以及Rb蛋白的磷酸化,从而抑制血管内皮细胞的增殖。Jagged-1所呈现的反向双重作用机制仍有待阐明。

乙肝相关肝癌组织中Jagged-1的表达及其临床意义

目的观察乙肝相关肝癌组织中Jagged-1蛋白的表达及其临床意义。方法收集2008-11至2012-06就诊并接受肝切除术治疗肝癌患者的110例乙肝相关肝癌组织及其对应的癌旁组织,通过组织芯片技术检测癌及癌旁标本中Jagged-1蛋白的表达水平,并分析其与临床指标和预后的关系。结果组织芯片提示乙肝相关肝癌组织Jagged-1蛋白高表达率(44.5%)高于对应癌旁组织(22.3%)(χ~2=12.16,P<0.0001)。Jagged-1蛋白的高表达水平与微血管侵润(microvascular invation,MVI)显著相关(P<0.001)。Jagged-1高表达组患者的1、3、5年生存率(87.5%、64.1%、46.5%)均低于低表达组(96.7%、84.5%、66.9%,P=0.0139)。结论乙肝相关肝癌组织Jagged-1蛋白的高表达水平与肝癌的MVI及不良临床预后有关。

LncRNA PVT1/miR-124轴靶向Jagged-1/Notch通路抑制晶状体纤维化的分子机制研究

目的 探究环状LncRNA PVT1调节人晶状体上皮细胞(LECs)纤维化的作用及可能的分子机制。方法 收集新鲜晶状体前囊膜标本,包括前囊下白内障(ASC)手术眼和健康死后眼各9例。体外培养SRA01/04细胞,并分为空白组、TGFβ2组、si-control组、si-PVT1组、si-PVT1+miR-NC组、si-PVT1+miR-124-inhibitor组。除空白组外,其余各组在转染相应序列后,用5 ng·m LTGFβ2作用48 h。提取组织或细胞RNA并进行微阵列分析。应用实时荧光定量PCR法检测组织样本或细胞中LncRNA PVT1、miR-124表达。采用双荧光素酶报告系统和RNA结合蛋白免疫共沉淀(RIP)法分析LncRNA PVT1、miR-124、Jagged-1之间的靶向关系。Western blot法检测各组细胞Jagged-1、Notch-1、Notch-2、Notch-3、Snail、Slug、纤维蛋白(FN)、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)、肌动蛋白α (α-SMA)等蛋白表达。结果 LncRNA PVT1在ASC眼的前囊膜组织或TGFβ组SRA01/04细胞中表达上调,同时miR-124表达水平降低(P<0.05),且LncRNA PVT1与miR-124表达水平均呈负相关性(P<0.05)。与空白组相比,TGFβ2组和si-control组FN、α-SMA、ColⅣ、Snail、Slug蛋白表达上调;与TGFβ2组和si-control组比较,si-PVT1组和si-PVT1+miR-NC组上述蛋白表达下调,但si-PVT1+miR-124-inhibitor组可逆转si-PVT1对上述蛋白表达的下调作用(P<0.05)。双荧光素酶报告系统和RIP法分析结果显示,LncRNA PVT1通过“海绵吸附”miR-124,负性调节miR-124的表达。与空白组相比,TGFβ2组Jagged-1、Notch-1、Notch-2、Notch-3蛋白表达显著上调;与TGFβ2组和si-control组比较,si-PVT1组Jagged-1、Notch-1、Notch-2、Notch-3蛋白表达下调,同时si-PVT1+miR-124-inhibitor组可逆转si-PVT1对上述蛋白表达的下调作用(P<0.05)。结论 TGFβ2通过一种LncRNA PVT1依赖机制诱导LECs发生上皮—间充质转化,其机制可能是LncRNA PVT1通过“海绵吸附”miR-124负性调节其表达,进而诱导下游Jagged-1/Notch信号通路激活。

可溶性Jagged-1/Fc嵌合蛋白诱导淋巴结细胞向CD4^＋CD25^＋T细胞分化

直接用可溶性Jagged-1/Fc嵌合蛋白(Jagged-1/Fc)在体外诱导小鼠淋巴结细胞向CD4+CD25+T细胞分化.通过荧光标记单克隆抗体染色结合流式细胞术,观察不同剂量Jagged-1/Fc在不同时间对淋巴结细胞向CD4+CD25+T细胞分化的影响,观察Jagged-1/Fc诱导T细胞内细胞因子的变化;藉ELISA法检测Jagged-1/Fc诱导分化的T细胞分泌TGF-β1、IL-4和IL-10的水平.结果显示,超过500.0μg/L剂量的Jagged-1/Fc使CD4+CD25+T细胞百分比明显增高,诱导时间需要4～6天,抗Jagged-1单抗能抵消Jagged-1/Fc的诱导作用,用DAPT阻断Notch信号通路的活化也能抑制Jagged-1/Fc的诱导作用,Jagged-1/Fc诱导分化的T细胞培养上清中IL-4和IL-10的水平明显增高,TGF-β1无明显变化,胞内IL-4,IL-10,IL-2和TNF-α的水平也呈增高趋势.上述结果表明,可溶性Jagged-1/Fc嵌合蛋白在体外可诱导小鼠淋巴结细胞向CD4+CD25+调节性T细胞分化.

西地那非对野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压中Notch-1/Jagged-1通路的影响研究

目的探讨西地那非对野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压中Notch-1/Jagged-1信号通路的作用。方法42只大鼠分为模型组16只,西地那非组16只及对照组10只。模型组及西地那非组一次性皮下注射野百合碱溶液(60 mg/kg)建立肺动脉高压模型,造模3周后西地那非组灌胃西地那非100 mg·kg^(-1)·d^(-1),连续2周,其余两组灌胃等体积0.9%氯化钠注射液。第5周末采用右心导管法测右心室收缩压(RVSP),取心脏分别称重右心室、左心室及室间隔,计算右心室肥厚指数(RI)。采用HE及Masson染色观察肺小动脉结构及纤维化情况。采用Western blot法及免疫组化法检测Notch-1、Hes-1、Jagged-1及α-SMA表达。结果模型组RVSP和RI均高于对照组和西地那非组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。HE及Masson染色显示,与对照组比较,模型组肺小动脉明显增厚、纤维化增加,西地那非组肺小动脉结构异常较模型组改善。模型组Notch-1、Hes-1、Jagged-1及α-SMA表达水平均高于对照组,西地那非组Notch-1、Hes-1、Jagged-1及α-SMA表达水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论西地那非能够抑制野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压中Notch-1/Jagged-1信号通路。

卵巢上皮性癌中Notch-1和Jagged-1的表达及临床意义

目的:检测Notch-1和Jagged-1基因蛋白在卵巢上皮性肿瘤中的表达,探讨二者在卵巢上皮性癌发生、发展、浸润、转移中的作用。方法:应用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)方法检测75例卵巢上皮性癌和54例良性上皮性肿瘤中Notch-1和Jagged-1基因的蛋白表达情况,并分析其与临床病理特征之间的关系。结果:Notch-1和Jagged-1在卵巢上皮性癌组织中的表达明显高于良性上皮性肿瘤组织(P<0.01)。Notch-1和Jagged-1在卵巢上皮性癌中表达与组织分化程度有关,中低分化组的表达明显高于高分化组(P<0.05)。临床分期及有无淋巴结转移组中,二者的蛋白表达无明显差异(P>0.05)。在卵巢上皮性癌中两种蛋白表达呈明显正相关(r=0.295,P<0.05)。结论:Notch-1和Jagged-1可能与卵巢上皮性癌的发生及癌细胞的分化有关,且二者在其发生、发展过程中可能起协同作用。

筋针结合关节松动术对兔膝骨关节炎受体Notch2、配体Jagged-1影响的研究

目的观察筋针结合关节松动术对膝骨关节炎兔膝关节软骨中Notch信号通路Notch2、Jagged-1表达的影响,探讨筋针结合关节松动术治疗膝骨关节炎的可行性和相关作用机制。方法选取26只大耳白兔,随机取6只作为空白组,其余兔采用改良Hulth手术法建立左膝膝骨关节炎模型。将建模成功的18只兔随机分为模型组、氨糖组和筋针结合松动术组各6只,氨糖组给予盐酸氨基葡萄糖灌胃6周,筋针结合松动术组给予筋针结合关节松动术治疗6周,空白组和模型组不予任何干预。干预结束后取各组兔的左膝软骨,分别采用Western blot法和荧光PCR法检测软骨细胞中Notch2、Jagged-1的蛋白和mRNA表达量。结果模型组软骨细胞中Notch2、Jagged-1蛋白和mRNA表达量均明显高于空白组(P均<0.05),氨糖组和筋针结合松动术组均明显低于模型组(P均<0.05),且筋针结合松动术组均明显低于氨糖组(P均<0.05)。结论筋针结合关节松动术可以有效下调膝骨关节炎兔软骨中Notch2和Jagged-1的表达,从而保护关节软骨。

人Jagged-1蛋白在真核细胞中的表达及稳定株的建立

Jagged-1蛋白属于Notch信号通路的配体之一,而Notch信号通路是介导细胞和细胞之间接触的主要信号通路之一,在造血微环境中调节造血细胞增殖与分化的过程中起重要作用。为研究Notch信号通路中受体与配体结合后的生物学功能及Notch信号通路在骨髓基质细胞影响细胞耐药的作用机制,构建过表达Jagged-1蛋白的NIH-3T3细胞株。构建含Jagged-1全编码区基因的pEGFP-IRES2-Jagged-1真核表达载体。结果表明,重组质粒转染哺乳动物细胞NIH-3T3后,Western blot分析证实转染后NIH-3T3细胞高效表达Jagged-1蛋白;经过选择性培养基筛选及有限稀释法挑取单克隆细胞后,流式细胞术(FCM)分析证实建立起过表达Jagged-1蛋白的单克隆细胞模型,即NIH-3T3-pEGFP-IRES2-Jagged-1细胞株。结论:本研究成功构建了Jagged-1真核表达载体,并建立了稳定转染的单克隆细胞株。过表达Jagged-1蛋白的NIH-3T3单克隆细胞株的构建为我们研究骨髓基质细胞相关的细胞耐药的作用机制并为发现新的药物作用靶点提供条件。

Jagged-1对淋巴细胞生成细胞因子的影响

目的:探讨可溶性Jagged-1/Fc嵌合蛋白对小鼠淋巴细胞产生细胞因子的影响。方法:不同时间和不同浓度Jagged-1/Fc处理小鼠淋巴细胞,ELISA检测其培养上清中细胞因子的水平,并用Westernblot分析相关蛋白NICD和Del-tex的表达。结果:低浓度Jagged-1/Fc对淋巴细胞生成IL-17无明显影响,但高浓度Jagged-1/Fc(500μg/L)组IL-17的表达量是对照组的64.75倍,并且随着时间的增加而减少;IFN-γ随着Jagged-1/Fc浓度的增加而减少。Westernblot分析显示Jagged-1/Fc处理组的NICD和Deltex的表达明显高于对照组和Anti-Jagged-1组。结论:高浓度Jagged-1/Fc能够诱导淋巴细胞表达IL-17,可能在指导初始T细胞向Th17细胞偏离中发挥作用。

绒毛和胎盘中Jagged-1/Jagged-2的表达与蜕膜中CD56+NK表达相关性探讨

目的探讨绒毛和胎盘中Jagged-1/Jagged-2的表达与蜕膜中CD56+NK表达相关性情况。方法分析该院2013年3月—2014年2月收治的妊娠期流产对象42例和正常剖宫产30例的临床资料,对Jagged-1、CD56+NK细胞和Jagged-2应用免疫组化方法检测,通过对其测定的情况。结果胎盘组Jagged-1高于绒毛组,Jagged-2低于绒毛组,自然流产组Jagged-1、Jagged-2及CD56+的表达均低于人工流产组,CD56+NK细胞和绒毛组织中的Jagged-1阳性细胞表达水平、Jagged-2阳性细胞表达水平均呈现明显正相关性,差异有统计学意义(r=0.91,0.95,P<0.05)。结论 Jagged-1、Jagged-2对NK细胞表型的变化可能两者一起参与,因而对妊娠结局造成影响,并且形成妊娠免疫耐受。

Jagged-1抑制小鼠胚胎干细胞分化为造血干/祖细胞

目的探讨Notch信号通路在小鼠胚胎干细胞(ESC)分化为造血干/祖细胞(HSC/HPC)中的作用。方法1)体外培养小鼠拟胚体细胞(EBs),使用Jagged-1蛋白活化Notch信号通路及DAPT(γ-分泌酶抑制剂)抑制Notch信号通路。实验分为拟胚体细胞复苏组(EB组)、对照组、Jagged-1组、DAPT组和Jagged-1-DAPT组。2)流式细胞计量术检测ESC特异性表型和HSC/HPC特异性表型的表达。3)实时定量PCR检测各组Notch信号通路基因、小鼠ESC表型基因和HSC/HPC表型基因的表达。结果1)Jagged-1组细胞胚胎干细胞数较对照组和Jagged-1-DAPT组明显增多(P<0.05),2)Jagged-1-DAPT组分化的HSC/HPC数较control组及Jagged-1组明显增多(P<0.05);3)Jagged-1组Notch1、Notch2、Notch4 mRNA表达量较对照组明显升高(P<0.05);4)DAPT组和Jagged-1-DAPT组中Notch1、Notch4 mRNA表达量较对照组降低(P<0.05)。结论Jagged-1激活Notch信号通路可抑制小鼠ESC向HSC/HPC的分化。

慢性丙肝患者DIL-4和Jagged-1的检测分析

目的探讨Notch信号通路的两种配体DIL-4和Jagged-1与慢性丙型肝炎的关系。方法采集慢性丙型肝炎患者及健康对照组的新鲜空腹抗凝血,分离单个核细胞,提取RNA,反转录为c DNA,应用实时定量RT-PCR技术检测DIL-4和Jagged-1。结果慢性丙型肝炎患者组和正常对照组相比较,DIL-4和Jagged-1测定水平均明显升高,具有显著性差异,P<0.05。结论 Notch配体在慢性丙型肝炎中明显升高,且转氨酶越高,Notch配体检测水平越高,Notch配体与慢性丙型肝炎存在相关性。