表达人Jagged1基因的骨髓基质细胞系的建立及其在HL-60细胞分化过程中的作用

目的 :建立表达人Jagged1基因的骨髓基质细胞系 ,并研究Jagged1基因表达在HL 6 0细胞诱导分化过程中的作用。 方法 :构建含有人全长Jagged1基因的逆转录病毒载体MSCV Jagged1 /neoR ,将其导入包装细胞PT6 7并收获病毒上清 ,用病毒上清转染骨髓基质细胞系HFCL ,经G4 1 8筛选得HFCL pMSCV Jagged1细胞 ,用Western印迹方法检测Jagged1基因的表达 ;将HL 6 0细胞与HFCL pMSCV Jagged1细胞、HFCL细胞在含有全反式维甲酸 (ATRA )的培养液中共培养 ,流式细胞仪检测不同时间点HL 6 0细胞CD1 1b的阳性率。 结果 :Western印迹方法证明HFCL pMSCV Jagged1细胞Jagged1表达水平明显高于HFCL细胞 ;HL 6 0细胞与HFCL pMSCV Jagged1、HFCL共培养 4 8和 72h后 ,CD1 1b阳性率在Jagged1组明显低于HFCL组 (P <0 .0 5 )。 结论 :Jagged1基因表达可以较为显著地抑制ATRA诱导的HL 6

大鼠肝移植术后Jagged1基因在胆管中的表达变化及意义

目的探讨Jagged 1基因在大鼠肝移植术后损伤胆管中的表达及意义。方法 100只健康雄性SD大鼠随机分为3组,A组(24只)为未手术组,B组(24只)为假手术组,C组(供、受体各26只)采用改良"二袖套"法建立大鼠肝移植模型。分别于术后1、7、14和28d采集静脉血检测总胆红素、γ-GT、ALT,并同时处死大鼠取肝组织,苏木精-伊红染色观察移植后肝组织的病理改变,免疫组化、RT-PCR及Western blot检测Jagged 1基因的表达。结果生化检测及苏木精-伊红染色显示大鼠肝移植术后胆管损伤淤胆明显(P<0.05),术后14d以胆管细胞增生为主,术后28d出现部分胆管细胞的破坏、消失。免疫组化显示,未手术组及假手术组肝组织中Jagged 1染色为弱阳性,肝移植组中Jagged 1染色为强阳性,且主要表达于胆管细胞中(P<0.05);RT-PCR、Western blot检测发现Jagged 1基因及蛋白在肝移植术后肝组织中呈逐渐升高的强表达,而未手术组和假手术组Jagged 1表达无明显改变(P<0.05)。结论大鼠肝移植术后随胆管损伤加重,胆管中的Jagged 1基因表达显著升高,该基因可能参与了移植术后的胆管损伤过程。

红景天苷调节miR-26a-5p/JAG1/Notch-1信号轴对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学功能的影响

目的探讨红景天苷(SAL)调节微小RNA-26a-5p(miR-26a-5p)/JAG1/神经源性基因Notch同源蛋白1(Notch-1)信号轴对瘢痕疙瘩(KD)成纤维细胞(HKF)生物学功能的影响。方法将HKF细胞随机分为对照组(Control组)、SAL低浓度组(SAL-L组,50μmol/L SAL)、SAL高浓度组(SAL-H组,100μmol/L SAL)、SAL高浓度+miR-NC组(SAL-H+miR-NC组)、SAL高浓度+miR-26a-5p mimics组(SAL-H+miR-26a-5p mimics组)、SAL高浓度+NC-inhibitor组(SAL-H+NC-inhibitor组)、SAL高浓度+miR-26a-5p inhibitor组(SAL-H+miR-26a-5p inhibitor组)。CCK-8法检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡与细胞周期;RT-qPCR检测各组细胞中的miR-26a-5p、JAG1和Notch-1 mRNA的表达;Western blot检测细胞中JAG1和Notch-1蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-26a-5p与JAG1的关系。结果与Control组相比,SAL-H组HKF细胞增殖能力(24 h)、迁移距离、侵袭细胞个数、S期细胞比例、JAG1和Notch-1 mRNA和蛋白表达显著减少(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、miR-26a-5p表达显著增加(P<0.05);与SAL-H组和SAL-H+miR-NC组相比,SAL-H+miR-26a-5p mimics组相应指标变化与上述变化相同;miR-26a-5p inhibitor减弱了SAL-H对HKF细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用,减弱了HKF细胞凋亡。miR-26a-5p靶向负调控JAG1表达。结论SAL可能通过上调miR-26a-5p,靶向抑制JAG1/Notch-1信号轴抑制HKF细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,改善KD。

圆锥动脉干畸形患儿NOTCH1和JAG1基因3’非编码区变异分析

目的·探索NOTCH1和JAG1的3’非编码区(3’UTR)核苷酸变异与心脏圆锥动脉干畸形(CTD)的相关性。方法·采用病例-对照的研究方法,收集600名无22q11缺失的CTD患儿以及300名正常对照儿童。应用高通量测序技术直接检测样本人群NOTCH1和JAG1 3’UTR区段的序列,筛选变异位点,通过PCR和Sanger测序法验证变异的准确性。运用在线软件Target Scan、Pic Tar和micro RNA.org对变异位点进行功能预测分析。结果·检测出CTD患儿NOTCH1 3’UTR区存在1个新发突变和3个单核苷酸多态性(SNP),JAG1 3’UTR区存在3个新发突变和6个SNP位点。其中JAG1 3’UTR区有2个SNP位点(rs3840074、rs8708)的基因型在病例组和对照组间的分布差异有统计学意义(均P<0.05)。预测结果显示4个突变位点及2个有差异的SNP位点均可与微小RNA结合。结论·NOTCH1和JAG1 3’UTR区的核苷酸变异可能与心脏圆锥动脉干畸形的发生相关。

肾透明细胞癌NOTCH1与JAG1的表达及意义

目的:探讨肾透明细胞癌跨膜受体蛋白(NOTCH1)与人类Jagged1基因(JAG1)的表达及意义。方法:应用免疫组化染色法比较肾透明细胞癌(n=129)及正常肾组织(n=33)中NOTCH1和JAG1蛋白的表达差异,并分析两者的表达与肿瘤临床病理参数的相关性。结果:肾透明细胞癌NOTCH1、JAG1阳性表达率高于正常肾组织(分别为95.3%比36.4%,P<0.05;93.0%比42.4%,P<0.05);随着肾癌的病理分级、临床分期的增高和肿瘤的增大,NOTCH1和JAG1的表达水平均增高。复发组NOTCH1和JAG1蛋白的表达均高于未复发组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:肾透明细胞癌NOTCH1和JAG1表达均高于正常肾组织,且与肿瘤分级、分期及肿瘤大小有关。两者对临床预后判断可能具有一定价值。

Alagille综合征临床病理及基因突变特征分析1例

Alagille综合征(Alagille syndrome,ALGS)是一种罕见的常染色体显性遗传病,其病变可累及肝脏、心脏、骨骼、眼睛、颜面及肾脏等多器官,最早在1969年由Alagille及其同事报道,并在1975年由Alagille~[1]再次报道并确定了诊断标准。近年来分子遗传学研究证实,ALGS与Notch信号传导通路中JAG1基因和NOTCH2基因突变有关,其中94%~96%患者存在JAG1基因(20p12)突变,2%~3%.

JAG1基因c.439C>T无义变异致新生儿Ⅰ型Alagille综合征1例

对1例疑似Alagille综合征的新生儿进行临床和遗传学分析,以明确致病原因。收集患儿临床资料并提取外周血DNA,利用目标基因捕获技术进行相关基因变异检测,Sanger测序验证变异来源。患儿以胆汁淤积、先天性心脏疾病和蝴蝶状椎骨为主要临床表现。基因测序显示患儿JAG1基因存在自发性c.439C>T(p.Q147X)杂合变异,该变异为无义变异,致编码JAG1蛋白的多肽链合成提前终止,依据美国医学遗传学与基因组学学会(American College of Medical Genetics and Genomics,ACMG)指南判定为致病性变异(PVS1+PS2+PS4+PM2_Supporting)。该新生儿为JAG1基因变异导致的Ⅰ型Alagille综合征,为后期诊疗或遗传咨询提供了参考依据。

JAG1突变致肾发育异常2例报告及文献复习

JAG1基因可以调节诸多细胞表型,该基因突变常累及肝脏、心脏、肾脏、骨骼、眼睛及颜面等多器官系统的异常,表现为Alagille综合征(alagille syndrome,ALGS)[1]。研究报道,肾脏疾病的发病率占临床被确诊为ALGS患者的39%,主要表现是肾发育不良、肾小管酸中毒、膀胱输尿管反流、梗阻、慢性肾衰竭、蛋白尿和高血压等[2],但是JAG1基因突变仅引起肾脏异常尚无研究报道。本文回顾性分析了2例JAG1基因突变致不同表型患儿的临床特点及全外显子组家系检测结果,并结合文献进行复习。

法乐四联征相关基因研究进展

法乐四联征(Fallot's tetrad)为一种多基因遗传性先天性心脏病,患者对该病的易感性与某些特殊染色体的特殊基因或基因群有关。因此,可能的相关基因的研究对研究法乐四联征的发生、发展和治疗具有重要意义。已有报道:CSX基因、Jagged1基因、DHCR7基因、FOG2基因以及21号染色体三体型与22q11微缺失等与法乐四联征有关。基因研究可以帮助我们了解法乐四联征的病因,也可能促进法乐四联征的基因诊断和基因治疗。

20p12.2缺失致Alagille综合征患儿临床和肝脏病理分析

目的分析20p12缺失致Alagille综合征(ALGS)患儿的临床表现和肝脏病理。方法回顾分析1例20p12微缺失致ALGS患儿的临床资料。结果患儿,男,1月龄起病,以胆汁淤积为首发表现,伴特殊面容,蝶形椎,肾脏和心脏病变;肝脏穿刺术病理学检测提示肝脏淤胆改变,肝细胞中度损害(G2S3),无胆管减少表现。采集患儿及父母血标本,采用二代基因测序检测发现chr20p12.2:(9288462-10654178)处1.36Mb的杂合缺失,缺失片段中包含JAG1基因,为新发突变。确诊后予以对症支持治疗,随访半年,患儿生长发育无异常,黄疸仍迁延不退,远期预后有待进一步随访。结论ALGS是一种常染色体显性遗传病,临床表现多样,基因检测和肝活检有助于诊断。

Alagille综合征的临床特征及基因突变观察(附2例报告)

目的观察2例Alagille综合征(ALGS)患儿的临床表现,分析其基因突变情况,并追踪其预后。方法收集2例ALGS患儿的临床资料并进行分析,将患儿及父母的血液进行高通量测序分析其基因突变情况,随诊观察预后。结果2例ALGS患儿的主要临床表现为早发严重胆汁淤积性肝病,伴先天性心脏病及特征性面容,此外,第1例患儿有蝴蝶样椎骨、先天性虹膜缺损,肝脏病理示纤维化分级为Ⅱ级。患儿分别为JAG1基因外显子c.3197delC(p.T1066kfs*8)、c.118delC(p.L40fs)突变,其父母均未检测到相应突变。结论ALGS患儿出现胆汁淤积性肝病早且症状严重,伴血清胆固醇、谷氨酰转肽酶、总胆汁酸、谷丙转氨酶明显升高及先天性心脏病。ALGS患儿存在JAG1基因c.3197delC(p.T1066kfs)及c.118delC(p.L40fs)突变,均为自发突变。

Notch信号通路配体Jagged1在子痫前期胎盘组织中的表达及其与胎盘血管形成的关系

子痫前期病因复杂，在全球范围内的发病率为5%～10%[1]，严重威胁母儿健康。文献报道，子痫前期是胎盘缺血性疾病，是由于子宫-胎盘血液循环障碍和胎盘功能缺陷，导致持续性胎盘缺氧而释放大量细胞因子进入血液循环，最终引发母体各种疾病表现[2]。而病理研究发现，除母体子宫螺旋动脉重铸异常外，胎盘绒毛数量下降，间质血管网形成减少，也是胎盘缺血、缺氧的重要原因[3]。Notch信号通路影响胚胎发育过程，在细胞增殖、分化、凋亡及血管形成等活动中均起重要的调节作用[4]。Jagged1作为Notch信号通路的配体在多种肿瘤中高表达，在肿瘤血管生成过程中起重要作用[5]，而胎盘的发育过程与肿瘤发生过程其细胞的生物学行为有许多相似之处，Jagged1基因是否参与胎盘血管的生成目前尚不可知。许多国内外研究提示，Jagged1在正常妊娠胎盘组织中表达，而关于其在子痫前期胎盘组织中表达的研究较少，研究结果也不一致，与血管生成的关系少见研究。本研究通过CD34标记胎盘血管内皮细胞，计数胎盘绒毛微血管密度（micro-vessle density，MVD），并探讨MVD与Jagged1基因在子痫前期孕妇胎盘组织中表达的关系，为深入了解子痫前期的发病机制提供依据。

转化生长因子β1诱导星形胶质细胞产生Jagged1的初步探讨

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对激活星形胶质细胞产生Jagged1基因的影响。方法对脂多糖(LPS)激活的星形胶质细胞,给予TGF-β1培养24 h,提取星形胶质细胞mRNA,观察各个时间点(0、6、12及24 h)Jagged1 mRNA的水平。结果 TGF-β1促进星形胶质细胞产生Jagged1 mRNA,并随培养时间的延长,星形胶质细胞中Jagged1 mRNA水平逐渐衰减(P<0.05)。结论 TGF-β1能使激活的星形胶质细胞产生Jagged1 mRNA,可能通过Jagged1/Notch通路的激活导致髓鞘修复障碍。

1个Alagille综合征家系中JAG1基因新突变的识别

Alagille综合征（ALGS）是一种主要由JAG1基因突变导致的常染色体显性遗传病,可累及肝脏、心脏、骨骼、眼和面部等多器官。本文报道1例ALGS患儿的临床和遗传学特征。患儿,男,2岁9个月,因发现肝功能异常及心脏杂音2年余就诊。查体：发育营养稍差,皮肤巩膜无黄染。前额突起,左眼内斜视,鼻梁低平,小下颌。双肺呼吸音清,胸骨左缘2~3肋间可闻及2/6级收缩期杂音,肝脾不大。血生化发现胆汁酸、胆红素、转氨酶等均升高。心脏彩超提示房间隔缺损（静脉窦型）和左肺动脉狭窄;脊柱正位片发现第6、8胸椎蝴蝶椎畸形。患儿明显左眼内斜,眼科诊断眼球后退综合征。因此,该患儿符合ALGS在肝脏、心脏、脊柱和面部的特殊表现,且DNA直接测序发现JAG1基因存在一个新突变c.2419del G（p.Glu807Asnfs X819）,ALGS诊断明确。确诊后予以对症支持治疗。目前已随访至4岁2个月,病情平稳,但面部畸形、左眼内斜视、心脏杂音和肝功能异常持续存在,其远期预后有待观察。

Notch信号转导途径配体基因JAG1和DLL1在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨Notch信号传导途径配体基因JAG1和DLL1在结直肠癌的表达及其与临床病理特征和肿瘤预后之间的关系。方法回顾性分析2004年8月至2006年9月在南京中医药大学第三附属医院全国肛肠医疗中心行手术治疗的146例结直肠癌患者的临床及随访资料．建立患者肿瘤标本组织芯片并对JAG1和DLL1基因表达进行免疫组织化学检测。结果146例患者JAG1表达与其肿瘤分化程度有关．DLL1表达在不同肿瘤部位的表达差异有统计学意义（均P〈0．05）；两种基因表达与微卫星不稳定状态之间差异无统计学意义（P〉0．05）。134例（91．8％）患者获随访，随访时间（42．3±13．3）个月。无瘤生存86例（64．1％），1、3和5年总生存率分别为93％、74％和67％。多因素分析显示，患者预后与TNM分期、病理学类型、微卫星状态、JAG1基因表达有关（P〈0．05）。JAG1基因高表达患者预后优于阴性表达和弱阳性表达的患者（P〈0．05）。结论Notch信号转导途径配体基因JAG1和DLL1表达分别与肿瘤分化程度及肿瘤部位有关．JAG1基因与预后有关。

法洛四联症与NOTCH1和JAG1基因3′非编码区变异的相关性研究

目的探讨法洛四联症(TOF)与NOTCH1和JAG1基因3′非编码区(3′UTR)变异的相关性,为TOF患者临床诊断提供遗传依据。方法采用民族-病例-对照的研究方法,收集20例汉族TOF患者及14例回族TOF患者,并分别以20名汉族及20名回族健康体检者为对照组,筛选出TOF患者在两个民族人群中,NOTCH1和JAG1基因3′UTR存在的变异。通过PCR技术,结合DNA序列测序,测定、验证、确定样本人群中这些变异位点;进一步运用TargetScan、PicTar和microRNA.org等软件对变异位点可能结合miRNA进行分析,推测其和TOF发生、发展的相关性。结果检测出TOF患者NOTCH1基因3′UTR存在3个单核苷酸多态性(SNP),JAG1基因3′UTR存在6个SNP位点。9个SNP位点在4组对象中的分布频数存在差异,但差异无统计学意义(P>0.05)。其中JAG1基因3′UTR rs542746042位点在汉族对照组与汉族病例组之间的分布,差异有统计学意义(P<0.05)。预测结果显示,JAG1基因3′UTR有差异的SNP位点(486delT)可与miRNA结合。结论NOTCH1和JAG1基因3′UTR的核苷酸变异可能与TOF的发生相关。

Alagille综合征患儿1例临床和遗传学分析:一个包含JAG1基因的染色体新中间缺失的识别

Alagille综合征(ALGS)是一种常染色体显性遗传病,可累及肝脏、心脏、骨骼、眼睛、肾脏、颜面等多个系统。本文报道1例ALGS患儿的临床和遗传学特征。患儿为3个月10d男婴,因发现皮肤、巩膜黄染3个月就诊。体格检查示:宽额头,小下颌;胸骨左缘第2、3肋间可闻及3~4/6级收缩期杂音;腹部膨隆,肝右肋下3cm可触及,质地中等。生化结果示肝功能明显异常,胆红素升高,且以结合胆红素升高为主,伴总胆汁酸和γ-谷氨酰转肽酶显著升高。心脏彩超示房间隔缺损、肺动脉狭窄。二代测序发现该患儿JAG1基因整体杂合缺失,而染色体微阵列分析在患儿20号染色体p12.3p12.2处检出约3.0Mb缺失,该范围包含ALGS致病基因JAG1。该患儿具备特殊面容、心脏畸形和胆汁淤积等临床表现,结合遗传学分析结果,诊断ALGS明确。确诊后给予对症支持治疗,现已随访至生后11个月,胆红素较治疗前明显下降,但总胆汁酸和γ-谷氨酰转肽酶等指标仍明显升高,其远期预后仍有待随访观察。本研究扩展了JAG1基因突变谱,同时为患儿诊断、治疗及家系遗传咨询和产前诊断提供了实验室依据。

一个Alagille综合征家系的JAG1基因新变异与临床表型分析

目的对1个Alagille综合征家系进行JAG1基因变异和临床表型分析,探讨基因型与表型的关系。方法对先证者进行靶向捕获二代测序,并在家系内进行Sanger测序验证。检出的候选致病基因与已知疾病数据库比对并进行致病性评估。分析表型变化特点及基因型与表型的关系。结果先证者及其姐姐、母亲JAG1基因均存在c.1270dupG(p.Ala424Glyfs*5)杂合变异,该变异可导致蛋白翻译提前终止,生成未成熟的截短蛋白,可能影响其功能。该变异未见相关文献及数据库报道。先证者表型(胆汁淤积、肺动脉狭窄和特殊面容)与姐姐(胆汁淤积伴瘙痒、角膜后胚胎环)、母亲(无临床表现)各不相同,且胆汁淤积、特殊面容随年龄增长不再明显。结论JAG1基因c.1270dupG(p.Ala424Glyfs*5)变异可导致不同表型的Alagille综合征,亦存在表型不完全外显现象。

表没食子儿茶素没食子酸酯对LoVo和SW480结肠癌细胞的作用机制

目的:探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株LoVo细胞和SW480细胞的作用及其可能的机制。方法:采用不同浓度的EGCG(0、10、20、35μg/mL)对LoVo细胞和SW480细胞进行处理,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化;实时荧光定量PCR检测细胞HES1与JAG1基因的表达情况。计量资料采用采用t检验,计数资料采用χ2检验。结果 10、20、35μg/mL EGCG对LoVo细胞和SW480细胞增殖均具有抑制作用,抑制率均在EGCG浓度为35μg/mL时达到最高,其抑制作用且呈浓度依赖性,不具有时间依赖性。经0μg/ml ECCG处理后LoVo细胞、SW480细胞凋亡率分别为7.72%,16.43%。经20、35μg/mL ECCG处理后,LoVo细胞和SW480细胞凋亡率分别为15.1%,19.13%和21.4%,40.81%,与0μg/mL ECCG处理后比较,差异有统计学意义((χ2=6.765,19.702,P<0.05)。35μg/mL EGCG能将LoVo细胞和SW480细胞的细胞周期阻滞在GO/G1期,阻碍其向S期转换。35μg/mLEGCG能下调LoVo细胞HES1基因和JAG1基因的表达水平(t=7.686,10.92,P<0.05)。结论:EGCG对体外培养的LoVo细胞和SW480细胞增殖有明显的抑制作用,且能诱导细胞凋亡和影响细胞周期。其作用机制可能与下调HES1及JAG1的基因表达及激活Notch信号转导途径有关。

一个伴不完全外显机制的Alagille综合征家系的遗传学诊断

目的:通过总结一个Alagille综合征(ALGS)家系的临床特征及遗传特点,以期提高对ALGS的认识和遗传学诊断水平。方法:收集一个ALGS家系中两兄弟患者的临床资料、实验室检查结果,应用人类全外显子组测序、荧光定量PCR和低深度全基因组测序(CNV-seq)对该家系进行遗传学诊断。结果:患儿两兄弟均于1岁余因皮肤瘙痒入院,有ALGS典型临床表现。患儿之兄一代测序JAG1基因检测未见异常;患儿全外显子检测(先证者模式)出chr20疑似存在约635 K大小的杂合缺失,缺失片段包含JAG1基因,qPCR验证发现患儿之兄及患儿之父也存在JAG1基因杂合缺失,但患儿父亲无典型临床表现。CNV-seq检测发现患儿及其父亲chr20存在约1.76 Mb的可能致病性CNV。结论:ALGS是一种常染色体显性遗传病,伴不完全外显机制。本资料家系中chr20大片段拷贝数变异丰富了JAG1基因变异谱。选择合适的基因检测方法能更好地为临床提供精准的分子诊断并作出遗传指导。